Livro de Resumos - Faculdade de Medicina Veterinária

Transcrição

SOCIEDADE PORTUGUESA DE CIÊNCIAS VETERINÁRIAS
CONGRESSO CIÊNCIAS VETERINÁRIAS 2005
LIVRO DE RESUMOS
VETERINARY SCIENCES CONGRESS 2005
PROCEEDINGS
Estação Zootécnica Nacional
13, 14 e 15 de Outubro de 2005
Edição: Sociedade Portuguesa de Ciências Veterinárias
Composição e impressão:
Tiragem: 600 exemplares
ISBN:
Depósito Legal:
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Comissão de Honra
Sua Excelência O Presidente da República, Dr. Jorge Sampaio
Senhor Ministro da Agricultura, Desenvolvimento Rural e das Pescas, Dr. Jaime Silva
Senhor Ministro da Ciência, Tecnologia e Ensino Superior, Prof. Dr. José Mariano Gago
Secretário de Estado Adjunto da Agricultura e Pescas, Dr. Luís Medeiros Vieira
Presidente da Fundação para a Ciência e a Tecnologia, Prof. Fernando Ramôa Ribeiro
Presidente do Conselho Executivo da Fundação Luso-Americana para o Desenvolvimento, Prof. Rui Chancerelle de
Machete
Director do Instituto Nacional de Investigação Agrária e das Pescas, Prof. José Abecassis Empis
Governador Civil de Santarém, Dr. Paulo Alexandre Homem de Oliveira Fonseca
Presidente da Câmara Municipal de Santarém, Eng. Rui de Sousa Barreiro
Presidente da Câmara Municipal do Cartaxo, Dr. Paulo Alexandre Caldas
Bastonário da Ordem dos Médicos Veterinários, Dr. José Augusto Cardoso de Resende
Presidente do Sindicato Nacional dos Médicos Veterinários, Dr. Edmundo Pires
Directora do Laboratório Nacional de Investigação Veterinária, Dra. Maria Inácia Corrêa de Sá
Director da Estação Zootécnica Nacional, Doutor João Ramalho Ribeiro
Director-Geral de Veterinária, Dr. Carlos Agrela Pinheiro
Presidente do Conselho Directivo da Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Técnica de Lisboa, Prof.
Doutor Luís Tavares
Coordenador do Curso de Medicina Veterinária Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro, Prof. Doutor Carlos
Alberto Antunes Viegas
Coordenadora do Curso de Medicina Veterinária Instituto de Ciências Biomédicas Abel Salazar, Universidade do
Porto, Prof. Doutora Fátima Gartner
Coordenador do Curso de Medicina Veterinária da Universidade de Évora, Prof. Doutor José Tirapicos Nunes
Coordenador do Curso de Medicina Veterinária da Universidade Vasco da Gama, Prof. Doutor Humberto Rocha
Comissão Organizadora
Doutor Luís dos Anjos Ferreira
Doutor Alexandre Cameira Leitão
Doutora Yolanda Vaz
Dr. António Simões Monteiro
Dr. Carlos Godinho
Doutor João Ramalho Ribeiro
Doutor António Horta
Comissão Científica
Doutor Luís dos Anjos Ferreira - Sociedade Portuguesa de Ciências Veterinárias (SPCV)
Doutor Alexandre Cameira Leitão - Sociedade Portuguesa de Ciências Veterinárias (SPCV)
Dr. Joaquim Vieira Lopes - Associação Portuguesa dos Médicos Veterinários Especialistas em Animais de
Companhia (APMVEAC)
Doutor Fernando Afonso - (Aquacultura) Faculdade de Med.Veterinária (FMV/UTL)
Dr. Loão Rebelo Cotta - Secção Portuguesa da Associação Mundial de Ciência Avícola (SPAMCA)
Dr. George Stilwell - (Bem-Estar Animal) Faculdade de Med.Veterinária (FMV/UTL)
Doutor João Cannas da Silva - Associação Portuguesa de Buiatria (APB)
Doutor Virgílio Almeida - Sociedade Portuguesa de Epidemiologia e Medicina Veterinária Preventiva (SPEMVP)
Dr. José Núncio Fragoso - Associação de Médicos Veterinários de Equinos (AMVE)
Dr. José Cardoso de Resende - (Formação Veterinária) Ordem dos Médicos Veterinários (OMV)
Doutor Luís Telo da Gama - Sociedade Portuguesa de Recursos Genéticos Animais (SPRGA)
Doutora Anabela Alves - Sociedade Portuguesa de Patologia Animal (SPPA)
Dr. Claudino Matos - Sociedade Portuguesa de Ovinotecnia e Caprinotecnia (SPOC)
Doutor Ramiro Mascarenhas - Sociedade Portuguesa de Reprodução Animal (SPRA)
Doutor Rui Baptista - Sociedade Científica de Suinicultura (SCS)
Dr. Daniel Patacho de Matos - Associação dos Médico Veterinários de Actividades Taurinas (AMVAT)
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Apoios Institucionais
Ordem dos Médicos Veterinários
Estação Zootécnica Nacional
Fundação para a Ciência e a Tecnologia
Direcção-Geral de Veterinária
Câmara Municipal de Santarém
Câmara Municipal do Cartaxo
Faculdade de Medicina Veterinária
Fundação Luso-Americana para o Desenvolvimento
Patrocínios
Alltech Portugal
Arbuset - Produtos Farmacêuticos e Sanitários de Uso Animal, Lda
Laboratórios Atral SA
Bayer Portugal, S.A.
CEVA - Saúde Animal, Lda
CPH Pharma
IAPSA Portuguesa Pecuária, Lda.
Llly Farma - Produtos Farmacêuticos Lda.
Intervet Portugal - Saúde Animal Lda.
Laboratório Pfizer, Lda
Merial Portuguesa - Saúde Animal, Lda
Novartis Farma - Produtos Farmacêuticos S.A.
Schering Plough - Veterinária Lda
Univete, Lda
Veterinária Esteve, Lda
Vetlima - Soc. Distribuidora de Produtos Agro-Pecuários, SA
Virbac de Portugal Laboratórios, Lda
D.I.N. - Desenvolvimento e Inovação Mutricional, S.A.
T.N. A. - Tecnologia e Nutrição Animal Lda.
Secretariado
Anabela Almeida - Sociedade Portuguesa de Ciências Veterinárias SPCV
R.Gomes Freire, 1169-014 Lisboa, Tel 21 358 0222, Fax 21 358 0221
[email protected]
www.spcvet.pt/Congresso2005
iv
Editorial
A Sociedade Portuguesa de Ciências Veterinárias (SPCV), alicerçada na sua história centenária e
na vontade de servir os interesses dos profissionais que dedicam o seu trabalho e esforço às diferentes
áreas do conhecimento que constituem o campo de acção do Médico Veterinário, organiza o Congresso
de Ciências Veterinárias 2005, na lugar na Estação Zootécnica Nacional, de 13 a 15 Outubro de 2005.
Este congresso conta com a cooperação das principais organizações profissionais e associativas
da classe médico-veterinária, nomeadamente: a Ordem dos Médicos Veterinários, a Estação Zootécnica
Nacional, os Cursos de Medicina Veterinária, o Sindicato Nacional dos Médicos Veterinários, o
Laboratório Nacional de Investigação Veterinária e as Sociedades sectoriais de: Animais de Companhia,
Avicultura, Actividades Taurinas, Buiatria, Equinos, Epidemiologia, Ovinotecnia e Caprinotecnia,
Patologia, Recursos Genéticos, Reprodução Animal e Suinicultura, que assumiram a organização dos
programas nas áreas respectivas, incluindo os temas e as individualidades que os irão apresentar. A SPCV
encontrou da parte destas organizações, desde a primeira hora, uma atitude de compromisso, de incentivo
e de verdadeira parceria, que muito nos honrou e que nos tem servido de estímulo para a realização deste
tão importante evento para a Classe Médico Veterinária. Para estas organizações e para todos os que, de
alguma forma, contribuiram para a realização deste Congresso - o nosso muito obrigado.
O Congresso de Ciências Veterinárias 2005 é uma oportunidade para todos os Médicos
Veterinários e outros profissionais que desenvolvem a seu actividade na área da Ciência Animal,
apresentarem os seus trabalhos e uma ocasião privilegiada para a troca de ideias e para a actualização de
conhecimentos.
À semelhança do expresso pela Comissão Organizadora do Congresso de Ciências Veterinárias
2002, também nós acreditamos que: “São manifestações desta natureza que definem a vitalidade dos
diferentes Sectores da Ciência e Tecnologia e pelo que aqui se mostra estamos certos que as Ciências
Veterinárias vão no bom caminho … tal é a dinâmica e a qualidade dos Profissionais, Técnicos, Docentes
e Investigadores, que hoje se dedicam e trabalham neste domínio científico”.
A Comissão Organizadora
v
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Índice Geral
Comissão de Honra ......................................................................................................................................................iii
Comissão Organizadora ...............................................................................................................................................iii
Comissão Científica .....................................................................................................................................................iii
Apoios Institucionais.................................................................................................................................................... iv
Patrocínios.................................................................................................................................................................... iv
Secretariado.................................................................................................................................................................. iv
Editorial ........................................................................................................................................................................ v
Índice Geral.................................................................................................................................................................vii
SESSÕES PLENÁRIAS ............................................................................................................................................... 1
COMUNICAÇÕES ORAIS.......................................................................................................................................... 5
Epidemiologia e saúde pública...................................................................................................................................... 6
Patologia ..................................................................................................................................................................... 19
Recursos genéticos animais......................................................................................................................................... 26
Diagnóstico / Toxicologia ........................................................................................................................................... 33
Qualidade e segurança alimentar ................................................................................................................................ 45
Actividades taurinas.................................................................................................................................................... 56
Suinicultura ................................................................................................................................................................. 59
Avicultura ................................................................................................................................................................... 63
Biologia celular e molecular ....................................................................................................................................... 69
Ovinotecnia e caprinotecnia........................................................................................................................................ 79
Bem-estar animal ........................................................................................................................................................ 89
Equinos ....................................................................................................................................................................... 96
Infecciologia ............................................................................................................................................................. 103
Reprodução ............................................................................................................................................................... 114
Buiatria...................................................................................................................................................................... 122
Animais de companhia.............................................................................................................................................. 128
Aquacultura............................................................................................................................................................... 128
POSTERS ................................................................................................................................................................. 147
Índice de Comunicações.............................................................................................................................................248
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SESSÕES PLENÁRIAS
Food hygiene
Herman Koëter
European Food Safety Agency
Identificação animal e rastreabilidade
Fernando Bernardo
Direcção Geral de Veterinária, L. Academia Nacional de Belas Artes, nº 2, 1249-105 Lisboa
A identificação dos animais de produção, individual ou colectiva, é um instrumento crucial para a gestão adequada
de todos os aspectos referentes à produção bem como ao maneio sanitário das explorações, incluindo programas de
erradicação e prevenção de doenças e sobretudo na Segurança Sanitária dos Alimentos.
Tendo em vista também a salvaguarda da segurança sanitária dos alimentos de origem animal e manter o nível de
confiança dos consumidores, todos os intervenientes na cadeia alimentar, têm de fazer diligências consistentes com
o objectivo de por em marcha na Europa um sistema que permita seguir o rasto dos produtos desde a produção
primária até à mesa do consumidor. Desde Janeiro de 2005 que a legislação europeia assim o exige (Reg. (EC) nº
178/2002 de 28/1). Os criadores de animais precisam criar e manter um sistema de registo adequado de modo a
melhorar a eficácia do maneio sanitário e do bem estar dos seus efectivos e colaborar com gestores de risco na
tomada de decisões, incluindo nesses registos os regimes alimentares e os medicamentos; registos correctos e
respeitos pelas normas de utilização dos medicamentos são cruciais. Ao longo dos últimos 8 mil anos os criadores
de animais têm usado múltiplos artifícios para obter uma adequada identificação dos seus animais, mas a
necessidade de um sistema de identificação universal, permanente, factível e prático ainda subsiste. Têm-se
equacionado e discutido muitas soluções para a identificação dos animais e dos seus produtos do “prado ao prato”.
Entre nós os sistemas SNIRB, SNIRA e SICAFE já são uma realidade não sendo contudo sistemas universais, nem
os mais práticos.
A urgência da necessidade de aperfeiçoar os sistemas de identificação animal revelam-se mais evidentes à medida
que a industria e o comércio alimentares se tornam mais exigentes, especialmente pelos factores decorrentes da
globalização (OMC – acordos SPS) e a imposição de sistemas que permitam seguir o rasto dos produtos.
Os principais objectivos da identificação e do registo dos animais são: Execução de controlos Veterinários e
zootécnicos na trocas intracomunitárias de alguns animais vivos e seus produtos; Controlo à entrada de animais
provenientes de países terceiros; Gestão de ajudas e prémios à produção; Trocas de informação rápidas e eficientes
entre os Estados Membros; manutenção de registos nas explorações para efeitos de Rastreabilidade; Identificação
mais precisa dos animais em caso de retiradas por intervenções sanitárias; Recolha eficaz de géneros alimentícios do
mercado nas circunstâncias em que o perigo sanitário foi introduzido ao nível da exploração; Comunicação de
Risco.
A identificação animal é também crucial noutras actividades, como o exame ante mortem dos animais ou das carnes
frescas, para efeitos de colheitas de amostras nas explorações e nos matadouros, como no caso de: pesquisa de
resíduos, de agentes zoonóticos, exames complementares na inspecção sanitária; caso contrário a acções judiciais
subsequentes podem ser prejudicadas. Estes são pontos críticos para captura registo e gestão da informação obtida a
partir dos sistemas de identificação animal.
Ao longo das cadeias alimentares existem múltiplas operações tecnológicas que têm o mesmo tipo de problemas
com fiabilidade da produção, manutenção e transmissão dos registos referentes à origem e ao destino em cada passo
das cadeia. O Sistema HACCP é, em si mesmo, também capaz de fornecer inúmeros dados que têm uma utilidade
complementar para o sistema da Rastreabilidade. Para se atingir o melhor desempenho do sistema da
Rastreabilidade é preciso dar especial atenção a alguns factores críticos: grau de fiabilidade do sistema de
identificação dos animais e do registo dos respectivos movimentos; registos da natureza da respectiva alimentação;
registo das medidas de maneio sanitário; captura da informação ao longo da cadeia; arquivos dos registos e ainda a
praticabilidade dos sistemas de rotulagem dos produtos.
[Identification of animals and traceability]
Livestock identification plays an important role in animal breeding and production systems as well as disease
eradication, disease prevention and food safety.
In order to assure food wholesomeness and maintain consumer confidence in food of animal origin (meat, milk,
eggs and fish) a consistent and diligent effort have to be put forth by all sectors of the food chain in Europe. These
principles are consigned in the EU legislation (Reg. (EC) nº 178/2002, 28/1). Animal farmers need rapid and
convenient record keeping systems to improve appropriated management of their health programs and participate on
decisions. This includes registration of feed supply and pharmaceutical products; correctly record and strict
2
adherence to established withdrawal periods. Over the years, many different methods have been used for animal
identification, but the need for a permanent and reliable identification system still persists in husbandry. Many
solutions have been in discussion to attend the principle from “farm to consumer”. In Portugal SNIRB, SNIRA and
SICAFE systems are already in place, but they are not universally adopted.
The sense of urgency to improve animal identification became more evident as the industry became better informed
of the implications that "ID" has with international trades policies (WTO-SPS) and with the facility of tracing in a
global market.
The aims of livestock identification and registration are: Veterinary and zootechnical checks in intra-Community
trade in certain live animals and products; Veterinary checks of animals entering the Community from Third
Countries; Management of certain Community Aid agriculture schemes; Rapid and efficient exchange of
information between Member States; Keeping of records of Animals on holdings and records of dealings; Rapid and
accurate tracing of animals; Recall of animal products and tracing back of Hazards associated with production
factors in husbandry’s; Risk Communication.
Other important use of animal “ID” concerns to activities like animal slaughtering, ante mortem examination and
fresh meat inspection, demand for sampling at the farm and the abattoir, like: residues detection, zoonotic agents
research, laboratory confirmations of meat inspection findings; otherwise any subsequent legal action could be
jeopardised. These are critical points for caption, registration and management of the information obtained from
animal system identification.
Across food chain many other operation have the same problem of accuracy in keeping records of all previous
origins and subsequent steps in the chain. The HACCP systems is, itself, a complementary tool and source able to
provide many data which are useful for traceability. To achieve the best accuracy in the traceability system, many
critical factors must be concern: level of confidence in the animal “ID” system and records of their movements;
registries on feed supplied, sanitary managements of animal production and caption of information, keeping records,
appropriated and practicable systems of labelling.
Animal welfare in relation to disease and production
Donald M. Broom
Department of Veterinary Medicine, University of Cambridge, Madingley Road, Cambridge CB3 0ES, UK. [email protected]
The relationships among the concepts of welfare, health and pathology and the consequences for disease of
particular behaviours are key issues in our understanding of animals and their welfare. Health is defined as an
animal's state as regards its attempts to cope with pathology, where pathology is a detrimental derangement of
molecules, cells, tissues, and functions that occur in living organisms in response to injurious agents or deprivations.
Pathology can be classified into genetic abnormalities; physical, thermal, and chemical injuries; infections and
infestations; metabolic abnormalities; and nutritional disorders. Welfare is the state of the animal as regards its
attempts to cope with its environment so is a wider concept than health. When an animal's health is poor, so is its
welfare, but poor welfare does not always imply poor health. Some measures of poor welfare classified as pathology
will therefore also be indicators of poor health, including body damage and symptoms of infectious, metabolic, and
nutritional disease. Other measures of poor welfare, while not being signs of poor health at the time, indicate a risk
of poor health in the future. They include immunosuppression and the occurrence of injurious abnormal behaviours.
The connection between coping mechanisms in the brain, immune function, and susceptibility to infectious disease,
as well as other routes by which poor welfare results in increased disease are illustrated. Improved animal
production efficiency has been a major achievement of the last fifty years but some of this has had costs for the
animals and these will be discussed.
Environmental hygiene is an important task in Veterinary Medicine
Reinhard Böhm
Universität Hohenheim, Institut für Umwelt und Tierhygiene sowie, Tiermedizin
Tel. 49 711/459-2427 - Fax: 49 711/459-2431, e-mail: [email protected]
mit
Tierklinik
–460,
D-70593
Stuttgart
Agricultural, municipal and industrial sources are contributing to improve the positive impacts of production,
processing, distribution and recycling of nutrients back to agriculture in the broadest sense. The conditions under
which the keeping of animals, the production of food and feed, the processing of the raw materials and their
distribution is done as well as the resulting by-products and wastes are used may differ substantially world - wide.
Independently from the local situation the general aim is to keep man and animals healthy and to avoid negative
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effects to the mediate and immediate environment. With respect to minimize the risk of introduction of zoonotic
agents or highly contagious animal pathogens into the environment as well as into the food- or feed chain
veterinarians have a specific responsibility. As long as health protection is the direct or indirect aim of the necessary
measures, hygiene is the tool which avoids the negative consequences with respect to man and animals in close
cooperation between medical and veterinary hygienists.
There are several ways risks due to chemicals and microorganisms may cause such risks and which can be
controlled by veterinarians. Negative health and environmental effects may be generated by the distribution organic
or inorganic pollutants as well as pathogens or other microorganisms with undesired properties.
The first responsibility is to prevent introduction of the undesired chemicals and micro-organisms into the primary
animal production indirectly via fertilizers or directly via treatment, water and feed. The second responsibility is to
prevent release of such risk factors into the environment like water air and soil from the primary production. The
third task is to prevent contamination with undesired chemicals or release and transmission of undesired
microorganisms via recycling of animal by-products. Hygiene prevents their introduction or generation at every step
of production, processing, distribution and utilization, therefore a survey is given how this can be achieved.
Veterinary Medicine in the United States
Bonnie Beaver
Texas A & M University, College Station, Texas
Veterinary medicine has changed tremendously over its existence in the United States, from one of apprenticeship
with practitioners, to one with high college educational standards. The focus of this talk will look at many aspects of
the profession as it exists today.
Educational standards have been developed through the American Veterinary Medical Association (AVMA) and its
Council on Education (COE). The purpose of this process was to allow all veterinary educational facilities to meet
certain standards of education in course material and quality of education. It helped standardize the knowledge base
of all new veterinarians, encourage the introduction of new knowledge into the class room, and ensure quality
facilities and faculties to deliver this education. The process has actually been a joint venture with the universities
and the AVMA's COE to bring our profession forward. As a highly regarded standard, the AVMA college
accreditation process is now being looked at by several other countries as a means for them to show that they too
meet certain high standards.
The United States has long insisted that individuals from outside our borders be allowed to work in their chosen
fields if they can show that they have skills equal to those needed by our own citizens. To provide opportunities for
veterinarians not educated in AVMA accredited programs to practice their profession, the AVMA has established a
program to evaluate the educational background of foreign-trained veterinarians, the ECFVG program. This will be
discussed.
Organized veterinary medicine is important for the progress of our profession over the years. The AVMA represents
87% of veterinarians in our country to represent our interests on the national level. To accomplish all the things that
it has, the AVMA has approximately 130 staff positions in 9 divisions. The headquarters building is in Schaumburg,
Illinois (near Chicago) and we have a building in Washington, DC for your Governmental Relations Division.
Continuing education (CE) opportunities provide veterinarians with the ability to stay current in things that affect
our profession.
The AVMA Convention is one of the 3 large meetings each year. We will discuss some of the types of EC available
in the United States too.
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COMUNICAÇÕES ORAIS
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Epidemiologia e Saúde Pública
Comunicação livre oral
Identificação de casos atípicos de scrapie em Portugal
Orge, L.1, Galo, A.2, Machado, C.1, Lima, C.1, Ochoa, C.1, Silva, J., Ramos, M.1 e Simas, J.P.3,4
1 Laboratório Nacional de Investigação Veterinária, Portugal
2 Investigador Principal Aposentado, Laboratório Nacional de Investigação Veterinária, Portugal
3 Instituto Gulbenkian de Ciência, Portugal
4 Instituto de Microbiologia, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, Portugal
Scrapie (ou Tremor Epizoótico) é uma Encefalopatia Espongiforme Transmissível (TSE) que afecta ovinos e
caprinos, constituindo a doença mais comum deste grupo de doenças, as quais incluem, entre outras, a doença de
Creutzfeldt-Jakob no Homem e a Encefalopatia Espongiforme Bovina (BSE).
O scrapie já é conhecido há mais de 250 anos, sendo endémico em muitos países europeus. Esta doença não
constituía um problema de Saúde Pública até à demonstração da transmissão experimental da BSE aos ovinos e
caprinos, associada à impossibilidade de distinguir clinicamente as duas doenças e da BSE assumir características
biológicas idênticas às do scrapie. O potencial risco de transmissão natural da BSE aos ovinos e caprinos, com a
possibilidade desta doença se tornar endémica nas populações destas espécies, bem como o facto da BSE ser
considerada uma zoonose, despertaram a preocupação da Comissão da UE para a vigilância epidemiológica das
TSEs também nos ovinos e caprinos. Deste modo, e de acordo com o Regulamento 999/2001, e suas posteriores
actualizações, a vigilância através da realização de testes rápidos de diagnóstico, pela pesquisa de proteína priónica
resistente (PrPres) (o marcador específico das TSEs) numa larga amostragem de pequenos ruminantes decorre em
todo o espaço europeu comunitário desde 2002.
Em Portugal, pese embora a vigilância desenvolvida até 2002, nunca tinha sido identificado nenhum caso de scrapie
em pequenos ruminantes. No âmbito do plano de vigilância activa, desde o seu início em 2002 e até Maio de 2005,
foram testados 108486 ovinos e caprinos, tendo-se detectado 55 (45 nacionais e 10 importados) casos de ovinos com
acumulação de PrPres no Sistema Nervoso Central. Destes 55 casos, 52 ovinos (45 nacionais e 7 importados)
revelaram uma distribuição e um perfil electroforético da PrPres diferentes do scrapie clássico, o qual foi
diagnosticado em apenas 3 ovinos importados. Na determinação dos genótipos do gene Prnp ao nível dos codões
136/154/171, identificaram-se vários genótipos, incluindo genótipos raramente associados com scrapie. Estes casos
são apresentados nesta comunicação, abordando-se os aspectos histopatológicos e genotípicos (ao nível do gene
Prnp) bem como o perfil electroforético da PrPres.
Estes dados evidenciam a existência de uma forma atípica de scrapie em Portugal sem uma relação a um genótipo
em particular, equacionando-se quais serão as implicações na saúde pública bem como na aplicação de programas
de controlo e erradicação de scrapie baseados na selecção genética de ovinos resistentes (ARR/ARR) introduzidos
em alguns países da União Europeia.
[Identification of atypical cases of scrapie in Portugal]
Scrapie affects sheep and goats and is the most common form of transmissible spongiform encephalopathies, which
include Creutzfeldt-Jakob Disease (CJD) of humans and Bovine Spongiform Encephalopathy (BSE).
Scrapie is an endemic disease recognized for over 250 years in several European countries. As no obvious clinical or
epidemiological connection to human disease has been revealed to date, scrapie is considered non-pathogenic for
humans, at least under natural conditions. However, since it has been shown that sheep could be experimentally
infected with BSE, the possibility has been raised that BSE could have been accidentally introduced in this species.
This has prompted in 2002 the implementation of a surveillance plan of scrapie in small ruminants by the European
Union in all member states.
In Portugal, despite the completion of previous scrapie surveillance schemes, no scrapie cases have been diagnosed.
Since its implementation in 2002 (according to EU regulation 999/2001 and subsequent alterations) until May 2005,
a total of 108486 sheep and goats have been tested and 55 (45 national and 10 imported) cases of sheep with
detectable PrPres deposition in the central nervous system have been identified in Portugal. Notably, in 52 sheep (45
national and 7 imported) the PrPres distribution and the profile of the electrophoretic mobility were different from
that previously described for scrapie diagnosed only in 3 imported sheep. Moreover, the PrP genotyping at the
codons 136/154/171 revealed a variety of genotypes, including genotypes rarely associated with scrapie.
These data reveal an atypical scrapie strain in Portugal not linked to specific PrP genotypes raising some questions
about its repercussion in public health as well as in the scrapie resistant breeding programmes that have been
introduced in several EU member states.
6
Leptospirose canina na ilha de São Miguel – Seroconversão em animais não vacinados
Borrego, S.1, Vilela C.L.1 e Collares-Pereira, M.2
1 CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária,. Av. Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa, Portugal
2 Unidade de Leptospirose e Borreliose de Lyme, IHMT/UNL, R. da Junqueira, N.º 96, 1349-008, Lisboa, Portugal
A leptospirose humana regista nos Açores a taxa de incidência mais elevada do País, com um número de casos cerca
de dez vezes superior à média nacional. Dados sobre a taxa de infecção e serovares circulantes na população canina
Regional são praticamente inexistentes, mas de extrema importância para o desenho de medidas de controlo
eficazes. O presente estudo visou conhecer o padrão da leptospirose em canídeos micaelenses.
Soros de 157 canídeos não vacinados, observados entre Agosto/04 e Maio/05, foram testados pela Técnica de
Aglutinação Microscópica, com 12 serovares (2 isolados locais) representativos de 9 serogrupos patogénicos.
A percentagem de seropositivos (títulos ≥1:100) foi de 22%. Neste grupo, em apenas 31% dos animais foram
identificados sintomas compatíveis com infecção por Leptospira. O serogrupo Icterohaemorrhagiae foi o mais
reactivo (94%), seguido de Autumnalis (25,7%), Australis (20%), Canicola (5,7%) e Sejroe (2,8%). Trinta e um por
cento dos soros positivos coaglutinaram com dois ou mais serogrupos. O padrão de coaglutinação mais frequente foi
Icterohaemorragiae/Autumnalis/Australis (11%). Não se encontrou reactividade para os restantes serogrupos
utilizados (Pomona, Bataviae, Ballum e Grippotyphosa). Os títulos variaram entre 1:100 e 1:6400 com um Título
Geométrico Médio de 315.
Os resultados sugerem que as estirpes do serogrupo Icterohaemorrhagiae são as principais responsáveis pela
leptospirose em cães micaelenses. Este é também o serogrupo mais frequentemente associado às infecções humanas
e um dos que tem sido mais isolado de roedores. Embora estes sejam o principal reservatório natural das leptospiras,
os canídeos podem ter igualmente, pela estreita relação com o Homem e com o ambiente, uma importância
epidemiológica significativa na transmissão destes agentes. Os resultados obtidos, aliados ao facto da vacinação
induzir uma imunidade específica, sugerem que deveria ser implementado um esquema de vacinação adequado à
Região, visando eliminar tanto a doença clínica como o estado de portador.
[Seroepidemiology of Leptospirosis on unvaccinated dogs of São Miguel - Azores]
Human leptospirosis presents in the Azores islands the highest incidence rate of Portugal, with a number of cases
about 10 times greater than national mean. Available data on seroprevalence and circulating serovars in the canine
population of São Miguel is scarce, but essential to design effective control measures. The present study aimed at
knowing the leptospirosis pattern in dogs from São Miguel.
Sera from 157 unvaccinated dogs from São Miguel, observed between Aug/04 and May/05, were tested by the
Microscopic Agglutination Test, with 12 serovares (2 local isolates), representative of 9 pathogenic serogroups.
The percentage of seropositive dogs (titres ≥1:100) was 22%. Within this group, only in 31% of the animals were
identified clinical signs compatible with Leptospira infection. Serogroup Icterohaemorrhagiae was the most reactive
(94%), followed by serogroups Autumnalis (25,7%), Australis (20%), Canicola (5,7%) and Sejroe (2,8%). Thirty
one per cent of positives showed coagglutination with two or more serogroups. The more frequent coagglutination
pattern was Icterohaemorragiae/Autumnalis/ Australis (11%). There was no reactivity for the other tested serogroups
(Pomona, Bataviae, Ballum and Grippotyphosa). Titres ranged from 1:100 to 1:6400, with a Geometric Mean Titre
of 315.
Results suggest that strains belonging to the serogroup Icterohaemorrhagiae are the major responsible for canine
leptospirosis in São Miguel. This serogroup is also the most frequently associated with human infections and one of
the more commonly isolated from rodents. Although these are the main natural reservoir of leptospires, dogs may
also play an important epidemiological role in the transmission of these pathogens, due to their close contact with
man and the environment. Results from this study, allied to the fact that vaccines induce specific immunity, suggest
that an adequate regional vaccination scheme should be routinely carried out, bearing in mind the need to eliminate
both clinical disease and the carrier state.
7
Gripe aviária altamente patogénica
Almeida, V.A., Nunes, T., Vaz, Y., Melo, M. e Louzã, A.
Faculdade de Medicina Veterinária-UTL, R.Prof. Cid dos Santos. 1300-477 Lisboa
Objectivos: Os Autores identificam os elos mais vulneráveis da cadeia de transmissão inter-espécies e de dispersão
geográfica destes vírus nas populações susceptíveis, com o intuito de contribuir para melhorar a eficácia das
medidas de vigilância e dos planos de emergência.
Metodologia: As recentes epidemias de gripe aviária na Europa e na Ásia são analisadas nos contextos dos vírus de
baixa (GABP) e de alta patogenicidade (GAAP); das tendências da dispersão geográfica da actual epidemia; e das
consequências devastadoras do morticínio de centenas de milhões de aves e da ocorrência de dezenas de casos
humanos fatais.
Resultados: A gripe aviária é uma doença muito contagiosa, das aves de capoeira e doutras aves, provocada por
quinze estirpes de vírus da família Influenzaviridae. Estes vírus podem também infectar mamíferos, nomeadamente
os suínos e o Homem. Devido às contínuas alterações genéticas dos vírus e à sua possível “adaptação” nos
hospedeiros recentemente infectados, os riscos para a Saúde Pública e a Sanidade Animal são variáveis, e muito
difíceis de prever.
Na UE, ocorreram focos de GAAP em Itália (1999-2000) e nos Países Baixos, com disseminação à Bélgica e à
Alemanha (2003). As medidas de morticínio, desinfecção e vazio sanitário nestas duas epidemias, custaram à UE
101 e 174 milhões de euros, respectivamente. O custo médio por foco foi de €150000.
Prevêem-se 80 a 320 focos de GABP por ano na UE, dos quais, em 25%, será necessário recorrer ao morticínio. Os
vírus GAAP dos tipos H5 e H7 foram responsáveis pela esmagadora maioria dos casos de gripe aviária no Homem e
por todos os casos fatais.
A vigilância activa das aves selvagens (especialmente, aves aquáticas migratórias) é crucial para detectar
precocemente à entrada de vírus GAAP no território nacional.
A vacinação é útil não só em cenários de emergência como para prevenir a eclosão da doença nos cenários de risco
elevado.
Finalmente, a legislação comunitária deve dar aos EM a possibilidade de adoptarem medidas de luta, de forma
proporcionada e flexível, ajustadas ao nível de risco colocado pelas diferentes estirpes; a modulação das medidas de
restrição de movimentos em função da densidade populacional de aves de capoeira e das repercussões
socioeconómicas da estratégia na fileira; garantindo, simultaneamente, que as medidas implementadas em cada
cenário sejam as mais adequadas.
[Highly pathogenic avian influenza]
Objectives: The Authors identify the most vulnerable links on the interspecies transmission chain and the
geographical dissemination of the virus on susceptible populations. The aim is to contribute to improve the efficacy
of the surveillance strategy and the contingency plans.
Methodology: The recent epidemics of highly pathogenic avian influenza in Europe and Asia are discussed on the
framework of virus of low (LPAI) and high pathogenicity (HPAI); geographical trends of the present epidemic; and
the devastating consequences of the stamping out of hundreds of millions of birds and the occurrence of fatal human
cases.
Results: The highly pathogenic avian influenza is a very contagious disease of poultry and other birds. It is caused
by fifteen subtypes of influenza virus. The virus can also infect mammals, namely swine and Men. Due to
continuous genetic mutations of the virus and its “adaptation” potential to hosts recently infected, the risks to Public
and Animal Health are variable and very difficult to predict. There were outbreaks of HPAI in UE in Italy (19992000) and Netherlands (2003) which spread to Belgium and Germany. The UE cost associated with the stamping out
and disinfection of premises on these two epidemics was 101 and 174 M€, respectively. The average cost per
outbreak was €150000.
80 to 320 outbreaks of LPAI are expected per year in the UE. In 25% of the cases it will be necessary to depopulate
the production units. HPAI virus type H5 and H7 were responsible for the majority of human cases of avian
influenza and for all the fatal cases. Active surveillance of wild birds (mainly aquatic migratory species) is critical
for the early detection of HPAI virus. Vaccination proved helpful not only on emergency situations but also to
prevent disease occurrence in high risk scenarios. Finally, EU legislation should allow Member States to select
disease control and prevention strategies, on a flexible and proportional way, adjusted to the risk level posed by
different virus subtypes; to modulate movement control methods according to population densities and economical
impact through the entire chain; assuring, simultaneously, that the chosen combination of measures will be the best
fit for each specific epidemiological and economical scenario.
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Utilização de dados de detecção remota em epidemiologia veterinária
Nunes, T.P.
Faculdade de Medicina Veterinária, Av da Universidade Técnica, 1300-447 Lisboa, email:[email protected]
No estudo das doenças infeciosas há que levar em conta os factores determinantes especificos do agente, do
hospedeiro e do ambiente. Os factores ambientais, tais como os factores ecológicos e climáticos são de particular
importância na dinâmica de determinadas doenças, das quais se destacam as doenças transmitidas por vectores. No
entanto, devido à dificuldade de obtenção destes dados por detecção local, particularmente de forma retrospectiva ou
de forma continuada, a análise destes dados tem sido limitada na maioria dos estudos em epidemiologia veterinária.
