Artigo nº - BioSys + Kovalent

Instruções de Uso
Somente para uso diagnóstico in vitro.
PChE COLINESTERASE
PLASMÁTICA
MS 80115310171
APRESENTAÇÃO
Artigo nº
Apresentação
00470K
Tampão 2 x 48 tubos x 2 mL + 1 Microplaca + Solvente
1 x 18 mL
REAGENTES
PChE Colinesterase Plasmática
1. Tampão – Tubo de ensaio x 2mL. Contém fosfato, surfactante e
conservante EDTA.
2. Reagente Solvente – Frasco conta-gotas x 18mL. Água destilada,
conservante e EDTA em um frasco plástico conta-gotas
3. Reagente Plasma Colinesterase – Liofilizado. Microplaca de 96 testes.
Armazenar reagente liofilizado a 15-30ºC, ao abrigo da luz. Reconstituir
com 3 gotas do reagente solvente. Permanece estável por 72 horas entre
15°C-30°C após a reconstituição. A concentração final contém: 2mM de
BuTC, 0,3mM de DTNB, 20µM de As1397, 50mM de fosfato de potássio e
0,03% Triton X-100 (tampa branca), pH 7,6.
INDICAÇÕES DE USO
Para determinação quantitativa de colinesterase no sangue total visando o
monitoramento da exposição a pesticidas. Para uso em diagnóstico in
vitro. O uso laboratorial deve ser feito apenas por técnicos treinados. O
Test-mate ChE Cholinesterase Test System é útil na avaliação de
envenenamento por pesticidas. A maioria dos organofosforados ou
carbamatos inibem as enzimas sanguíneas eritrócito-colinesterase (AChE)
e/ou plasma colinesterase (PChE). O grau de inibição enzimática é
proporcional à exposição ao pesticida. Geralmente, prefere-se o AChE ao
PChE devido a sua menor variabilidade biológica e a ausência de
interferências relacionadas ao PChE. Após a exposição à pesticidas, a
recuperação da atividade de AchE, em geral é mais lenta que a de PChE
devido a sua meia-vida maior (1 mês para AChE e 2 semanas para
PChE).Devem ser realizadas medições (doseamentos) pré-exposição
(linhas de referência) de AChE e/ou PChE de modo a reduzir o efeito da
variabilidade biológica.
COLETA DAS AMOSTRAS
Tanto o sangue total coletado da ponta dos dedos quanto o sangue
coletado por punção venosa (anticoagulado com EDTA) podem ser
utilizados. O local de punção deve ser muito bem lavado antes da
amostragem, de forma a minimizar possíveis contaminações da amostra
por resíduos de pesticida adsorvidos na pele. Para evitar coagulação, o
capilar deve ser colocado no tubo de ensaio por 10 segundos. A
colinesterase pode ser reativada, especialmente a partir da inibição de
pesticida carbamato durante estocagem prolongada. Tal reativação pode
produzir um resultado “falso negativo”.
PROCEDIMENTO DE TESTE
1. Ligar o analisador fotométrico. Pressionar a tecla MODE para escolher o
PRINCÍPIO DO MÉTODO
Os reagentes Test-mate ChE Cholinesterase Test System baseiam-se no
método de Ellman. A acetiltiocolina (AcTC) e a butiriltiocolina (BuTC) são
hidrolisadas, respectivamente, pela AChE e pela PChE, produzindo ácido
carboxílico e tiocolina que reagem com o reagente de Ellman (DTNB, ácido
ditionitrobenzóico), produzindo uma coloração amarela que é medida
espectrofotometricamente a 450nm. A taxa de formação de cor é
proporcional à quantidade de AChE e PChE.
Colinesterase
ester tiocolina (AcTC/BuTC) =================> tiocolina
tiocolina + DTNB ===========> TNB-tiocolina (amarelo)
O reagente AChE tem uma especificidade acima de 95% devido à adição
de um inibidor específico de PChE, o As1397 (10-(alfadietilaminopropionil)-fenotiaziana).A BuTC apresenta uma especificidade
acima de 95% para PChE.
CONTEÚDO
procedimento de Ensaio PChE. Pressionar TEST para começar o ensaio.
2. Inserir um tubo de ensaio no analisador. Pressionar TEST para
continuar o ensaio.
3. Quando solicitado pelo analisador, remover o tubo de ensaio. Pressionar
TEST para continuar o ensaio.
