GOT - GPT - Spinreact

GOT –R&F
GPT - R&F
GOT - GPT
Reitman-Frankel. Colorimétrico
Determinação quantitativa de transaminases GOT e GPT
IVD
6. Agitar e deixar 20 min. a temperatura ambiente e adicionar:
Conservar a 2-8ºC
7. Agitar e deixar repousar 5 min. a temperatura ambiente
8. Lêr a absorvância (A) frente a agua destilada. A côr é estavel durante pelo
menos 1 hora.
PRINCÍPIO DO MÉTODO
As transaminases catalizam a transferencia do grupo amino do
(GOT) ou da alanina (GPT) a -cetoglutarato. O cetoácido
oxalacético ou pirúvico respectivamente, na presença
Dinitrofenilhidrazina (DNFH) forma a hidrazona correspondente
coloração que pode ser medida em meio alcalino1,2.
aspartato
formado,
de 2,4com uma
NaOH 0,4 N
5,0 mL
5,0 mL
CÁLCULOS
Os valores da actividade da GOT e GPT calculam-se interpolando a absorvânçia
lida para o problema com a curva de calibração.
Curva de calibração
SIGNIFICADO CLÍNICO
As transaminases GOT e GPT são enzimas intracelulares que se
encontram em níveis elevados no músculo cardíaco, nas células do
fígado, nas células do músculo esquelético e em menores quantidades
noutros tecidos .
Apesar de um nivel elevado de GOT e GPT no soro não ser específico de
doença hepática,utiliza-se principalmente para o seu diagnóstico e
acompanhamento. A utilização da GOT em associação com a GPT ajuda
no diagnóstico do enfarte de miocárdio, uma vez que o valor da GPT se
mantem nos limites normais aumentando os níveis de GOT1,2,5,6.
O diagnóstico clínico deve realizar-se tendo em consideração todos os
dados clínicos e de laboratório.
1.
Em tubos de ensaio Pipetar (mL):
Tubo
Agua
Substrato GOT
Calibrador
DNFH
1
0,2
1,0
0,0
1,0
2
0,2
0,9
0,1
1,0
3
0,2
0,8
0,2
1,0
4
0,2
0,7
0,3
1,0
5
0,2
0,6
0,4
1,0
6
0,2
0,5
0,5
1,0
Agitar bem e deixar 20 min. a temperatura ambiente.
NaOH 0,4 N
10,0
10,0
10,0
10,0
10,0
10,0
Agitar bem e deixar 5 min. a temperatura ambiente.
REAGENTES
Ref: 1001165 GOT
R1a
Substrato GOT
Ref: 1001175 GPT
R1b
Substrato GPT
R2
Revelador
GOT / GPT –R&F CAL
DL-Aspartato
-Cetoglutarato
100 mmol/L
2 mmol/L
pH 7,4
GOT
DL-Alanina
-Cetoglutarato
200 mmol/L
2 mmol/L
pH 7,4
2,4-Dinitrofenilhidrazina
(DNFH)
1 mmol/L
Calibrador primario de ácido pirúvico 1,2 mmol/L
PREPARAÇÃO
Todos os reagentes estão prontos para utilização .
CONSERVAÇÃO E ESTABILIDADE
Todos os componentes do kit são estáveis, até á data indicada no prazo
de validade, constante na etiqueta do frasco, desde que se mantenham os
frascos bem fechados a 2-8 ºC, protegidos da luz e se evite a sua
contaminação.
Não utilizar os reagentes fora do prazo indicado.
Indicadores de deterioração dos reagentes :
- Presença de partículas e turvação.
MATERIAL ADICIONAL
- Espectrofotómetro ou analisador para leituras a 505 nm.
- Banho termoestatável a 37ºC ( 1ºC)
- Cuvetes de 1,0 cm de passo de luz.
- Equipamento habitual de laboratorio.
AMOSTRAS
Soro1,2. Estabilidade da amostra : 7 dias a 2-8ºC.
PROCEDIMENTO
1. Condições do ensaio :
Comprimento de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .505 nm
Cuvete:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm passo de luz
Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . 15-25ºC
2. Ajustar o espectrofotómetro a zero com agua destilada.
3. Pipetar para uns tubos de ensaio:
R1a Substrato GOT
R1b Substrato GPT
GPT
-0,5 mL
4. Incubar 5 min. a 37ºC, adicionar
Amostra
100 L
5. Agitar e incubar a 37ºC, durante:
BEIS13-P
19/09/13
30 min.
0,5 mL
0
0
0
0
22
11
25
12
55
27
50
24
95
46
83
40
150
72
126
62
215
104
---
Unidades
- Uma unidade Wróblewski (UW) de GOT o GPT define-se como a quantidade
de enzima que forma 4,82 x 10-4 mol de Glutamato/min (25ºC).
- Para convertir as UW a U/I multiplicar por 0,482.
É conveniente analizar junto com as amostras os soros controlo padronizados:
SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).
Se os valores determinados se encontrarem fora do intervalo de tolerância,devem-se
rever o instrumento, os reagentes e a tecnica.
Cada laboratorio deve dispôr o seu próprio Controlo de qualidade e estabelecer
correcções caso os controlos não cumpram com as tolerâncias.
PRECAUÇÕES
R2: Corrosivo (C). R35: Provoca queimaduras graves.
GOT
0,5 mL
--
GPT
WU/mL
U/L
WU/mL
U/L
CONTROL DE CALIDAD
Reagente adicional: Hidróxido sódico (NaOH) 0,4 N
R2 Revelador
2.
Lêr a absorvância (A) de todos os tubos, frente a agua destilada.
3.
Representar gráficamente os resultados, colocando as absorvâncias em
ordenadas e as unidades em abcissas, de acordo com a seguinte relação:
VALORES DE REFERENCIA1
GOT:
8-40 UW / ml (3-18 U/L)
GPT:
5-30 UW / ml (2-16 U/L)
Estes valores são orientativos. Recomenda-se que cada laboratorio estabeleça
os seus próprios valores de referência.
CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
Intervalo de medida: Desde o limite de detecção até ao limite de linearidade
180 UW/ml para a GOT e 126 UW/ml para a GPT
Se a concentração da amostrar fôr superior ao limite de linearidade a, diluir 1/10
com ClNa 9 g/L e multiplicar o resultado final por 10.
Exactidão: Os reagentes SPINREACT (y) não apresentam diferenças
sistemáticas significativas quando se comparam com outros reagentes
comerciais (x).
As características do método podem variar segundo o analisador utilizado.
INTERFERÊNCIAS
A hemólise interfere com a determinação1,2. Estão descritas várias drogas e
outras substâncias que interferem com a determinação de GOT e GPT3,4.
NOTAS
SPINREACT dispõe de instruções detalhadas para a aplicação deste
reagente em diferentes analisadores.
BIBLIOGRAFIA
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Murray R. Aspartate aminotransferase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V.
Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1112-116.
Reitman S, Frankel S.J. Clin Path 1957; 28-56.
Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
100 L
30 min.
0,5 mL
APRESENTAÇÃO
Ref: 1001165 (GOT)
Ref: 1001175 (GPT)
Cont.
R1a: 1 x 250 mL, R2: 1 x 250 mL, CAL: 1 x 5 mL
R1b: 1 x 250 mL, R2: 1 x 250 mL, CAL: 1 x 5 mL
SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: [email protected]