O lançamento a partir de 1972 de diversos satélites de obsevação da terra e a posterior disponibilização dos dados
dos seus sensores à comunidade científica, constitui uma oportunidade para a análise do impacto de determinados
parâmetros ecológicos nas doenças animais.
O objectivo deste trabalho é apresentar alguns dos sensores cujos dados estão já disponíveis à comunidade
científica, os parâmetros de interesse que podem ser utilizados na vigilância e controlo de doenças animais, assim
como algumas das metodologias para a sua utilização.
Os sensores instalados em satélites, diferem em termos de resolução espacial, temporal e espectral. Estes variam
desde os instalados em satélites de órbita de baixa altitude com resoluções espaciais elevadas mas com resoluções
temporais baixas, particularmente úteis para a classificação da ocupação de terrenos, até aos instalados em satélites
de orbitas de alta altitude com reduzidas resoluções espaciais mas com elevada resolução temporal, usados na
caraterização da dinâmica temporal dos diversos determinantes ambientais.
A partir de dados de detecção remota é possivel obter indicadores de variaveis como a elevação do terreno, a
biomassa vegetal, o tipo de coberto vegetal, temperatura ao nível do solo e a humidade. Com estas variaveis, é
possivel por exemplo com base em pontos amostrais caracterizar os biotipos de determinados vectores de doença,
permitindo o desenvolvimento de modelos de risco para a presença destes vectores para outras áreas. A integração
desta informação com dados de ocorrência de doença, permite a criação de sitemas de alerta antecipada, com obvias
vantagens na definição de estratégias de profilaxia sanitária.
[Remote sensed data in veterinary epidemiology]
In the study of infectious diseases, determinant factors of the agent, host and environment should be taken into
account. Environmental factors, such as ecological and climatic factors, are specially important for certain diseases,
like vector born diseases.
Since the access of this data trough local detection is not always feasible or practical, specially on a continuous or
retrospective way, the analysis of this data has been limited in most of the veterinary epidemiological studies. Since
1972, several earth observation satellites have been launched, and the data from their sensors have been made
available for the scientific community. This represents an opportunity for the analysis of the impact that several
ecological parameters have in animal diseases.
The objective of this work is to present some of the sensors for which data is already available for the scientific
community, the parameters that can be used for the surveillance and control of animal diseases, as also some of the
available analysis methodologies.
Satellite sensors differ in spatial, temporal and spectral resolution. The ones in low altitude orbits have high spatial
resolutions but low temporal resolutions and are particularly useful to classify land use. The ones in high altitude
orbits have low spatial resolutions but high temporal resolutions and can be used to characterize the temporal
dynamics of several environmental determinants.
From remote sensed data is possible to obtain indicators of variables like terrain elevation, green biomass,
landcover, land surface temperature and humidity. With this variables, is possible from sampling points to
characterize the habitat of some disease vectors, and thereafter develop risk models for the presence of this vectors
in other areas. The integration of this information with disease occurrence data, can help the development of early
warning systems, with obvious advantages in the definition of disease prevention strategies.
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A análise do ciclo de vida como ferramenta de gestão ambiental na industria de lacticínios
Castanheira, E.G.1, Pereira, C.J.D.1, Gomes, D.1, Aguado, N.2
1 Escola Superior Agrária de Coimbra, Bencanta, 3040-316 Coimbra. Telf. 239802940, [email protected]
2 Escuela Técnica Superior de Ingenierías Agrárias - Universidad de Valladolid
As medidas impostas pela União Europeia na área do ambiente têm tido como principal consequência a necessidade
de adaptação das indústrias de lacticínios a uma nova realidade. A implementação destas medidas não pode, nem
deve ser encarada como uma necessidade de investimentos sem retorno para as empresas, mas sim numa
possibilidade de reestruturação e criação de novos mercados e produtos.
No que respeita às indústrias de lacticínios a produção de soro lácteo está associada a um dos maiores impactes
ambientais deste tipo de indústria, a produção de águas residuais com elevada carga orgânica. Anualmente são
produzidas, em Portugal, cerca 500 mil toneladas de soro líquido (ANIL, 2000). Os elevados consumos de energia e
de água são igualmente considerados impactes ambientais significativos neste ramo.
Tendo em vista a minimização destes impactes ambientais foi instalado na Oficina Tecnológica de Lacticínios da
Escola Superior Agrária de Coimbra um equipamento piloto que permite a valorização do soro líquido produzido
nessa unidade e ainda a reutilização de água. O tratamento consiste num processo contínuo de ultrafiltração e
osmose inversa: as proteínas séricas são recuperadas por ultrafiltração sendo desnaturadas e reintroduzidas no
processo produtivo do queijo. O permeado resultante deste tratamento é submetido a osmose inversa sendo a água
obtida utilizada na lavagem dos pavimentos da unidade.
Este estudo envolve a caracterização dos produtos, das águas residuais e dos consumos de água e energia associados
ao processo produtivo convencional do queijo e ao processo produtivo alternativo, na qual é feita a valorização do
soro lácteo. Para uma avaliação ponderada dos impactes ambientais associados a cada uma destas formas de
produção é ainda utilizada a Análise de Ciclo de Vida. Esta ferramenta de gestão ambiental permite, através da
análise aprofundada de todas as etapas de vida do produto e da quantificação dos inputs e outputs no sistema, definir
e quantificar os impactes ambientais associados a cada uma dessas etapas. Desta forma, é possível através da
utilização do software adequado, utilizar esta ferramenta como um instrumento de apoio à decisão quando se trata de
reorganizar e adaptar processos produtivos à nova realidade nacional e europeia, permitindo uma melhoria do
desempenho ambiental e financeiro nas industrias de lacticínios.
[Life cycle assessment as a tool of environmental assessment at dairy industry]
European Union’s environment legislation in becoming increasingly demanding, which has obviously consequence
on the dairy industry, that experiences difficulties in the adaptation to this new reality. These new requirements
might nevertheless be seen not as an expense, where the investment has no returns for the industries, but as a good
opportunity for the development of new products and the conquest of new markets. Whey production in dairy
industries has big environmental impacts caused by the high organic charge of their wastewaters. Portugal produces,
approximately, 500000 tones of liquid whey per year (ANIL, 2000). In addition, the dairy industry consumes
significant amounts of water and energy.
Aiming the reduction of these impacts in the “Oficina Tecnológica de Lacticínios – Escola Superior Agrária de
Coimbra” a new pilot-equipment was installed, to permit liquid whey valorisation and water reuse. This treatment
consists on a continuous process of ultrafiltration and reverses osmosis. The whey proteins are recovered for
ultrafiltration and re-used in the cheese productive process. The ultrafiltration resulting permeated is then submitted
to a new treatment, reverses osmosis. The water flowing out of reverse osmosis can be used to wash pavements.
This study characterizes products, wastewater and energy and water consumption for conventional cheese
production and of alternative cheese production (with liquid whey valorisation).
To quantify the environmental impacts of each cheese production process, a life cycle assessment methodology was
used. This environmental management tool, allows a detailed analysis through all cheese’s life cycle steps. The
method quantifies all the system’s inputs and outputs, defining and quantifying the environmental impacts
associated to each steps.
Through the operation of specific software, it is then possible to use this instrument as a decision instrument which
can be a valuable tool to re-organize the productive processes and adapt it to the new environmental requirements,
while achieving a better environmental and financial performance.
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Risco de seroconversão à paratuberculose e associação com factores predisponentes em efectivos
leiteiros em contraste do Entre Douro e Minho
Gomes, C.1,2, Afonso, C.1, Madeira, H.1, Barbosa, A.1, Sousa, J.1, Pereira, A.1, Niza-Ribeiro, J.1,2
1 Laboratório de Segurança Alimentar e Saúde Animal (Segalab, SA)
2 Universidade do Porto - Instituto de Ciências Biomédicas Abel Salazar.
A paratuberculose é uma doença infecciosa crónica que afecta os ruminantes, causada pelo Mycobacterium avium
subsp. paratuberculosis (MAP). O MAP tem crescimento lento, capacidade de sobrevivência em condições
ambientais adversas e boa resistência a desinfectantes e à maioria dos antibióticos. A doença tem uma distribuição
mundial, com impacto significativo na economia global do sector leiteiro, podendo provocar pesadas perdas
financeiras em explorações leiteiras infectadas. Estas decorrem da diminuição da produtividade, do aumento da
infertilidade e da susceptibilidade a outras infecções, terminando com emaciação e morte dos animais infectados. O
isolamento do MAP em pacientes com a doença de Crohn levanta a hipótese que este seja patogénico para a espécie
humana.
Realizou-se um estudo epidemiológico observacional, transversal, a uma amostra representativa das explorações
leiteiras em constraste no Norte de Portugal. Seleccionaram-se de forma aleatória, proporcional ao peso de cada
concelho 122 explorações e recolheram-se 5299 amostras de leite individual a todas as vacas em lactação. Efectuouse um inquérito estruturado, previamente validado, para recolher dados que pudessem ser relacionados com o risco
de seroconversão sobre as vacas, o maneio e a política de compras de cada exploração. Utilizou-se um método de
ELISA para detectar seroconversão (positividade) no leite individual. Para determinar associações de risco foram
classificadas como positivas explorações com pelo menos um animal seropositivo.
Classificaram-se positivas 56 explorações. As associações de risco de seroconversão mais importantes a nível de
exploração foram a (i) introdução de animais durante os últimos 4 anos (OR: 2,79, p=0,019), (ii) dimensão superior
a 49 animais (OR: 2,46, p=0,035) e (iii) a limpeza das manjedouras menos de uma vez por dia (OR: 2,16, p=0,038).
Quanto às vacas, foram associações de risco de seroconversão (i) ter duas ou mais lactações versus uma lactação
(OR: 2,41, p<0,001). O desenho do estudo não permitiu evidenciar associações de risco de incidência dentro das
explorações. Identificaram-se entre as explorações estudadas vários factores de risco descritos noutros estudos como
estando associados à disseminação da doença dentro da explorações.
Os resultados evidenciam associações de risco de introdução da doença nas explorações da amostra, semelhantes às
descritas por outros autores, na Europa e nos EUA. O risco de introdução por animais de origem nacional ou
estrangeira é semelhante. Este cenário mostra a importância da adopção de programas de biosegurança nas
explorações e de programas para controlo da doença nas explorações infectadas.
Agradecimentos: à ABLN pelos dados fornecidos. Projecto financiado pela FCT com a designação POCTI /CVT
/39462/2001.
[Risk of seroconversion to paratuberculosis and associations with risk factors of dairy herd in dairy
herds improvement schemes in the region of Entre Douro e Minho]
Paratuberculosis or Johne’s disease is a chronic infectious disease that affects the ruminants, caused by a bacterium
called Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map). This bacteria is characterizated by its slow grow, their
ability to survive in hard conditions and their resistance to disinfectants and antibiotics. Paratuberculosis is a
worldwide disease with a significant impact in the economic of the dairy herd. The losses are due to lesser
productivity, higher infertility and susceptibility to others infections, and in the end the animal die. The isolation of
Map from the intestinal tissue of persons with Crohn may indicate that this bacterium is pathogenic to humans.
It was done an observational, transversal epidemiological study, to a sample of representative dairy herds in dairy
herd improvement schemed in region Entre Douro and Minho (EDM). The sample was form by 122 dairy herds and
5299 samples of individual milk. A questionnaire about the management in the herd, especially risk factors, was
done in each visit. An ELISA method was used to detect seroconvertion in the individual milk samples. To
determine de risk associations the herds were classified as positive if the had at least one animal seropositive.
So we had 56 positive herds. The more important risk associations at the herd level found were: (i) buying animals
in the last four years (OR: 2.79, p=0.019), (ii) herds with 50th or more animals (OR: 2.46, p=0.035) and (iii)
cleaning the mangers less than once for day (OR: 2.16, p=0.038). At animal level: (i) animals with two or more
lactations against animals with one lactation (OR: 2.41, p<0.001). This study do not allow showing risk associations
concerning the incidence of the disease inside the herd. It was identified in the sample several risk factors described
by others authors as being associated with the dissemination of the disease inside the herds.
This work shows that the risk associations of introducing the disease in the herds are similar to the ones described by
others authors in Europe and USA. The risk of introducing animals of national or foreign origin is similar. This
setting shows the importance of implementation of biosafety programs in the herds and control programs in the
infected herds.
Aknowledgments to ABLN. Project financed by FCT with the grant POCTI/CVT/39462/2001.
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Isolamento de Corynebacterium pseudotuberculosis a partir de lesões de linfadenite em suínos da
Raça Alentejana
Cavaco, L.M.1, Costa, D.2, Oliveira, M.1, Nunes, S.F.1, Bexiga, R.1, 3, Vilela, C.L.1
1 CIISA/ Faculdade de Medicina Veterinária, Pólo Universitário do Alto da Ajuda, Av. da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa, Portugal.
2 Clínico privado
3 Presentemente na Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade de Glasgow, Reino Unido
Os dados apresentados referem-se a duas explorações, A e B, na região de Odemira, onde foram detectados casos de
linfadenite purulenta em suínos da raça Alentejana. Nas explorações A e B, respectivamente com 700-800 e 400-500
animais, os animais são mantidos em camping extensivo, com as fêmeas, até ao desmame, após o que são criados
em extensivo, em lotes de engorda com cerca de 200 animais.
Os casos surgiram em animais logo após o desmame e até aos 10 meses, em todos os lotes de recria, atingindo até
10% destes. As lesões situavam-se mais frequentemente nos linfonodos da região da cabeça e cervicais, embora
surgissem também noutras localizações. Em cerca de 1% dos animais a morte surgiu em consequência de poliartrite
ou disseminação da infecção a outros orgãos. Nos restantes animais, a infecção foi controlada medicamente, não se
tendo verificado rejeições no abate. Esta afecção causou perdas económicas consideráveis, por diminuição da taxa
de crescimento e despesas de tratamento.
Foram colhidas amostras de 4 porcos de A e de 2 de B, onde se observaram cocobacilos Gram+. Em todas as
amostras foi isolado Corynebacterium pseudotuberculosis. Este microrganismo encontrava-se em cultura pura em
todas as amostras recolhidas em A, excepto uma e ambas as amostras recolhidas em B. Na quarta amostra de A,
isolou-se ainda Arcanobacterium pyogenes. Foram preparadas vacinas de rebanho, inactivadas, a partir dos isolados
de cada exploração. Os leitões de todos os lotes de A e apenas os de um lote de B foram vacinados (2mL IM) após
desmame, com rappel após 3-4 semanas. Na exploração A foi realizada a revacinação 1 ano depois.
Em B, não surgiram casos novos após a vacinação. Em A, a profilaxia vacinal não impediu totalmente o
aparecimento de novos casos, tendo sido isolado Corynebacterium pseudotuberculosis a partir de 5 amostras obtidas
a partir de casos recentes. Foram detectadas algumas práticas de maneio que provavelmente terão contribuído para
este problema. Os resultados sugerem que a utilização de vacinas de rebanho, aliada a medidas de maneio sanitário,
permitem controlar esta infecção.
Na literatura disponível, não encontramos qualquer referência a isolamento de Corynebacterium pseudotuberculosis
a partir de amostras clínicas de suínos. Em ambas as explorações não se confirmou a ligação epidemiológica à
ocorrência de linfadenite caseosa em pequenos ruminantes. Deverão agora ser desenvolvidos estudos mais
aprofundados sobre caracterização genética e factores de virulências dos isolados suínos.
[Isolation of Corynebacterium pseudotuberculosis from lymphadenitis lesions in swine of the
Alentejana breed]
Data presented refer to two swine herds A and B, both from the Odemira area, where purulent lymphadenitis cases
were detected in Alentejana breed swine. In farm A and B, respectively with 700-800 and 400-500 animals, piglets
are maintained in camping with the sows until weaning, and afterwards are reared in extensive, in lots with around
200 animals each.
Cases were detected in piglets from weaning until 10 month of age, in all rearing lots, affecting up to 10% of the
animals. Lesions were observed mainly in the head and neck lymphnodes, but were also found in other locations.
About 1% of the animals died in consequence to polyarthritis, and/or dissemination of infection to other lymphnodes
and organs. In the remaining cases, the infection was medically controlled and was not responsible for rejections at
slaughter. This condition has been causing considerable economical losses, due to lowering growth rates and
treatment expenses.
Samples were collected from 4 pigs from farm A and 2 pigs from farm B, where Gram positive cocobaccilli could
be observed. Corynebacterium pseudotuberculosis was isolated from all samples. This microorganism was found in
pure culture in all but one sample from farm A and both samples from farm B. From the fourth sample from farm A
Arcanobacterium pyogenes was also isolated. Two inactivated whole-cell autovaccines were produced using herdspecific isolates of each farm. Piglets of all lots in farm A and piglets from a unique lot of farm B were vaccinated
after weaning (2mL, IM), with a rappel after 3-4 weeks. In farm A, animals were revaccinated after 1 year.
In farm B, no more cases have been observed since vaccination. In farm A, the vaccine did not totally prevent the
emergence of new cases and Corynebacterium pseudotuberculosis was again isolated from 5 samples collected from
recent cases. Some management practices that were identified may have contributed to this problem. The results
suggest that the use of a herd-specific vaccine, allied to control measures and sanitary management practices, allow
to control this infection. To our knowledge, this is the first description of isolation of Corynebacterium
pseudotuberculosis from swine clinical samples. In both herds, the possibility of an epidemiological link to caseous
lymphadenitis in small ruminants has not been confirmed. Further studies are required on genetic characterization
and virulence factors of pig isolates.
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Contaminação parasitária por fezes de canídeos em jardins e vias públicas da cidade de Santarém –
Novos dados*
Crespo, M.V.1, Cerejo, A.1, Rosa, F.2
1 Escola Superior Agrária de Santarém, Apartado 310-2001 904 SANTARÉM
2 Instituto de Investigação Científica Tropical/Zoologia, Rua da Junqueira, 14, 1349-007 LISBOA
Após um estudo parasitológico realizado há seis anos atrás em amostras de fezes de canídeos na cidade de Santarém,
as autoridades locais tomaram algumas medidas sanitárias para protecção da contaminação parasitária do meio
ambiente. O presente trabalho teve como objectivo principal determinar o tipo e o grau de parasitismo actual e
compará-los com os resultados obtidos anteriormente.
Entre Setembro de 2003 e Agosto de 2004 efectuou-se a colheita aleatória de 144 amostras de fezes de canídeo,
encontradas no solo de diferentes locais das quatro freguesias da cidade (Marvila, Sta. Iria, S. Nicolau e S.
Salvador), num total de 576 amostras. Estas foram submetidas a análises coprológicas, pelas técnicas de Willis e de
sedimentação espontânea.
Das 576 amostras, 193 (33,51%) apresentaram ovos de helmintes e oocistos de protozoários com a seguinte
distribuição por freguesias em estudo: Marvila, 20,83%; Sta. Iria, 54,17%; S. Nicolau, 22,92% e S. Salvador,
36,11%.
Identificaram-se ovos de espécimes pertencentes às famílias Taeniidae e Dipylidiidae (Platyhelminthes, Cestoda),
Ancylostomatidae, Ascarididae e Trichiridae (Nematoda) e oocistos de Eimeriidae e Sarcocystidae (Apicomplexa).
As maiores prevalências foram registadas em Ancylostomatidae (73, 06%) e Trichuridae (24,87%) e a menor em
Sarcocystidae (0,52%). Das 193 amostras positivas, 76,17% apresentaram infecção simples, 21,76% infecção dupla
e 2,07% infecção tripla.
As prevalências e o tipo de infecção obtidos foram ligeiramente inferiores aos registados em 1997/1998, o que
sugere que as campanhas implementadas não foram suficientes, pelo que continua a haver a necessidade da
aplicação de medidas preventivas adequadas, de forma a continuar a reduzir os riscos de contaminação ambiental e
de infecção humana e animal.
* Integrado no Projecto “Contaminação parasitária por fezes de canídeos de zonas urbanas e rurais do Ribatejo e
Oeste” da Escola Superior Agrária de Santarém (Sector de Produção Animal).
[Parasitological contamination by dog faeces of gardens and streets at Santarém city – New data]
After a parasitological study on dog faeces from streets at Santarém city performed six years ago, the local
authorities to protect environment from parasitological contamination implemented some sanitary measures.
Though, the main purpose of the present study was the detection of parasitological egg output in dog faeces, which
were hazard sampled in public gardens and streets of Santarém city and then comparisons were made to former data.
Between September 2003 and August 2004, 144 samples of dog faeces were taken from the soil in different places
of the city four communities (Marvila, Sta. Iria, S. Nicolau e S. Salvador), with an overall of 576 samples.
Coprological exams were performed using Willis and spontaneous sedimentation techniques.
From the total faeces samples examined, 193 (33,51%) samples sheded helminth eggs and/or protozoa oocyst. In all
communities the following distribution was observed: Marvila, 20,83%, Sta. Iria, 54,17%, S. Nicolau, 22,92% and
S. Salvador, 36,11%.
Specimen’s eggs were identified as belonging to the families Taeniidae and Dipylidiidae (Platyhelminthes,
Cestoda), Ancylostomatidae, Ascarididae and Trichuridae (Nematoda) and oocyst of Eimeriidae and Sarcocystidae
(Apicomplexa).
The highest prevalence belonged to Ancylostomatidae (73,06%) and Trichuridae (24,87%) and the smaller to
Sarcocystidae (0,52%). Out of the positive samples, 76,17% showed simple infection, 21,76% double infections and
2,07% triple infections.
Parasitical prevalence’s was slightly lower than that found in earlier studies. This fact suggests that the measures
implemented have not been effective. So, it is still necessary to stress out the importance of the application of
adjustable preventive measures in order to proceed the reduction of environmental contamination and human and
animal infection risks.
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Cryptosporidium sp. em bivalves de água doce em Portugal
Melo, P.1, Teodósio, J.2, Reis, J. 3, Duarte, A. 1, Correia da Costa, J.M.4, Pereira da Fonseca, I.M.1
1 CIISA, FMV-UTL, R. Prof. Cid dos Santos, 1300-477 Lisboa
2 CCMAR, Universidade do Algarve, Faculdade de Ciências do Mar e Ambiente. Campus de Gambelas, 8000-810 Faro
3 Centro de Biologia Ambiental/Dep.de Biologia Animal, Faculdade de Ciências da UL, Campo Grande, C2, 3ºPiso, 1749-016 Lisboa
4 Centro de Imunologia e Biologia Parasitária, INSA, R. S. Luís, 16, 4000-509 Porto, Portugal
A criptosporidiose é uma zoonose causada por um protozoário da subclasse Coccidina, da espécie Cryptosporidium
parvum. Os ruminantes domésticos (bovinos) e silváticos (cervídeos) são hospedeiros deste parasita actuando como
reservatórios para outras espécies e eliminando oocistos para o ambiente. A pesquisa de C. parvum em águas
superficiais é complexa devido ao efeito de diluição. Por isso, a utilização da capacidade filtrante e concentradora
dos bivalves de água doce, permite o isolamento de uma maior quantidade de oocistos e a sua caracterização
genética. O consumo das amêijoas e mexilhões de rio, prática comum no nordeste de Portugal e nas bacias dos rio
Tejo e Guadiana, pode ser também uma via de infecção para o Homem pelo que é importante avaliar este risco em
Saúde Pública. Considerando a utilização destes moluscos como bioindicadores de contaminação de águas
superficiais, os objectivos deste trabalho foram a determinação da taxa de contaminação por Cryptosporidium sp.
nas diferentes espécies de bivalves de água doce.
Estudaram-se 55 amostras constituídas por 3 a 15 exemplares de bivalves das espécies Anodonta anatina, Unio
pictorum e Corbicula fluminea. As capturas efectuadas por busca aleatória, “kick sampling” ou arte ganchorra, num
transecto de tempo e comprimento variáveis, realizaram-se uma vez por mês e por estação de colheita (sempre que
os caudais o permitissem) nos afluentes do Rio Guadiana, Sado e Tejo, num período de dois anos. Os moluscos
recolhidos foram congelados e posteriormente dissecados para extracção das brânquias e do aparelho
gastrointestinal. O material foi triturado com a ajuda de PBS, filtrado e o produto obtido centrifugado, várias vezes,
até à obtenção de um sobrenadante límpido. O centrifugado foi colocado num gradiente de sucrose (Solução de
Sheather`s ds: 1064 e ds: 1103) e submetido a uma centrifugação. O sedimento final foi corado com anticorpos
monoclonais marcados com fluoresceína (Kit Easy Stain 80, BTF, Austrália ou Crypto/giardia Cel, Cellabs,
Austrália) e observado ao microscópio de imunoflurescência. Obtiveram-se 18 amostras com oocistos de
Cryptosporidium distribuídas por Anodonta – 33,3% (4/12), Unio - 29,1% (7/24) e Corbicula – 36,9% (7/19).
Algumas amostras foram submetidas a PCR, com os “primers” CPHST2F: 5’ TCC TCT gCC gTA CAg gAT CTC
TTA 3’ e CPHSPT2R: 5’ TgC TgC TCT TAC CAg TAC TCT TAT CA 3’, para subsequente realização de RFLP
para genotipagem dos isolados.
[Cryptosporidium sp. in freshwater bivalves from Portugal]
Criptosporidiosis is a zoonosis caused by a protozoan of the Coccidina subclass, of the Cryptosporidium parvum
specie. The domestic (bovine) and wild (cervids) ruminants are commons hosts of this parasite acting as reservoirs
for other species shading oocysts for the environment. The research of C. parvum in superficial waters is complex
due to the dilution effect. Therefore, the use of the filter and concentrative capacity of fresh water bivalves, allows
the isolation of a higher concentration of oocysts allowing its genetic characterization.
The human consumption of freshwater clams and mussels, a common habit in the northeast of Portugal and in the
basins of the Tejo and Guadiana rivers, can also be a way of infection for man. Therefore the evaluation of the
Public Health risk is important considering the use of these clams as bio indicators of superficial water
contamination. The objectives of the present work include the evaluation of the contamination rate for
Cryptosporidium sp. in different species of fresh water bivalves.
Fifty-five samples were studied, consisting of 3 to 15 bivalves of the species Anodonta anatina, Unio pictorum and
Corbicula fluminea. The captures were performed, monthly in each sampling station (when the water level allowed
to do it), during a period of two years. The samples resulted from random search by kick sampling or “ganchorra”
art, in time and length changeable transect, in affluents Guadiana, Sado and Tejo rivers. The collected clams had
been frozen and later dissected for ablation of the gills and the gastrointestinal tract. The material was suspended in
PBS, triturated, filtered and the gotten product centrifuged, until clearance of the supernatant The sediment was
placed in a sucrose gradient (Sheather`s Solutions with ds: 1064 and ds: 1103) and centrifuged. The final sediment
was stained with monoclonal antibodies marked with fluorescein (Kit Easy Stain 80, BTF, Australia or
Crypto/giardia Cel, Cellabs, Australia) and observed in an imunoflurescence microscope. Eighteen samples were
found positive with oocysts of Cryptosporidium (33.3% (4/12) A. anatina, 29.1% (7/24) U. pictorum and 36.9%
(7/19) C. fluminea).
A set of positive and negative samples were submitted to PCR, with primers CPHST2F (5' TCC TCT gCC gTA
CAg gAT CTC TTA 3') and CPHSPT2R (5' TgC TgC TCT TAC CAg TAC TCT TAT CA 3') to amplify an internal
fragment of 18S rRNA gene useful for genotyping based on a RFLP assay.
14
Isolamento de estirpes de Leptospira a partir de roedores no Nordeste de Portugal
Paiva-Cardoso, M.1, Collares-Pereira, M.2, Gilmore, C.3, Ferreira, D.4, Sá, V.1, Catarino, R.1, Martins, B.1, SantosReis, M.4, Rodrigues, J.1, Mackie, D.3 e Ellis, W.A.3
1 Depto de Ciências Veterinárias, UTAD, Qta de Prados, Apartado 1013, 5001-911 Vila Real Codex, Portugal, [email protected];
2 Unidade de Leptospirose e Borreliose de Lyme, Instituto de Higiene e Medicina Tropical, Universidade Nova de Lisboa, Lisboa, Portugal;
3 Department of Agriculture & Rural Development for Northern Ireland, Veterinary Sciences Division, Belfast, Northern Ireland, U.K.;
4 Centro de Biologia Ambiental, Faculdade de Ciências, Universidade de Lisboa, Lisboa, Portugal.
Introdução: O papel dos roedores e outros pequenos mamíferos na manutenção da leptospirose na fauna selvagem
foi anteriormente descrito por Collares-Pereira et al. (2000) no sul e centro de Portugal continental e no Arquipélago
dos Açores, mas nunca anteriormente na região norte de Portugal. O objectivo deste estudo centrou-se no isolamento
de estirpes de Leptospira a partir da população de roedores do norte de Portugal, particularmente na área de Trás-osMontes, onde o gado Maronês (raça autóctone) é criado segundo um sistema tradicional de maneio. Estudos prévios
em bovinos desta região mostraram uma elevada taxa de seropositividade à Leptospira e também um padrão de
aglutinação diferenciado relativamente a outras regiões de Portugal (teste de aglutinação microscópica) (PaivaCardoso et al., 2001). Estes factos justificaram a necessidade de conhecer o papel desempenhado pela fauna
selvagem na leptospirose bovina, neste sistema particular de produção. A leptospirose bovina é causa de
consideráveis perdas económicas, devidas maioritariamente a problemas reprodutivos, no que concerne
especialmente às infecções crónicas pelo serovar Hardjo (serogrupo Sejroe).
Métodos: Foram capturados 308 pequenos mamíferos em estábulos de gado Maronês, e examinados por cultura de
tecido renal (meio semi-sólido EMJH). Os espécimes de pequenos mamíferos analisados foram Mus musculus
(n=255), M. spretus (n=24), Rattus norvegicus (n=19), R. rattus (n=3), Apodemus sylvaticus (n=4) e Crocidura
russula (n=3).
Resultados: Foram isoladas leptospiras a partir de 17 roedores: 13 estirpes a partir de Mus musculus; 3 a partir de
Mus spretus e uma a partir de Rattus norvegicus. Três destas estirpes foram posteriormente perdidas e 14 foram
identificadas. Onze estirpes foram identificadas como pertencentes ao grupo Ballum, duas ao grupo Sejroe e a
restante permanece não identificada.
Conclusões: Trata-se da primeira vez que estirpes do serogrupo Sejroe são isoladas a partir de roedores em Portugal,
facto de grande importância epidemiológica. Os resultados sugerem também a importância dos pequenos mamíferos
na transmissão potencial de Leptospira ao gado autóctone em maneio tradicional, especialmente nas infecções
acidentais, mas também na doença causada por estirpes do grupo Sejroe.
Referências: - Collares-Pereira, M., Korver, H., Cao Thi, B. V., Santos-Reis, M., Bellenger, E., Baranton, G.,
Terpstra, W. J., 2000. Analysis of Leptospira isolates from Mainland Portugal and the Azores islands. FEMS
Microbiology Letters, 185: 181-187.
- Paiva-Cardoso, M. N., 2001. Leptospirose bovina em Portugal. In: Livro de resumos do III Congresso Ibérico de
Reprodução Animal. Federação Ibérica de Reprodução Animal. Fundação Cupertino de Miranda. Porto, 6, 7 e 8 de
Julho. pp 239-244.
[Isolation of Leptospira strains from rodents in Northern Portugal]
Background: The role of rodents and other small mammals on wildlife leptospirosis was previously been described
by Collares-Pereira et al. (2000) in south and central mainland Portugal and in the Archipelago of Azores, but not in
the north. The purpose of the present study was to isolate Leptospira strains carried by rodent population in
Northern Portugal, particularly in the area of Trás-os-Montes, where indigenous Maronês cattle are bred under
traditional management systems. Previous studies on cattle of this region have been shown to have a high
seropositive rate to Leptospira serovars and also a different agglutination pattern when compared to other Portugal
regions (microscopic agglutination test) (Paiva-Cardoso et al., 2001). These facts justified the need of research about
the role played by wildlife in cattle leptospirosis on this particularly traditional cattle production system. Cattle
leptospirosis is a cause of considerable economic loss through reproductive wastage, especially due to chronic
infection with serovar Hardjo (Sejroe serogroup).
Methods: 308 small mammals, trapped on Maronês cattle small-holdings, were examined by kidney culture in
EMJH semi-solid medium. Small mammals specimens analysed were Mus musculus (n=255), M. spretus (n=24),
Rattus norvegicus (n=19), R. rattus (n=3), Apodemus sylvaticus (n=4) and Crocidura russula (n=3).
Results: Leptospires were isolated from 17 rodents: 13 strains from Mus musculus; three from Mus spretus and one
from Rattus norvegicus. Three of these strains were subsequently lost and 14 were forwarded for identification.
Eleven strains have been identified as belonging to the Ballum group, two to the Sejroe group and the other remains
unidentified.
Conclusions: These results have a very great epidemiological importance because it’s the first time that strains from
serogroup Sejroe are isolated from rodents in Portugal. On the other hand, the results suggest the great importance
which these small mammals can play on Leptospira transmission to indigenous cattle kept under traditional
management, especially concerning incidental infections, but also on disease cause by strains from group Sejroe.
15
Medicina Veterinária em Catástrofes – Evacuação de Lobos Ibéricos (Canis lupus signatus) em
cativeiro ameaçados por incêndios florestais
Pereira, N.1,11, Barão da Cunha, M.2, Melo, P.3, Peleteiro, C.4, Amaral, M.5, Beira, S.6, Camacho, F.7, Câmara, M.8,
Carreiro, R.8, Costa, C.9, Martinho, F.10, Martins, J.11, Mendonça, P.12, Ramada, M.13, Reisinho, A.9, Sardinha, L.14,
Silva, A.7
1 Grupo Lobo. Faculdade de Ciências de Lisboa. Bloco C2, 3º piso. Departamento de Biologia Animal. 1749-016 Lisboa; 2 Jardim Zoológico de
Lisboa. Estrada de Benfica, 158-160, 1549-004, Lisboa; 3 Centro de Recuperação de Animais Silvestres do Parque Florestal de Monsanto
(CML), Lisboa; 4 CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária. Av. Universidade Técnica 1300-477, Lisboa; 5 Hospital de S. Bento, Lisboa; 6
Clínica Veterinária quatro patas, Cascais; 7 Centro Militar de Educação Física e Desporto, Mafra; 8 Hospital dos animais, Odivelas; 9 Clínica
Veterinária VetSet, Palmela; 10 Clínica Médico Veterinária Dr. Gonçalo Faria de Vasconcelos, Cascais; 11 Clínica Veterinária João XXI,
Lisboa; 12 Lisboa; 13 Estagiária do Centro de Recuperação de Animais Silvestres do Parque Florestal de Monsanto (CML), Lisboa; 14 Clínica
Veterinária de Mafra, Mafra.
O Centro de Recuperação do Lobo Ibérico (CRLI) situa-se numa zona florestal albergando lobos ibéricos (Canis
lupus signatus), distribuídos por sete cercados num total de 4,5 hectares. Entre Setembro de 2003 e Julho de 2005, o
CRLI foi ameaçado por dois incêndios florestais. No primeiro incêndio foi desencadeada uma operação de
evacuação de emergência dos lobos alojados no CRLI e ainda de 3 lobos mantidos num cercado da Tapada Nacional
de Mafra (TNM), próximo do CRLI. Esta intervenção foi coordenada pelo CRLI envolvendo um grupo
interdisciplinar de dezenas de voluntários. No âmbito da medicina veterinária montou-se uma clínica de campanha
que coordenou tarefas como a preparação dos dardos, a captura dos lobos, a triagem e intervenção clínica de
urgência, o envio dos animais e a sua posterior monitorização clínica no Jardim Zoológico de Lisboa (JZL).