4. Preencher o tubo capilar com 10µL de sangue (limpar o excesso com
papel de filtro) e coloque-o no tubo de ensaio. Agitar vigorosamente o tubo
de ensaio por 15 segundos. Alinhar o capilar e inserir o tubo de ensaio no
analisador. Pressionar TEST para continuar o ensaio.
5. Quando solicitado pelo analisador, remover o tubo de ensaio. Pressionar
TEST para continuar o ensaio.
6. Dissolver o reagente com 3 gotas de solvente. Adicionar o reagente
dissolvido ao tubo de ensaio utilizando a pipeta de transferência.
Imediatamente, pressionar TEST para continuar o ensaio.
7. Agitar cuidadosamente o tubo de ensaio por inversão durante 5
segundos. Alinhar o capilar e inserir o tubo de ensaio no analisador.
Pressionar TEST para continuar o ensaio.
8. Quando solicitado pelo analisador, remover e descartar o tubo de
ensaio. Pressionar TEST para continuar o ensaio.
9. Salve as leituras do analisador, utilizando a tecla TEST para avançar o
display. Pressionar DONE para finalizar o ensaio.
PChE Colinesterase Plasmática
Cada kit reagente contêm 3 caixas e uma instrução de uso.
Caixa 1
48 Tubos com tampão de ensaio.
Caixa 2
48 Tubos com tampão de ensaio.
Caixa 3
1 Microplaca com 96 poços com etiqueta azul
100 tubos capilares (volume de 10µL)
100 papéis de filtro (para secagem dos capilares)
Reagente Solvente - 1 frasco conta-gotas plástico x 18ml
2 pipetas de transferência com faixa azul
bateria 9 volts
A microplaca do kit Test-mate PChE Cholinesterase Test System
apresenta uma etiqueta “Plasma” azul. As pipetas de transferência do Kit
reagente PChE possuem uma faixa azul.
Nota: nunca utilizar as mesmas microplacas e as pipetas de transferência
quando alternar entre testes AChE e PChE.
CALIBRAÇÃO
O analisador fotométrico Test-mate ChE é calibrado na sua fabricação.
Nenhuma calibração adicional é requerida.
CONTROLE DE QUALIDADE
O uso de um operador não-exposto é melhor; a intra-variabilidade da
colinesterase eritrocitária e plasmática é menor que 5% por semana e
menor que 10% por mês. Alternativamente, o sangue obtido por punção
venosa refrigerado (anticoagulado com EDTA) permanece estável pelo
menos um mês. Devem ser ensaiados controles a cada dia que o teste for
realizado.
CÁLCULOS
A medição de atividade de colinesterase é calculada pelo analisador
fotométrico através da equação a seguir:
Sangue U/mL =
INSTRUMENTAÇÃO
O kit reagentes PchE Plasma Colinesterase deve ser utilizados apenas
com analisadores fotométricos fornecidos como parte do Test-mate
Cholinesterase Test System e não são indicados para uso com qualquer
outro método de teste ou equipamento, manual ou automático.
BL0195 / REV04 – 01/2014
(A/min) (Volume do ensaio mL)
(Ɛ, mM-1cm-1)(“light path” cm)(sangue mL)
O doseamento da atividade de colinesterase então é refinado
posteriormente, através dos ajustes abaixo listados para se obter o valor
final de colinesterase;
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Bula Pche Colinesterase Plasmática
Instruções de Uso
Somente para uso diagnóstico in vitro.
· Ajuste do “Blank” do Reagente - Uma pequena fração não específica
(cerca de 15%) é subtraída do valor da atividade de colinesterase
doseado.
· Ajuste de Temperatura - Usando o sensor de temperatura no analisador,
ambas medida da atividade de colinesterase e a atividade do “Blank” do
Reagente são normalizados à 25°C.
· Ajuste de Hemoglobina – Para o AChe, a normalização da hemoglobina
ocorre de acordo com o volume da amostra e teor de ferro; portanto, os
índices de AChE são mais precisamente expressos em U/g Hgb.
VARIABILIDADE ENTRE TÉCNICOS
10 técnicos efetuaram 10 medições de ambas amostras normais e
anormais de punção venosa (N=100). A amostra anormal foi preparada por
dosagem com pesticida (paraoxon).
