ANTI-A ANTI-B ANTI-AB

ANTI-A
ANTI-B
ANTI-AB
Monoclonal Murino
IgM
PROTHEMO
Produtos Hemoterápicos
Ltda.
Reagentes para
classificação do
sistema sangüíneo
ABO
PARA TESTES EM
LÂMINA OU TUBO
Somente para
Uso Diagnóstico
“IN VITRO”
Conservar entre:
2º - 8ºC
Não congelar
Conservante:
Azida de Sódio 0,1 %
Responsável Técnico:
Janaina Martins
CRF: 30.331
SISTEMA DE GRUPO SANGUÍNEO ABO
O sistema ABO descoberto por Landsteiner em 1901 é representado por
quatro grupos principais, A, B, A,B e O.
O indivíduo adulto normal que não possui os antígenos A e/ou B em suas
hemácias normalmente apresentam os anticorpos correspondentes em seu
soro. Os anticorpos Anti-A e Anti-B podem causar sérias reações hemolíticas
transfusionais assim como a Doença Hemolítica do Recém-Nascido. Sendo
assim, existe a necessidade de se testar tanto o sangue do receptor quanto
do doador para a presença dos antígenos A e/ou B. Posteriormente,
seleciona-se sangue de doador compatível para transfusão. O fenótipo ABO
de um indivíduo é determinado pelo padrão de reação de suas hemácias
com os reagentes Anti-A, Anti-B e Anti-A,B. É conhecida a existência de
subgrupos de A e B que podem apresentar reações fracas ou negativas com
reagentes Anti-A, Anti-B e Anti-A,B (Classificação Direta).
O grupo ABO de um paciente adulto deve sempre ser confirmado,
testando-se o soro do paciente contra glóbulos conhecidos dos
grupos A1 e B (Classificação Reversa).
O soro do recém-nascido não contém os esperados anticorpos AntiA e Anti-B, podendo inclusive ocorrer à aquisição passiva de
anticorpos Anti-A e Anti-B da circulação materna. Desta forma a
prova reversa não deve ser realizada no sangue do recém-nascido
por não fornecer o resultado confirmatório esperado. As hemácias
de recém-nascido podem também não apresentar expressão total
dos antígenos A e B e assim resultar em reações ligeiramente mais
fracas.
PRINCÍPIO BIOLÓGICO DO TESTE
Os reagentes causam aglutinação direta macroscópica das
hemácias que carregam os antígenos correspondentes.
As hemácias possuidoras do antígeno A se aglutinam quando
misturadas ao reagente Anti-A; igualmente, hemácias possuidoras
do antígeno B se aglutinam na presença do reagente Anti-B.
O teste adicional empregando-se o reagente Anti-A,B facilita o
reconhecimento de subgrupos raros de baixa reatividade
aglutinando as hemácias dos grupos A, B, e A,B, mas não as do
grupo O. O uso do reagente Anti-A,B é recomendado na seleção de
doadores do grupo O e na confirmação de resultados negativos
obtidos nos testes onde se utilizam os reagentes Anti-A e Anti-B.
DESCRIÇÃO DO PRODUTO
O reagente é preparado utilizando-se anticorpos monoclonais de
origem murina reativos em lâmina e tubo, fornecendo um teste
específico qualitativo para a identificação dos antígenos A e B nas
hemácias.
Cada lote produzido é analisado, segundo os métodos adotados
pelo FDA, assegurando potência, especificidade, reatividade e
avidez iguais ou superiores aos padrões de referência
internacionais.
O diluente dos reagentes contém: Cloreto de Sódio, Albumina
Bovina, Tampão Fosfato e Azida de Sódio a 0,1%.
Os reagentes foram otimizados para serem usados como fornecidos
sem adições ou diluições.
O produto é fornecido em frascos de 10 ml, acompanhados de
conta-gotas. Cada gota equivale a 50 µl.