Os animais foram capturados por contenção química com ketamina (3,7 ± 0,4 mg/kg) e medetomidina (0,036 ±
0,004 mg/kg) administrados por dardos telinject® com zarabatanas e pistola de pressão de ar. Quando necessário,
foi administrado atipamazole (5 mg IM/mg de medetomidina) para reverter a acção desta. Todos os animais foram
transportados quimicamente imobilizados, acompanhados por um veterinário, até ao JZL, onde ficaram
temporariamente alojados. Durante a viagem, cerca de 40 km, foi administrado soro fisiológico IV e mantida a
imobilização, quando necessário, com um ou dois bolus de 50 mg de ketamina IV. Em menos de 24 horas foram
capturados e evacuados 12 lobos tendo 3 deles morrido. As causas de morte foram, num caso, torsão gástrica, e num
outro intoxicação por inalação de fumo. O terceiro lobo com queimaduras profundas em cerca de 30% do corpo
morreu ao fim de 3 semanas, apesar de ter sido seguido um protocolo de tratamento para queimados. A evolução
clínica foi típica de doente queimado, com edema temporário dos tecidos moles, tosse produtiva, leucocitose,
infecções das feridas cutâneas e por fim peritonite com septicémia.
O incêndio de 2005 chegou a atingir um dos cercados do CRLI mas o trabalho de prevenção contra os incêndios
entretanto efectuado facilitou o seu controle. Apenas foi necessário deslocar um lobo dentro do próprio CRLI.
Planos de contingência que permitam o rápido estabelecimento de uma estrutura centralizada de coordenação e a
existência de uma lista de contactos de médicos veterinários preparados para actuarem em situações de catástrofe
revelaram-se essenciais minimizando as consequências deste tipo de situações.
[Veterinary disaster medicine – Evacuation of captive Iberian Wolves (Canis lupus signatus)
threatened by forest fires]
The Iberian Wolf Recovery Centre (IWRC) is located in a forest zone, occupying 17 hectares. Iberian Wolves (Canis
lupus signatus) are distributed by seven enclosures summing a 4, 5 hectare area. Between September 2003 and July 2005
two forest fires threatened the Centre. In the first fire it was necessary to trigger an emergency evacuation of the IWRC
wolves and of 3 other wolves kept in a small enclosure of Tapada National de Mafra (TNM), located about 1 km of
distance. This intervention was co-ordinated by the IWRC and involved an interdisciplinary group of volunteers.
Veterinary intervention consisted in the organization of an ad hoc clinic were coordination and or execution of the
following tasks took place: preparation of darts, capture of the wolves, triage and clinical emergency intervention. Also
under veterinary supervision animals were sent to the Zoological Garden of Lisbon (JZL) were they stayed under clinical
observation. Animals were captured after being immobilized with ketamine (3,7 ± 0,4 mg/kg) and medetomidine (0,036 ±
0,004 mg/kg) administrated by darts (telinject®) with blowpipes and pressurized air pistols (telinject®). Whenever
necessary atipamazole was used (5 mg atipamazole for each mg of medetomidine/IM), to revert the medetomidine action.
Each immobilized animal was transported to the JZL accompanied by a veterinarian. During the transport, about 40 km,
fluids where administrate by IV drip and if necessary immobilization was reinforced by one or two bolus of 50 mg of
ketamina/IV. Capture and evacuation of 12 wolves took less than 24h and three animals died. Death causes included
gastric torsion, smoke inhalation and extensive skin burns. The animal with deep skin burn had 30% of the body affected
and died at the end of 3 weeks, despite treatment protocol for burn patients. Clinical evolution was typical with temporary
soft tissues oedema, productive cough with leukocytosis, infections of cutaneous wounds and finally peritonitis with
septicaemia.
The 2005 fire reach one of the CRLI enclosures, but the previous fire propagation prevention measures facilitated its
control. Only one animal had to be transferred within the centre. Existence of contingency plans allowing a prompt
establishment of a coordinating structure and the previous elaboration of a contact list of veterinarians prepared to act in
emergencies situations has proven important to minimize consequences associated with these situations.
16
Comunicação por convite
Environmental influences on bluetongue and other arboviral infections
Mellor, Philip S.
Head, Dept. of Arbovirology & the OIE/EC Reference Labs for BT & AHS. Institute for Animal Health, Pirbright Laboratory, Ash Rd., Pirbright,
Woking, Surrey GU24 0NF, UK. e-mail: [email protected]
Honorary Professor, School of Biological Sciences, University of Aberdeen
In the context of climate-change those components of climate that are likely to have the most important effects in
altering the distribution of insect-transmitted viral infections will be described.
On the basis of a predicated global mean temperature increase in the order of 1.4 to 5.8oC, as is projected to occur
during the early part of this century, examples will be provided of the sort of changes that may occur drawing upon
recent research work on bluetongue and African horse sickness viruses. Certain recent and dramatic changes in the
distribution and transmission of bluetongue virus, which since 1998 has caused the deaths of over 1.5 million sheep
in southern Europe and North Africa, will be highlighted to suggest that climate-change may already be having an
effect.
17
Perspectivas do controlo da Língua Azul em Portugal
Boinas F.1, Amador, R. 2, Pereira da Fonseca, I. 1, Nunes, T. 1, Fevereiro, M. 3 e Agrela Pinheiro, C. 2
1 FMV-UTL, Polo U.Alto da Ajuda, Av. Alam. Univ. Técnica, 1300-477 Lisboa
2 DGV, Lg. Academia Nacional das Belas Artes,2, 1249-105 Lisboa
3 LNIV, E. Benfica, 701, 1549-011 Lisboa
A Língua Azul (LA) ou Febre Catarral Ovina é uma doença vírica infecciosa e não contagiosa dos ovinos. Os
bovinos e outros ruminantes podem ser reservatórios do agente. Para a transmissão se verificar na natureza é
necessária a presença de insectos Culicoides que são vectores do vírus da LA para os animais susceptíveis.
Em Portugal ocorreram, no mês de Novembro de 2004, 10 focos em explorações na área da Direcção Regional de
Agricultura (DRA) do Alentejo e 1 foco na DRA da Beira Interior. Isto seguiu-se à epidemia da LA diagnosticada
no mês anterior em Espanha, próximo da zona da fronteira com Portugal.
As medidas implementadas pela Direcção Geral de Veterinária, autoridade sanitária nacional, incluiram a criação de
um gabinete de crise e a emissão de 6 editais, adoptando um conjunto de medidas epidemiologicamente relevantes
no âmbito da profilaxia sanitária e médica, conjugadas com acções de combate ao vector.
Apesar de os focos terem sido pouco expressivos clínicamente, as consequências económicas mais relevantes
resultaram das medidas restritivas para circulação de ruminantes das zonas de protecção e de vigilância, que
incluiram áreas de 4 DRAs e abrangeram 421.131 bovinos e 1.665.336 pequenos ruminantes.
O plano nacional de vigilância para a LA incluiu a vigilância serológica de explorações de bovinos em todo o país,
de explorações de bovinos sentinela na zona de vigilância, assim como testes de ELISA e de RT-PCR para prémovimentação de ruminantes, a partir das zonas restritas.
Foi implementada uma campanha de vacinação com uma vacina viva para o serotipo 4 que imunizou 1.479.231
ovinos na zona de protecção, representando 97% dos efectivos reprodutores da região.
Em Maio de 2005 foi iniciado um plano estruturado de vigilância entomológica que inclui redes de amostragem
permanente e pontual e que abrange todo o território nacional.
As perspectivas futuras para o controlo da doença incluem, nomeadamente, o estudo da possibilidade da utilização
de vacinas inactivadas em ruminantes e também o ajustamento das medidas a implementar, de acordo com os
resultados dos estudos de avaliação de risco.
[Perspectives of Bluetongue control in Portugal]
Bluetongue (BT) is an infectious and non-contagious viral disease of sheep. Bovine and other ruminants can be
reservoirs of the virus. For the transmission to occur in nature it is necessary the presence of Culicoide midges
which are vectors of BT virus for susceptible animals.
In Portugal, during November 2004, 10 outbreaks of BT in the Regional Directorate (DRA) of Alentejo and 1
outbreak on the DRA of Beira Interior were diagnosed in small ruminants herds,. This followed the BT epidemic in
Spain, near the border area with Portugal, during the previous month.
The measures implemented by the Veterinary General Directorate (DGV), the national sanitary authority, included
the creation of a crisis cell and the launching of 6 edicts, adopting a pack of epidemiologically important measures
on the aim of the medical and sanitary prophylaxis and vector control.
Although the outbreaks did not present clinically serious problems, the most important economical consequences
resulted in restricted measures for animal movement on the protection and surveillance zones, which included
421,131 bovine and 1,665,336 small ruminants, in the areas of 4 DRA.
The national surveillance plan for BT included the serological surveillance of bovine herds in the entire country and
of bovine sentinel herds on the surveillance zone and also pre-movement tests for ELISA and RT-PCR tests for
ruminants from restricted zones.
A vaccination campaign with a live vaccine for BT virus serotype 4 that immunized 1,479,321 ovine was
implemented on the protection zone, what represented 97% of the reproductive stock in the region.
In May 2005 a structured entomological surveillance plan including point and permanent surveillance networks was
initiated in all the national territory.
The future perspectives for the control of disease are discussed regarding, namely, the possibility of the use of
inactivated vaccines in ruminants and also the adjustment of the measures to be implement according to the results
of the risk evaluation studies.
18
Patologia
Meat inspection in the USA: today and the future. What drives change in our industry.
Edwards, John F.
Professor, Texas Veterinary Medical Center, College Station, TX 77843-4467
The inspection of meat in the USA has followed an evolution from a complete lack of governmental participation to
complete federal supervision as the marketplace expanded from a local to a national, and finally to a global scale. At
the same time, there has been a continual demand for veterinarians trained in meat hygiene and animal husbandry to
fill positions of inspectors in abattoirs. Unfortunately, the urbanization of the United States has included an
urbanization of the Veterinary Profession and resulted in an inability to provide enough qualified Veterinarians for
the demands of Industry. Perhaps more important is the failure of Veterinary curricula to include training in
business, marketing, and cultural sensitivity into curricula that are already "full". There is a gap between those
making policy and those enforcing inspection laws that needs to be bridged by a new type of Veterinary
Professional. At the National level, the urbanization of the American Public has made it necessary to increase
vigilance of the sanitation level of meat products in a quantitative fashion in an ever-more litiginous society. A rapid
metamorphosis of the US inspection program has followed: the actual oversight of sanitation is being returned to the
industry through HACCP, a program which no Veterinary curriculum addresses. Through the entire evolution of the
US inspection program, the USA has tried to address those political diseases (such as Foot and Mouth Disease and
Bovine Spongiform Encephalopathy) and economic developments that dictate marketshare in the global
marketplace.
Pathology of abortion. Bovine abortion: a review
Edwards, John F.
Professor, Texas Veterinary Medical Center, College Station, TX 77843-4467
Bovine abortion continues to present challenges to Veterinary Diagnostitions. A review of published surveys of
causes of bovine abortion reveals a relatively small list of etiologic infectious agents, many of which are "classic"
well-studied agents. The relative frequency abortions caused by each agent in different parts of the world reflect
cultural, geographic], and economic differences. In all cases, husbandry practices, availability of Veterinary
assistance, and governmental priorities in disease control are reflected in disease prevelance. Diagnostic techniques
have evolved beyond routine bacterial and viral culturing; such that, well-equipped laboratories also now look to
immunologic and molecular technologies to assist in the search for causes of abortion. Common sense and a
thorough examination with sample collection are the key elements to success in diagnosis. Regardless,
approximately 40% of the causes of all bovine abortions remain undiagnosed. The Veterinary Profession must look
at the contribution of hormonal deficiencies, chromosomal derangements, failure of fetal allograft phenomena, and
toxins (fungal plant, and environmental) in the causality of bovine abortions.
19
Linfoma maligno num equino. Estudo morfológico e imunohistoquímico
Pissarra, H.1, Pessa, P.2, Carvalho, J.3 e Afonso, F.1
1 CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária, Lisboa
2 Hospitais da Universidade de Coimbra, Serviço de Anatomia Patológica, Coimbra
3 Hospital Veterinário Militar de Equinos, Mafra
Os autores descrevem um caso de linfoma maligno intra-abdominal de grandes dimensões em equino de raça
Lusitana com 20 anos de idade. O exame clínico revelou emagrecimento progressivo, anorexia e diarreia. As
alterações hematológicas e bioquímicas revelaram neutrofilia, linfopénia, hipoalbuminémia e
hipergamaglobulinémia. O animal foi eutanasiado em consequência do agravamento do quadro clínico sendo
remetido para necrópsia.
Os tecidos para exame histopatológico foram fixados com formol a 10% com tampão fosfato e incluídos em
parafina. Os cortes com 5 µm de espessura coraram-se com Hematoxilina-Eosina (H.E.).
As lâminas foram sujeitas a estudo imunohistoquímico com os seguintes anticorpos primários:
CD-20 clone L26, Dako, ref. M 0755, a diluição foi de 1/500 em TBS; Vimentina clone Vim 3B4, Dako, ref. M
7020, a diluição foi de 1/200 em TBS; Mieloperoxidase, Dako, ref. A 0398, a diluição foi de 1/500 em TBS; Factor
VIII, Von Willebrand Factor-policlonal- Dako, ref. A0082- diluição foi de 1/300 em TBS.
À abertura da cavidade abdominal observou-se volumosa massa neoplásica, localizada na região da curvatura maior
do estômago e duodeno, estando aderente ao hilo do baço, invadindo a região supra-renal esquerda bem como o
próprio rim esquerdo. A massa apresentava superfície externa de aspecto macronodular, com vascularização
superficial e de coloração, predominantemente, esbranquiçada; ao corte, observaram-se áreas de coloração
amarelada, zonas cavitárias contendo líquido e também zonas de calcificação.
O exame imunohistoquímico permitiu revelar que se tratava de linfoma maligno de células B de alto grau de
malignidade.
[Malign lymphoma in a horse. Morphological and immunohistochemical study]
The authors describe a case of a lymphoma in the abdomen of a Lusitan horse, 20 years old. The clinical exam
showed progressive emaciation, anorexia and diarreha. The haematological and biochemical findings, revealed
neutrophilia, lymphopenia, hypoalbuminemia and hypergammaglobulinemia. The animal was euthanized and
subjected to necropsy.
The tissues for histopathological exam were fixed in 10% formaldehyde solution and included in paraffin. The slices
with 5 µm were stained with Haematoxilin-Eosin.
The immunohistochemical study was made with the following primary antibodies:
CD-20 clone L26, Dako, ref. M 0755, dilution was 1/500 in TBS; Vimentine clone Vim 3B4, Dako, ref. M 7020,
dilution was 1/200 in TBS; Myeloperoxidase, Dako, ref. A 0398, dilution was 1/500 in TBS; Factor VIII, Von
Willebrand Factor-policlonal- Dako, ref. A0082- dilution was 1/300 in TBS.
At the necropsy, it was present in the abdominal cavity a voluminous mass, localized close to the stomach and
duodenal curve, attached to the spleen, with invasion of the left supra-adrenal region and kidney. The mass had
nodules on the external surface, with superficial vascularization and the color was mainly whitish. The surface cut,
presented yellowish areas, calcification and cavities with liquid.
The immunohistochemical exam revealed a high-grade B-cell lymphoma.
20
Carcinosarcoma pulmonar num gato
Pires, M.A.1, Pires, I.1, Saraiva, A.L.1, Seixas, F.1, Ferreira de Carvalho, P.2, Payan-Carreira, R.1
1 CECAV- UTAD; Apart. 1013, 5001-911 Vila Real, Portugal
2 Centro Hospitalar Vila Real – Peso da Régua
As neoplasias primárias do pulmão nos animais são raras, quando comparados com a incidência que apresentam nos
humanos. Nos animais, quase todos os tumores primários do pulmão são carcinomas. Os autores apresentam um
caso de carcinossarcoma espontâneo em gato.
Foi apresentado à necrópsia um gato siamês, inteiro de 16 anos. Nos últimos três anos, o animal foi acompanhado na
consulta do Hospital Veterinário da UTAD, devido a alterações gastro-intestinais de origem imunitária, tendo desde
então sido submetido a corticoterapia cíclica. Em Janeiro de 2005 desenvolveu uma situação transitória de diabetes,
que ultrapassou. Posteriormente em Maio-Junho de 2005 apresentou sinais de alteração respiratória: rinorreia
purulenta, dispneia, fraqueza e perda de peso. Por solicitação do dono, foi eutanasiado.
À necrópsia o animal apresentava-se caquético, com pêlo baço e quebradiço e sinais de vómito e diarreia. O pulmão
não colapsou na abertura da cavidade torácica e apresentava áreas de densificação brancas e amarelas dos lóbulos
crânio-ventrais, e aumento da consistência ao corte. No lóbulo esquerdo cranial apresentava uma área abecedada
cuja cápsula apresentava um revestimento interno irregular. Os gânglios mediastínicos apresentavam aumento de
consistência e tinham um aspecto difuso. O pâncreas apresentava-se espessado e com nódulos brancos disseminados
no parênquima. Os restantes orgãos não apresentavam alterações macroscópicas dignas de registo.
Amostras dos diferentes tecidos foram fixadas em formol tamponado a 10% e processadas e coradas para a rotina de
histopatologia. Para caracterização imunohistoquímica usaram-se anticorpos monoclonais para citoqueratinas (AE1AE3, Dako, diluição 1:50) e vimentina (clone NCL-L-Vim-V9, Novocastra, diluição 1:100).
Ao aspecto microscópico o pulmão apresentava proliferação neoplásica de células epiteliais por vezes com
diferenciação escamosa, de disposição lobular, e de células conjuntivas fusiformes que apresentavam diferenciação
condróide e mixóide. A marcação de imunohistoquímica mostrou-se positiva para a citoqueratina e para a
vimentina, nos diferentes componentes.
Com base nas observações e nas marcações de imunohistoquímica concluimos estar perante um caso de
carcinossarcoma do pulmão, uma lesão muito rara em gatos.
[Pulmonary carcinosarcoma in a cat]
Primary animal lung carcinoma in animals is uncommon compared to similar tumors in human, and almost all
primary lung cancers are carcinomas. A case of spontaneous pulmonary carcinosarcoma in a cat is presented here
A16 years old Siamese cat, intact male was presented to necropsy. For the past 3 years this animal was presented for
consultation at the Veterinary Teaching Hospital of UTAD, due to gastrointestinal immune disease and was then
submitted to cyclic corticoid treatment. On January 2005, he developed transitory diabetes. By May-June he first
presented respiratory distress, with purulent rhinorrhea and dyspnoea, and showed marked weakness and weight
loss. The cat was euthanised by owner request.
The post mortem examination showed pulmonary densification with yellow and white areas in the cranium-ventral
lobules, and one abscess with irregular internal capsule in the left lobule. Mediastinum lymph nodes were enlarged,
pale and firm. The pancreas presented white nodules in the parenchyma. The other organs didn’t present
macroscopic lesions.
Representative samples of gross lesions and major organs were fixed in 10% neutral buffered formalin, processed by
routine methods, and stained with haematoxylin and eosin (H&E). Antibodies to cytokeratin (AE1-AE3, Dako,
1:50) and vimentin (NCL-L-Vim-V9, Novocastra, 1:100) were used in order to immunohistochemically characterize
the neoplastic cells, by the strepto-avidin-biotin peroxidase complex method.
Microscopically, the neoplasm was composed by a component of carcinomatous cells intermingled by sarcomatous
elements. In the epithelial component some foci of squamous differentiation were observed. The sarcomatous
component, composed by spindle cells, presented foci of differentiation into chondrosarcomatous and mixoid tissue.
The cells presented immunoreactivity to cytokeratin in the carcinomatous component and to vimentin in the
sarcomatous one. According to this evidences, we conclude that this tumor is a spontaneous pulmonary
carcinosarcoma, an extremely rare neoplasm in cats.
21
Estudo das neoplasias testiculares caninas em peças de orquiectomia num período de 4 anos
Silva, J.F. e Peleteiro, M.C.
CIISA, FMV-UTL, R. Prof. Cid dos Santos, 1300-477 Lisboa
No cão, os tumores testiculares estão em segundo lugar em frequência, a seguir às neoplasias cutâneas. Este facto,
aliado à possibilidade de aqueles tumores poderem constituir um modelo de estudo dos homólogos humanos,
justifica a sua caracterização clinico-patológica aprofundada.
Entre Janeiro de 2001 e Dezembro de 2004, foram examinadas no Laboratório de Anatomia Patológica da FMV
(Lisboa) 162 peças de orquiectomia provenientes de vários animais (156 cães, 4 gatos, 1 coelho e 1 iaque): 124
(76,54 %) correspondiam a neoplasias [122 (98,38 %) em cães, 1 (0,81 %) num gato e 1 (0,81 %) num coelho] e 38
(23,46 %) a patologia não tumoral.
A média da idade dos cães com neoplasia testicular foi de 10,16 anos; o gato tinha 5 anos e o coelho 7. A maior
parte dos casos ocorreu em cães de raça indeterminada (41 casos – 33,61 %), seguindo-se os Cockers (11 casos –
9,02 %) e os Boxers (10 casos – 8,20 %).
Quanto à localização, 93 casos (76,23 %) eram unilaterais (envolviam um só testículo) e 25 (20,49 %) eram
bilaterais. Nos restantes 4 (3,28 %), não se pôde determinar a uni- ou bilateralidade das lesões.
O número total de tumores diagnosticados foi de 176, devido à presença de tumores bilaterais e de vários tumores no
mesmo testículo em alguns casos.
Em cães, foram diagnosticados 55 leydigomas (31,61 %), 57 sertolinomas (32,76 %), 51 seminomas (29,31 %) e 11
tumores mistos de células seminais-células de Sertoli (6,32 %). No que respeita aos tumores em testículos bilaterais,
a casuística foi de 30 (50,00 %), 15 (25,00 %), 13 (21,67 %) e 2 (3,33 %), respectivamente para os tumores
mencionados. O testículo do gato apresentava um sertolinoma e o do coelho um tumor misto.
Uma das conclusões a tirar é a grande frequência de tumores testiculares no cão, quando comparada a outras
espécies. Neste estudo, as frequências de leydigomas, sertolinomas e seminomas foram semelhantes. A frequência
de tumores mistos de células seminais-células de Sertoli foi um pouco superior à apontada por Patnaik e Mostofi,
1993 (7,0 %) (1).
(1) Patnaik, A.K. e Mostofi, F.K. (1993). A clinicopathologic, histologic, and immunohistochemical study of mixed
germ cell-stromal tumors of the testis in 16 dogs. Vet. Pathol., 30: 287-295.
[A 4-year survey of canine testicular neoplams in orchiectomy specimens]
In the dog, testicular tumours occur in frequence in the second following skin neoplams. This fact, and the
possibility (or not) to use canine testicular tumours as a model of human counterparts, prompts its extensive study.
From January 2001 to December 2004, 162 orchiectomy specimens from several species (156 dogs, 4 cats, 1 rabbit
and 1 yak) were examined at the Laboratory of Pathologic Anatomy at the FMV (Lisbon): 124 (76,54 %) harboured
neoplasms [122 (98,38 %) in dogs, 1 (0,81 %) in a cat and 1 (0,81 %) in a rabbit] and 38 (23,46 %) had nonneoplastic pathology.
The mean age of dogs suffering of testicular tumours was 10,16 years; the cat and the rabbit were, respectively, 5
and 7 year-old. The most afflicted dogs were mongrel dogs (41 cases – 33,61 %), followed by Cockers (11 cases –
9,02 %) and Boxers (10 cases – 8,20 %).
As to ther localisation, 93 cases (76,23 %) were unilateral and 25 (20,49 %) were bilateral. In the remainig 4 (3,28
%), the bi- or unilaterality of the lesions could not be determined.
The total number of diagnosed neoplasms was 176, because of bilateral tumours and also due to the presence of two
or three tumours within the same testicle.
In dogs, there were 55 Leydig cell tumours (31,61 %), 57 Sertoli cell tumours (32,76 %), 51 seminomas (29,31 %) e
11 mixed germinal-Sertoli cell tumours (6,32 %). As to the bilateral neoplasms, the respective incidence was 30
(50,00 %), 15 (25,00 %), 13 (21,67 %) and 2 (3,33 %). The cat had a Sertoli cell tumour and the rabbit a mixed
tumour.
A conclusion to draw is the high frequence of canine testicular neoplasms when compared to other species. In this
study, the frequences of Leydig cell tumours, Sertoli cell tumours and seminomas were similar. The frequency of
mixed tumours was slightly higher than the one reported by Patnaik and Mostofi, 1993 (7,0 %) (1).
(1) Patnaik, A.K. e Mostofi, F.K. (1993). A clinicopathologic, histologic, and immunohistochemical study of mixed
germ cell-stromal tumors of the testis in 16 dogs. Vet. Pathol., 30: 287-295.
22
Lesões epiteliais e melanocíticas da pele do cão. Um estudo descritivo de 10 anos
Saraiva, A.L., Prada, J. e Pires, M.A.
CECAV – Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro, 5000-911 Vila Real
As lesões epiteliais e melanocíticas da pele são muito frequentes no cão. Juntamente com as lesões
mesenquimatosas, constituem as lesões mais frequentemente diagnosticadas em animais domésticos (Goldschmidt et
al, 1998). Assim sendo, a sua classificação e prevalência constituem informações importantes, tanto para o
patologista, como para o clínico.
Os autores apresentam um estudo da distribuição das lesões epiteliais e melanocíticas da pele em canídeos em
função do sexo, da idade, da raça e do padrão histológico de diferenciação predominante com a finalidade de
contribuir para a identificação mais fácil, precisa e válida destas lesões. O conhecimento da epidemiologia destas
lesões pode estabelecer o prognóstico do caso clínico e a opção terapêutica mais eficaz (normalmente cirúrgica), que
representam informações de grande interesse para o médico veterinário clínico e até mesmo para o proprietário do
animal.
As informações presentes neste trabalho referem-se a 1213 casos de lesões epiteliais e melanocíticas da pele, de
canídeos, recebidas no Laboratório de Histologia e Anatomia Patológica da UTAD, desde 1995 até Fevereiro de
2005. As amostras recebidas provieram de Portugal Continental e Ilhas, com predominância para a zona Norte do
país. Acompanhavam-nas uma ficha que incluía a identificação do animal, dados e suspeita clínica, ainda que raras
vezes estes parâmetros fossem devidamente preenchidos.
Este material biológico foi recebido sob a forma de biópsias e exéreses cirúrgicas. O material foi fixado em formol a
10%, processado num microprocessador automático de tecidos modelo Hypercenter XP® Histoplast® da Shandon® e
incluído em parafina. Foram efectuados cortes em parafina a 2 µm, corados com hematoxilina-eosina (H-E). Sempre
que necessário recorreram-se a técnicas de histoquímica (P.A.S., Reticulina, Azul de Prússia, Azul de Alcian, Van
Gieson, de entre outras), ou de imunohistoquímica (marcação com anticorpos específicos, como por exemplo anticitoqueratinas e anti-vimentina), para melhor caracterizar as lesões em estudo. As lesões foram avaliadas com base
na classificação histológia da Organização Mundial de Saúde (OMS) em vigor (Goldschmidt et al., 1998).
Da avaliação dos casos resultou a seguinte distribuição: 3.4% (n=41) tumores epiteliais sem diferenciação escamosa
ou de anexos, 11.5% (n=139) tumores da epiderme, 41.7% (n=506) tumores com diferenciação de anexos, 0.2%
(n=3) metástases epiteliais, 23.8% (n=289) quistos, 6.3% (n=76) hamartomas, 9.4% (n=114) lesões semelhantes a
tumores e 3.7% (n=45) tumores melanocíticos. Estas lesões foram predominantes em machos (60.7%), em cães sem
raça definida (ou indeterminada) e em animais entre os 9 e os 10 anos de idade.
[Epithelial and melanocytic lesions of the skin of dogs. A ten years descriptive study]
Epithelial and melanocytic lesions of the skin are very frequent in dogs. Along with their mesenchymal counterparts,
they are the most commonly diagnosed lesions in domestic animals (Goldschmidt, et al, 1998). Therefore, their
classification and prevalence among dog’s populations are very important, not only for the pathologist but also for
the clinician.The authors present a distribution study of dog’s epithelial and melanocytic lesions of the skin by
means of sex, age, breed and predominant histological differentiation pattern in order to contribute for an easier,
more efficient and precise identification of these tumors. The epidemiology of these lesions may provide
information on prognosis and therapeutics (usually surgical), which are of extreme interest to the clinician and even
to the owner of the animal. The information of this work corresponds to 1213 analysis of epithelial and melanocytic
lesions of the skin of dogs processed at the laboratory of Histology and Surgical Pathology of UTAD, Portugal since
1995 until February 2005. The samples were provided from Portugal, including islands; most of them were from
UTAD’s Hospital and northern part of the country. The samples were accompanied by a clinical report which
included the animal identification, relevant clinical features and differential diagnosis, even if sometimes these
parameters were not correctly given. This biologic material was received as biopsies and surgical exeresis. It was
fixed in 10% formalin, processed on an automatic microprocessor (Hypercenter XP®, Histoplast® from Shandon®)
and embedded in paraffin. We used 2 µm sections stained with Hematoxylin and Eosin. Whenever necessary,
techniques of histochemistry (P.A.S., Reticuline, Prussian Blue, Alcian Blue, Van Gieson, among others) or
immunohistochemistry (proprietary antibodies binding such to citokeratins and vimentin) were used, in order to
allow a better characterization of the lesions under study. Evaluation of the lesions was performed based on the
reference histological classification of the World Health Organization (Goldschmidt et al., 1998). From the
evaluation of the cases, we obtained the following distribution:3.4% (n=41) epithelial tumors without squamous or
adnexal differentiation, 11.5% (n=139) tumors of the epidermis, 41.7% (n=506) tumors with adnexal differentiation,
0.2% (n=3) tumors metastatic to the skin, 23.8% (n=289) cysts, 6.3% (n=76) hamartomas, 9.4% (n=114) tumorlike
lesions, and 3.7% (n=45) melanocytic tumors. These lesions were most predominant in males (60.7%), in mongrel
dogs and in animals between 9 and 10 years old.
23
Aspectos anatomo-histopatológicos da intoxicação por bromadiolona em canídeos
Pissarra, H.1, Afonso, F.1, Rodrigues, A.L.2, Carrapiço, B.2 e Jorge Silva, A.2
1 Núcleo de Histologia e Patologia, CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária, Lisboa, Portugal
2 Núcleo de Farmacologia e Toxicologia, CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária, Lisboa, Portugal
Os autores descrevem um caso de intoxicação simultânea de 5 canídeos co-habitantes por bramadiolona.
A bromadiolona é um composto químico da família dos cumarínicos de segunda geração, bastando uma única
ingestão para produção dos efeitos desejados. Geralmente é utilizada como rodenticida, sendo considerada bastante
eficaz no controlo deste tipo de pragas. A intoxicação dos animais domésticos ocorre por via acidental
(contaminação de água e/ou alimentos) ou por via intencional.
Os tecidos para exame histopatológico foram fixados com formol a 10% com tampão fosfato e incluídos em
parafina. Os cortes com 5 µm de espessura coraram-se com Hematoxilina-Eosina (H.E.).
A pesquisa de bromadiolona foi realizada a partir de amostras de fígado dos animais e do conteúdo estomacal. A
confirmação foi realizada com recurso à análise do produto comercial.Após exame clínico todos os animais
apresentavam a mesma sintomatologia, nomeadamente, choque (particularmente profundo em dois animais),
cianose, midríase, inconsciência, vasoconstrição periférica e hipotermia. Apesar das medidas terapêuticas todos os
animais acabaram por morrer.
As respectivas necrópsias revelaram em todos os animais um quadro hemorrágico exuberante consistindo em
hemotórax, hemoperitoneu, hemorragias petequiais disseminadas pela pele, hemorragias dos tecidos moles e
sufusões hemorrágicas das serosas.
As análises toxicológicas foram positivas para a presença de bromadiolona.
Pretendemos caracterizar os aspectos anátomo-histopatológicos da intoxicação por este tipo de composto bem como
do contributo da anatomia patológica e da toxicologia nos esclareciemento deste tipo de situações.
[Anatomic and histopathological study of bromadiolone intoxication in dogs]
The authors describe a case of intoxication of 5 dogs by bromadiolone.
Bromadiolone is a second-generation coumarine, that produces the effects with only one ingestion. Usually, is a
very efficient rodenticide. The intoxication in domestic animals occurs through the water or food contamination.
with 5 µm were stained with Haematoxilin-Eosin.
The bromadiolone detection was made from liver samples and from the stomach content. The confirmation was
made with the analysis of the commercial product. After the clinical exam all the animals presented similar
symptoms. The animals presented choc (deep in two animals), cyanosis, mydriasis, unconsciousness, peripherical
vasoconstriction and hypothermia. Therapy was applied, but all the animals died.
Necropsy revealed in all animals severe haemorrhages, with hemothorax, hemoperitoneum, petechial haemorrhages
on the skin, haemorrhages on the soft tissues and suffusions on the serous membranes.
The toxicologic analysis were positive to the presence of bromadiolone.
The objective is to characterize the anatomic and histopathological features of the intoxication of this substance,
with the contribution of pathological anatomy and toxicology.
24
Contribuição para o esclarecimento da etiopatogenia da hematúria enzoótica bovina na Ilha de S.
Miguel, Açores
Pinto, C.2, Lobo, A.3, Machado, J.3, Carvalho, T.1, Fernandes, I.1, Peleteiro, M.C.1
1 Centro de Investigação Interdisciplinar em Sanidade Animal, Fac. Medicina Veterinária, 1300-477 Lisboa, Portugal
2 Serviço de Desenvolvimento Agrário de S. Miguel, 9504-541 Ponta Delgada, Açores, Portugal
3 Dep. de Ciências Agrárias, Universidade dos Açores, 9701-851 Angra do Heroísmo Açores, Portugal
A Hematúria Enzoótica Bovina (HEB) é uma doença de evolução arrastada, associada ao consumo do feto comum
(Pteridium aquilinum), sendo caracterizada do ponto de vista clínico por hematúria intermitente e pelo aparecimento
de lesões vesicais de carácter inflamatório, proliferativo e neoplásico. A HEB é um problema comum na Ilha de São
Miguel, Açores, tendo sido possível identificar que as zonas mais afectadas correspondem a áreas de pastagens com
maior infestação pelo feto comum. Em 2004, 19% dos bovinos adultos abatidos no matadouro local foram rejeitados
para consumo devido à presença de tumores da bexiga. Entre os compostos de efeito tóxico identificados no feto
comum destaca-se o ptaquilósido (PT), um glicósido sesquiterpenóide cujos efeitos mutagénicos e cancerígenos já
foram reconhecidos. Para avaliar a responsabilidade deste composto na HEB nos Açores, o seu doseamento foi
efectuado por cromatografia líquida de alta pressão a partir de 35 amostras de feto comum colhidas em explorações
afectadas. Os níveis de ptaquilósido obtidos na análise das amostras de feto comum foram sistematicamente muito
elevados, sendo o valor médio das determinações de 2274.3 µg.g-1, com um mínimo de 373.7 µg.g-1 e o máximo de
8440.6 µg.g-1
Outro factor envolvido na génese das neoplasias vesicais da HEB tem sido o papilomavírus bovino de tipo 2 (BPV
2), sendo considerado um agente potenciador dos efeitos carcinogénicos e imunossupressores das toxinas do
Pteridium sp. No sentido de estimar o grau de infecção nos animais afectados, foi pesquisada a existência de
sequências do ADN do BPV por reacção da polimerase em cadeia (PCR) em 200 amostras de tumores de bexiga e
em 100 amostras de bexigas sem lesões evidentes. Os resultados obtidos revelaram que sequências de ADN de
papilomavírus tipo 1 e tipo 2 estavam presentes de forma muito idêntica tanto nas amostras de tumores (42%) como
nas bexigas controlo (43%).