Normal
AChE
U/mL
5,63
AChE
U/mL
5,63
AChE
U/g
33,8
PChE
U/mL
1,72
Desvio
Padrão
0,21
0,21
0,8
0,15
%CV
3,7
3,7
2,4
8,5
AChE
U/mL
1,38
AChE
U/g
9,7
PChE
U/mL
1,03
PChE
g/dL
14,3
Desvio
Padrão
0,12
0,8
0,08
0,3
%CV
9,0
7,9
7,5
2,2
Média
LIMITAÇÕES
Interferências fisiológicas - Os níveis de AChE são reduzidos na
Hemoglobinúria Paroxística Noturna (HPN). Na anemia macrocítica ou
microcítica severa, a razão de hemoglobina/colinesterase pode interferir na
correção de hemoglobina e,portanto, na atividade de AChE. Os níveis de
PChE são reduzidos em insuficiência hepática e desnutrição. Os níveis de
PChE aumentam na hepatite viral/alcoólica e infecção.
Interferências analíticas - Drogas capazes de inibir a colinesterase, tais
como piridostigmina irão diminuir os níveis de colinesterase. Resíduos de
pesticida adsorvidos na pele podem diminuir artificialmente os valores. A
lavagem da pele com detergentes contendo sal quaternário de amônio, tais
como cloreto de benzetônio, também podem diminuir artificialmente os
valores; verificar a rotulagem do detergente antes do uso.
Anormal
Média
PRECISÃO
O Test-mate ChE foi comparado com o Kit Boehringer Mannheim
Colinesterase Cód. 450035 no equipamento Hitachi 704 (BM/H). O método
BM/H é realizado com plasma ou sangue total diluído (AChE) corrigido
pelo hematócrito; portanto, ao contrário das unidades U/mL obtidas pelo
Test-mate Che a 25°C ou U/g Hgb a 25°C. Os resultados BM/H são
expressos como U/L plasma (PChE) a 37°C ou U/L RBCs (AchE) a 37°C.
Doadores normais (X, BM/H, punção venosa) vs. (Y, Test-mate, sangue
coletado da ponta do dedo)
N
r
Tendência
Intercepção
Faixa*
AChE,
U/L
44
0,78
0,000894
10,8
±25%CV
RBCs vs. U/h
Hgb
PChE,
U/L
plasma vs. U/L
sangue
44
0,96
0,253
440
A diminuição da colinesterase para <50% do normal indica possível
envenenamento por pesticida exigindo remoção da exposição e/ou
tratamento com anticolinérgicos tais como atropina e pralidoxima.
Suspeitas de casos de envenenamento podem ser confirmadas pelo
monitoramento de colinesterase para um subsequente aumento e patamar
de equilíbrio na atividade após 1-3 meses da exposição. Se os valores da
linha de referência são obtidos, uma diminuição da colinesterase para
<70% dos valores da linha de referência podem ser interpretados como
possível envenenamento por pesticida.
±50%CV
LITERATURA
Pesticidas – Doseados & Doadores Normais: (X, BM/H, punção venosa)
vs. (Y, Test-mate, punção venosa)
N
r
Tendência
Intercepção
Faixa*
AChE,
U/L
86
0,98
0,00158
0,322
±100%CV
RBCs vs. U/h
Hgb
PChE,
U/L
plasma
vs.
U/L sangue
INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS
87
0,98
0,457
-210
±100%CV
* Nota: r, o coeficiente de correlação, é extremamente sensível dentro da
faixa (aumenta com %CV da faixa).
PRECISÃO
Intra-ensaio - N=40, 1 - 5 U/mL - 3 – 5%CV. Entre-ensaios - N=40, 1 - 5
U/mL - 5 – 7%CV.
LINEARIDADE
Eritrócitos AChE: 0 – 7 U/mL; 0 – 50 U/Hgb. Plasma PChE: 0 – 7 U/mL.
VALORES ESPERADOS
Esses valores foram determinados a partir de amostras normais de
doadores de banco de sangue (homens e mulheres), entre 20 e 60 anos
de idade.
AChE, U/mL
N
40
Média
3,68
Desvio-padrão
0,47
Faixa
2,77 – 5,57
AChE, U/g Hgb
40
27,1
2,9
21,9 – 37,3
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Uso exclusivo para diagnóstico in vitro
Conservar entre 15 °C e 30 °C.
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