Corantes: ANTI-A (Azul Brilhante), ANTI-B (Amarelo de Tartrazina)
ANTI-A
ANTI-B
ANTI-A,B
Código Embalagem Código Embalagem Código Embalagem
2012 10 mL
2022 10 mL
2032 10 mL
2013 5 x 10 mL 2023 5 x 10 mL 2033 5 x 10 mL
MATERIAIS NECESSÁRIOS NÃO FORNECIDOS
Teste em lâmina: lâminas de vidro, pipetas Pasteur e solução
salina à 0,9%.
Teste em tubo: tubos de vidro (10 x 75 mm ou 12 x 75 mm),
pipetas Pasteur, centrífuga e solução salina à 0,9%.
ARMAZENAMENTO E PRECAUÇÕES
Conservar em geladeira entre 2° e 8°C. Não congelar ou expor o
produto a temperaturas elevadas.
Não utilizar após o vencimento.
Não utilizar o produto se observar nítida turvação o que pode indicar
contaminação bacteriana ou deterioração do produto.
Não reutilizar os frascos vazios.
Evitar a contaminação do reagente.
SOMENTE PARA USO DIAGNÓSTICO “IN VITRO”.
Os materiais de origem biológica devem ser considerados como se
fossem “potencialmente infectantes”. Devem ser estabelecidos
métodos adequados para o manuseio e descarte equivalentes aos
utilizados para as amostras de sangue.
O não seguimento das instruções de uso pode resultar em
diminuição da performance ótima do produto.
COLETA DA AMOSTRA:
O sangue deve ser coletado por procedimento asséptico aprovado,
com ou sem adição de anticoagulante.
As hemácias obtidas de coágulo podem ser tipadas em até 5 dias
após sangria. As amostras coletadas em EDTA ou Heparina devem
ser tipadas em até 48 horas. Se a demora para a execução do teste
for inevitável, hemácias de sangue coagulado e as colhidas em
EDTA ou Heparina devem ser separadas do soro/plasma, lavadas e
ressuspendidas em solução preservativa de glóbulos. Estocar a 2°8°C por no máximo 20 dias.
O sangue coletado em anticoagulante ACD, CPD e CPDA-1 pode
ser tipado até a data de expiração se armazenado entre 2° e 8°C.
O armazenamento prolongado de hemácias antes da execução do
teste pode causar deterioração de antígenos e resultar em reações
mais fracas.
PROCEDIMENTO DO TESTE
Teste em lâmina:
1 - Preparar uma suspensão de glóbulos a 40% no próprio soro,
plasma ou solução salina à 0,9%.
2 – Colocar uma gota do reagente Anti-A no lado esquerdo da
lâmina e uma gota de reagente Anti-B no lado direito. Em uma
segunda lâmina, colocar uma gota de reagente Anti-AB. Realizar
os testes à temperatura ambiente (20º a 25º C).
3 – Adicionar 1 gota da suspensão de hemácias a cada reagente.
4 – Misturar o reagente com a suspensão de glóbulos em uma área
de 2x3 cm. Movimentar delicadamente a lâmina para promover
a mistura e examinar a presença ou não de aglutinação
macroscópica. A aglutinação se inicia em poucos segundos.
Não observar a lâmina por mais de 2 minutos, quando não
houver aglutinação.
Alternativamente, pode-se realizar o teste em lâmina utilizando-se
uma suspensão de glóbulos à 10% em solução salina à 0,9%.
Teste em tubo:
1 - Preparar uma suspensão a 3-5% do glóbulo a ser testado em
solução salina à 0,9%.
2 – Adicionar uma gota de reagente Anti-A, Anti-B e Anti-AB
respectivamente em três tubos de ensaio e identificá-los.
3 – Acrescentar uma gota da suspensão de hemácias 3-5% a cada
tubo. Misturar bem o conteúdo.
4 - Centrifugar por 15 segundos a 3400 rpm.
5 - Ressuspender delicadamente o botão de hemácias e examinar a
presença ou não de aglutinação.
6 - Graduar e registrar o resultado.