Foram analisados os valores sanguíneos de alguns oligolementos (zinco, cobre e selénio) em duas populações de
novilhas pertencentes a explorações com e sem historial de HEB, correspondendo a 61 e a 33 animais
respectivamente. Registou-se diminuição significativa nos valores de glutationa peroxidase (indicativa do estado
nutricional em selénio) nos animais das explorações problema. Os resultados obtidos sugerem que a carência em
selénio poderá contribuir, em conjunto com outros factores, para a génese dos tumores de bexiga.
Este trabalho foi financiado pela Fundação para a Ciência e a Tecnologia, projecto POCTI 34320.
[Etiopathogenic studies of bovine enzootic hematuria in S. Miguel, Açores]
Bovine Enzootic Hematuria (BEH) is a syndrome of chronic onset characterized by hematuria, inflammatory lesions
and neoplasia associated with the ingestion of bracken fern (Pteridium aquilinum). BEH is very common problem in
the Azores, the most affected areas having been confirmed as the ones were bracken fern grows more intensely in
the pastures. In 2004, 19 % of the adult cows slaughtered in the local abattoir were rejected due to the presence of
bladder tumours.
Bracken fern contains a remarkable amount of toxic components, one of which is the ptaquiloside (PT), a glicoside
sesquiterpenoid whose mutagenic and carcinogenic activity has been demonstrated. To evaluate the responsibility of
the ptaquiloside in the etiology of disease in the Azores, its levels were evaluated by high pressure liquid
chromatography in 35 samples of bracken fern from farms with severe BEH problems. The values obtained were
systematically high with a mean value of 2274.3 µg.g-1 (minimum – 373.7, maximum – 8440.6).
Another factor reported as involved in the genesis of BEH has been the papilomavirus type 2 (BPV 2), being
considered to increase the carcinogenic and immuno supressor potential of the ptaquiloside. In order to estimate the
degree of infection of the affected animals, specific DNA sequences for BPV were investigated by polymerase chain
reaction in 200 samples of bladder tumours. One hundred bladder samples with no macroscopic lesions were used as
controls. The results showed that no significant differences exist between the two populations. DNA sequences for
BPV 1 and 2 were found in 42% of the bladder tumours and in 43% of the controls.
The blood values for some oligoelements (zinc, copper, selenium) were determined in two populations of heifers
from farms with and without BEH problems, corresponding to 61 and 33 animals respectively. Significant
differences were found in the values of glutathione peroxidase (indicator of the nutritional condition for selenium)
between the two groups, with very low values in the affected animals. The results suggest that selenium deficiency
may also play a role in the etiology of BEH.
This work was sponsored by the Fundação para a Ciência e a Tecnologia, POCTI 34320.
25
Recursos Genéticos Animais
Situação mundial dos recursos genéticos animais
Cardellino, Ricardo A.
Grupo de Recursos Genéticos Animais-Divisão de Produção e Sanidade Animal. FAO - 00100 Roma Italia. E-mail: [email protected]
Biodiversidade e recursos genéticos animais: sua conservação e utilização.
As variações nos organismos vivos são o resultado de bilhões de anos de evolução. A diversidade biológica refletese na existência de mais de 1,75 milhões de espécies que ocupam uma variedade de ecosistemas como desertos,
florestas, planícies, terras baixas, lagoas, rios e uma grande variedade de ecosistemas agrícolas. A biodiversidade
vem diminuindo rapidamente, o que tem levado aos países a assinar a Convenção sobre a Diversidade Biológica
(CBD) cujos objetivos são a conservação da biodiversidade, o uso sustentável de seus componentes e a distribuição
justa e equitativa dos benefícios resultantes da utilização dos recursos genéticos. Biodiversidade agrícola refere-se à
biodiversidade diretamente envolvida na produção de alimentos e funções agrícolas. Quase um terço da área da
Terra é utilizada na produção de alimentos e todos os animais domesticados e as plantas cultivadas resultaram do
manejo pelo homem da diversidade biológica, em constante resposta aos novos desafios para manter e aumentar a
produção nos ambientes ecológicos e nos sistemas agrícolas mais variados. Assim, agrobiodiversidade inclui
elementos socio-culturais, econômicos e ambientais. A biodiversidade nos animais domésticos é representada por
mais de 9.000 raças ou populações diferenciadas pertencentes a 36 espécies animais utilizadas para a produção de
alimentos e serviços agrícolas. Mais de 3.500 destas espécies pertencem às 13 espécies responsáveis por mais de
90% da produção animal mundial.
O Primeiro Relatório sobre a Situação Mundial dos Recursos Genéticos Animais.
A Organização das Nações Unidas para a Agricultura e a Alimentação (FAO) é um organismo intergovernamental
fundado em 1945 para lutar contra a fome e a pobreza no mundo. As regiões mais pobres do mundo encontram-se
principalmente na Africa, Asia, Latinoamérica e Europa Oriental. Uma das funções da FAO é colaborar com seus
paises membros, para a conservação e desenvolvimento dos recursos genéticos animais, já que essas regiões
dependem, num percentual alto, do setor animal para alimentar seus povos, especialmente as comunidades rurais. A
base genética da produção animal moderna do tipo industrial, em particular o gado leiteiro, suinos e aves, está
ficando cada vez mais restrita, com os riscos que isso implica, como consanguinidade com perda de fertilidade e
vitalidade, menor capacidade de reação frente às mudanças ambientais, maior consumo de energia fossil, adubos e
pesticidas, suplementos energéticos, antibióticos e uso de alta tecnologia. No ano 2020 o consumo mundial de
alimentos é previsto que aumente em 120 milhões de toneladas de carne e 240 MT de leite, em comparação com
1993. Por outro lado, os recursos genéticos animais sofrem constante erosão. Nos últimos 15 anos, 300 de 6.000
raças identificadas pela FAO desapareceram. Mais de 160 paises participam do Relatório Mundial, a ser apresentado
em 2006. Os países identificaram prioridades como necessidade de formação profissional na área de manejo de
recursos genéticos animais e melhoramento, bancos de germoplasma, caracterização e avaliação das raças
adaptadas, desenvolvimento de estratégias nacionais, colaboração regional, e incorporação de biotecnologia,
especialmente aos paises em desenvolvimento. O grande desafio é convencer aos paises desenvolvidos e às
organizações financeiras a investir na conservação e melhor manejo dos recursos genéticos animais no mundo, como
parte dos pacotes de ajuda internacional aos paises em desenvolvimento.
26
Sinalização intercelular mediada pelo ligando Delta-like 4 determina a identidade arterial no
desenvolvimento vascular em mamíferos
Duarte, A.1, Trindade, A.1, Benedito, R.1, Diniz, P.1, Henrique, D.2 e Lopes da Costa, L.1
1 Centro Interdisciplinar de Investigação em Sanidade Animal, Faculdade de Med.Veterinária, Av. da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa
2 Instituto de Medicina Molecular, Faculdade de Medicina de Lisboa, Av. Egas Moniz, 1700-159 Lisboa
Mutações em humanos, ratinhos e peixe-zebra têm vindo a implicar a via de sinalização Notch na regulação da
diferenciação vascular durante o desenvolvimento em vertebrados. Nos peixes-zebra, a via Notch parece actuar na
determinação da identidade dos vasos em crescimento através da supressão do destino celular venoso nas células
endoteliais arteriais. No homem e em ratinhos, tanto o receptor Notch 4 como o ligando Delta-like 4 (Dll4) são
exclusivamente expressos nas células endoteliais arteriais, sugerindo a existência de um mecanismo regulador
semelhante ao caracterizado em peixes-zebra.
A análise fenotípica de mutantes tanto de ganho- como de perda-de-função do gene Dll4, que aqui apresentamos,
vem demonstrar o papel determinante deste ligando na padronização e diferenciação dos vasos arteriais em
mamíferos.
Enquanto nos mutantes de perda-de-função todos os vasos sanguíneos apresentam identidade venosa, caracterizada
pela expressão de marcadores específicos como o receptor Eph-B4, a sobre-expressão de Dll4 provoca a adopção da
identidade arterial pela generalidade das células endoteliais. Os resultados identificam esta molécula como o ligando
responsável pela activação autócrina da via Notch nas células endoteliais arteriais e constituem-no como um
potencial alvo em estratégias de intervenção terapêutica ao nível da angiogénese arterial.
[Activation of Notch signalling by Delta-like 4 determines arterial identity]
Involvement of the Notch signalling pathway in vascular development has been demonstrated by mutations in
humans, mice and zebrafish. In zebrafish, Notch signalling appears to be required for arterial identity through the
suppression of the venous cell fate in developing arterial endothelial cells. In mice, the Notch4 receptor and the
Delta-like 4 (Dll4) ligand are specifically expressed in arterial and not in venous endothelial cells, suggesting a
possible similar role. Knockout of the Notch4 receptor gave no obvious phenotype alone, although Notch1/Notch4
double mutants did show severe vascular remodelling defects.
By creating and analysing Dll4 gain and loss of function mouse mutants we show, in contrast, that this ligand alone
is required in a dosage-sensitive manner for normal arterial patterning in development. This implicates Dll4 as the
specific endothelial ligand for autocrine endothelial Notch signalling and suggests it may be a suitable target for
therapeutical intervention in arterial angiogenesis.
27
Polimorfismo genético do exão 4 do gene da K-caseína em caprinos
Delgado, F.1, Faro, C.2,3, Castanheira, P.2,3, Santos, A.3, Pires, E.2,3, Colaço, J.4
1 Dept. Ciências Zootécnicas - Escola Superior Agrária de Coimbra, Bencanta 3040-316 Coimbra
2 Dept. Bioquímica – Faculdade Ciências e Tecnologia - Univ. Coimbra (FCT-UC), Apartado 3126, 3001-401 Coimbra
3 Centro de Neurociências e Biologia Celular (CNC) - Univ. Coimbra, 3020-201 Coimbra
4 Dept. Zootecnia - Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro, Apartado 202, 5001-911 Vila Real
O exão 4 do gene da caseína kappa (k-cas.E4) é determinante e maioritário na codificação do respectivo RNA
maduro. Estão já notificados diversos SNP´s. Apesar disso, importa notar que existe uma região extremamente
conservada e que codifica o segmento que inclui a ligação Phe-Met – zona alvo das enzimas proteolíticas.
O polimorfismo observado em todas as outras proteínas do leite e na própria k-cas têm sido conotados com
variações quantitativas e qualitativas do leite, desde o volume final à rigidez da massa do queijo.
Procurando tipificar as populações caprinas exploradas na região centro, extraiu-se DNA leucocitário de 68 cabras:
1) - 11 Serranas e 3 cruzadas, do rebanho da ESAC e 2) - mais 54 (9 por raça/ecótipo) representantes dos grupos
“Serrano Ribatejana”, “S.Transmontano”, “S.Jarmelista”, “Alpina”, “Saanen” e “Anglo-Nubianas cruzadas”, de
rebanhos regionais.
Recorreu-se a PCR para amplificação de um segmento englobante do exão 4 da k-cas que posteriormente foi
sequenciado em processo automatizado (Beckman Counter-CEQ 8000®) para evidenciação de SNP’s e
genotipagem.
k
k
k
Observaram-se 3 formas alélicas: A -cas.E4., B -cas.E4 e D -cas.E4 (este, em heterozigotia e apenas num animal). A
k
frequência do alelo B -cas.E4 foi: Saanen (94%), Anglo-Nubiana (86%), Jarmelista (72%), Transmontana (61%),
Ribatejana (69% e 39%, dois grupos distintos) e Alpinas (33%).
[Genetic polymorphism on exon 4 of K-casein gene in goats]
Exon 4 of Kappa-casein gene (k-cas.E4) is determinant and encodes most of the corresponding mature RNA. There
are already several SNP´s notified. Nevertheless, it is important to notice the existence of one region highly
conserved which codes the segment that includes the Phe-Met link – target zone for proteolytic enzymes.
The observed polymorphism in all milk proteins, including the k-cas, and the corresponding genes, have been
associated to quantitative and qualitative variations in the milk, from amount of milk produced till the hardness of
cheese curd.
Aiming the characterization of goat populations used in central region, Leucocytic DNA was extracted from 68
goats: 1) 11 Serrana goats and 3 Sannen crossbred from the ESAC flock 2) and more 54 (9 per breed/ecotype)
representing groups of “Serrana Ribatejana”, “S.Transmontana”, “S.Jarmelista”, “Alpina”, “Saanen” and “crossed
Anglo-Nubians” from 6 regional flocks.
After PCR amplification of one segment encoding exon 4 of k-cas gene, it was then automatically (Beckman
Counter-CEQ 8000®) sequenced for evidence of SNP’s as well as for genotyping. Three allelic forms were
k
k
k
k
observed: A -cas.E4., B -cas.E4 and D -cas.E4 (the late, in heterozygous form in just one animal). The allele B -cas.E4 frequency
was: Saanen (94%), Anglo-Nubians (86%), Jarmelista (72%), Transmontana (61%), Ribatejana (69% e 39%, two
distinct groups) and Alpines (33%).
28
Diversidade genética nas raças caprinas do Sul de Portugal
Bruno de Sousa, C.1, Martinez Martinez, A.2, Ginja, C.1, Carolino, I.1, Santos Silva, F.1, Delgado, J.2, Gama, L.T.1
1 Departamento de Genética e Melhoramento Animal, Estação Zootécnica Nacional – Fonte Boa, 2000-Vale de Santarém. Portugal
2 Departamento de Genética, Universidad de Córdoba – Edificio C-5, Campus de Rabanales, 14071-Córdoba. España
Portugal possui um património genético rico e diversificado, com cinco raças autóctones de caprinos actualmente
reconhecidas. Todas estas raças se encontram ameaçadas de extinção, tendo nos últimos anos apresentado uma
redução acentuada dos efectivos. Os programas de gestão do património genético, particularmente aqueles que
visam a sua conservação, pressupõem a caracterização da variabilidade genética, nomeadamente para a detecção de
possíveis estrangulamentos e identificação de populações únicas ou de particular interesse. Por serem neutros face à
selecção, os microssatélites são actualmente reconhecidos e escolhidos como particularmente interessantes em
estudos de diversidade genética. Este trabalho teve como objectivo a análise da diversidade genética das raças
Serpentina e Algarvia, que constituem as principais raças caprinas exploradas no Sul de Portugal. Para o efeito
foram analisados 25 loci microssatélites, em ADN extraído de sangue, de cerca de 30 animais não relacionados de
cada raça. A análise de polimorfismos genéticos decorreu segundo metodologias standard, nomeadamente por PCR
seguida de análise de fragmentos em sequenciador automático. Os resultados obtidos foram analisados com vista à
determinação do grau de variabilidade genética existente nestas raças. O número de alelos detectado por locus
variou entre 3 e 16, com um número médio de 7,2, para a raça Serpentina, e entre 2 e 23, com um número médio de
6,5, para a raça Algarvia. A heterozigotia observada (Ho) foi de 0,637 e 0,656 e a esperada (He) de 0,691 e 0,690,
nas raças Serpentina e Algarvia, respectivamente. Apesar de estas populações terem um reduzido número de
animais, a análise de microssatélites indica que a diversidade genética existente é elevada.
[Genetic diversity in goat breeds from Southern Portugal]
Portugal presents a wide and rich diversity of animal genetic resources, with five indigenous breeds of goats
currently recognised. Due to a strong decrease in the number of goats in Portugal over the last few years, all these
breeds are now classified as threatened. Genetic resources management programs, namely those that have the goal
of conservation of domestic breeds, include the genetic characterization of these breeds as well as the detection of
important productive characteristics that allow the identification of populations of particular interest. Because of the
supposed neutrality of microsatellite loci regarding selection effects, these are currently recognised and chosen as
markers of particular interest for genetic diversity studies. In this survey, genetic diversity was studied in the more
important goat breeds in Southern Portugal, namely Serpentina and Algarvia. Twenty five microsatellite loci were
analysed using DNA extracted from blood of approximately 30 non-related individuals of each breed. Genetic
polymorphisms were analysed through standard methodologies, namely through PCR amplification of microsatellite
loci followed by fragment analysis using an automated DNA sequencer. The results were analysed in order to
estimate the genetic variability within and between these breeds. The number of alleles per locus varied between 3
and 16, with an average of 7,2 for the Serpentina breed, and between 2 and 23, with an average number of 6,5, for
the Algarvia breed. The observed heterozigosity (Ho) was 0,637 and 0,656 and the expected heterozigosity (He) was
0,691 and 0,690, in the Serpentina and Algarvia breeds, respectively. Even though these breeds have a small number
of animals, the results indicate that genetic variability, as assessed by analyses of microssatelites, is still large.
29
Preta Lusitânica: caracterização genética de uma raça avícola autóctone Portuguesa
Costa, L.1, Leite, J.V.2, Lopes, J.C.1, Soares, L.1, Alvarez, L.3, Arranz, J.J.3, Brito, N.V.1
1 Instituto Politécnico de Viana do Castelo, Escola Superior Agrária de Ponte de Lima, Refóios 4990 Ponte de Lima, Portugal.
2 Associação de Criadores de Bovinos da Raça Barrosã, AMIBA, S.Torcato, 4810 Guimarães, Portugal.
3 Departamento de Producción Animal, Universidad de León E-24071 León, España.
O declínio da diversidade genética no Reino Animal acentuou-se no último século, considerando-se que cerca de
30% das raças de mamíferos e aves domésticas estejam actualmente em risco de extinção. Factores como a
destruição dos seus habitats nativos, desenvolvimento de raças geneticamente uniformes e a preferência do produtor
e/ou consumidor por certas variedades e espécies contribuem grandemente para esta realidade.
A raça avícola autóctone Preta Lusitânica é uma população do Norte de Portugal, de elevada rusticidade, bem
adaptada ao meio e associada a pequenas explorações familiares, de regime extensivo e baixa produtividade, tendo
como finalidade a produção para autoconsumo de carne e ovos, a utilização de penas para prática da pesca e, em
meios menos esclarecidos, em rituais de feitiçaria. Raça de características ímpares tem sofrido uma forte redução do
seu efectivo, por cruzamentos indiscriminados e introdução de raças exóticas mais produtivas, evidenciando, alguns
exemplares, elevado estado de depauperamento genético e declínio das características étnicas originais.
A caracterização genética da raça avícola Preta Lusitânica é estudada, baseada em marcadores de tipo microsatélite
que manifestam elevada utilidade para a análise genética das populações dada a sua ampla distribuição no genoma,
elevada variação, herança codominante e fácil identificação alélica. São, ainda, de grande precisão para estimar o
grau de variabilidade intra e inter-populacional e utilizam-se de forma generalizada em diferentes espécies animais,
em particular na avicultura.
Procedeu-se à recolha de sangue a partir de uma amostragem aleatória de cinquenta fêmeas da raça Preta Lusitânica,
inscritas no Livro Genealógico e provenientes de diferentes explorações que abrangiam todo o seu solar. Isolou-se
DNA genómico utilizando o procedimento conhecido como “salting out” (Miller et al., 1988). Os marcadores
nucleares seleccionados foram 15 loci microsatélites localizados em diferentes cromossomas. Realizaram-se várias
reacções de amplificação conjunta ou “multiplex” e os fragmentos amplificados combinaram-se em duas corridas
electroforéticas utilizando um sequenciador automático ABIPRISM 377. A identificação alélica estimou-se
mediante os programas “Genescan” e “Genotyper”. Obteve-se, na caracterização genética da raça avícola Preta
Lusitânica, parâmetros de variabilidade genética como frequência alélica e heterozigotias que indicam um nível
considerável de variação. Medidas de suporte da raça, sob o ponto de vista de apoio financeiro deverão ser
implementadas, através de políticas sociais e de planos de melhoramento que passem pela dinamização da raça e do
seu associativismo, do seu sistema produtivo e do conceito de “produto ecológico/biológico”, da investigação e de
marketing, privilegiando as raças autóctones de reduzido potencial produtivo.
[Preta Lusitânica: genetic characterization of an autochtonous Portuguese Poultry Breed]
The decline of the genetic diversity in animal populations increased in the last century, being considered that about 30% of
mammals and domestic birds breeds are, at this moment, in risk of extinction. Factors as the destruction of their native
habitats, development of breeds genetically uniforms and the producer or consumer preference for certain varieties and
species contribute largely to this reality. The autochthonous poultry breed “Preta Lusitânica” is a population of the North
of Portugal of high rusticity, well adapted to the environment and associated to small family farms, extensive systems and
low productivity with meat and eggs production aptitudes focussed for self-consumption as well as the use of feathers for
practice of the fishing and, in less illustrious means, in sorcery rituals. Odd characteristics breed has been suffering a
strong reduction of its number, for indiscriminate crossings and introduction of more productive exotic breeds, evidencing,
some examples, high state of genetic decline and original ethnic characteristics. The genetic characterization of the poultry
breed “Preta Lusitânica” is studied based on microsatellite markers that manifest high usefulness for the genetic analysis
of the populations given their wide distribution in the genome, high variation and inheritance codominant and easy allelic
identification. They are, still, of great precision to esteem the variability degree intra and inter-population and are used in a
widespread way in different animal species, particularly in the aviculture.
Blood sampling were collected from a random sampling of fifty females of the breed “Preta Lusitânica”, enrolled in the
Genealogical Book and proceeding of different farms in its influence area. Genomic DNA was isolated using the
procedure "salting out" (Miller et al., 1988). The selected nuclear markers were 15 micro-satellite loci located in different
chromosomes and took place several reactions of amplification or "multiplex", combining the amplified fragments in two
electrophoretic procedures using an automatic sequencing ABIPRISM 377. The allelic identification was performed by the
programs "Genescan" and "Genotyper". It was obtained, in the genetic characterization of the poultry breed “Preta
Lusitânica”, parameters of genetic variability as allelic frequency and heterozygosis that indicate a considerable level of
variation. Must be necessary, for breed preservation, the implementation of financial support programs, through social
politics and improvement plans that go by the protection of the breed and its associative, their productive system and the
concept of "ecologic product / organic product", the investigation and marketing, privileging the autochthonous breeds of
low productive efficiency.
30
A relevância do gene anão ligado ao sexo (dw) na produção de ovos em Maputo
Garcês, A.
Universidade Eduardo Mondlane, Faculdade de Veterinária, C.P. 257, Maputo, Moçambique
A produção de ovos na zona de Maputo decresceu 99% nos últimos vinte anos, devido fundamentalmente à
influência negativa do mercado externo, de ovos e ingredientes para rações, na rentabilidade dos criadores locais. A
viabilidade de produzir ovos neste ambiente desfavorável depende, em larga medida, da margem sobre o custo de
alimentação. A redução do custo de alimentação pode também ser conseguida por via genética, usando uma linha de
poedeiras diferente.
Foi estudado o desempenho de poedeiras Dahlem Red, anãs e de tamanho normal. Verificou-se que o gene anão
influencia significativamente (P<0.001) todos os parâmetros produtivos estudados. As aves anãs produziram menos
ovos (-15%), com um peso menor (-7%), consumiram menos alimento (-27%) e necessitaram de menos ração para
produzir uma dúzia de ovos (-15%) do que as galinhas no grupo controlo de tamanho normal. A sobrevivência das
anãs ao stress pelo calor, a principal causa de mortalidade, foi três vezes melhor do que nas de tamanho normal
(P<0.05). A eficiência económica das poedeiras anãs foi igualmente superior. O seu custo de alimentação absorveu
menos receita (-9%) e o ponto de equilíbrio foi atingido mais cedo. Nas condições do estudo e considerando as
presentes relações entre o preço das poedeiras em ponto de postura, da ração e da dúzia de ovos, as aves anãs
permitiram uma redução de 11% dos principais componentes variáveis do custo de produção. Atendendo a que a
densidade de aves por unidade de área pode ser 1,3 vezes superior quando se usam anãs, o retorno sobre o capital
investido pode aumentar 44%.
Conclui-se que o gene anão, ligado ao sexo (dw), pode constituir uma alternativa relevante para os pequenos
produtores peri-urbanos, para os quais o espaço é um factor de produção limitante.
[The relevance of the sex-linked dwarf gene (dw) to egg production in Maputo]
Egg production in Maputo decreased 99% in the last twenty years, due mainly to the negative influence of the
external markets of eggs and feed ingredients on the profitability of local farmers. The feasibility of producing eggs
in this unfavourable environment depends, to a large extent, on margin over feed costs. Feed cost reduction can also
be achieved through genetics by using a different strain of layers.
The performance of normal-sized and dwarf Dahlem Red layers was studied. The sex-linked dwarf gene
significantly influenced (P<0,001) all production traits studied. Dwarf females produced less (-15%) and lighter (7%) eggs, consumed less feed (-27%) and needed less feed to produce a dozen eggs (-15%) than their normal-sized
counterparts in the control group. The survival of dwarf birds to heat stress, the main cause of mortality, was three
times higher (P<0,05). The economic efficiency of dwarf layers was also superior. Their feeding cost absorbed less
income (-9%) and the break-even point was reached earlier. In the conditions of the study and considering the
present relations between point-of-lay hens, feed and egg prices, dwarf hens allowed for an 11% reduction of the
main variable costs. Given that bird density can be 1,3 higher when using dwarf birds, return over capital can be
increased by 44%.
It was concluded that the sex-linked dwarf gene (dw) might be a relevant alternative to the small-scale peri-urban
farmers, for whom space is a limiting production factor.
31
Análise do intervalo entre partos em vacas leiteiras. Influências ambientais e variabilidade genética
Pereira, C.M.1,2, Carolino, M.I.1, Carolino, N.1, Machado, J.3 e Gama, L.T.1
1Estação Zootécnica Nacional, 2005-048 Vale de Santarém
2 Faculdade de Medicina Veterinária-UTL, R. Prof. Cid dos Santos, 1300-477 Lisboa
3 Associação Nacional para o Melhoramento dos Bovinos Leiteiros, Verdemilho, Aveiro
A selecção em bovinos leiteiros tem tido resultados apreciáveis, orientando-se sobretudo para caracteres de
produção e tipo. Contudo, crê-se que a eficiência reprodutiva em vacas leiteiras tem vindo a mostrar uma evolução
indesejável, possivelmente devido às correlações negativas entre produção leiteira e fertilidade. Uma forma comum
de avaliar a eficiência reprodutiva em bovinos é o cálculo do intervalo entre partos (IP), que reflecte essencialmente
o efeito conjunto do período até ao reinício da actividade ovárica, eficiência de detecção de cios e fertilidade à
inseminação. Este trabalho tem como objectivo o estudo dos diferentes factores ambientais que influenciam o IP em
bovinos da raça Frísia em Portugal, bem como estimar a variabilidade genética que lhe está subjacente, como forma
de programar possíveis alterações ao programa de selecção que tem vindo a ser seguido. Neste sentido, foram
analisados 282238 registos de IP pertencentes a 137768 vacas, que correspondem a partos registados na base de
dados nacional da raça Frísia entre 1984 e 2002. O BLUP-Modelo Animal utilizado na análise considerou os efeitos
fixos do estábulo-ano-estação (n=33690), mês de parto e idade da vaca, e os efeitos aleatórios do valor genético e
ambiental permanente da vaca. O IP médio foi de 415.6±78.9 dias, sendo a idade média das vacas de 41.99±17.53
meses e a produção média de leite aos 305 dias de 7460±1761 kg. Para o IP, observaram-se diferenças ambientais
acentuadas entre estábulos, sendo as diferenças entre meses de parto relativamente reduzidas. A idade da vaca teve
uma influência quadrática no IP, ainda que no intervalo de idades considerado o IP aumentasse sempre com a idade
da vaca, resultando em diferenças de cerca de 8.5 dias entre vacas de 24 e 72 meses de idade. A variabilidade
genética do IP é reduzida, com uma heritabilidade estimada de 0.04±0.003 e uma proporção da variância fenotípica
devida a efeitos ambientais permanentes de 0.083±0.004. Contudo, a grande variabilidade fenotípica deste caracter
permite algum optimismo quanto à possibilidade de seleccionar para a melhoria da eficiência reprodutiva em vacas
leiteiras.
[Analysis of calving interval in dairy cattle. Environmental influences and genetic variability]
Selection in dairy cattle has been quite successful and has been aimed mostly towards production and type traits.
Nevertheless, it is believed that reproductive efficiency in dairy cows has shown an undesirable trend, possibly due
to negative correlations between milk yield and fertility. One common way to evaluate reproductive efficiency in
cattle is through the calculation of calving interval (CI), which essentially reflects the joint effects of the period from
calving until re-initiation of ovarian activity, efficiency of heat detection and fertility resulting from artificial
insemination. The objectives of this work were to study different environmental factors which affect CI in Friesian
cattle in Portugal, and to estimate genetic variability for this trait, as an important tool for possible changes to be
introduced into the breeding program which has been followed until now. For these purposes, 282239 CI records by
137768 cows calving between 1984 and 2002, and with records in the national data base, were analysed. The
analysis was conducted with a BLUP-Animal Model, considering the fixed effects of herd-year-season (n=33690),
month of calving and cow age, and the random effects of breeding value and permanent environmental effect of the
cow. Average CI was 415.6±78.9 days, while the averages for cow age a milk yield at 305 d were 41.99±17.53 and
7460±1761 kg, respectively. For CI, differences among herds were important, while the effect of month of calving
was of minor importance. Cow age had a quadratic influence on CI, even though; for the age interval analysed, CI
always increased with age, to reach a difference of nearly 8.5 days between cows of 24 and 72 months of age.
Estimates of genetic parameters for CI were 0.04±0.003 for heritability and 0.083±0.004 for the fraction represented
by common environmental effects. Even though heritability is low, the phenotypic variance for this trait is large, and
allows for some optimism regarding the possibilities of selection for reproductive efficiency in dairy cows.
32
Diagnóstico / Toxicologia
Eliminação de fármacos na disfunção hepática
São Braz, B., Rodrigues, A.L., Silva, A.J.
Núcleo de Farmacologia e Toxicologia, CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária, Lisboa, Portugal
A cinética dos fármacos pode estar sujeita a alterações na presença de lesões hepáticas que, mesmo sem evidência
patológica, modificam a importante função metabolizadora deste órgão. Estas alterações na cinética das substâncias
podem conduzir a uma diminuição da actividade farmacológica, ou a um aumento da sua toxicidade, com as
consequências que daí podem advir quer para os planos terapêuticos, quer para a Saúde Pública.
Através da utilização de um modelo de disfunção hepática aguda, induzido pela administração da galactosamina
(hepatotoxina) a uma espécie animal de laboratório - Ratus norvegicus - foi avaliada a cinética de eliminação da
antipirina (molécula com eliminação essencialmente hepática).
Da avaliação dos parâmetros cinéticos correspondentes foi possível observar uma redução da eliminação da
antiprina e uma modificação de perfil de eliminação urinária dos seus metabolitos.
Os resultados obtidos levam-nos a concluir que a instituição de esquemas terapêuticos de fármacos com eliminação
preferencial por via hepática deve ser cuidadosamente instituída principalmente no que diz respeito à dose e à
frequência de administração, no sentido de reduzir, em especial, o risco de toxicidade.
[Drug elimination in hepatic disfunction]
Pharmacokinetic of drugs can suffer alterations if hepatic lesions occur, even without pathologic evidence, but with
hepatic metabolizing function disturbance. These alterations in the kinetics of the drugs can induce a
pharmacological activity reduction or even a toxicity increase, with consequences on therapeutic schemes and on
Public Health.
Using an acute hepatic disfunction model, induced by galactosamine (hepatotoxin) administration to a laboratory
animal specie - Ratus norvegicus -, kinetic antipyrin elimination was evaluated.
Through the evaluation of the corresponding kinetic parameters a reduction of antipyrine elimination and a
modification of the urinary elimination profile of antipyrine metabolites were also observed.
Considering the obtained results it can be concluded that, for drugs with preferencial hepatic elimination,
therapeutics schemes must be optimized, mainly with respect of dosage and administration frequency, in order to
prevent toxicity.
33
Análise de resíduos das lactonas do Ácido β-Resorcílico em urinas de bovino por Cromatografia
Gasosa Associada a Espectrometria de Massa (GC-MS)
Ribeiro, L.M., Marques, M.L., Alves, M.P.
LNIV, Estrada de Benfica, 701 – 1496-011 LISBOA
A zearalenona, uma micotoxina com actividade estrogénica produzida por diversas espécies de Fusarium é um
contaminante natural comum e bastante difundido nos grãos de cereais e rações animais. Estudos metabólicos indicam que
a zearalenona pode ser transformada pelos animais, e possivelmente pelos humanos, em α-zearalenol e β-zearalenol e αzearalanol (zeranol) e β-zearalanol (taleranol). A zearalenona tem sido referida como potencialmente carcinogénica em
roedores e também associada a casos de desenvolvimento sexual precoce em crianças. Como consequência, verifica-se
uma preocupação crescente sobre o potencial risco desta micotoxina para a espécie humana, não somente pela exposição
directa a cereais, grãos e legumes contaminados mas, também através de alimentos provenientes de animais expostos a
rações contaminadas. O zeranol é um promotor de crescimento que quando administrado por implante ou quando presente
como contaminante ambiental promove o ganho do peso vivo em produção animal. Sendo o seu uso ilegal na União
Europeia, é exigido aos Estados Membros assegurar através dos respectivos Planos Nacionais de Controlo a monitorização
da utilização abusiva do zeranol (Directiva do Concelho 96/23/EEC).
No entanto a possível ocorrência natural do zeranol devida à contaminação por toxinas do Fusarium, as quais são
parcialmente metabolisadas em zeranol tornam difícil a monitorização precisa do possível abuso.
Desse modo é importante que os Laboratórios Nacionais de Referência (NRLs) assegurem a análise do grupo completo
das lactonas, de modo a tornar mais efectiva a vigilância do uso ilegal dos promotores de crescimento.
Assim foi desenvolvido um método de confirmação quantitativo por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de
massa (GC-MS) para a análise das Lactonas do Ácido β-Resorcílico (RALs) em amostras de urina. Este método analítico é
selectivo e sensível para a quantificação, em simultâneo, de baixos teores de zearalenona e seus metabolitos, sendo
pertinente a sua aplicação às amostras do Plano Nacional de Controlo de Resíduos (PNCR) pelos Laboratórios Nacionais
de Referência.
O método foi desenvolvido no Laboratório Nacional de Investigação Veterinária (LNIV), no âmbito do projecto FAIR
CT97-3443 “Development, validation and harmonization of screening and confirmatory tests to distinguish zeranol abuse
from Fusarium toxin contamination in food animals”.
As características de desempenho do método foram avaliadas pela participação no ensaio de aptidão “Zeranol and
Taleranol in samples of lyophilised bovine urine and bovine bile”, organizado pelo Laboratório Comunitário de
Referência/Instituto Nacional de Saúde Pública e do Ambiente (CRL/RIVM), sendo assim dado cumprimento à Decisão
da Comissão 2002/657/CE para a análise de resíduos.
[Analysis of β-Resorcylic Acid lactones residues in bovine urine by Gas Chromatography – Mass
Spectrometry (GC-MS)]
Zearalenone a mycotoxin with estrogenic activity produced by several Fusarium species is found to be a common and
widespread contaminant in cereal grains and animal feedstuffs. Metabolism studies indicate that zearalenone can be
transformed by animals, and possibly by humans, in α-zearalenol and β-zearalenol and α-zearalanol (zeranol) and βzearalanol (taleranol).
Zearalenone has been reported to be potentially carcinogenic in rodents and it has also been related to cases of precocious
sexual development of human infants. Consequently, there is an increasing concern about the potential risk of this
mycotoxin to humans, not only from direct exposure to contaminated cereal products, but also through food from farm
animals exposed to zearalenone-contaminated feeds.
Zeranol is a growth promoter that increases the liveweight gain in food animals following implantation or as an
environmental contaminant. Its use in the EU is illegal and therefore Member States are required to establish National
Surveillance Schemes to monitor possible abuse of zeranol (Council Directive 96/23/EEC).
The eventual natural occurrence of zeranol due to contamination by the Fusarium toxins, which are partially metabolised
to zeranol, generates difficulties to the accurate monitoring of possible abuses.
So, it is important that National Reference Laboratories (NRLs) carry out the analysis of the entire group of lactones, in
order to attain a more effective surveillance of illegal use growth promoting compounds.
A gas chromatographic/mass spectrometric (GC-MS) method has been developed as a quantitative confirmatory method
for the analysis of all Resorcylic Acid Lactones (RALs) in urine samples. This analytical method is a selective and
sensitive procedure for the simultaneous quantification of low zearalenone levels and its metabolites and National
Reference Laboratories can use it on Residue National Surveillance Schemes.
The method has been developed in Laboratório Nacional de Investigação Veterinária (LNIV) within the task of the FAIR
CT97-3443 Project “Development, validation and harmonisation of screening and confirmatory tests to distinguish zeranol
abuse from Fusarium toxin contamination in food animals”.
The performance characteristics of the method were evaluated through the participation on the proficiency test, “Zeranol
and Taleranol in samples of lyophilised bovine urine and bovine bile”, organised by the Community Reference
Laboratory/National Institute of Public Health and the Environment (CRL/RIVM) according to the Commission Decision
2002/657/CE for residue analysis.
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Métodos analíticos de rastreio para detecção de antibióticos em leite
Rodrigues, A.L., São Braz, B., Abreu, S., Correia, M.I., Silva, A.J.
A administração de antibióticos é uma prática comum na produção leiteira, sem que contudo deva colocar em risco a
saúde humana. Para garantir este objectivo foram instituídas, na UE, políticas de monitorização e controlo dos
resíduos de antibióticos em leite, utilizando para o efeito metodologias de rastreio. Estas são usualmente realizadas
através de métodos microbiológicos que não discriminam qual ou quais as moléculas presentes no leite.
Assim, foi nosso objectivo desenvolver um método, por cromatografia de camada fina (CCF), no qual essa
discriminação pudesse ser obtida.
Os antibióticos objecto deste estudo foram a penicilina G, a amoxicilina (ambos do grupo dos β-lactâmicos), a
tetraciclina (grupo das tetraciclinas), a espiramicina (grupo dos macrólidos), a espectinomicina (grupo dos
aminoglicosídeos) e a lincomicina.
Pretendeu-se encontrar para cada um dos antibióticos em estudo os respectivos eluente, reagente de pulverização,
valores de factor de retenção (Rf), e limites de detecção.
A separação dos anitibióticos, nas placas de cromatografia de camada fina (CCF), foi realizada com os seguintes
sistemas de eluição: clorofórmio/metanol (4:1) para a penicilina G, lincomicina e a espiramicina (I, II e III);
clorofórmio/metanol (2:3) para a amoxicilina; e butanol/ácido acético/água (3:1:1), para a espectinomicina e
tetraciclina.
A detecção das moléculas foi realizada sob luz UV (254/366 nm) e/ou com reagentes específicos de pulverização.
Nestes incluímos o p-anisaldeído que revela a espiramicina (I, II e III), com um LD de 0,0488 µg, 0,0186 µg, 0,01
µg, respectivamente, a espectinomicina com um LD de 0,00508 µg e a tetraciclina, com um LD de 0,007816 µg. O
reagente de pulverização de iodo revela a penicilina G com LD de 0,0066 UI, a lincomicina com um LD de 0,0696
UI e a amoxicilina com um LD de 0,07912 µg.
Face às combinações de eluentes e reagentes de pulverização encontradas e aos limites de detecção obtidos,
podemos considerar a metodologia utilizada bastante eficiente na detecção e discriminação dos antibióticos
estudados e equacionar a sua utilização na optimização dos métodos de rastreio para detecção de antibióticos em
leite.
[Screening analytical methods for antibiotics detection in milk]
Antibiotics administration is a usual pratice in milk production, however this use must be safe to human health. In
order to guarantee this goal a policy of monitorization and control of antibiotic residues in milk is followed in EU,
using screening methodologies. However some of these are performed by microbiological methods whose don't
discriminate exactly what antibiotic or antibiotics are present in milk samples.
Our goal in this work was to develop a thin layer chromatography (TLC) method method by what that
discrimination can be obtained.
Antibiotics tested were: Penicillin G, amoxycillin (β-lactams group); tetracyclin (tetracyclines group); spiramycin
(macrolides group); spectinomycin (aminoglycosides group) and lincomycin.
For each antibiotic identification of: elluent, spraying reagent, retention factor value (Rf) and detection limits (DL)
was intented.
Antibiotic separation, in thin layer chromatography plates, was made with the following elution systems:
chloroform/methanol (4:1) for penicillin G, lincomycin and spiramycin (I, II and III); chloroform/methanol (2:3) for
amoxycillin; and butanol/ acetic acid/water (3:1:1) for spectinomycin and tetracyclin. Detection was made under UV
light (254/366 nm) and/or specific spraying reagents. In these are included P-anisaldehyde for revelation of
spiramycin (I, II and III) with detection limits of 0.0488, 0.0186 and 0.01µg respectively; spectinomycin with DL of
0.00508 µg; and tetracyclin with Dl of 0.007816 µg. With iodine spraying reagent it can be revelated penicillin G
with DL of 0.0066 UI, lincomycin with DL of 0.0696 UI and amoxycillin with DL of 0.07912 µg.
Face to eluent spraying reagents combinations and detection limits obtained we can considered this methodology
efficient enough for detection and discrimination of antibiotics in milk.
35
Pesquisa de resíduos de Macrólidos em amostras biológicas por LC-MS/MS
Barbosa, R., Freitas, A., Sá, L., Barbosa, J.
Laboratório Nacional de Investigação Veterinária – Estrada de Benfica, 701 1549 – 011 Lisboa
Os Macrólidos são antibióticos de espectro de acção médio, activos contra bactérias Gram + e são os fármacos mais
eficientes no tratamento e profilaxia de doenças causadas por micoplasmas, possuindo também uma boa actividade
contra bactérias anaeróbias. Actuam inibindo a síntese proteica, ligando-se á subunidade 50S do Ribossoma,
impedindo a translocação do RNAt e inibindo a enzima peptidiltransferase (impedem o alongamento da cadeia
peptídica). São antibióticos bacteriostáticos muito usados, não só em medicina humana (ex.: infecções respiratórias)
como também em medicina veterinária (ex.: como promotores de crescimento e em infecções respiratórias).
O uso destes compostos em animais de produção intensiva está sujeito a restricções, nomeadamente a obrigação do
cumprimento do intervalo de segurança antes do abate, por forma a que os resíduos destes compostos não atinjam
concentrações que excedam os Limites Máximos de Resíduos (LMR’s) estabelecidos no Anexo I do Regulamento
2377/90/EC para cada matriz animal (tecidos edíveis, ovos e leite) e para cada um dos compostos deste grupo. Para
os consumidores, os resíduos destes compostos nos alimentos podem provocar não só reacções de hipersensibilidade
em indivíduos susceptíveis, como também induzir o aparecimento de estirpes bacterianas resistentes.
O cumprimento, por parte dos produtores, dos intervalos de segurança, é monitorizado pelo Plano Nacional de
Controlo de Resíduos, sendo os compostos de maior relevância deste grupo a tilosina, a eritromicina, a espiramicina
e a tilmicosina. A triagem destes compostos é feita por ensaios microbiológicos, de onde resulta um elevado número
de falsos positivos. Até há pouco tempo, para a confirmação das amostras suspeitas, utilizava-se HPLC-UV/vis, que
demonstrava falta de especificidade para alguns dos compostos analisados.
Por este motivo foi necessário desenvolver uma metodologia de confirmação de evidenciasse um elevado grau de
especificidade e cumprisse os critérios definidos na Decisão da Comissão 2002/657/EC.
O procedimento analítico que se descreve utiliza a extracção das amostras em fase sólida (SPE) e análise do extracto
obtido por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massa sequencial (LC-MS/MS) no modo MRM
(monitorização de reacções múltiplas). Demostra-se a aplicabilidade deste procedimento em rotina, evidenciando-se
a detecção, confirmação e quantificação de amostras biológicas positivas oriundas do controlo oficial.
[Determination of Macrolide residues in biological samples by LC-MS/MS]
The antibiotics Macrolide are considered to be medium spectrum antibiotics, active against a wide range of Gram +
bacteria, specially efficient in preventing and treating diseases such as the ones caused by mycoplasma and they are
also used against anaerobic bacteria. These antibiotics connect to the 50S ribosome sub-unit inhibiting the protein
synthesis. These are bacteriostatics very used in human medicine (e.g.: in respiratory infections) as in veterinary
medicine (e.g.: as growth promoters and in respiratory infections).
The use of these compounds in food producing animals is subject of restrictions such as the fulfilment of the
withdrawal period before slaughter to ensure the absence of macrolide residues above the MRL (maximum residue
limit) established in Council Regulation 2377/90/EC, annex I for each animal matrix (edible tissues, eggs and milk)
and for each compound of this group. Antibiotic residues may have direct toxic effects on consumers, e.g., allergic
reactions in hypersensitive individuals, or may indirectly cause problems through the induction of resistant strains of
bacteria.
The fulfilment of the withdrawal period is monitored by the National Plan of Residue Control in which the relevant
compounds are tylosin, erythromycin, spiramycin and tilmicosin. Generally, the determination of antibiotics,
including macrolide, is mainly carried out by microbiological assays. These assays excel as a qualitative means by
which samples may be screened for residual amounts of antibacterial substances. However the assays tend to lack
specificity and present high number of false positive results. The confirmation was carried out by HPLC-UV/vis
which was set aside due to the lack of specificity for some compounds.
In order to overcome these problems a confirmation procedure was developed to ensure high level of specificity and
the fulfilment of the Commission Decision 2002/657/EC criteria.
The analytical procedure described uses the solid phase extraction of the samples and the analysis of the obtained
extract by a liquid cromatographer connected to a tandem mass spectrometer (LC-MS/MS) in MRM mode (multiple
reaction monitoring).
This method is suitable and reliable for routine analysis in detection, confirmation and quantitation of positive
biological samples derived from the official control.
36
Dietilstilbestrol – Isomerização cis-trans na pesquisa de resíduos em amostras de animais para
consumo
Barbosa, J., Jesuíno, B., Carvalho, I.
Laboratório Nacional de Investigação Veterinária, Estrada de Benfica 701, 1549-011 Lisboa. resí[email protected]
Hormonas naturais e sintéticas têm sido usadas em todo o mundo nos animais de produção intensiva para aumentar a
deposição proteica. O dietilstilbestrol (DES) é um estrogénio sintético conhecido por possuir esta função. No
entanto, devido às suas propriedades cancerígenas e estrogénicas, não é permitida a presença de resíduos deste
composto nos alimentos, e a sua administração é proibida na maioria dos países, incluindo a União Europeia. Em
Portugal, o Laboratório Nacional de Investigação Veterinária é a entidade responsável pela pesquisa de resíduos de
DES em amostras provenientes de animais para consumo, onde a presença do isómero cis-DES nas amostras e a
discussão da sua origem biológica e/ou analítica levou à realização deste estudo.
trans-DES é a forma biologicamente activa, e está disponível comercialmente com percentagens de isómero cis
inferiores a 0.5%. Contudo, observa-se a formação significativa de isómero cis (~40%) durante o processo de
extracção e purificação das amostras utilizadas no método para a pesquisa deste composto por GC-MS. Estudos
realizados para observar o comportamento do rácio cis/trans nos diferentes solventes, aos quais o DES é sujeito
durante a extracção, revelam significativas formações de isómero cis em todos eles (água ~25%; n-hexano ~20%;
acetato de etilo ~15%). Apenas em metanol parece não ocorrer o fenómeno de isomerização. No passo de hidrólise
enzimática, para desconjugação do DES, com glucuronidase (extracto de helix pomatia) não parece haver diferença
quando esta é realizada a 37ºC durante a noite, ou a 55ºC em 2 horas. Estudos de variações do rácio com a enzima
termicamente desactivada, e a pH inadequado foram realizados. Relativamente ao passo de derivatização, os nossos
resultados sugerem que quando é realizada com MSTFA/TMIS/DTE não ocorre a formação de isómero cis durante
esta fase. O rácio cis/trans nas amostras parece também ser fortemente dependente da composição da matriz, e
diferente do rácio do DES deuterado adicionado como padrão interno.
Parece assim haver um forte impedimento analítico na determinação do rácio cis/trans originalmente presente nas
amostras, não podendo ser utilizado esse rácio como critério de identificação. Estudos de cis-DES derivado da
metabolização biológica do animal também se encontram fortemente comprometidos quando este efeito não é
considerado.
Perante estes resultados, a quantificação isolada de cis-DES e trans-DES não parece trazer qualquer mais valia
apesar de se conseguir a separação inequívoca dos picos relativos aos dois isómeros por GC-MS.
[Diethylstilbestrol – cis-trans isomerization in the analysis of samples from livestock]
Natural and synthetic hormones have been used worldwide to improve the rate of protein deposition in livestock.
Diethylstilbestrol is one of the synthetic estrogens known to have been intensively used. However, because of its
carcinogenic and estrogenic properties, residues in foods are not permitted and its administration is forbidden in
most countries, including the European Union. In Portugal, Laboratório Nacional de Investigação Veterinária is the
responsible entity for the control of DES in samples from livestock, where the presence of cis-DES in the samples
and the discussion about its biological and/or analytic origin led to this study.
trans-DES is the biologically active form, and commercial preparations of this substance contain less then 0,5% of
the cis isomer. However, a considerable extra amount of the cis isomer is formed (~40%) as an artefact during
sample extraction and cleanup of sample for GC-MS analysis. When trans-DES is submitted to different kinds of
solvents used in the analytical procedure high levels of cis-DES are formed (water ~25%; n-hexane ~20%; ethyl
acetate 15%). The isomerization is only inhibited in methanol. Incubation with beta-glucuronidase from Helix
Pomatia at 37ºC overnight, or at 55º% for 2 hours seems to produce similar results around 40%. Tests with heatinactivated glucuronidase and at inadequate pH are presented. It was not observed cis-DES formation in the
derivatization step with MSTFA/TMIS/DTE. Results also suggest that the cis/trans ratio is strongly matrix
dependent and significant cis/trans ratio differences have been observed between DES in extracts and d6-DES used
as internal standard.
There seems to be a strong analytical barrier to the determination of the original cis/trans ratio in samples, making it
not suitable for identification purposes. Studies about probable cis-DES metabolic origin can also be seriously
threatened when such effect is not taken under account.
Despite the well-resolved chromatographic peaks of the two isomers, specific quantification of each of the isomers
brings no additional information due to the uncontrolled isomerization during samples preparation.
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Detecção e quantificação de estricnina em matrizes biológicas
Rodrigues, A.L., Moreira, A.S., Brissos, I., Jorge Silva, A.
Em Toxicologia Clínica é da maior relevância dispor de meios de diagnósticos que identifiquem e quantifiquem,
fiável e rapidamente o xenobiótico responsável pela intoxicação. A correlação dos resultados analíticos com a
história pregressa e a sintomatologia é fundamental, quer para proceder à terapêutica, quer para confirmar as
suspeitas da morte.
Situações de intoxicação por suspeita de estricnina surgem com alguma regularidade quer em animais de companhia
quer em espécies silváticas, que recorrem ao nosso laboratório para confirmação.
Deste modo, sentiu-se a necessidade de desenvolver métodos analíticos expeditos de detecção, identificação e
quantificação, que caracterizem o xenobiótico com rapidez e fiabilidade.
A metodologia para detecção e quantificação da estricnina, inicia-se com a sua extracção, em meio básico (pH 10)
das matrizes biológicas (sangue, fígado e conteúdo estomacal), tendo sido introduzido um passo de purificação para
eliminar interferentes na análise, com resultados muito positivos.
O rastreio é feito por cromatografia de camada fina (ccf), sob luz UV (254 nm). Para além da visualização com UV
a placa de ccf é pulverizada com um reagente específico tornando a molécula cromófora (cor vermelha), o que
fornece uma dupla confirmação da sua presença
A quantificação por cromatografia gasosa, é realizada usando um padrão interno (Dieldin), numa coluna capilar HP35 (30 m, 320 µm d.i) e um detector de captura electrónica, com um tempo de corrida de 17 minutos. O tempo de
retenção (tr) obtido para a estricnina é de 5.124 minutos.
Em Toxicologia Forense, é necessária uma dupla confirmação e quantificação, pelo que se desenvolveu um método
colorimétrico baseado numa reacção química sobre o extracto, em meio ácido, com a adição de nitrito de sódio. A
cor obtida no produto de reacção formado, é medida num espectrofotómetro de microplacas, e a quantificação é feita
através da absorvência a 530 nm.
[Strychnine detection and quantification in biologic matrixes]
In Clinical Toxicology is very important to have quick and reliable methods for detection and quantification of
xenobiotics that could be involved in intoxication processes. The correlation between the analytical results and the
case history and symptoms is of major importance for both therapeutics and confirmation of death's cause.
In our laboratory, we are asked, regularly, to confirm the existence of strychnine in animals, both domestic and wild,
suspicious that had been intoxicated with this xenobiotic.
Due to this fact, it was necessary the development of analytical methodology that could quickly and reliable made
the detection, identification and quantification of such xenobiotics.
The strychnine detection and quantification methodology began with the basic extraction (pH 10) from biologic
matrixes (blood, liver and gastric content), there was been introduced a purification step, with the objective of
elimination of analytical interferents, with a very good result.
The screening is done by Thin Layer Chromatography (TLC) under UV (254 nm). Beside this, the TLC plate is
sprayed with a specific reagent turn the molecule in a chromatic one (red colour), given a double confirmation of
presence.
The quantification by Gas Chromatography (GC) is done using an internal standard (Dieldin), a capillar column HP35 (30m, 320 µm i.d.) and an electronic capture detector, with a running of 17 min. The Retention Time (RT) for
strychnine, with these conditions, is 5.124 min.
In Forensic Toxicology, it is necessary to have a double confirmation and quantification, due to this fact it was
developed a colorimetric method, based in a chemical reaction of the extract, in acid medium, with sodium nitrite.
The colour of the reaction product is quantified in a microplates spectrophotometer at 530 nm of absorvence.
38
Identificação de micobactérias atípicas em bovinos, no âmbito do Plano de Erradicação da
Tuberculose Bovina
Albuquerque, T.1, Botelho, A.1, Domingos, M.1, Amaro, A. 1, Duarte, E.1,2 e Amado, A.1
1 Laboratório Nacional de Investigação Veterinária,Portugal
2 Universidade de Évora, Laboratório de Sanidade Animal, Portugal
O Laboratório Nacional de Investigação Veterinária recebeu no primeiro semestre deste ano, 190 amostras para
diagnóstico de tuberculose, no âmbito do plano de erradicação da tuberculose bovina.
Neste período verificou-se um aumento de isolamento de estirpes de micobactérias atípicas.
O diagnóstico tradicional para a classificação das várias estirpes de micobactérias é demorado e muitas vezes
inconclusivo, principalmente para a maioria das estirpes atípicas pelo que foram introduzidas técnicas de
diagnóstico molecular.
GENOTYPE e PCR-RFLP baseado no gene gyrB para identificação do complexo M. tuberculosis, INNO-LIPA
(INNOGENETICS) para as micobactérias atípicas e PCR desenvolvido no LNIV para a identificação de subespécie
do complexo avium baseado nas sequências de inserção IS1245 e IS901.
Das 190 amostras processadas foram identificadas 52 estirpes como pertencendo ao complexo M. tuberculosis (51
M. bovis ssp. bovis, 1 M. bovis ssp. caprae), 6 pertencentes ao complexo M. avium (5 M. avium ssp. hominissuis, 1
M. intracellulare), 1 M. scrofulaceum, 88 foram negativas e 43 ainda se encontram em pesquisa.
[Identification of bovine atypical mycobacteria, concerning the tuberculosis eradication program]
The “Laboratório Nacional de Investigação Veterinária” (National Veterinary Research Laboratory, Lisbon,
Portugal) received during the first semester of the current year 190 samples for the diagnosis of Bovine
Tuberculosis, as a part of the established eradication plan for this disease. During this time, the isolation of atypical
mycobacterium strains has increased. The conventional diagnosis allowing the classification of Mycobacterium
strains is time consuming and often inconclusive, especially when it comes to atypical strains. For these reasons,
diagnosis based on molecular techniques was introduced: GENOTYPE and PCR-RFLP based on gyr B gene
polymorphism for the identification of strains belonging to M. tuberculosis complex (MTC), INNO-LIPA
(INNOGENETICS) for atypical Mycobacteria, and the development of IS1245 and IS901 based PCRs for the
identification of strains from M. avium complex (MAC).
From the 190 processed samples, 52 strains belonged to the MTC (51 M. bovis spp. bovis, 1 M. bovis spp. caprae), 6
strains belonged to the MAC (5 M. avium spp. hominissuis, 1 M. intracellulare), 1 M. scrofulaceum, 88 of the
samples studied were negative for Mycobacteria, and 43 are still being processed.
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Tipificação molecular de estirpes de Mycobacterium bovis isoladas em Portugal por spoligotyping
Duarte, E.L.1,2, Domingos, M.1, Amaro, A.1, Amado, A.1 e Botelho, A.1
1 Laboratório Nacional de Investigação Veterinária (LNIV), Departamento de bacteriologia, Lisboa, Portugal
2 Universidade de Évora, Laboratório de Sanidade Animal/ICAM, Évora, Portugal
A Tuberculose bovina em Portugal continua a ser motivo de grande preocupação, quer pelas suas implicações na
Saúde Pública, quer pelo permanente esforço financeiro e humano despendido em planos de controlo e erradicação.
Para apoiar o combate a esta zoonose, é muito importante um maior conhecimento da epidemiologia das infecções
por bactérias do complexo Mycobacterium tuberculosis (MTC).
Este trabalho, desenvolvido no sector de micobactérias do LNIV, teve por objectivo a tipificação molecular por
spoligotyping de mais de 110 estirpes de M. bovis isoladas no período 2003-2005 de várias espécies animais
domésticas e silvestres. Primeiro, a identificação das estirpes isoladas foi feita com base em características culturais
e fenotípicas e confirmada por PCR-REA do gene gyr B segundo Niemann et al. As estirpes identificadas como M.
bovis bovis e M. bovis caprae foram em seguida analisadas pelo spoligotyping. Esta técnica avalia o polimorfismo
do locus DR (Direct Repeats), uma região do cromossoma presente em praticamente todas as estirpes do MTC. Os
produtos de um PCR, específico para esta região, foram hibridados numa membrana e a presença ou ausência de 43
oligonucleótidos foi registada. Os perfis de spoligotyping encontrados permitiram verificar a existência de vários
“clusters” de M. bovis bovis no nosso país. Os perfis das estirpes M. bovis caprae encontrados foram muito
diferentes dos perfis de M. bovis bovis, podendo esta técnica ser utilizada para a identificação dos isolados
pertencentes a esta subespécie. Á semelhança de vários estudos usando o spoligotyping e realizados noutros países,
os resultados permitem concluir da importante contribuição desta técnica para a compreensão da epidemiologia da
Tuberculose bovina no nosso país.
[Molecular typing of Mycobacterium bovis strains isolated in Portugal using spoligotyping]
Bovine Tuberculosis in Portugal is still a major concern for its Public Health implications as well as the financial
and human effort brought up in control and eradication plans. To support the combat of this zoonosis, a greater
knowledge concerning the epidemiology of Mycobacterium tuberculosis complex (MTC) bacteria infections is very
important.
The aim of this work, developed in LNIV’s Mycobacteria sector, was to perform the molecular typing by
spoligotyping of over 110 M. bovis strains isolated between 2003-2005, both from domestic and wildlife animals.
First, the identification of isolated strains was done using cultural and phenotypic characteristics and then further
confirmed by PCR-REA of gyr B gene as described by Niemann et al. Strains identified as M. bovis bovis and M.
bovis caprae were analysed by spoligotyping. This technique evaluates the DR (Direct Repeats) locus
polymorphism, a chromosomal region present among almost all strains belonging to the MTC. PCR products,
specific for this region, were hybridised on a membrane, and presence or absence of 43 oligonucleotides was
recorded. The spoligotyping patterns found allowed us to certify that several M. bovis bovis clusters are present in
our country. M. bovis caprae patterns were very different, compared with M. bovis bovis, which enables this
technique to be used in the identification of isolates belonging to this subspecies. As shown by several spoligotyping
studies performed in other countries, this technique has been proven useful for understanding Bovine Tuberculosis
epidemiology in Portugal.
40
ELISA e western blot: dois métodos úteis no diagnóstico de infecção por Besnoitia besnoiti
Cortes, H.1, Nuñes, S.2, Reis, Y.3, Vidal, R.4, Sager, H.2, Leitão, A.3, Gottstein, B.2
1 Laboratório de Parasitologia. Nucleo da Mitra, Universidade de Évora, Ap. 94, 7002-554, Portugal.
2 Institute of Parasitology, University of Bern, Langgass-strasse 122, Bern, Switzerland
3 Instituto de Investigação Cientifica e Tropical, CVZ, CIISA, Av da Universidade Técnica, 1300-447 Lisboa, Portugal.
4 Faculdade de Farmácia, Laboratório de Engenharia Genética, Universidade de Lisboa, Portugal
Besnoitia besnoiti é um protozoário parasita dos bovinos, endémico em áreas tropicais e subtropicais, de relevância
económica crescente em países mediterrânicos, contra o qual não existe qualquer tratamento nem vacina com níveis
de segurança e eficácia que permitam o seu uso na Europa. Posto isto, o controle da infecção por B. besnoiti
depende do controle de vectores e da identificação e abate dos animais infectados. Neste trabalho descreve-se a
detecção de anticorpos anti-B. besnoiti em amostras de soro de bovino, baseada em antigénios somáticos de
taquizoítos aplicados aos testes ELISA e western blot. Para avaliar estes métodos recorreu-se a um painel de soros
que inclui soros de animais infectados com B. besnoiti apresentando diferentes quadros clínicos, soros de animais
não infectados e soros de animais infectados com os Apicomplexa proximamente relacionados Toxoplasma gondii e
Neospora caninum. O teste ELISA permite o rastreio de grande número de animais. Todavia os resultados
observados por western blot mostram melhor correlação com o estado infectado/não-infectado dos animais e a
vantagem deste método na detecção de reacções cruzadas ocasionalmente registadas em ELISA. Este trabalho
evidencia que a utilização conjunta de ELISA e western blot, utilizando antigénios somáticos de B. besnoiti é útil na
identificação serológica de animais que tenham sido expostos à infecção por B. besnoiti, independentemente do
curso clínico da infecção.
[ELISA and western blot: two useful tools in the diagnosis of Besnoitia besnoiti infection]
Besnoitia besnoiti is a cattle protozoan parasite, endemic in many tropical and subtropical areas and of increasing
economical relevance in Mediterranean countries. There is no effective pharmaceutical treatment neither there is a
vaccine with safety and efficacy levels allowing its use in Europe. Therefore, the present control of B. besnoiti
infection only relies upon vector control and identification and culling of infected animals. In this work we describe
two assays for the detection of anti-B. besnoiti antibodies in cattle serum samples, using a somatic tachyzoite
antigen-based enzyme-linked immunoabsorbent assay (ELISA) and western blot. For the evaluation of these
methods, a serum panel including sera from animals infected with B. besnoiti showing different clinical status, sera
from non-infected animals and sera from animals infected with the related Apicomplexa Toxoplasma gondii and
Neospora caninum. The ELISA offers the possibility for large-scale screening of animals such as in epidemiology
survey studies. However, the results observed by western blot show a better correlation with the infected/noninfected animal clinical status and the advantage of this method for the detection of cross-reactions that occasionally
occur in the ELISA. This study provides evidence that ELISA and western blot, using somatic B. besnoiti antigens,
are useful tools in the serological detection of animals that have been exposed to B. besnoiti and which may
subsequently develop either asymptomatic or symptomatic course of infection.
41
Diagnóstico sorológico da Peste Suína Africana utilizando proteínas virais recombinantes
Reis, A.L.1, Parkhouse, R.M.E.1, Leitão, A.2
1 Instituto Gulbenkian de Ciência, Rua Quinta Grande Apartado 14, 2786-901 Oeiras
2 Instituto de Investigação Científica Tropical, CVZ, CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária, 1300-477 Lisboa
O vírus da peste suína africana (VPSA) é endémico na Sardenha e países sub-Saarianos, representando um sério
problema ao desenvolvimento da suinicultura. Além disso, com o aumento da infecção em África e das trocas
comerciais entre países, a possibilidade de um novo surto vir a ocorrer em Portugal não pode ser excluída.
Não existe tratamento e ainda não foi desenvolvida uma vacina eficaz. O controlo da doença é por isso baseado no
diagnóstico e subsequente adopção de medidas sanitárias rigorosas. Assim, a introdução de métodos de diagnóstico
mais rápidos e fiáveis poderá melhorar a eficiência do controlo de surtos e a erradicação da doença em países
endémicos.
Com o objectivo de identificar novos antigénios para diagnóstico, testaram-se os principais imunodeterminantes
sorológicos do VPSA recentemente descritos. Estas proteínas foram identificadas por rastreio de uma biblioteca de
cDNA do isolado BA71V, usando soro de um porco que sobreviveu à infecção com o isolado virulento Malta e soro
de um hospedeiro natural resistente à doença (o porco do mato africano) infectado com o isolado virulento Malawi
(SINT 90/1).
Os genes que codificam estes imunodeterminantes foram amplificados por PCR e clonados no plasmídeo pGEX. As
proteínas GST recombinantes foram expressas em E.coli e purificadas por cromatografia de afinidade.
Com o objectivo de validar o uso destas proteínas recombinantes para a detecção de anticorpos anti-VPSA em
ELISA, determinaram-se por titulação a diluição dos soros e concentração de antigénios apropriadas. Em seguida,
testaram-se soros de porcos experimentalmente infectados com o isolado ASFV/NH/P68, colhidos a diferentes
tempos pós infecção. A capacidade para detectar animais anteriormente expostos ao vírus foi avaliada através de
ELISA revelando com proteína A conjugada com peroxidase. Foram identificadas quatro proteínas recombinantes
com potencial para o diagnóstico da PSA (“histone-like”, p54, B602L e K205R), todas com 100% de sensibilidade
aos 21 dias pós infecção. Estes quatro antigénios foram depois testados para determinar a sua capacidade de detectar
animais recentemente infectados, em ELISA, focando a resposta IgM primária. Verificou-se que a grande maioria
dos animais pode ser identificada a partir dos 7 dias pós infecção e que o antigénio K205R é capaz de detectar todos
os animais infectados a partir do dia 11 pós infecção.
Estes resultados sugerem que um diagnóstico rápido e reprodutível pode ser conseguido utilizando proteínas virais
recombinantes. Além disso, a análise pormenorizada do padrão de resposta por anticorpos aos antigénios do VPSA
poderá permitir correlacionar essa resposta com a patogenia da doença.
[Reproductible serodiagnosis of African Swine Fever with recombinant viral proteins]
African swine fever virus (ASFV) is endemic in Sardinia and sub-Saharan countries, representing a serious problem
to the development of pig industry. Furthermore, with increasing infections in Africa and commercial trade between
countries the possibility of a new outbreak in Portugal cannot be excluded.
There is no treatment and an effective vaccine has still not been developed. Control, therefore, is based on diagnosis
and subsequent adoption of strict sanitary measures. Thus, the introduction of rapid and reliable diagnostic tools
could improve the efficiency of outbreak control and the eradication of the disease in endemic countries.
In order to identify new antigens for diagnosis, we took advantage of the recently described principal serological
immunodeterminants of ASFV. These proteins were recognized by antibody screening of a cDNA library of the
BA71V isolate, using serum from a domestic pig that had survived infection with the virulent Malta isolate and the
natural resistant host (the bushpig) that was infected with the virulent Malawi (SINT 90/1) isolate.
The genes coding these immunodeterminants were amplified by PCR and cloned into a pGEX plasmid. The GST
recombinant proteins were expressed in E.coli and purified by glutathione affinity chromatography.In order to
validate the use of these recombinant proteins for detection of anti-ASFV antibodies in ELISA, the appropriate sera
dilution and antigen concentration were determined by titration. After that, longitudinal studies were done using sera
from pigs experimentally infected with the ASFV/NH/P68 isolate, collected at different times post infection.
The ability to detect exposure to the virus was assessed focusing the ELISA assays on IgG antibodies developed
with protein A conjugate. Four ASFV recombinant proteins were identified as potential serological diagnostic
antigens (p54, histone-like A104R, B602L, K205R), all of them with 100% sensitivity 21 days post infection.
These four antigens were further tested for the ability to detect recently infected animals (outbreaks) focusing the
ELISA assays on primary IgM responses. Using these proteins, a great majority of infected animals can be identified
as early as 7 days post infection. In addition, one antigen (K205R) is able to detect all the infected animals at 11
days post infection.
These studies suggest that rapid and reproducible diagnosis of ASF can be achieved with recombinant virus
proteins. In addition, fine analysis of the pattern of antibody responses to a panel of selected ASFV antigens may
provide correlates of pathogenicity.
42
Diferenciação dos Coronavírus Felinos tipo I e II em Portugal
Duarte, A., Tavares, L.
CIISA, FMV-UTL. Av da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa
O Corona Vírus Felino (FeCoV) e o Vírus da Peritonite infecciosa Felina (FIPV), incluídos na familia
Coronaviridae, são agentes patogénicos dos Felídeos domésticos e selvagens, sendo considerados como dois
biotipos virais com diferente potencial patogénico, indistinguíveis pelos meios actuais de diagnóstico.
O FeCoV induz uma doença entérica primária, enquanto o FIPV origina uma peritonite infecciosa dos felinos, uma
doença imunomediada de evolução rápida e frequentemente fatal. O desenvolvimento de novas metodologias de
diagnóstico baseadas na amplificação de ácido nucleico viral em diferentes materiais biológicos, através duma
reacção de RT-PCR permite a detecção de animais portadores de vírus, contribuindo para a clarificação do modo de
transmissão do vírus na população felina.
Actualmente o FeCoV inclui dois tipos (I e II). O tipo I é constituído por isolados de felinos enquanto que o tipo II
incluí virus resultantes de um processo de recombinação entre os Coronavírus felino e canino. Embora estes dois
tipos de FeCoV sejam capazes de induzir peritonite infecciosa, animais infectados com o tipo II são mais
susceptíveis de desenvolver PIF. Pelo contrário, a infecção pelo tipo I origina usualmente uma infecção persistente.
De forma a conhecer a prevalência em Portugal da infecção pelos dois tipos de FeCoV e o seu impacto patogénico,
foi efectuado um rastreio virológico a animais suspeitos, através amplificação por RT-PCR de uma região
conservada do genoma viral, correspondente ao extremo 3’. Todos os animais positivos nesta prova foram testados
por um segundo protocolo de RT-PCR para amplificação duma região do gene S, codificante das espiculas virais,
que permite a diferenciação entre os dois tipos de FeCoV, pelo tamanho dos fragmentos gerados..
Inicialmente foram testados 117 animais, dos quais 32% (37/117) foram positivos para a presença de ácido nucleico
viral nos vários material biológicos. Em 10 dos 37 animais positivos detectou-se a presença de FeCoV tipo I.
A ausência de amplificação nas restantes 27 amostra poderá ser devida à variabilidade genética desta região
particularmente na região de ligação dos primers utilizados.
O estudo da prevalência destes vírus na população felina e a sua diferenciação genética contribui para o
conhecimento dos mecanismos de transmissão e persistência viral e permite igualmente aferir as potencialidades
patogénicas de vírus ubiquitários na população felina.