A força centrífuga aplicada deve ser a mínima necessária para se
obter um sobrenadante claro e um botão nitidamente delineado que
possa ser ressuspendido facilmente.
As centrífugas devem ser calibradas individualmente para se obter
o tempo e velocidade ótimos de centrifugação.
Nota: OS TESTES PARA CLASSIFICAÇÃO ABO NUNCA DEVEM
SER INCUBADOS À 37° C.
INTERPRETAÇÃO DO RESULTADO
POSITIVO: excluindo-se as limitações do teste, a aglutinação dos
glóbulos pelo reagente indica a presença do antígeno
correspondente. Igualmente, a aglutinação da amostra pelo
reagente Anti-A,B indica a presença dos antígenos A e/ou B,
caracterizando não se tratar de grupo O.
NEGATIVO: excluindo-se as limitações do teste, a ausência de
aglutinação no teste indica ausência do antígeno correspondente.
O padrão de reação esperada com os fenótipos comuns é como se
segue:
Classificação Direta
Classificação Reversa
Anti-A
Anti-B
Anti-A,B
A1
B
+
o
+
o
+
o
+
+
+
o
o
o
o
+
+
+
+
+
o
o
Grupo
ABO
A
B
O
AB
Nota: A hemólise observada na tipagem direta ABO não deve ser
interpretada como resultado positivo, pois pode ser causada por
contaminação bacteriana. Qualquer discrepância entre a prova
direta e reversa deve ser resolvida antes da liberação do resultado
de grupo sangüíneo.
LIMITAÇÕES DO TESTE
Resultado falso-negativo ou reações fracamente positivas podem
ocorrer com amostras de sangue de subgrupos A e B ou após
estocagem prolongada.
Resultado falso-positivo pode ocorrer com hemácias colhidas do
cordão de recém-nascidos.
As variáveis relativas ao procedimento técnico, tais como: técnica,
suspensões muito concentradas ou diluídas, centrifugação ou
incubação inadequadas, solução salina à 0,9% contaminada ou
vidraria suja podem causar falsas reações positivas ou negativas.
As anomalias sorológicas inerentes à amostra podem causar
reações inesperadas ou discrepância entre tipagem direta e
reversa.
O Grupo ABO de um indivíduo só pode ser determinado se existir
uma concordância exata entre a classificação direta e classificação
reversa.
O reagente foi otimizado para as técnicas descritas. Outros
procedimentos devem ser validados pelo usuário.
CONTROLES
1- O resultado obtido na tipagem ABO em adultos deve ser
confirmada pela prova reversa com reagente de células A1 e B (Rh
negativos).
2- É importante que a reatividade e especificidade do reagente
sejam confirmadas a cada dia de uso utilizando-se um controle
positivo, de preferência hemácia A2B e um controle negativo,
hemácia do grupo O.
DESEMPENHO
Os anticorpos Anti-A, Anti-B, Anti-A,B (Monoclonal Murino)
aglutinam especificamente hemácias humanas na presença dos
antígenos correspondentes.
A especificidade do produto é determinada através da inclusão de
um painel de hemácias, representando os antígenos com
freqüência igual ou superior a 1% na população.
Para assegurar reatividade adequada, na análise final para
liberação do lote, os reagentes são testados com hemácias
positivas para o antígeno correspondente. Em se tratando do
reagente Anti-A, incluem-se amostras do fenótipo A2B.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1- Walker Rh,ed.Technical Manual. 11th Edition. Bethesda: AABB,
1993.
2- Race R. R. and Sanger R. Blood Groups in Man, 6th Edition
Oxford Blackwell Scientific Publishers, 1975.
3- Mollison P. L. Blood Transfusion in Clinical Medicine. 7th Edition.
Oxford: Blackwell Scientific, 1983.
4- Guidelines for the Blood Transfusion Service H.M.S.O.
GARANTIA
Este produto é garantido por Prothemo Produtos Hemoterápicos
Ltda. durante o prazo de validade indicado no rótulo se conservado
e utilizado segundo as instruções recomendadas.
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Edição: Nov/2009