[Differentiation Feline Coronavirus type I and II in Portugal]
Feline Coronavirus (FeCoV) and Feline Infectious Peritonitis Virus (FIPV) included in Coronaviridae family are
feline pathogens, considered as two biotypes with different pathogenic potential and not differentiated by diagnostic
methodology.
FeCoV induces a primary enteric disease while FIPV is the aetiological agent of Feline Infectious Peritonite an
immunomediated disease, frequently fatal. The development of new diagnostic methodologies, based on viral
nucleic acids amplification in several biological materials through RT-PCR allows the detection of virus in carriers
animals, contributing for the understanding of the viral transmission pattern in the feline population.
FeCoV is divided in two types (I and II). Type I in wholly feline and type II arises from a recombination process
with Canine Coronavirus. Although the two types are capable of inducing Feline Infectious Peritonitis, animals
infected with type II are more prone to develop the disease. Type I tends to establish a persistent infection.
To understand the prevalence of infection of the two FeCoV types in Portugal and its pathogenic significance, a
virological survey was conducted to identify positive animals by RT-PCR. A conserved genomic region was chosen
corresponding to the 3’ end of the viral genome. All the positive animals were subjected to a second RT-PCR assay
to amplify a fragment of the S gene, coding for the viral envelope spikes. This region allows the differentiation
between FeCoV type I and II through the amplification of fragments with diffent sizes.
Initially 117 animals were tested, from which 32% were FeCoV positive (37 out of 117). FeCoV Type I was
confirmed to be present in 10 samples. The remaining 27 samples were negative in the second RT-PCR. The
absence of viral nucleic acid amplification may be explain by the high genetic variability of this genomic region
particularly in the primers annealing site.
The study of FeCoV prevalence in the cat population and their genetic differentiation will contribute for the
understanding of viral transmission and persistence pattern. This information will also allow the assessment of the
pathogenic potential of this virus.
43
Diagnóstico diferencial do Vírus da Mixomatose e do Vírus do Fibroma de Shope
Duarte, M.M., Fagulha, M.T., Ramos, F., Barros, S., Cruz, M.B., Fevereiro, M.
Laboratório Nacional de Investigação Veterinária, Estrada de Benfica, 701, 11459-011 Lisboa
Embora a incidência de Mixomatose nas populações de coelhos de Portugal continental seja pouco conhecida, nos
últimos anos foi registado um aumento do número de casos na Ilha da Madeira.
O vírus da Mixomatose (MYXV) e o vírus do fibroma de Shope (SFV) possuem grandes genomas de DNA de
cadeia dupla que replicam no citoplasma das células infectadas. Pertencem ao Género Leporipoxvirus e são
aparentemente transmitidos de animal a animal por picada de artrópodes.
O MYXV infecta coelhos europeus domésticos e selvagens (Oryctolagus cuniculus) mas raramente provoca doença
na lebre europeia (Lepus europaeus).
A infecção do coelho Europeu pelo MYXV resulta geralmente numa infecção sistémica de desfecho fatal.
Embora a infecção de coelhos adultos pelo SFV evolua em geral com a regressão natural dos tumores induzidos pelo
vírus, em coelhos recém nascidos ou imunossupremidos o curso da infecção pode também ser fatal. A infecção
pelos 2 vírus é difícil de distinguir em algumas espécies de coelhos «cottontail», como é o caso da espécie
Sylvilagus floridanus.
O diagnostico clínico e anatomopatológico da mixomatose é frequentemente difícil nos estadios iniciais da infecção
sendo por isso urgente dispor de um método eficaz no diagnostico precoce da doença.
A análise das sequências nucleotídicas revelou a existência de uma estreita relação genética entre o SVF e o MXYV.
A comparação dos genomas completos destes vírus permitiu ainda identificar alguns genes exclusivamente
presentes no mixomavirus.
Com base nas sequências nucleotídicas de genes conservados nestes dois virus e únicos no MXYV, concebemos e
testámos um sistema de PCR diferencial eficaz para a detecção do genoma viral de MYXV e FSV tanto em vacinas
comerciais como em amostras de campo. Para além de permitir a diferenciação entre estes dois Leporipoxvirus, este
método apresenta maior sensibilidade do que o diagnóstico por observação de partículas virais ao Microscópio
Electrónico.
O método que aqui descrevemos é actualmente utilizado no LNIV no diagnóstico da Mixomatose e do Fibroma de
Shope.
[Differential diagnosis between Myxoma Virus and Shope Fibroma Virus]
Although the incidence of Myxomatosis in the rabbits populations of continental Portugal is poorly known, an
increased number of cases have been registered in the Madeira Island in the last years.
Myxoma virus (MYXV) and Shope fibroma virus (SFV) are large dsDNA genome viruses that multiply in the
cytoplasm of the infected cell. They are members of the Leporipoxvirus genus and appear to be transmitted to
rabbits by biting of arthropod vectors.
Myxoma virus infects both European domestic and wild rabbits (Oryctolagus cuniculus) but rarely causes disease in
European hares (Lepus europaeus) that seem to have some resistance. A rapid systemic and lethal infection is
usually developed by European rabbits after infection with MYXV.
Although SFV infection in adults usually result in natural regression of the tumours induced by the virus, in newborn rabbits as well in immunocompromised adults the course of the disease can also be lethal. Furthermore the two
kinds of infection were reported to be confused in some cottontail rabbit specie like Sylvilagus floridanus.
Clinical and anatomopathological diagnosis of myxomatosis in often difficult in the initial stages of infection
requiring the use of an earlier diagnosis alternative method.
DNA sequence analysis showed before that SVF and MXYV are closely related. The comparison of its complete
genomes led however to the discovery of genes that are only present in the myxomavirus.
Based on the nucleotide sequences of conserved an unique genes of MXYV and SFV, we designed and tested a
differential PCR system that proved to be effective on the genome detection of MXYV and SFV either on
commercial vaccines for both viruses as on field samples. Besides allowing the differentiation between these two
Poxvirus, this method is also more sensitive then the observation of viral particles from suspected tissues by
Electronic Microscopy.
The method we describe here is currently used in our laboratory for diagnosis of MXYV and SFV.
44
Qualidade e Segurança Alimentar
Avaliação do estado higio-sanitário de unidades de produção de enchidos tradicionais Alentejanos
Fraqueza, M.J.1, Elias, M.2, Ferreira, M.C.1, Barreto, A.S.1
1 CIISA. Faculdade de Med.Veterinária. Av. da Universidade Técnica. Polo Univiversitário do Alto da Ajuda. 1300-477 Lisboa. Portugal.
e-mail:[email protected]
2 Universidade de Évora, Área Departamental de Ciências Agrárias, Apartado 94, 7002-554 Évora.
A salsicharia tradicional do nosso país caracteriza-se por uma grande diversidade de produtos, com elevada procura
pelos consumidores, devido às suas características organolépticas. No entanto, cada vez mais, estes exigem outros
atributos de qualidade, nomeadamente de ordem higiosanitária. Os enchidos tradicionais caracterizam-se pela
presença de uma flora fermentativa, existente no ambiente fabril e que passa à carne durante as operações de abate e
de transformação e fabrico dos produtos. Em cada instalação fabril encontra-se uma flora ambiental específica,
composta por microrganismos úteis para a fermentação e desenvolvimento das características organolépticas dos
enchidos, mas também por microrganismos de deterioração e potencialmente patogénicos.
O objectivo deste trabalho consistiu em avaliar o estado higiosanitário de 6 salsicharias tradicionais no Alentejo.
Para a realização de análises microbiológicas, em cada unidade fabril, foram recolhidas amostras (500 cm2) de
superfícies do ambiente fabril (picadora, misturadora, enchedora, instrumentos de corte, mesas de corte, paredes da
câmara de maturação), antes do início do processo de fabrico, além de amostras de chouriço ao longo do processo de
fabrico. As superfícies mais contaminadas foram, geralmente, as facas e as mesas, com elevadas contagens de
Pseudomonas spp. e Enterobactereaceae, seguidas das picadoras e das enchedoras. Os bolores e leveduras
encontravam-se disseminados por todo o ambiente fabril. A flora tecnológica Staphylococcus/Kocuria, foi
recuperada do ambiente fabril, prevalecendo em maior quantidade que as bactérias do ácido láctico, em todas as
amostras, quando não se detectaram Pseudomonas spp. e Enterobactereaceae.
Não se detectou Salmonella spp. na maioria das amostras ambientais; o S. aureus encontrou-se sempre abaixo do
limite de detecção do método analítico. A Listeria monocytogenes foi detectada por PCR, principalmente nas facas e
mesas. As bactérias do ácido láctico aumentaram ao longo do período de fabrico do chouriço, enquanto que os
Staphylococcus/Kocuria diminuíram, após a fase de maturação. Os teores de Enterococcus, Enterobactereacea,
Pseudomonas spp. e fungos, não mostraram geralmente alterações. Encontrou-se Listeria monocytogenes no
chouriço de duas das unidades estudadas, com contagens de 1,5 e 1,8 log ufc/g, no produto final.
Pode concluir-se que a qualidade inicial da carne e a higienização dos instrumentos de trabalho utilizados sobretudo
nas operações de corte, são fundamentais para a garantia da qualidade higiénica do produto final.
Este trabalho foi financiado pelo projecto europeu TRADISAUSAGE (QLK1-CT2002-02240).
[Hygienic status evaluation of traditional dry sausage workshops in Alentejo]
The production of traditional sausages in our country is characterized by its diversity, having our products
organoleptic characteristics very tempting for consumers. However these are, presently, paying attention to some
attributes related to the safety of traditional products. The process of traditional dry sausages is characterized by its
relationship to fermentative flora naturally present on workshop environment. The introduction of this flora in the
meat is done during slaughtering and increases during sausage manufacture. Each workshop has a specific
environmental flora, composed of useful microorganisms for the fermentation and organoleptic characteristics
development on traditional sausages, but also spoilage and pathogenic flora. The aim of this work was to evaluate
the hygienic status of six traditional dry sausages workshops from Alentejo. Environmental samples (500cm2) from
workshop environment (mincing, mixing and stuffing machines, knives, cutting table and walls of cold storage
room) were performed before manufacture initiation for microbiological analysis. In addition one traditional sausage
(chouriço) was analysed during manufacture on each workshop. The surfaces more contaminated were knives and
tables, with higher Pseudomonas and Enterobactereaceae counts. After those, the mincing and stuffing machines
are also points of contamination. The Moulds and Yeasts were spread all over the workshops environment samples.
The technological flora Staphylococcus/Kocuria were more prevalent than the lactic acid bacteria (LAB) in all
environmental samples, even when there were no detection of spoilage flora as Pseudomonas and
Enterobactereaceae. Salmonella was absent in the main environmental samples. S. aureus was below the method
detection limit in all samples. Listeria monocytogenes was detected by PCR, mainly on knifes and cutting tables.
The LAB counts increases during technological process of traditional chouriço while Staphylococcus/Kocuria
counts reduce after maturation. The Enterococcus, Enterobactereaceae, Pseudomonas spp. and Yeasts/Moulds
counts maintained, in general, the same level than that initially reported in samples. Listeria monocytogenes was
detected in the sausages sampled in two workshops; the level of contamination was 1.5 and 1.8 log ufc/g on final
product. The initial hygienic quality of meat and the good hygienization of tools and equipment used mainly in meat
cutting are essential to assure the hygienic quality and safety of final product.
This work was financially supported by EU project TRADISAUSAGE (QLK1-CT2002-02240).
45
Avaliação do sistema de autocontrolo existente numa amostra de 30 restaurantes do Porto no
EURO 2004 e sua dinâmica no tempo
Santos, M.C.T.1, Niza-Ribeiro, J.2
1 Faculdade de Ciências da Nutrição e Alimentação - UP
2 Instituto de Ciências Biomédicas Abel Salazar - UP.
A realização de quaisquer eventos de natureza lúdico-desportiva de grande dimensão, como o Euro 2004, traduzemse, na maioria das vezes, em alterações ou desvios da ordem e da organização a vários níveis, entre os quais a
Segurança Alimentar. Por se esperar que este acontecimento atraísse um número avultado de pessoas, a capacidade
de uma oferta alimentar segura encontrar-se-ia facilmente condicionada. A legislação em vigor, responsabiliza as
empresas da higiene dos seus estabelecimentos de restauração. Neste sentido as empresas devem instaurar
mecanismos de autocontrolo que assegurem um nível aceitável de gestão dos riscos de natureza alimentar nos seus
processos. Estes sistemas são imprescindíveis para garantir a higiene dos géneros alimentícios. Com o objectivo de
avaliar a aplicação dos pré-requisitos dos sistemas de autocontrolo e das boas práticas de higiene nos restaurantes e a
eficácia da implementação do autocontrolo, realizou-se um estudo observacional, descritivo e prospectivo, no
âmbito do evento desportivo Euro 2004, realizado na cidade do Porto entre Maio e Julho de 2004, a 30 restaurantes.
A recolha de dados foi obtida em dois tempos, através da utilização de um questionário de inspecção higio-sanitária
associado a uma grelha de avaliação quantitativa de desempenho, cujo preenchimento foi efectuado pelo mesmo
inquiridor. O inquérito foi expressamente construído para o efeito e validado neste trabalho. Apreciaram-se em cada
restaurante 15 parâmetros para avaliação do sistema autocontrolo, através de duas visitas consecutivas no tempo, a
primeira realizada antes do Euro 2004 e a segunda levada a cabo durante o referido evento. Como primeiro
resultado verificou-se que o inquérito permitiu avaliar a conformidade dos sistemas de autocontrolo existentes com
os requisitos legais. Apenas em dois dos parâmetros, “existência de programa de PSSM” e “programa FPCM” 16
(53,3%) estabelecimentos tiveram nota Bom. Nos restantes 13 parâmetros houve sempre avaliação negativa (Mau)
em mais de 50 % dos estabelecimentos. Apenas 24,4% dos restaurantes evidenciaram ter um sistema de
autocontrolo implementado em ambas as visitas, o que está de acordo com trabalhos realizados por outros autores.
Regista-se um forte grau de incumprimento ao nível dos pré–requisitos exigidos, sinónimo de uma implementação
incorrecta e pouco eficaz do sistema de autocontrolo. O trabalho permitiu evidenciar assim o incumprimento da
legislação, relativamente à obrigatoriedade de os estabelecimentos possuírem um sistema de autocontrolo. Os
autores colocam como hipótese, a ser esclarecida em estudos posteriores, que a restauração a nível nacional tenha
níveis de desempenho semelhantes aos da amostra estudada.
[Assessment of the hugienic ans sanitary self-control in 30 Porto restaurants during the EURO 2004
and their dynamics along the time]
The staging of major entertaining or sports events, like the Euro 2004, is often accompanied by changes or
deviations in established practices in different branches of activities, among which those concerning food safety. It
was expected that the capacity for safe food supply would be conditioned/challenged by the large amount of people
attracted by the event. The legislation in place makes restaurants responsible for the hygiene of their facilities.
Therefore, businesses must establish self-control mechanisms that assure an acceptable level of risk management of
their foodstuffs in their procedures. These systems are indispensable to assure the hygiene of foodstuffs.
In the context of the Euro 2004, an observational, descriptive and prospective study was made on 30 restaurants in
Porto between the months of May and July 2004 with the purpose of assessing the application of the self-control
systems pre-requisites and of the good practices in hygiene in restaurants, as well as the efficiency in implementing
self-control. Data were collected in two times, through a hygienic and sanitary inspection questionnaire coupled to a
quantified performance evaluation form, which was completed by the same enquirer. The questionnaire was
specifically conceived for that purpose and validated in this work. Fifteen parameters were considered for the
assessment of the self-control system in each restaurant and two consecutive inspection visits were made: the first
one before the Euro 2004 and the second one during the event. As a first result, the enquiry made it possible to
ascertain the non-compliance of the self-control systems with the legal requisites. On two parameters only – "
Prevention of health and safety of the handling personnel" and "Continuing training of the handling personnel" – 16
establishments (53,3%) were graded "Good". On the remaining 13 parameters more than 50% of the establishments
obtained a negative ("Bad") mark. Only 24,4% of the inspected restaurants clearly showed to have in place a selfcontrol system on both visits, which confirms the works by other authors. A high degree of pre-requisites noncompliance is apparent, which means that the efficiency of the self-control system is low and that it is incorrectly
implemented. The work made clear the non-compliance of the legislation prescribing a mandatory self-control
system for catering establishments. The authors consider the hypothesis, to be checked in further studies, of catering
establishments at national level having similar performances to the ones studied in the sample.
46
Caracterização preliminar do risco de resistência antimicrobiana: estudo de caso na avicultura
Fernandes, A.1,2, Dias, C.2, Bernardo, F.1, Machado, J.3
1 FMV - UTL, DPASA, Polo Universitário Alto da Ajuda, Avenida da Universidade Técnica 1300-477 Lisboa
2 ENSP - UNL, Avenida Padre Cruz 1600-560 Lisboa
3 INSA - Unidade de Enterobactérias, Av.ª Padre Cruz 1649-016 Lisboa
A utilização de antibióticos em produção animal e medicina veterinária exerce pressão de selecção para resistência nos
microorganismos susceptíveis, não só patogéneos, mas também bactérias pertencentes à microflora intestinal comensal
dos animais, como E.coli e Enterococcus spp.
Objectivos: Caracterizar o risco de desenvolvimento de antibio-resistência, na flora comensal cecal, de frangos abatidos e
aprovados para consumo, nos matadouros da DRARO e DRABL, Portugal, devido à utilização de antibióticos específicos
em aves. Nomeadamente, determinar a frequência de fenótipos de resistência aos antibióticos utilizados em produção
avícola e com importância em Saúde Pública, e; determinar a associação entre a frequência de resistência aos antibióticos
Enrofloxacina e Vancomicina e a administração de antibióticos aos animais objecto de estudo, as características da
produção avícola e o perfil sanitário do lote.
Métodos: Estudo quantitativo, não-experimental, exploratório, observacional, descritivo, transversal, restrospectivo. A
recolha de dados compreendeu duas fases: fase laboratorial (recolha de amostras, isolamento dos agentes bacterianos e
teste de susceptibilidade antimicrobiana-técnica de difusão por disco em agar-NCCLS), para estimar a prevalência da
resistência antimicrobiana em E.coli e Enterococcus spp., e; fase recolha de informação de campo (fichas de dados
Amostra/Tratamento) que resultou em variáveis que foram analisadas para identificar e quantificar a associação dos
factores ao estatuto de resistência em E.coli e Enterococcus spp. Só os factores associados (valor Pearson do teste χ2,
p<0,1) com o estatuto resistência dos isolados foram oferecidos ao modelo para a análise multivariada-regressão logística.
Conclusões: Existe uma elevada percentagem de administração de antibióticos em avicultura (90%), principalmente,
Fluoroquinolonas (55%) e β-lactâmicos (37,5%), para fins predominantemente profiláticos (primeira administração) e uma
elevada percentagem com dosagens em não-conformidade (35%). Para Enrofloxacina (42,5%), existiu indicação de subdosagem e desrespeito pelo intervalo de segurança. Foi mais frequente a administração ‘Fluoroquinolonas 0-14 dias antes
abate’ na produção avícola extensiva (12,5%) versus intensiva (5%). E.coli – a resistência/multi-resistência é muito
frequente (99,1%; 95,8%), globalmente, superior em Portugal quando comparado com o restante cenário europeu, bastante
superior para Fluoroquinolonas (41,7%), Cefalosporinas [Cxm (48,4%); Ctx (7,2%)] e Aminoglicosídeos [Sm (94,4%);
Km (40,6%); Cn (29,4%)]. Enterococcus spp.- é preocupante a resistência à Ampicilina (18,8%), Amoxicilina-Ácido
Clavulânico (4,75%) e Vancomicina (20,25%). No modelo de regressão logística final para isolados E.coli, as variáveis
‘Tipo_Extensivo’ (OR=1,616), ‘Uniformidade_do_bando’ (‘Aceitável’, OR=1,679; ‘Má’, OR=3,856) e administração de
‘Fluoroquinolonas 0-14 dias antes abate’ (OR=7,078) constituíram factores de risco para presença de
E.coli_enrofloxacina-resistente. O modelo final derivado para isolados Enterococcus spp. não apresentou a suficiente
robustez.
[Preliminary antibioresistance’s risk characterization: case study on poultry production]
Veterinary medicine and animal production’s antibiotic use both exert a high resistance selection pressure on susceptible bacteria,
not only pathogenic bacteria but also bacteria of the normal faecal flora, like E.coli and Enterococcus spp.
Objectives: To characterize the antibioresistance risk development on normal cecal flora of slaughtered broilers approved for
human consumption in DRARO and DRABL slaughterhouses, Portugal, mainly due to poultry specific antibiotic’s use. Namely,
to determine the frequency of resistance phenotypes to antibiotics used on poultry production and of great importance to Public
Health, and; to determine the association between the prevalence of Enrofloxacin and Vancomycin resistance phenotypes and
antibiotic administration to the animals in study, the characteristics of poultry production management and the batch’s sanitary
status.
Methods: Quantitative, non-experimental, exploratory, observational, descriptive, cross-sectional and retrospective study. Data
collection comprised two phases: laboratory phase (sample collection, bacteria isolation and agar disc diffusion antimicrobial
susceptibility test-NCCLS validated) to estimate the prevalence of E.coli and Enterococcus spp. resistant isolates, and; field data
collection (Sample/Treatment datasheets) that resulted in variables which were analysed to identify and quantify factor’s
association with the resistance status on E.coli and Enterococcus spp. Only factors associated with resistance (Pearson value, χ2
test, p<0,10) were offered to the model for regression multivariate analysis (SPSS V.12).
Conclusions: There is a high percentage of antibiotic administration on poultry production (90%), mainly due to
Fluoroquinolones (55%) and β-lactam (37,5%) antibiotic classes, especially for prophylactic purposes (first administration) and a
high frequency of antibiotic administration on off-label dosages (35%). For Enrofloxacin (42,5%), there was indication of subdosage and non-compliance with withdrawal period. It was noted a higher frequency of Fluoroquinolone administration within 014 days before slaughter on extensive (12,5%) versus intensive (5%) poultry production. E.coli – it is very frequent the presence
of resistance/multiple resistance (99,1%; 95,8%), globally higher in Portugal when compared with other European countries and
much higher for Fluoroquinolones (41,7%), Cephalosporins [Cxm (48,4%); Ctx (7,2%)] and Aminoglycosides [Sm (94,4%); Km
(40,6%); Cn (29,4%)] antibiotic classes. Enterococcus spp. – it is worrying the resistance level to Ampicillin (18,8%),
Amoxicillin-Clavulanic acid (4,75%) and Vancomycin (20,25%). In the final logistic regression model for E.coli isolates, the
variables ‘Extensive production’ (OR=1,616), ‘Flock uniformity’ (‘Acceptable’, OR=1,679; ‘Bad’, OR=3,856) and
‘Fluoroquinolone administration 0-14 days before slaughter’ (OR=7,078) were risk factors for E.coli enrofloxacin-resistance. The
final logistic regression model for Enterococcus spp. isolates didn’t have sufficient robustness.
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Clembuterol – um risco para a saúde pública que persiste há uma década
Carvalho, S.V., Ferreira, M.L., Barbosa, J.
Laboratório Nacional de Investigação Veterinária, Estrada de Benfica, n.º 701, 1549-011 Lisboa
A preocupação acrescida por parte dos consumidores em relação à segurança dos alimentos e o conjunto de
episódios que tem vindo a ser divulgado nos últimos tempos envolvendo compostos tais como os nitrofuranos, o
cloranfenicol e as dioxinas entre outros, vêm colocar esta questão na primeira linha das actuais preocupações das
autoridades e dos cidadãos.
O clembuterol é um agonista β-adrenérgico, que é utilizado em medicina veterinária como broncodilatador em
equinos, pela acção que demonstra como estimulador dos receptores celulares β2 provocando um relaxamento da
musculatura lisa. Contudo, quando administrado em doses 5 a 10 vezes superiores à terapêutica, estimula igualmente
os receptores β1 - efeitos cardíacos e β3 – lipólise. Este último efeito confere ao clembuterol a propriedade de
promotor de crescimento.
Aproveitando esta acção farmacológica, e uma vez que a carcaça é valorizada no matadouro, alguns produtores
administram este composto aos animais, de forma fraudulenta, por via da água de bebida ou das rações.
A ingestão de produtos cárnicos provenientes de animais administrados com clembuterol é considerada como uma
situação de risco para o consumidor, visto que provoca hiperestimulação adrenérgica e consequentemente alterações
a nível cardiovascular. Estão descritos, no nosso país, diversos casos de intoxicação aguda por clembuterol por via
alimentar, envolvendo um total de 50 pessoas. A fraca sensibilização da classe médica face a este tipo de compostos,
leva-nos a crer que este número fica muito aquém dos casos realmente existentes.
Como é proibida a utilização deste fármaco para fins não terapêuticos, a sua pesquisa é efectuada, desde 1990, ao
abrigo do Plano Nacional de Controlo de Resíduos. Os resultados referentes aos anos de 1995 a 2004, abrangem um
total de cerca de 20900 amostras analisadas, das quais 723 revelaram positividade a clembuterol. A percentagem
destas amostras não conformes, tem um comportamento quase constante ao longo dos anos, na ordem dos 3,5%.
Se extrapolarmos este valor para o efectivo pecuário português, que segundo o Instituto Nacional de Estatística é de
sete milhões e meio (suínos, bovinos, ovinos, caprinos e equinos), então poder-se-á especular um elevado número de
animais contaminados.
O esforço legislativo da Comunidade neste domínio tem sido considerável. A nível nacional, e no que concerne a
este composto, é evidente a falta de eficácia das medidas implementadas, se tivermos em consideração a constante
positividade registada nestes últimos dez anos. Julgamos necessária a tomada urgente de iniciativas com vista a
inverter esta situação.
[Clenbuterol - a risk for public health that persists for a decade]
The growing interest and concern with food safety emphasized by cases that went public, such as the nitrofuran
crises, cloranphenicol positive cases and the dioxins, raised this issue not just to the competent authorities but to the
general public, as well.
Clenbuterol is an agonist β-adrenergic used in veterinary medicine as a broncodilator agent in equines because it
stimulates cell receptors β2 - relaxation of smooth muscle. However, when administered 5 to 10 times more the
therapeutical doses, it stimulates equally the receptors β1 - cardiac effects and β3 – lipid lyses. This last effect gives
to clembuterol the ability to be a growth promoter.
This pharmacological action increases the value of the carcass in slaughterhouse, so some producers abuse of this
compound adding it fraudulently to animals water and feed.
The ingestion of products from animals contaminated with clenbuterol is a risk to consumers because it causes
adrenergic hiperstimulation and cardiac/vascular alterations. Some cases of poisoning by clembuterol are described
in our country, involving a total of 50 people. The medical class is not sensitized to the possible secondary reactions
resulting from this compound, so it is possible that the majority of the cases are not reported or not even diagnosed.
The use of clenbuterol for non-therapeutical purpose it’s forbidden, so this compound is monitored under the
National Residue Plan since 1990. Results from years 1995 to 2004, enclose a total of 20900 analysed samples, in
which 723 had positive result to clenbuterol. The percentage of these samples has been almost constant across the
years (3,5%).
If we extrapolate the value to the actual number of cattle in Portugal, which according to National Statistics
Institute, is seven million and half (swine, bovine, ovine, goat and equine), then we can speculate a high number of
contaminated animals.
The legislative effort of the European Community in this domain has been considerable, however, the lack of
national effective answers is evident facing the positive cases to clenbuterol. Urgent measures are required to
guarantee the ending of this situation.
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Avaliação do risco para um grupo de consumidores representado pela presença de mercúrio em
pescado
Pires, S.M., Nunes, T.P.
CIISA, FMV-UTL. Av. da Universidade Técnica, Polo Univ. Alto da Ajuda, 1300-477 Lisboa. Portugal. [email protected]
Portugal apresenta o índice de consumo de peixe per capita mais elevado da Europa. Apesar de componente
importante de uma alimentação saudável, os produtos da pesca são a principal fonte de exposicäo de mercúrio para o
homem. Os efeitos adversos do mercúrio para o consumidor incluem sintomatologia nervosa severa e, em casos
extremos, morte. A forma mais tóxica do metal pesado, o metilmercúrio, é particularmente tóxica para o tecido
nervoso em desenvolvimento, pelo que as crianças e grávidas constituem um grupo de risco. Diversos surtos de
doença têm sido reportados em diferentes países - Japão, Iraque, Seychelles e Ilhas Faroe. O presente estudo teve
como objectivo a determinação do risco de efeitos adversos do mercúrio para o consumidor representado pelo
consumo de produtos da pesca. A avaliação do risco incluíu o desenvolvimento de um modelo determinístico e de
um estocástico. No modelo estocástico foi utilizada uma simulação de Monte Carlo, tendo como ferramenta o
software @risk®. Os dois modelos foram baseados no consumo de peixe da população estudada (funcionários e
familiares de uma Faculdade Portuguesa) e nas concentrações do tóxico nas diversas espécies de pescado. A
ingestão total semanal de mercúrio por Kg de peso vivo foi calculada e comparada com o limite inócuo tolerável,
definido pela FAO/ OMS: PTWI (Provisional Tolerable Weekly Intake), 5 µg por Kg de peso corporal. No modelo
determinístico foram utilizados os valores médios das variáveis. No modelo estocástico foram utilizadas
distribuições de probabilidade diferentes para cada parâmetro da simulação. Foram realizadas 50000 iterações na
simulação de Monte Carlo. Os dois modelos estimaram um risco significativo para a população estudada. O risco
estimado para as crianças, que constituem um grupo de risco, é mais elevado. Segundo o modelo determinístico,
estima-se uma exposição semanal média de 1,25 µg por Kg de peso corporal para a população em geral e 4,39 µg
por Kg para a população infantil. Os dois resultados, e especialmente o referente à população infantil, são
significativamente elevados e próximos do limite inócuo. O modelo estocástico estimou uma exposição média de
2,89 µg por Kg para a população em geral, estimando-se que 18,68% da população estudada tenha uma ingestão
superior a 5 µg/Kg/semana. No que diz respeito à população infantil, foi estimada uma ingestão semanal média de
6,89 µg por Kg, estando 53,79% da população exposta a valores superiores ao PTWI. A utilização do modelo
estocástico permitiu ter em conta as incertezas e variabilidade da população, obtendo-se resultados que se espera
serem mais representativos da realidade. Neste modelo estima-se um risco mais elevado tanto para adultos como
para criancas. Conclui-se que o risco representado pelo mercúrio através do consumo de produtos da pesca é
relevante para a população estudada, especialmente para a população infantil. Por outro lado, conclui-se que o
modelo estocástico de avaliação de risco apresenta resultados mais aproximados da realidade e permite levar em
conta a incerteza inerente a este estudo.
[Mercury in fish: assessment of the risk for a group of Portuguese consumers]
Portugal has the highest consumptions of fish per capita. Fish is an import part of a healthy diet. Nevertheless, significant
concentrations of mercury are found in fish. Fish is considered to be the most important source of exposure of mercury to
humans. The adverse effects of mercury on human health include severe nervous damage. The most toxic form of
mercury, methlymercury, is particularly toxic to developing tissues. Thus, children and pregnant women constitute a risk
group to mercury exposure. Several outbreaks of disease related to mercury were reported worldwide: Japan, Seychelles,
Faroe Islands and Iraq. The purpose of this study was to estimate the risk of exposure to mercury through fish in a group
of Portuguese consumers. A quantitative risk assessment, which included a deterministic and a stochastic model, was
developed. In the stochastic model, Monte Carlo Simulation was used. Both models were based on the consumptions of
fish of the studied population – workers and relatives of a Portuguese Faculty - and their mercury concentrations. The
weekly total ingestion of mercury per body weight was estimated and compared with the tolerable limit defined by
FAO/WHO, the PTWI (Provisional Tolerable Daily Intake), which is 5 µg per Kg of body weigh. The deterministic model
used the mean values of the inputs. The stochastic model used probability distributions for each input of the simulation.
50,000 iterations were performed in the Monte Carlo simulation. Both models estimated a relevant risk for the studied
population. The risk estimated for children, who constitute a risk group, is higher. The deterministic model estimated an
average weekly exposure to mercury of 1,25 µg per Kg of body weigh for the general populations and 4,39 µg per Kg for
children. Both results, and specially the children’s average weekly intake, are considered to be extremely high and close to
the PTWI. The stochastic model estimated an exposure of 2,89 µg per Kg of body weigh for he general population, and is
estimated that 18,68% of the studied population is exposed to a concentration of mercury higher than 5 µg/Kg. Regarding
the children’s population, it was estimated that the average weekly intake is 6,89 µg per Kg of body weigh, and that
53,79% of the population is exposed to values above the PTWI. The stochastic model allowed to take into account the
uncertainty and variability of the population and is expected to achieve results more approximated to reality. In this model
a higher risk for both children and the general population is estimated. The presented study concluded that the risk
represented by mercury consumed through fish is relevant for the studied population, especially to children. By other
hand, it was concluded that the stochastic model achieves more complete results and allows taking into account the
uncertainty of the study.
49
Evolução da despesa em carne dos agregados familiares portugueses: um padrão diferente?
Banovic, M.1, Barreira, M.M.2 e Aguiar Fontes, M.2
1 CIISA- FMV-UTL, Av. da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa
2 ISA- DEASR –UTL, Tapada da Ajuda, 1349-017 Lisboa
A procura de bens alimentares por parte dos agregados familiares está relacionada com o nível de rendimento, preço
dos bens, preferências e variáveis demográficas como a dimensão do agregado, estrutura etária, entre outras. Um
aumento no rendimento disponível das famílias está associado a um aumento menos que proporcional na procura de
bens alimentares. Com este trabalho pretendem-se identificar as alterações/ tendências ocorridas em termos de
despesa dos agregados familiares portugueses em carne, nos anos de 1990, 1995 e 2000. As questões essenciais que
se procuram responder são: (i) Que alterações ocorreram em termos de despesa por grupos de produtos? (ii) Que
alterações ocorreram em termos de despesa em carne? (iii) qual tem sido, em particular, a alteração verificada na
despesa em carne de bovino? Para responder a estas questões, utilizou-se o Inquérito aos Orçamentos Familiares do
INE, com uma amostra de cerca de 12.000 agregados familiares. Os valores foram ajustados utilizando o Índice de
Preços no Consumidor, base 2000, de forma a identificar alterações em termos reais. Desta forma, examinam-se as
alterações ocorridas por grupos de produtos, com base em diferentes variáveis. Os resultados sugerem que o
rendimento, o nível de instrução e a idade do representante do agregado, influenciam os padrões de compra dos
agregados familiares portugueses. A despesa em carne destes agregados decresceu, em termos reais, na década
1990-2000. No grupo das carnes, com a excepção da carne de bovino, todas as carnes aumentaram a sua proporção
na despesa total em carne. O decréscimo do peso da despesa em carne de bovino na despesa total em carne foi
particularmente evidente entre 1995 e 2000. A proporção da despesa em carne de bovino, na despesa total em carne,
difere de acordo com a região, nível de rendimento, e idade e nível de instrução do representante do agregado
familiar.
[Portuguese households meat expenditure: a different pattern?]
Household demand for food is related to the level of income, food prices, preferences and demographic variables,
such as family size and age structure. The proportion of income spent on food products declines as income rises.
The aim of this work is to highlight major trends of Portuguese household meat expenditure in 1990, 1995 and 2000.
The main research questions to be answered are: (i) What has happened in terms of expenditure per food groups? (ii)
What has happened in terms of meat expenditure? and (iii) What has happened in terms of expenditure in beef and
veal? In order to answer these questions the Household Budget Survey (INE) with a sample of approximately 12,000
households, was used. Values were adjusted using the Consumer Price Index, base 2000, in order to identify
changes in real terms. Hence, changes that have taken place by group of food products, based on different variables
and distinguishing meat products are examined. Results suggest that income level, and literacy and age of the head
of the household do influence consumption patterns of Portuguese households. Meat expenditure of Portuguese
households declined, in real terms, between 1990 and 2000, being the only food group decreasing its share in food at
home expenditure. Within meat, apart from beef and veal, all the remaining types of meat have increased their
shares in meat expenditure. The decrease in beef and veal was particularly high between 1995 and 2000. Share for
beef and veal, in total meat expenditure, differs according to region, level of income, and age structure and level of
literacy of the head of the household.
50
Desenvolvimento de um protocolo de Hibridação In Situ Fluorescente para detecção de
Staphylococcus spp. e S. aureus
Oliveira, M.1, Pedro, S.2 e Bernardo, F.1
1 CIISA/Laboratório de Inspecção Sanitária, Polo Universitário da Ajuda, 1300-477 Lisboa
2 DITVPP-INIAP/IPIMAR, Av. Brasília, 1449-006 Lisboa
A intoxicação alimentar por estafilococos é promovida por estirpes de Staphylococcus aureus com a capacidade de
produzir uma toxina termoestável que provoca doença no Homem. O aparecimento dos sintomas é em geral rápido e
em muitos casos agudo, dependendo da susceptibilidade individual à toxina, da quantidade de alimento contaminado
ingerida, da quantidade de toxina ingerida e do estado de saúde geral da vítima. Os sintomas mais comuns são
naúseas, vómitos, dores abdominais, prostação, dores de cabeça, dores musculares e alterações da pressão arterial. A
recuperação demora pelo menos dois dias.
A incidência real da doença é desconhecida, devido à não comunicação às autoridades de saúde e a erros de
diagnóstico e na análise laboratorial. Com o objectivo de optimizar a eficiência destes processos, foi desenvolvido
um protocolo para a detecção rápida de Staphylococcus spp. e S. aureus, baseado na técnica de Hibridação In Situ
Fluorescente.
O protocolo foi estabelecido através de duas estirpes de referência (S. aureus e S. epidermidis) e inclui a fixação dos
microrganismos através de uma solução de paraformaldeído, permeabilização das membranas bacterianas por
lisostafina e etanol, hibridação com duas sondas oligonucleotídicas dirigidas para o 16S rRNA, lavagens de
estringência e observação das células hibridadas por microscopia de fluorescência.
Ambas as estirpes de estafilococos apresentaram sinal de hibridação positivo com a sonda específica para
Staphylococcus spp., enquanto que a sonda específica para S. aureus apenas originou um sinal de hibridação
positivo com esta estirpe.
Estes resultados sugerem que o protocolo pode ser aplicado à quantificação destes microrganismos em amostras de
alimentos, mas serão necessários novos testes de modo a determinar a sua precisão, especificidade e sensibilidade.
[Development of a Fluorescent In Situ protocol for the detection of Staphylococcus spp. and S.
aureus]
Staphylococcal food poisoning is promoted by strains of Staphylococcus aureus, which are able to produce a heatstable toxin that causes illness in humans. The onset of symptoms is usually rapid and in many cases acute,
depending on individual susceptibility to the toxin, the amount of contaminated food eaten, the amount of toxin
ingested and the health of the victim. The most common symptoms are nausea, vomiting, abdominal cramping,
prostration, headache, muscle cramping and changes in blood pressure. Recovery generally takes at least two days.
The true incidence of this illness is unknown, due to the lack of communication of the victims to the health officials,
to the misdiagnosis of the illness and to improper laboratory examination. With the purpose of optimization the
efficiency of these processes, a protocol based on the Fluorescent In Situ Hybridization technique has been
developed for the rapid detection of Staphylococcus spp. and S. aureus.
The protocol was established using two reference strains (S. aureus and S. epidermidis) and includes fixation of the
microorganisms by a paraformaldehyde solution, permeabilization of the bacterial membranes by lysostaphin and
ethanol, hybridization with two 16S rRNA oligonucleotide probes, stringency washes and observation of the
hybridized cells by fluorescence microscopy.
Both staphylococci strains showed positive hybridization signal with the Staphylococcus spp.-specific probe, while
the S. aureus-specific probe only showed a positive hybridization signal with S. aureus.
These results suggest that the protocol can be applied to the enumeration of these microorganisms in food samples,
but further testing is still necessary in order to verify its accuracy, specificity and sensitivity.
51
Comparação dos isómeros conjugados do ácido linoleíco (CLA) nas carnes Carnalentejana-DOP e
Mertolenga-DOP
Prates, J.A.M.1, Quaresma, M.G.1, Martins, S.V.1, Portugal, A.P.V.2, Fontes, C.M.G.A.1, Castro, M.F.3, Bessa,
R.J.B.2 e Alfaia, C.M.1
1 Faculdade Medicina Veterinária, CIISA, Av. Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa. 2 Estação Zootécnica Nacional, INIAP, Fonte Boa,
2000-763 Vale de Santarém. 3 Faculdade Farmácia, CECF, Av. Professor Gama Pinto, 1649-003 Lisboa.
No presente trabalho compara-se o perfil dos isómeros CLA na gordura intramuscular das carnes Carnalentejana-DOP e
Mertolenga-DOP, ambas obtidas de raças bovinas autóctones criadas em sistema de produção semi-extensivo, de acordo
com as especificações do produto. Adicionalmente, foram também avaliadas as variações sazonais, pela análise de
amostras obtidas de animais abatidos no Outono (Outubro) e na Primavera (Junho). Os novilhos das raças Alentejana e
Mertolenga (n=60), abatidos em Outubro de 2002 (amostragem no princípio do Outono), foram mantidos em pastagem
desde o fim do Inverno até meados da Primavera e acabados a concentrado desde Maio (n=30; 21±0,7 meses e 347±18 kg
para a Alentejana, e 17±0,7 meses e 239±7 kg para a Mertolenga), enquanto que os novilhos abatidos em Junho de 2003
(amostragem no fim da Primavera) foram criados em pastagem até ao fim do Inverno e acabados com concentrado desde
Março (n=30; 20±0,6 meses e 359±8 kg para a Alentejana, e 20±0,5 meses e 388±12 kg para a Mertolenga). A avaliação
dos teores totais e individuais dos isómeros CLA na carne foi determinada nos músculos longuíssimo torácico (LT) e
semitendinoso (ST) por HPLC, utilizando três colunas de prata em série. O teor de CLA total não mostrou diferenças
significativas (p>0,05) quando foram analisadas ambas as carnes e a época de abate. Contudo, o músculo LT apresentou
teores totais de CLA mais elevados relativamente ao músculo ST. E ainda, quando se compararam as duas carnes bovinas,
foram observados efeitos significativos (p<0,01) no que respeita ao teor de CLA específico, mostrando a carne
Carnalentejana-DOP teores mais elevados do que a carne Mertolenga-DOP. O somatório dos isómeros cis,trans contribuiu
com 91,5-93,4% do CLA total na Carnalentejana-DOP e 85,9-91,6% na carne Mertolenga-DOP, embora não fossem
observadas diferenças significativas entre a época de abate, o tipo de músculo e as carnes. Ao contrário da CarnalentejanaDOP, a carne Mertolenga-DOP mostrou um aumento significativo (p<0,05) nos isómeros trans,trans. Apesar dos isómeros
cis,cis totais apresentarem baixas percentagens em ambas as carnes, os valores foram mais elevados no fim da Primavera
(p<0,001). A distribuição dos isómeros CLA mostrou uma predominância do isómero bioactivo c9,t11 em ambas as
carnes, mas a proporção relativa de c9,t11 na carne Carnalentejana-DOP (75,9-79,8%) foi superior que na carne
Mertolenga-DOP (68,7-74,5%). O outro isómero biactivo t10,c12 apresentou valores residuais em ambas as carnes (<3%).
No essencial, os dados indicam que a carne Carnalentejana-DOP apresentou teores de CLA específicos mais elevados que
a carne Mertolenga-DOP, tendo ambas as carnes perfis isoméricos similares e sem variações sazonais importantes.
Agradece-se o financiamento através dos projectos CIISA/2002/52, POCTI/CVT/2002/44750 e AGRO/2003/512.
[Comparison of conjugated isomers of linoleic acid (CLA) in Carnalentejana-PDO and MertolengaPDO meats]
The aim of this study was to characterise and compare the CLA isomeric profile in intramuscular fat of Carnalentejana-PDO and
Mertolenga-PDO meats, both obtained from autochthonous bovine breeds (Alentejana and Mertolenga purebred bullocks,
respectively) reared in a semi-extensive production system, according to the product specifications. In addition, seasonal changes
were also assessed by analysing meat samples from animals slaughtered in early Autumn (October sampling) and late Spring
(June sampling). Alentejana and Mertolenga purebred bullocks (n=60) were slaughtered in October 2002 (early Autumn
sampling), and had been exposed to a period of grass abundance (late Winter and early-middle Spring) and finished on
concentrate since May (n=30; mean ± standard error of age and carcass weight were 21±0.7 months and 347±18 kg for
Alentejana and 17±0.7 months and 239±7 kg for Mertolenga, respectively) while bullocks slaughtered in June 2003 (late Spring
sampling) had been raised on late Winter grass and finished on concentrate since March (n=30; 20±0.6 months and 359±8 kg for
Alentejana and 20±0.5 months and 388±12 kg for Mertolenga, respectively). The evaluation of total and individual CLA isomer
contents in meat were determined in longissimus thoracis (LT) and semitendinosus (ST) muscles by triple Ag+-HPLC based on
the external standard technique (using 18:2c9,t11, 18:2t10,c12, 18:2c9,c11 and 18:2t9,t11 as representatives of each of the
geometric groups of CLA isomers) and on the method of area normalization. Total CLA content did not show significant
differences (p>0.05) when slaughter season and both meats were analysed. However, LT muscle had higher (p<0.001) total CLA
contents relative to ST muscle. In addition, significant effects (p<0.01) regarding specific CLA content were observed when
bovine meats were compared, showing Carnalentejana-PDO beef higher contents than Mertolenga-PDO meat. The sum of
cis,trans isomers contributed 91.5-93.4% of total CLA in Carnalentejana-PDO and 85.9-91.6% in Mertolenga-PDO beef,
although no significant differences were observed between the slaughter seasons, muscle type and meats. In contrast to
Carnalentejana-PDO, meat from Mertolenga-PDO showed a significant increase (p<0.05) in trans,trans isomers. Although, total
cis,cis CLA isomers presented lower percentages in both meats, the values were higher in late Spring (p<0.001). The CLA
isomeric distribution showed a predominance of the bioactive isomer c9,t11 in both meats-PDO, but the relative proportion of
c9,t11 in Carnalentejana-PDO beef (75.9-79.8%) was higher than in Mertolenga-PDO beef (68.7-74.5%). The other bioactive
isomer, t10,c12, only presented residual values in both meats (<3%). The data mainly indicate that Carnalentejana-PDO beef
shows higher specific CLA contents than Mertolenga-PDO meat, having both meats similar isomeric profiles and no important
seasonal variations.
Financial support by projects CIISA/2002/52, POCTI/CVT/2002/44750 and AGRO/2003/512 is acknowledged.
52
Vida útil da carne de avestruz embalada em atmosfera modificada
Matos, A.C., Silva, J.A., Patarata, L., Martins, M.C.
1 Escola Superior Agrária de Castelo Branco, 6000 Castelo Branco
2 Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro, 5000 Vila Real
Neste estudo foi avaliado o efeito da embalagem da carne de avestruz, para isso obtiveram-se assepticamente
amostras do músculo da perna (Gastrocnemius) de avestruz às 24 horas após o abate (Dia 0). O músculo foi dividido
em várias porções que foram posteriormente embaladas em película, sob vácuo e em atmosfera modificada (100%
CO2; 80% CO2 + 20% O2; 80% O2 + 20% CO2) durante 16 dias a 4ºC.
Durante o armazenamento, nos dias 0, 4, 8, 12 e 16 foi determinado o perfil microbiológico da carne
(microrganismos aeróbios a 30ºC, microrganismos psicrotróficos, bactérias do ácido láctico, Enterobacteriaceae,
Brochothrix thermosphacta e Pseudomonas spp.) e foram avaliados o odor, a cor e a apreciação global, por um
grupo de provadores.
A embalagem teve efeito significativo (p<0,05) na maior parte dos parâmetros analisados. A embalagem em
atmosfera modificada com 100% de CO2 determinou valores inferiores de mesófilos, psicrotróficos, Brochothrix
thermosphacta e Pseudomonas spp.. Sendo também uma das embalagens, juntamente com a embalagem sob vácuo,
que o painel sensorial considerou significativamente (p<0,05) mais agradável, com melhor cor, odor e apreciação
global.
Os resultados deste trabalho indicam que a mistura de gás apropriada para oferecer garantias de segurança no que
diz respeito ao perfil microbiológico da carne é a embalagem com 100% de CO2.
A utilização desta atmosfera modificada juntamente com as baixas temperaturas de armazenamento, aumentam a
vida útil da carne, impedindo o desenvolvimento microbiano e mantêm as suas características sensoriais até aos 16
dias de armazenamento.
[Shelf life of ostrich meat stored under modified atmosphere]
This study aimed at evaluating the effect of packaging ostrich meat. Ostrich muscle (Gastrocnemius) samples were
collected aseptically 24 h post-slaughter (day 0). Each sample was subdivided into three and packaged with a high
permeability cling film; under vacuum or under modified atmosphere (100% CO2; 80% CO2 + 20% O2; 80% O2 +
20% CO2). These subsamples were stored for 16 days at 4ºC.
Each subsample was analysed at days 0, 4, 8, 12 and 16 of storage. Total aerobic mesophilic count at 30ºC as well as
psicrotrophic, lactic acid bacteria, Enterobacteriaceae, Brochothrix thermosphacta and Pseudomonas spp. counts
were performed. A sensory evaluation panel evaluated colour, odour and made a general assessment.
Type of packaging had a significant effect (p<0.05) on most microbiological and sensorial analyses. Packaging
under modified atmosphere with 100% CO2 was characterised by low mesophilic, psicrotrophic, Brochothrix
thermosphacta and Pseudomonas spp. counts. This type of packaging together with vacuum packaging is
considered, by the sensory evaluation panel, was significantly tastier; had a nicer colour and odour; and had a better
general assessment.
The results of this study indicate that packaging ostrich meat with 100% CO2 guarantees microbiologically safe
ostrich meat.
This modified atmosphere combined with low storage temperatures increases meat shelf life. Moreover, it hinders
the growth of the microbial populations in the product and it keeps the sensory characteristics of the product
packaging for 16 days of storage.
53
Inactivação térmica de Salmonella spp. e S. aureus em alheira: Determinação dos valores D e z.
Patarata, L., Esteves, A. e Martins, C.
UTAD, Centro de Estudos em Ciência Animal e Veterinária (CECAV), 5000-911 Vila Real, Portugal
A utilização de calor para inactivar patogénicos em alimentos é comummente utilizada como um PCC em produtos
cárneos cozidos. O conhecimento dos parâmetros de inactivação térmica (valores D e z) no alimento especifico com
microrganismos provenientes desse ecossistema particular é uma estratégia interessante para melhorara a confiança
da sua utilização.
O objectivo do presente trabalho foi determinar os valores D e z de Salmonella spp. e S. aureus em alheira, para
temperaturas normalmente utilizadas no processamento de produtos cárneos.
Um lote de massa de alheira foi obtido de uma indústria, homogeneizado e esterilizado (115ºC, 15’). Pesaram-se
assepticamente 3 g de amostra para sacos de plástico e contaminaram-se com 0,1 ml de uma mistura de bactérias
(Salmonella Enteritidis ATCC 14028, S. aureus ATCC 25923 e 3 isolados de cada espécie isolados do ambiente de
produção, no sentido de obter uma concentração final de cerca de 7 log ufc/g. As amostras foram homogeneizadas
manualmente para assegurara uma distribuição uniforme da microflora, e comprimidas para obter uma camada de 1
a 2 mm de espessura. Os sacos selados foram completamente imersos em banhos de água estabilizados a 55, 57,5,
60, 62,5, 65, 67,5 e 70ºC. A diferentes intervalos de tempo – dependendo da temperatura – foram removidos 3 sacos
e arrefecidos de imediato num banho de água-gelo. A contagem dos microrganismos foi efectuada após sementeira
de diluições decimais em agar de verde brilhante para Salmonella spp. e meio de Chapman para S. aureus e
incubação a 37ºC.
Os valores D, definidos como o tempo (min) para obter uma redução de 90% da população viável a dada
temperatura, foi calculado a partir da parte recta da curva de sobreviventes vs tempo de aquecimento. Considerando
a recta de interpolação (y = a+bx), o valor D foi calculado pela expressão (D = |1/b|). Os valores z – incremento de
temperatura necessário para produzir uma redução de 90% no valor D – foi calculado utilizando a mesma estratégia,
relacionando os valores D e a temperatura de aquecimento.
Foi observado que os valores D de Salmonella spp. em alheira variaram entre 6,5 min a 55ºC até alguns segundos
(0,02 min) a 70ºC. S. aureus apresentou um tempo de exposição ao calor mais elevado. Os valores D estiveram
compreendidos entre 12,5 min a 55ºC até alguns segundos a 70ºC. Os valores z, calculados para os dois patogénicos
foram de 5,9 ºC e 12,8 ºC respectivamente para Salmonella spp e S. aureus.
Este trabalho foi financiado pelo programa AGRO (166).
[Thermal inactivation of Salmonella spp. and S. aureus in alheira: Determination of D- and zvalues]
The use of heat to inactivate pathogens of foods is usually used as a CCP in cooked meat products. The knowledge
of the parameters of thermal inactivation (D- and z- values) in the specific food tested with microorganisms obtained
from that particular ecosystem is an interesting strategie to increase the confidence of its use.
The aim of the present work was to determine D- and z- values of Salmonella spp. and S. aureus in alheira for
temperatures usually used in the processing of meat products.
A batch of alheira batter obtained from an industry was minced and sterilized (115ºC, 15’). Three g of sample were
aseptically weighed in plastic bags and contaminated with 0.1 ml of a mixture of bacteria (Salmonella Enteritidis
ATCC 14028, S. aureus ATCC 25923 and 3 strains of each from the industrial environment) to a final concentration
of 7 log cfu/g. Samples were manually mixed in the bags to ensure the distribution of the bacterial, compress to a
final thickness of 1 to 2 mm and heat sealed. Bags were fully immersed in a water bath stabilized at 55, 57,5, 60,
62,5, 65, 67,5 e 70ºC. At different time intervals, depending on the temperature, 3 bags were removed, immediately
cooled in an ice-water bath. The enumeration of bacteria was performed by plating serial decimal dilutions in
Brilliant Green Agar for Salmonella and Chapman agar for S. aureus followed by incubation at 37ºC.
D-values, defined as the time (min) to obtain a reduction of 90% on the viable population at a given temperature,
were calculated from the straight portion of the survival counts vs their corresponding heating times. Considering
the interpolation line (y = a+bx), D-value was obtained throughout the expression (D = |1/b|). The z-values – the
increase in the temperature necessary to achieve a reduction in 90% in the D-value were calculated using the same
strategy, but plotting D-values vs heating temperature.
It was observed that D-values for Salmonella spp. in alheira ranged from 6,5 min at 55ºC to few seconds (0.02 min)
at 70ºC. S. aureus presented a higher time of exposition to the heating temperature. D-values were comprised
between 12,5 min at 55ºC to few seconds at 70ºC. z-values calculated for both pathogens were de 5,9 ºC and 12,8 ºC
respectively for Salmonella spp and S. aureus.
This work was financially supported by AGRO Program (166).
54
Qualidade higio-sanitária e química do leite e queijo da cabra Serpentina
Potes, M.E.1, Pinheiro, C.M.1, Babo, H.2, Cavaco, N.2, Cachatra, A.2, Fialho, J.B.3
1 Instituto de Ciências Agrárias Mediterrânicas. Universidade de Évora. Apto 94. 7002-554 Évora
2 Associação Portuguesa de Caprinicultores da Raça Serpentina. R. Diana de Liz, Horta do Bispo - Apto194. 7002-503 Évora
3 Direcção Regional de Agricultura do Alentejo. Centro Experimental do Baixo Alentejo. Herdade da Abóbada. 7830-908 Vila Nova de S. Bento
Actualmente, cresce o número de consumidores preocupado com a segurança alimentar, exigindo, como é seu
direito, alimentos inócuos e salubres. Muito valorizados pelos apreciadores, os produtos tradicionais integram o
património cultural das regiões que os produzem. Fabricados por processos artesanais, a sua qualidade pode ser
comprometida, quer pela enorme variabilidade encontrada no produto, quer por deficiências higio-sanitárias
ocorridas durante o fabrico. No entanto, qualquer tentativa de intervenção neste âmbito não deve comprometer as
suas características próprias.
Inseridos no estudo do queijo fabricado com leite de cabra Serpentina caracterizaram-se o leite destinado ao fabrico
deste produto e o queijo fresco, produto bastante apreciado pelas suas características organolépticas, mas
frequentemente repudiado pelos consumidores receosos dos derivados de leite de cabra. Seguiu-se o processo de
fabrico do queijo em duas queijarias e avaliaram-se as composições química e microbiológica do leite e do queijo
fresco, durante os períodos de Primavera e de Inverno, realizando, em cada período, três amostragens quinzenais.
No leite crú (LC) e no leite tratado termicamente (LTT) dosearam-se sólidos totais, gordura, proteína, caseína e pH e
no queijo fresco (QF), resíduo seco, gordura, proteína, fracções azotadas e pH. Os parâmetros microbiológicos
quantificados foram mesófilos viáveis totais (MVT) e coliformes (COLIF) e pesquisaram-se Salmonella sp.,
Staphylococcus coagulase positivo e Listeria monocytogenes, em LC, LTT e QF, excepto MVT nestes últimos.
Considerando os dois períodos de fabrico e ambas as queijarias, o LC apresentou os seguintes valores médios:
sólidos totais: 14,10±0,15g/100g; gordura: 4,81±0,14g/100g; proteína: 3,89±0,04g/100g; caseína: 2,55±0,14g/100g;
pH: 6,48±0,049. A composição química do LTT não foi significativamente diferente da do LC. As populações
médias no LC foram: MVT: 5,61±0,53logufc/ml; COLIF: 3,98±0,26logufc/ml. No LTT, estes parâmetros foram
negativos. O QF apresentou teor de humidade: 61,91±0,42g/100g; gordura: 45,44±0,44g/100gMS, humidade isenta
de gordura: 74,94±0,47g/100g, proteína: 40,77±0,29g/100gMS e pH: 6,55±0,02. Os valores de COLIF foram
6,61±0,64logufc/g. Em nenhum produto foram detectados Salmonella sp., Staphylococcus coagulase positivo ou
Listeria monocytogenes. De acordo com a legislação em vigor, os valores encontrados no leite indicam que se trata
de uma matéria-prima de boa qualidade microbiológica, apta a ser transformada em queijo. Os valores de COLIF no
QF são elevados, podendo indicar a existência de algumas deficiências durante o fabrico. Contudo, estes valores
podem ser reduzidos com a aplicação de regras estritas de higiene, garantindo a qualidade e assegurando a
genuinidade deste produto artesanal.
[Hygienic and chemical quality of Serpentina goat milk and cheese]
The numbers of consumers worried about food safety increase nowadays. They require safe and suitable food
products for consumption. Traditional products are very valorised by their appreciators, integrating the cultural
heritage of the production region. Normally traditional products are farmhouse-made and its qualities may be
compromised by the huge variability and hygienic troubles of the manufacture. However, every attempt to improve
this condition must not compromise own characteristics. In a study about Serpentina breed valorisation, milk and
fresh cheese produced from Serpentina goat’s breed were characterized. Goat’s fresh cheese is a very appreciated
product by the sensorial characteristics, but frequently rejected by consumers afraid with goat’s milk derived
products. Goat’s cheese manufacture was controlled in two factories during two periods of cheesemaking (Spring
and Winter), performing three samplings in each period, fortnightly. It was evaluated the chemical and
microbiological composition of milk and fresh cheese. Raw milk (RM) and heat-treated milk (HTM) were tested for
total solids, fat, protein, casein and pH and fresh cheese (FC) for dry matter, fat, protein, nitrogen fractions and pH.
Microbiological parameters quantified were total viable mesophiles (TVM) and coliforms (COLIF) and it was
examined for Salmonella sp., Staphylococcus coagulase positive and Listeria monocytogenes, in RM, HTM and FC
excepting TVM in FC. Taking into account the two periods of cheesemaking in both factories, RM present the
following mean contents: total solids: 14,10±0,15g/100g; fat: 4,81±0,14g/100g; protein: 3,89±0,04g/100g; casein:
2,55±0,14g/100g; pH: 6,48±0,049. Chemical composition of HTM was not significantly different from RM. Mean
populations in RM were TVM: 5,61±0,53 log cfu/ml; COLIF: 3,98±0,26 log cfu/ml. In HTM, these parameters were
negative. In FC, the mean contents were: moisture: 61,91±0,42g/100g; fat: 45,44±0,44g/100gDM; moisture in non
fat solids: 74,94±0,47g/100g; protein: 40,77±0,29g/100gDM and pH: 6,55±0,02. COLIF were 6,61±0,64log ufc/g.
Salmonella sp, Staphylococcus coagulase positive and Listeria monocytogenes were not detected in any product.
According present legislation, the values found in milk indicate that, in a point of view of hygiene, it is a good raw
material, suitable to be transformed in cheese. In FC, COLIF values are high, indicating some deficiencies during
transformation. However, applying some strict measures of hygiene these values can be reduced, warranting the
quality and assuring the genuinity of this artisanal product.
55
Actividades Taurinas
A AMVAT - Associação de Médicos Veterinários de Actividades Taurinas
Patacho de Matos, Daniel
Presidente da AMVAT
A ideia da sua criação e as causas da sua fundação, data da constituição, o apoio da O.M.V.
Os colegas que a constituem como fundadores e os diversos tipos de associados.
Seu objectivo principal – fomentar e desenvolver o exercício das actividades médico-veterinárias taurinas e como
atribuições:
- Promover e zelar pela pureza e integridade do toiro de lide como base do espectáculo tauromáquico.
- Apoiar e contribuir em todas as iniciativas de índole cultural e cientifica susceptíveis de promover o conhecimento
e dignificação do espectáculo taurino.
- Prestar colaboração em todos os Organismos Oficiais, Instituições e eventos ligados à Tauromaquia.
- Efectuar e participar em reuniões e cursos de aperfeiçoamento e actualização.
Para a consecução dos fins pretendidos poderá a AMVAT federar-se noutras organizações internacionais do mesmo
género.
Que futuro esperado para a AMVAT?
O que pretendemos no presente mandato como programa de acção para a AMVAT.
- Criação de página Web
- Publicação com periodicidade duma Newsletter
- Reunião periódica de follow-up com os organismos oficiais com os quais temos maiores contactos – IGAC e
DGV, etc.
- Sessões técnicas sobre temas específicos ligado à problemática do toiro de lide.
- Abordagem à problemática do transporte das rezes e sua ligação ao Bem-estar Animal e aos cursos para
transportadores.
- Contactos com o Livro Genealógico Português da Raça Brava de Lide tendo em vista o estudo dos encastes em
Portugal.
- Colaboração com Centros Universitários sobre o assunto “encastes”.
- Contactos com as Faculdades de Veterinária Portuguesas tendo em vista a organização de cursos e palestras sobre
o tema toiro de lide em todas as suas vertentes de produção, manejo, alimentação, genética, economia da produção e
características morfológicas específicas.
- Contactos com as Faculdades de Veterinária Espanholas, Francesas e Mexicanas onde se desenvolvem diversos
estudos sobre temas taurinos.
- Contactos com as Tertúlias Tauromáquicas das Associações de Estudantes de Veterinária que têm há anos
organizado várias jornadas sobre o Toiro.
- Contactos periódicos com todas as outras Associações representativas dos vários intervenientes da Festa dos
Toiros – ganadeiros, toureiros, forcados e empresários.
- Lançamento de cursos de reciclagem para os actuais Delegados Técnicos Tauromáquicos.
- Preparação e ministração de cursos para novos Delegados a admitir – se for caso disso no quadro do IGAC.
- Montar um esquema monitorizado de ligação entre os Delegados Tauromáquicos e o Corpo de Inspecção Sanitário
dos matadouros onde se verifique o maior abate dos animais após corridas, tendo em vista o conhecimento científico
sobre determinados problemas que podem surgir e afectar a lide.
Que futuro para os veterinários taurinos?
A sua relação com a Festa dos Toiros em Portugal.
Os veterinários e a sua relação com o toiro de lide na produção e na lide.
Há 3/ 4 grandes grupos de actuação:
- Os que trabalham nas OPPs e que são cerca de 50, com impossibilidade de implantar e realizar um plano sanitário
e acompanhá-lo.
- Os que actuam directamente nos espectáculos taurinos e que são actualmente 19 no Continente e 2 nos Açores.
- Os que fazem clínica nas ganadarias bravas e que estimamos actualmente em 12 colegas – alguns ligados às OPPs.
Os aspectos veterinários com maior relevância e interesse na produção do toiro bravo:
O estudo da genética.
O estudo de programas alimentares específicos para este tipo de exploração.
O estudo da reprodução e toda a problemática ligada à inseminação artificial e ao transplante de embriões.
Para melhor avaliação peso da Festa dos Toiros e do papel cada vez mais importante que o Médico – Veterinário
nela desempenha apresentamos os elementos que se nos afiguram mais relevantes e referentes ao ano de 2004.
Número de rezes lidadas em Portugal (machos) – 1624. Total de espectáculos taurinos – 305, dos quais 208 são
corridas de touros. Deste conjunto 39% respeitam aos dados em praças desmontáveis. Número de espectadores total
que assistiram aos espectáculos – 515.500. Número de espectadores médio por espectáculo – 1.690.
56
Livro Genealógico Português dos Bovinos da Raça Brava de Lide
Lucas, António V.
Secretário Técnico da LGPRBL
Nesta intervenção o autor realiza de forma resumida uma análise sobre a finalidade, organização e funcionamento
do supracitado Livro, citando os seus antecedentes, a experiência dos seus anos de existência, assim como as
dificuldades derivadas da sua aplicação e suas vantagens para os criadores.
Também se abordam as alterações introduzidas e a introduzir ao seu esquema básico de funcionamento, visando
sempre a credibilização dos seus resultados, atendendo a um padrão rácico que é um modelo zootécnico de cada
criador, o qual arrisca o seu prestígio e a sua própria economia, através da selecção animal.
Finalmente, referem-se tarefas a montante e a jusante da actividade deste Livro que, baseadas neste, colaboram com
diversas estruturas, tanto oficiais como tauromáquicas, na defesa dos interesses do consumidor.
Maneio e comercialização da Raça Brava de Lide
Grave, Joaquim
Investigador, INIAP
O título aponta para os dois aspectos mais difíceis de tudo o que, actualmente, se relaciona com a raça brava. Se o
maneio sempre foi complicado pela própria natureza comportamental destes animais, já a comercialização se tornou
nos últimos tempos uma questão também bastante complexa.
Maneio: O maneio é difícil e requer pessoal conhecedor do comportamento habitual dos animais, mas também
quando, pela sua natureza facilmente irritável, reagem aos estímulos externos provocados dos homens.
As várias categorias de animais de uma ganadaria brava não se comportam igualmente quando sujeitas a acções de
maneio. Assim, os bezerro(a)s não reagem do mesmo modo que os garraios, estes diferem dos novilhos e estes,
ainda dos toiros. As vacas sujeitas a operações de saneamento mais frequentes, exibem um comportamento
específico.
As infra-estruturas necessárias para um adequado maneio são diferentes daquelas utilizadas para outras raças
bovinas de carne. As vedações, para serem eficazes, também devem obedecer a parâmetros diferentes.
Como consequência, a mão de obra deve ser especializada o que significa mais uma dificuldade acrescida.
Comercialização: ctualmente, existe um excesso de produção em relação ao consumo. Este excesso de oferta,
naturalmente, condiciona fortemente o mercado do toiro de lide em Portugal.
Podem apontar-se vários factores que têm contribuído para a actual situação:
Grandes dificuldades na exportação para Espanha e França.
Prémio da vaca aleitante numa vaca com muito menos necessidades de manutenção.
Estatuto social do ganadero convidativo a capital alheio a actividade.
Excesso de peso específico dos toureiros no fenómeno taurino, tornando-se demasiado selectivos em relação aos
toiros que lidam.
Profilaxia e clínica da Raça Brava
Núncio Fragoso, José
Médico Veterinário, R. Sousa Lopes LT PO AP 167
Servindo-se de um meio audio-visual, o autor mostra a resolução de dois casos clínicos.
O primeiro mostra o método e os meios utilizados para a resolução de um caso de fractura na extremidade de um
membro, estando o animal em ambiente fechado.
O segundo, a captura em pleno campo e o tratamento de um caso de artrite.
57
Profilaxia e clínica na Raça Brava de Lide
Brito Paes, Vasco
Médico Veterinário, VetLide Portugal
O presente trabalho pretende referir a importância do acompanhamento médico-veterinário numa ganadaria de raça
Brava. O Médico Veterinário é um colaborador fundamental pelo apoio que pode prestar ao ganadeiro na
alimentação, maneio e selecção, não necessitando interferir directamente na selecção do toiro pretendido por este
mas acessorando na persecução dos objectivos traçados.
A Raça Brava de lide apresenta características peculiares, que a tornam muito distinta, na sua criação e maneio em
relação às restantes raças bovinas. O condicionamento das épocas de intervenção e a necessidade de adaptar os
programas sanitários a essas épocas (ferras, desmame), muitas vezes mais dependentes do critério do ganadeiro do
que da vertente médica, dificultam o trabalho do clínico, comprometendo prognóstico médico-cirúrgico ou o
seguimento dos casos. O facto de, muitas vezes, os toiros intervencionados já estarem vendidos, com data e hora
para serem lidados, a impossibilidade de substituir um animal por outro, pela correlação que existe entre a
classificação e a importância das praças com o tipo de toiro, leva a adaptar o tratamento e à difícil decisão do clínico
de quando e como intervir.
É importante que o clínico esteja familiarizado com a raça, maneio e problemas do Sector de modo a estabelecer
critérios de intervenção e opções terapêuticas possíveis de executar, algumas vezes distantes das ideais.
De um modo geral podemos dividir a acção médico-veterinária em três partes. A primeira será a profiláctica em que
o clínico, mediante um conjunto de factores como a experiência de patologias anteriores na ganadaria, localização,
condições de maneio, condições climáticas entre outras, deve estabelecer um programa sanitário adequado às
necessidades da exploração.
A segunda será o acompanhamento reprodutivo, desde os lotes de cobrição, aos eventuais problemas obstétricos,
diagnóstico de gestação ou patologias associadas a este aparelho.
Por último consideramos a clínica, que está mais ou menos presente ao longo de todo o ano, embora tenha maior
expressão nos meses que antecedem o início da temporada. No entanto esta divisão faz-se apenas por uma questão
de facilidade de apresentação do trabalho, pois na realidade todas estão interligadas entre si complementando-se.
Quando existe um programa sanitário ajustado às necessidades da ganadaria, um maneio reprodutivo sério com
objectivos definidos, evidentemente que o risco diminui permitindo optimizar os resultados produtivos da
exploração.
58
Suinicultura
Complexo das Doenças Respiratórias dos Suínos – do nascimento à entrada na engorda
Sena, Gil
Pfizer Saúde Animal
O Complexo das Doenças Respiratórias dos Suínos é um termo universalmente aceite na área da suinicultura para
descrever um vasto conjunto de fenómenos de patologia respiratória, cuja etiologia é habitualmente muito complexa
e resultante da acção conjunta de factores associados à estrutura da exploração, ao maneio, ao ambiente e aos
agentes patogénicos com importância respiratória.
Os sistemas de produção modernos, em que o diagnóstico da população é mais importante do que o diagnóstico do
indivíduo, constituem hoje um desafio importante para o médico veterinário dedicado à área dos suínos, e levam à
necessidade de desenvolver competências que muito ultrapassam o estrito conhecimento científico sobre as doenças
– designadamente na área da nutrição, economia, recursos humanos, instalações, etc – de modo a poder dar uma
resposta eficaz às necessidades de um sector cada vez mais exigente.
As primeiras fases de produção, sobretudo os dois momentos criticos de transição – o desmame e a entrada na
engorda – são cruciais para caracterizar a dinâmica de infecção e desenhar correctamente protocolos de tratamento e
profilaxia do complexo respiratório dos suínos em qualquer exploração. O propósito deste trabalho é apresentar um
resumo dos principais agentes patogénicos com relevância neste complexo de doenças, e apontar alguns pontos
críticos que servem para melhor compreender a natureza multifactorial destes fenómenos.
[Porcine Respiratory Disease Complex – farrowing and nursery]
Porcine Respiratory Disease Complex (PRDC) is a term universally accepted in the swine industry to describe a
wide set of respiratory disease signs, often resulting from the combined action of pathogens, management, farm
structure and other farm related issues.
In modern swine production, the diagnose of the population is more important than the diagnose of the individual
animal leading the swine practitioner to the need of developing skills far beyond the narrow scientific knowledge of
the disease – namely on nutrition, economy, human resources, farm facilities, etc – as to provide a good service to
the needs of an increasing demanding customer.
The early stages of production, specially weaning and early growing, are critical to understand the disease dynamic
and to generate good control programs for PRDC in any farm. The purpose of this paper is to summarize the most
relevant pathogens to PRDC and give a perspective of it’s multifactor nature.
59
Complexo Respiratório dos Suínos – da entrada da engorda ao abate
Bolis, Delair A.
Schering-Plough Portugal. E-mail: [email protected]
Os agentes mais frequentemente envolvidos no complexo respiratório dos suínos são Actinobacillus pleuropneumoniae,
Pasteurella multocida, Bordetella bronchiseptica, Haemophilus parasuis, Salmonella cholerae-suis e Mycoplasma
hyopenumoniae. Por estar envolvida com um sistema de alta criação intensiva, para controlarmos eficazmente as
patologias respiratórias, nunca devemos analisar somente uma fase específica da exploração, pois os agentes infectam os
animais em diferentes fases da criação. A maioria das doenças respiratórias tem início nas fases logo após o desmame,
fazendo-se notar com maior incidência durante as fases de início da engorda e acabamento. Nesta fase as perdas
económicas decorrentes dos problemas respiratórios são bastante sérias e recaem tanto sobre os produtores como sobre a
indústria. Sobre os primeiros, em consequência dos gastos com medicamentos, redução do desenvolvimento corporal dos
animais afectados e pelo aumento da mortalidade. Sobre a indústria, os maiores prejuízos são devido à alta rejeição das
carcaças, especialmente no caso da pleuropneumonia. As perdas económicas devido às doenças respiratórias dependem da
idade do animal, do grau da infecção e do curso da doença depois do aparecimento dos primeiros sintomas clínicos.
Portanto, torna-se difícil estimar as perdas em todos os casos individuais. Segundo Straw et al, 1989, para cada 10% de
pulmão hepatizado, ocorre uma diminuição de 37,4 gramas no Ganho de Peso Diário (G.P.D.). Segundo o mesmo autor a
obServação a nível de matadouro de um pulmão com 10 a 20% de hepatização significa um perda de 9,3% no
desenvolvimento do animal. Já aderência de pleura (pleurisia), significa uma perda de 17% no desenvolvimento do
animal. De acordo com Holgren N. Et all, 1999 a identificação e a quantificação das diferentes intensidades de
comprometimento pulmonar no momento do abate dos animais, têm-se revelado um valioso instrumento de diagnóstico
precoce dos processos respiratórios tendo em conta o aumento da eficiência da actividade suinícola. Com o objectivo de
avaliar os níveis de incidência de hepatização e pleurisias pulmonares, estimar os índices para pneumonia (IPP) e para
rinite atrófica (IRA) e os graus de lesão pulmonar (hepatização) e dos cornetos nasais (rinite atrófica) em explorações de
suínos em Portugal iniciámos em Maio de 2003 um trabalhor precursor, voltado para a monitorização de abate dos suínos.
Até este momento foram analisados mais de 6.000 pulmões distribuídos em diferentes regiões de Portugal e mais de
106.000 pulmões distribuídos entre os países Portugal, Brasil, México e Colombia. Esse trabalho permitiu-nos observar
que a prevalência das hepatizações e pleurisias pulmonares em Portugal reduziram de 76,11% e 23,19% em 2003 para
47,9% e 13,2% em 2005, respectivamente. Também houve uma redução significativa nos Índices para Pneumonia e nos
Índices de Rinite Atrófica com uma redução de 0,97 e 0,50 para 0,76 e 0,45 respectivamente. Uma análise comparativa
entre os países Portugal, Brasil, México e Colombia, na qual se envolveram aproximadamente 973 empresas e 106.643
pulmões demonstrou que Portugal possui o segundo melhor resultado no Índice Para Pneumonia e a segunda menor
prevalência de hepatização pulmonar.
[Swine Respiratory Complex: From beginning of fattening to the slaughterhouse]
The most common agents related to Swine Respiratory Complex are Actinobacillus pleuropneumoniae, Pasteurella
multocida, Bordetella bronchiseptica, Haemophilus parasuis, Salmonella cholerae-suis and Mycoplasma hyopenumoniae.
As the swine production is highly involved in intensive systems of production, we should never analyze one specific
period separately to control the respiratory diseases efficiently, as the animals are infected in different periods. Most of the
Respiratory Diseases start shortly after the wean and show their highest incidence of symptoms in the beginning of the
fattening and the finishing. In this period, the economical harm is significantly high due the Respiratory Diseases and
affect farmers as well as the industry. Namely, farmers see the treatment cost increase, the weight gain reduce and
themortality in infected animal increase. For industry, the greatest harm is due to high slaughterhouse condemnations,
mainly when pleuropneumoniae was involved. The economical harm due to the Respiratory Diseases depend on the
animal’s age, the lesion score’s infection and the cycle of the diseases after the first symptoms. As consequence, it’s
difficult to estimate the harm to each individual case. According to Straw et al, 1989, the Daily Weight Gain was reduced
37,4 grams each 10% of the lesioned lung. The same author showed that 10 or 20% of the lung hepatization means a loss
of 9,3% in the animal growing. If pleurisy is observed, means a loss of 17% less in the animal growing. According to
Holgren N. et all, 1999 the identification and quantification of the different lesions intensity of the lung in the
slaughterhouse, has been an important tool to an early diagnosis of the Respiratory Processes considering the significant
increase of the swine activity efficiency. With the objective of evaluating the levels of the lungs hepatization and pleurisy,
estimating the Pneumonia Index (P.I) and Atrophic Rhinitis Index (R.I, to check the degree of the lungs lesions
(hepatization) and of the turbinal bones in Portuguese Swine Farms, in May 2003 we started a pioneer project to monitor
swines in the slaughterhouse. At this time, 6.000 lungs from different regions of Portugal and more than 106.000 lungs
from Portugal, Brazil, Mexico and Colombia were analyzed. This job has permitted us to observe that the prevalence of
the hepatization and pleurisies reduced 76,11% and 23,19% in 2003 to 47,9% and 13,2% in 2005, respectively in Portugal.
The Pneumonia and Atrophic Rhinitis Index reduced significantly, from 0,97 and 0,50 to 0,76 and 0,45 respectively. In a
comparative analyze between Portugal, Brazil, Mexico and Colombia, where 973 companies and 106.643 lungs were
involved, showed that Portugal has the second better results in Pneumonia Index and the second lower prevalence of lungs
hepatization.
60
C perfringens Type A - neonoatal clostridiosis in swine: epidemiology, pathogenesis and vaccination
Manteca, Cristophe1,2, Salle, E.2, Pontoppiddan, L.3, Deflandre, A.2
1 Dépt. des Maladies Infectieuses et Parasitaires. Bactériologie. Faculté de Méd.Vétérinaire. Univ. de Liège – Sart Timan, Bât B43a; 4000 Liège
2 CEVA SANTÉ ANIMALE, França (CEVA Santé animale – La Ballastière. F33501 Libourne, France)
3 CEVA ROSCO, Dinamarca (CEVA ROSCO Animal Health A/S Andkaervej 19, 7100 Vejle, Denmark)
Clostridium perfringens type A enteritis appeared in swine herds in the years 90 in France, USA and now in
Denmark. Until this date C. perfringens type A was considered as a normal intestinal flora, this is the reason why
type A clostridial diarrhoea was mistaken for a long time with colibacillosis and other diarrhoea of the new born
piglet (rotavirus, coccidiosis, etc.). The diagnosis of C. perfringens type A diarrhoea was then a diagnosis by
exclusion.
In herds infected by C. perfringens type A, the anti-infective treatments are often uncertain and then, only the
vaccination against the alpha toxin is really efficient to protect piglets. This presentation aims to describe this new
pathology, the pathogenesis of C. perfringens type A and to show some relevant results about prevention. In
Denmark and in France, our studies show that this toxinotype seems be one of the most important aetiology of
catarrhal diarrhoea of piglets one to five days old (60% of cases). It’s not possible to differentiate clinically this
pathology of colibacillosis. Some studies show that vaccination with an high α antitoxin level is able to really
prevent this clostridiosis.
[C. perfringens Tipo A - clostridiose neonatal nos suínos: epidemiologia, patogenia e vacinação]
A enterite por Clostridium perfringens tipo A apareceu nas explorações de suínos nos anos 90 em França, EUA e
recentemente na Dinamarca. Até à data, C. perfringens tipo A foi considerado como parte da flora intestinal, razão
pela qual a diarreia por clostrídios tipo A tem sido confundida, desde há muito tempo, com a colibacilose e outros
tipos de diarreia dos leitões recém-nascidos (rotavirus, coccidiose, etc). O diagnóstico da diarreia por C. perfringens
tipo A foi então um diagnóstico por exclusão.
Nas explorações infectadas com C. perfringens tipo A, os tratamentos com antimicrobianos são muitas vezes
incertos e, por esta razão, apenas a vacinação contra a toxina alpha é realmente eficiente para proteger os leitões.
Esta apresentação pretende descrever esta nova patologia, a patogenia do C. perfringens tipo A e mostrar alguns
resultados relevantes sobre a prevenção. Na Dinamarca e na França, os nossos estudos mostram que este toxinotipo
parece ser uma das etiologias mais importantes na diarreia catarral dos leitões entre 1 e 5 dias de vida (60% dos
casos). Não é possível diferenciar clinicamente esta patologia da colibacilose. Alguns estudos demonstram que a
vacinação com um nível elevado de antitoxina α tem capacidade para prevenir esta clostridiose.
61
Principais afecções do cólon em suínos
Joaquim, Manuel
Médico Veterinário
As doenças entéricas têm uma grande importância na produção suinícola. Com a retirada dos antibióticos
promotores de crescimento prevê-se um aumento desta patologia.
Por colite entende-se a inflamação do cólon, que se traduz clinicamente por diarreia.
Esta diarreia pode ser caracterizada por fezes de várias consistências e aparências, embora não sendo possível fazer
um diagnóstico definitivo a partir da visualização das fezes, poder-se-ão obter pistas importantes.
Para controlar e prevenir estas alterações intestinais é essencial compreender os diferentes mecanismos que
interagem para causar a doença.
Tendo em conta que o diagnóstico da colite é difícil, e devera ser feito um grande esforço para se fazer um
diagnóstico correcto, o que permitirá a elaboração de um plano de combate.
A colite parece resultar de uma má digestão e/ou má absorção dos nutrientes, quer no intestino delgado, quer no
intestino grosso, como resultado de uma doença primária do intestino delgado, de um alimento mal formulado ou
com uma composição inadequada. As matérias primas fermentáveis chegam ao cólon e induzem alterações na
população e no tipo de bactérias que constituem a sua flora. As bactérias, as suas toxinas ou os produtos de
fermentação dos amidos e das proteínas (aminas), causam acidose e irritação do cólon, levando a uma colite catarral,
diminuindo a capacidade do cólon para absorver água e sal.
Os processos patológicos na engorda continuam a ser um problema real nas nossas explorações, a rentabilidade da
exploração não depende apenas dos custos de produção mas também da qualidade e consequente valor económico
da carcaça apresentada no matadouro. Uma resposta rápida, quando nos deparamos com este tipo de problema é
correcta, mas não é suficiente, pois não evitará totalmente a mortalidade nem os atrasos de crescimento resultantes
desta patologia.
Um bom controlo deve ser baseado no perfeito conhecimento da dinâmica do processo e na sua prevenção, o qual
não deverá contemplar apenas medidas médicas.
62
Avicultura
A fagoterapia na avicultura
Sereno Melo, Rui
Controlvet, Segurança Alimentar
As infecções provocadas pela bactéria Escherichia coli, nomeadamente colibaciloses e colisepticémias são
responsáveis por perdas muito significativas na Indústria Avícola, verificando-se mortalidades elevadas, baixa
eficiência de conversão alimentar com consequentes perdas de peso e rejeição das carcaças no matadouro. Os
antibióticos têm sido a terapia utilizada ao longo dos tempos para combater estas infecções bacterianas. Contudo
têm vindo a verificar-se, de um modo cada vez mais significativo e preocupante, fenómenos de resistências
bacterianas a antibióticos, e consequente selecção e propagação dessas bactérias. Tornam-se comuns os problemas
de colibaciloses para as quais não se encontra qualquer antibiótico eficaz. Um estudo de sensibilidades bacterianas
realizado na Controlvet, com 998 estirpes de E.coli, revelou que, dos antibióticos com acção sistémica e cuja
utilização na produção avícola é economicamente viável, o mais eficaz foi a Enrofloxacina embora apenas contra
50% das estirpes isoladas.
A necessidade de encontrar e desenvolver novas soluções no controlo destas infecções, assegurando a qualidade da
carcaça com o mínimo de impacto ambiental é uma realidade. A prespectiva promissora da fagoterapia como
alternativa, motiva a investigação nesta área. Os bacteriófagos (fagos) são vírus que infectam exclusivamente
bactérias. Adsorvem à sua parede e destroem-na, permitindo a libertação dos novos fagos. Estes por sua vez
infectarão novas bactérias e o ciclo continuará até à extinção do hospedeiro (bactéria alvo). Os bacteriófagos são
altamente específicos para o hospedeiro poupando as bactérias que fazem parte da flora natural das aves. A sua
multiplicação exponencial ocorre no local da infecção bacteriana e apenas permanecem o tempo necessário para
extinguir a infecção, uma vez que a sua sobrevivência depende da presença da bactéria hospedeira. Está
cientificamente comprovado que os bacteriófagos são absolutamente inofensivos para o Homem, para os outros
animais e para o ambiente do qual fazem parte. Por exemplo uma pequena porção de solo ou uma gota de água do
mar contém milhões de bacteriófagos.
Foram testados fagos contra estirpes de E.coli isoladas de aves e serotipificadas para o antigene “O”. O objectivo do
ensaio foi tentar sistematizar a relação fago /bactéria de acordo com a diversidade antigénica (antigene “O”).
Verificou-se que as E.coli do mesmo serogrupo não são necessariamente receptivas aos mesmos fagos e que
portanto novas abordagens neste sentido deverão ser desenvolvidas.
[The Phage Therapy in Aviculture]
Escherichia coli infections, like colibacilosis and colisepticemia are responsible for significant losses in Poultry
Industry, like high mortality rates, low feed conversion efficiency, low carcass weight and carcass rejection on
slaughter. The antibiotics have been used as the therapy to fight these bacterial infections. However, antibiotic
resistances and consequent resistant strain selection are becoming frequent and preoccupying. It has became
common the lack of antibiotics to treat some colibacilosis infections. A sensitivity study with 998 E. coli isolated
strains has been taken, to test antibiotics profile. The more efficient antibiotic was Enrofloxacin, only for 50% of the
strains.
The necessity of find and develop new methods and solutions against those infections, assuring meat quality and
avoiding environmental impact is urgent. The phage therapy seems to be a promising alternative.
The bacteriophages (phages) are viruses that exclusively infect bacteria. They adsorb to the cell wall, they promote
the generation of new phages inside the bacterial cell, the cell lysis and the release of the new phages. Those phages
will infect other bacteria and the process continues until there is no host remaining (their survival depends on the
presence of the host). The bacteriophages are highly specifics for a given host, and therefore they don’t damage the
good intestinal flora. The phages exponential growing occurs in the same place of the infection and they only stay
there until the infection is extinguished. They are absolutely inoffensive to Man, animals and environment. A
minimal soil portion or a drop of sea water contains millions of phages.
Ten phages were tested against 148 E.coli strains (serotyped for “O” antigene). The aim of the study was a
systematization attempt to find a relationship between the cell wall antigene “O” of the bacteria and the phage lytic
answer. The results showed that E.coli from the same serogroup is not necessarily receptive to the same phages and
though new approaches are needed in further works.
63
Análise de risco microbiológico dos alimentos de origem avícola
Martins, Ana
Controlvet, Segurança Alimentar, Lda
Os dados recolhidos identificam a Salmonella como um dos principais perigos microbiológicos associados ao consumo de
produtos de origem avícola.
A análise de risco é um processo constituído por três componentes interligadas: avaliação, gestão e comunicação dos
riscos. A Avaliação dos riscos é um processo constituído por: identificação do perigo, caracterização do perigo, avaliação
da exposição e caracterização do risco. A identificação do perigo – consiste na identificação do agente biológico que pode
estar presente num grupo específico de alimentos e que é capaz de provocar efeitos adversos na saúde do consumidor.
Caracterização do perigo – Avaliação qualitativa e/ou quantitativa da natureza do efeito adverso associado com o perigo
microbiológico que pode estar presente no alimento. Avaliação da exposição – Avaliação da exposição ao agente através
da ingestão de alimentos. Caracterização do risco – estimativa da probabilidade de ocorrência de efeitos adversos na
saúde, numa população dada baseada no perigo identificado e na avaliação da exposição. A exposição do consumidor à
Salmonella através da ingestão de carne de aves resulta da interacção da sua prevalência em cada uma das fases da cadeia:
produção; processo de abate e desmancha; armazenagem exposição e venda; preparação para consumo. Na passagem de
cada uma destas fases da produção de carne de ave verifica-se uma alteração na prevalência de Salmonella. Na produção a
prevalência de aves infectadas é o resultado de infecções verticais e de processos de infecção durante a engorda. A
prevalência de infecção durante o processo de abate, preparação desmancha resulta da interacção dos animais infectados
abatidos com os não infectados que se contaminam durante o processo de abate. A preparação da carne de ave para
consumo contempla uma fase de cozedura, a exposição do consumidor a Salmonella vai resultar da interacção da
prevalência de Salmonella na carne de aves nesta fase do processo com a prevalência resultante de insuficiente cozedura e
contaminações cruzadas na sequencia da manipulação de carnes contaminadas cruas.
Dados da WHO de 2002 revelam que se reduzirmos a prevalência de carcaças contaminadas por Salmonella em 50% (por
exemplo de 20% para 10%) obtém-se (mantendo todos os restantes parâmetros) uma redução de 50% no risco de ocorrer
infecção alimentar por ingestão. A redução de carcaças infectadas em resultado do processo de abate pode também ser
reduzida incluindo nas medidas de higiene e boas práticas regras na ordem de abate (abater bandos livres de Salmonella
primeiro e os bandos infectados no final do abate). Outras acções podem ser tomadas no que respeita a formação relativa a
boas praticas na manipulação de alimentos com especial atenção para as regras de higiene a respeitar na manipulação de
carnes e seus derivados crus. Esta formação deve incluir regras de lavagem de mãos, utilização de utensílios. Espera-se
que face a uma prevalência de 20% de carcaças infectadas cerca de 2% contenha Salmonellas viáveis após preparação para
consumo face a erros de manipulação (contaminações cruzadas) ou cozedura insuficiente (WHO 2002). A Exposição do
consumidor a Salmonella através da ingestão de produtos avícolas pode assim ser reduzida estabelecendo programas
específicos para cada um dos pontos da cadeia alimentar
[Risk assessment of avian food born pathogens]
Several collected data, refers the bacteria Salmonella as one of the main microbiological dangers, related to the
consumption of aviary derived food. The risk assessment is a process consisting of tree linked elements: evaluation,
management and communication of risks. The risk evaluation is a process consisting on: hazard identification, hazard
characterization, exposure evaluation and risk characterization. The hazard identification consists on the identification of
the biological agent present in a specific group of foods, dangerous to consumers health.
The hazard characterization is the qualitative and/or quantitative evaluation of the adverse effect origin, in association with
the potential microbiological hazard of the food. The exposure evaluation is the evaluation of the exposure to the agent by
food ingestion. The risk characterization is an estimate of the probability of health adverse effects occurrence in a given
population, based on hazard identification and exposure evaluation. The consumers’ exposure to Salmonella by ingestion
of aviary meat is due to bacteria prevalence in each phase of the chain: raising, slaughter and post-slaughter manipulation,
storage, selling and consumption. In each one of these phases, there is a variation on Salmonella prevalence. In fact,
during the raising of the birds, the Salmonella infections result from vertical infections and from the fattening process. The
infection during slaughter and post-slaughter manipulation is a consequence of the contact of the infected carcass with
animals in pre-slaughter that get contaminated during the slaughter process.
The meat processing and cooking goes trough a heating process. The exposure of the consumer to Salmonella will be a
consequence of the bacteria present in the meat in this phase, the bacteria resultant from insufficient cooking and the cross
contamination due to deficient raw meat manipulation. Data collected from WHO (2002) reveals that, if we reduce the
prevalence of contaminated carcasses by Salmonella in 50% (for instance from 20% to 10%), we can get (maintaining all
the other parameters) a reduction of 50% on the risk of food contamination by ingestion. The reduction of post-slaughter
infected carcasses can also be done by the requirement of rules on the slaughter order: to slaughter Salmonella free flocks
before the infected ones. There are other measures that can be taken: “food manipulation practices” learning, with special
attention to the hygiene rules on manipulating raw meat and its derivatives. This learning may include washing hands
rules, utensils manipulation rules, etc. It is thought that in 20% of infected carcasses, about 2% contains active Salmonella
after cooking due to manipulation errors (cross contamination) or insufficient cooking (WHO, 2002).
The exposure of the consumer to Salmonella by ingestion of aviary products, can be reduced, with the implementation of
specific programs for each phase of the alimentary chain.
64
Patologias de campo mais comuns em perús de engorda
Raposo, João
Médico Veterinário
Nos últimos anos, temos assistido a um incremento da patologia em perús de engorda, o que tem sido a causa de
graves prejuízos económicos, suportados, quer pelos agentes económicos (Integradores), como pelos produtores.
Como causas poderemos apontar problemas relativos ao Maneio e Infecciosos.
MANEIO: - Alta concentração da produção em determinada zona geográfica; - Explorações com elevada densidade
de aves e multidades; - Pavilhões antigos, com pouca capacidade de higienização; - Inexistência de reprodutoras em
Portugal; - Falta de regras de Biossegurança a nível dos produtores.
PROBLEMAS INFECCIOSOS: - PEMS (Poultry Enteritis Mortality): sem etiologia conhecida. De uma maneira
geral, esta doença está descrita por diversos investigadores, que atribuem as suas causas a mais que um agente
(Coronavírus? Adenovírus? Enterovírus? Etc). A patologia detectada pode ser agravada por bactérias secundárias
como E.coli, Salmonela, Etc.). As aves apresentam sintomas de diarreia, desidratação, anorexia (Doença do PIUPIU), o que pode ocorrer em toda a fase da produção, mas sobretudo nas primeiras 6 semanas de vida; - ORT
(Ornithobacterium rhinotracheale). É uma bactéria gram-negativa, com tropismo para as vias respiratórias
superiores, originando a sua evolução problemas locomotores (tenosinovites). Como esta evolução é lenta, e sem
grandes mortalidades na sua primeira fase, a decisão de medicar não é tomada, pelo que ficam lesões crónicas que
explicam as elevadas taxas de rejeição no matadouro. - ENTERITE HEMORRÁGICA: como agente etiológico,
poderemos classificar um adenovírus aviário tipo 2. Em casos agudos da doença, em perús com mais de 4 semanas
de idade, poderão existir mortalidades de cerca 15-20% em 2 -3 semanas. Muitas vezes, não existem sintomas
clínicos, o que provoca imunossupressão e consequentes infecções secundárias por bactérias. - DISBACTERIOSES:
enterites inespecíficas em todas as fases de produção, sobretudo na fase de engorda. - ARTRITES: de origem
multifactorial, de entre as quais poderemos apontar: - Estirpes de aves utilizadas; - Densidades elevadas; - Tipo e
qualidade da cama utilisada; - Ventilação; - Problemas de origem infecciosa.
De referir ainda que a patologia deste tipo de aves sofreu um incremento, sobretudo no campo digestivo, com a
proibição de alguns antibióticos promotores de crescimento, nomeadamente NIFURSOL.
[The most common field pathologies in fattening turkeys]
In the last years, we have verified an increase of pathology in fattening turkeys, what has been the cause for serious
economic damages supported by the economic agents (Integrators) or by the producers.
As causes we can point Management and Infectious problems.
MANAGMENT: - High concentration of production in some geographic areas. - Farms with high density of turkeys
and different age groups. - Ancient buildings, with limited capacity of hygienization. - Inexistence of reproducers in
Portugal. - Lack of Biosecurity rules for the producers.
INFECTIOUS PROBLEMS: - PEMS (Poultry Enteritis Mortality): aetiology unknown. The disease is described by
many researchers, in a general way, and causes are attributed to more than one agent (Coronavirus? Adenovirus?
Enterovirus? Etc.). The pathology detected can be aggravate by secondary bacteria as E.coli, Salmonella, Etc. Main
symptoms in turkeys are diarrhoea, dehydration, anorexia (PIU-PIU disease) and can occur during all production
stages, specially on the first 6 weeks of life. - ORT (Ornithobacterium rhinotracheale): it is a gram-negative
bacterium, with tropism for the superior respiratory tract, originating locomotive problems (tenosinovites) in later
stages. As the evolution of the disease is slow, with low mortality in the first stage, the decision to medicate is
usually not taken, so chronicle injuries remain which explain the high rates of rejection at the slaughterhouse. HEMORRHAGIC ENTERITIS: as aetiological agent, we can classify an aviary adenovirus type 2. In acute cases of
disease, in turkeys with more than 4 weeks of age, mortalities about 15-20% in 2-3 weeks can happen. Many times,
there are no clinic symptoms, what leads to immunosuppressive state, and consequently secondary infections by
bacteria. - DISBACTERIOSES: unspecified Enteritis during all stages of production, mainly in fattening. ARTHRITIS: with multifactorial origin, such as: - Strains of Turkeys used. - High densities. - Type and quality of
the bed used. - Ventilation. - Problems with infectious origin.
Furthermore, this type pathology has suffered an increment over the years, specially on the digestive tract, due to the
prohibition of some grown promoters antibiotics, namely NIFURSOL.
65
Antibiorresistências na flora entérica (Enterococcus spp. e Escherichia coli) de frangos e humanos
Martins da Costa, Paulo
Inst. de Ciências Biomédicas de Abel Salazar, Univ. do Porto. Largo Professor Abel Salazar, 2; 4099-003 Porto. [email protected]
As infecções hospitalares por Enterococcus spp. são um problema emergente devido à sua ubiquidade,
ecorresistência, capacidade para troca de material genético e por possuírem um elevado espectro de resistências
naturais e adquiridas. O nível de resistência aos antibióticos em Escherichia coli tem sido proposto como indicador
da prevalência de antibiorresistências numa determinada população, inferindo a pressão selectiva decorrente da
administração de antibióticos em humanos e espécies pecuárias.
Os esgotos urbanos e os efluentes do abate de aves domésticas contribuem para a disseminação no ambiente
terrestre e aquático de fenótipos antibiorresistentes. Avaliou-se a especificidade e a influência do método de
isolamento na diversidade de perfis de resistência em Enterococcus spp. e em E. coli isolados a partir de amostras de
afluentes, efluentes e lamas recolhidas em Estações de Tratamento de Águas Residuais (ETAR) urbanas e de
matadouros de aves domésticas. Estudou-se igualmente a repetibilidade dos resultados em função da dispersão
temporal numa ETAR urbana.
Foi determinado o perfil de antibiorresistência em 1489 E. coli através da técnica de difusão em agar. No conjunto
das estirpes isoladas nas ETAR urbanas, as taxas mais elevadas de resistência foram encontradas nas grandes
cidades com valores a oscilarem entre 47,1 %, para a tetraciclina, e 0,8 % para o nitrofurantoína. Nas ETAR dos
matadouros de aves domésticas as percentagens de resistência à tetraciclina, ampicilina, estreptomicina e
cotrimoxazol foram, respectivamente, 80,8 %, 55,5 %, 46,0 % e 38,6 %. A resistência à enrofloxacina foi atingiu
17,9. %. Setenta e dois porcento dos isolados eram multi-resistentes. A prevalência de antibiorresistências foi mais
elevada nos matadouros que abatiam frango de produção intensiva. Um total de 1520 Enterococcus spp. foram
igualmente testados.
Em suma, um elevado número de E. coli e de Enterococcus spp. são liberados a partir das ETAR para as águas
superficiais. A elevada frequência de estirpes multi-resistentes e a elevada prevalência de resistências à ampicilina e
tetraciclina são particularmente preocupantes. A avaliação das antibiorresistências em bactérias comensais é crucial
para uma pessoa ou um animal que vão iniciar um tratamento com antibiótico, permitindo uma avaliação detalhada
dos riscos e benefícios decorrente do uso desse antibiótico.
[Antibioresistance in the enteric flora (Enterococcus spp. e Escherichia coli) of poultry and humans]
Enterococci have become an emerging problem because they are ubiquitous bacteria with high resistance to
environmental stress and their ability to rapid acquisition and dissemination of resistance genes. Carriage of
resistance by Escherichia coli has been proposed as an indication of different burden of antibiotic resistance that
may be present in a population, assessing the selection forces due antibiotic prescription in humans and food
producing animals.
Human sewage and effluents from poultry slaughterhouses passing into, or bypassing, sewage systems can disperse
organisms throughout the wider environment, acting as a suitable vehicle for the transmission of resistance genes.
The author has studied the reliability and the accuracy of the method and its sensitivity to isolate Enterococcus spp.
and E. coli for antimicrobial testing, from crude inflow, treated effluent and sludge of urban and poultry
slaughterhouses sewage treatment plants.
A total of 1489 E. coli strains were tested, using the Kirby-Bauer diffusion agar method, regarding their resistance to
ten antibiotics. Among urban strains the highest resistance rates were found in E. coli strains isolated from the
biggest cities sampled with values ranged from 47.1 % for tetracycline to 0.8 % for nitrofurantoin. In poultry
slaughterhouses plants resistance to tetracycline, ampicillin, trimethoprime/sulfamethoxazole and streptomycin was
found in 80.8 %, 55.5 %, 46.0 % and 38.6 % of isolates, respectively. Resistance to enrofloxacin was found to be
17.9 %. Multidrug resistance was present in 72.0 % of isolates. The prevalence of resistance for all antibiotics tested
was higher in conventional broiler than in free range slaughterhouses. A total of 1520 enterococci were also tested.
In conclusion, large quantities of resistant E. coli and Enterococcus spp. are released from municipal wastewater
treatment plants in surface waters. Frequent isolation of multi-resistant strains and high prevalence of ampicillin and
tetracycline resistance are specially warring. Quantifying antimicrobial resistance rates in commenal bacteria is
crucial to a person or an animal about to initiate antibiotic treatment allowing a comprehensive assessment of the
risks and benefits of antimicrobial use.
66
Patologias de campo mais frequentes em frangos de carne
Bica, António
Este trabalho pretende abordar as doenças dos frangos de carne que um técnico de campo encontra com alguma
frequência no seu dia a dia referindo a suas causas, agentes etiológicos, consequências sanitárias e económicas, a
prevenção e o tratamento.
Assim, começaremos por falar das doenças mais frequentes que afectam os pintos logo nos primeiros dias: onfalite,
aspergilose e desidratação.
A Colibacilose, doença causada pela E. coli, será uma das nossas principais referências uma vez que esta bactéria,
saprófita intestinal, é muito frequente, em quase todos os processos patológicos como agente secundário, sendo a
principal responsável pelos prejuízos, na avicultura, devidos a processos infecciosos.
A Doença Infecciosa da Bursa, mais conhecida como Doença de Gumboro será referida com alguma atenção pois
tem afectado as nossas explorações avícolas com regularidade, sendo, actualmente, uma das situações patológicas
que mais prejuízo tem causado aos nossos avicultores.
As situações patológicas mais importantes e frequentes na avicultura industrial são, além das já referidas em cima,
processos mórbidos que afectam essencialmente os aparelhos digestivo e respiratório.
No aparelho respiratório a CRD, a Bronquite Infecciosa e a O.r., são as doenças que encontramos com mais
frequência e ás quais nos referiremos com mais atenção. A Influenza Aviaria, devido ao interesse que actualmente
suscita e a Doença de Newcastle devido ao risco de podermos sofrer um surto a qualquer momento serão, também
alvo de breves referências.
No aparelho digestivo iremos referir a Disbacteriose, a Coccidiose e a Enterite Necrótica por serem os processos
entéricos que encontramos com mais frequência no campo.
[The most common field pathologies in broilers]
This work intends to approach the main broiler diseases frequently found in a technician daily work, relating its
causes, ethological agents, sanitary and economical consequences, prevention and treatment.
Firstly, it will be reviewed the more frequent diseases that affect new born chicks: onfalitis, aspergilosis and
dehydratation. The colibacilosis, a disease caused by Escherichia coli will be mainly referred, once this bacteria, an
intestinal saprofite, is very frequent in almost all the pathologies as a secondary agent and that’s why it is the main
responsible for big losses on the aviculture, due to infectious processes.
The bursa infectious disease, well known as Gumboro disease, will be mentioned with attention, once it regularly
affects our flocks, being nowadays one of the pathological situations that cause more damages in aviculture.
Besides the pathologies already mentioned, others are frequent and important: the morbid processes that affect
essentially digestive and respiratory tract. On respiratory tract, the CRD, the infeccious bronquitis and the ORT, are
the diseases more frequently found and that more attention we shall pay. The Aviary Influenza because of the
growing interest about it and the Newcastle disease due to the imminent spread risk, will also be reviewed. On
digestive tract, the disbacteriosis, coccidiosis and the necrotic enteritis will be referred because they are the mores
frequently found enteric process in the field.
67
Aspectos práticos da osteoporose em galinhas poedeiras
Sousa Nunes, José J.R.
Médico Veterinário. Tel e Fax: + 351 21 087 7105
A osteoporose em galinhas poedeiras, também denominada “Fadiga das Baterias”, ocorre com frequência nos
bandos de produção intensiva (em bateria), sobretudo perto do pico de postura. Trata-se de uma situação clínica
caracterizada pela existência de um número variável de aves imóveis, que rapidamente morrem por desidratação e
fome. Tem na sua base uma deficiência no metabolismo do cálcio, nomeadamente na absorção e mobilização.
Neste trabalho são revistos alguns aspectos fisiopatologicos e clínicos deste processo, bem como os factores prédisponentes e medidas práticas a implementar para a sua prevenção.
[Practical aspects of osteoporosis in laying hens]
Osteoporosis in commercial laying hens, also known as “Caged Layer Fatigue” frequently occurs in highly
productive caged birds, around the peak production period. In a flock, affected birds show difficulties and reluctance
to move and most of them die of hunger and thirst if unassisted.
In this presentation, some clinical and phisiopathological aspects of the disease are described, as well as the practical
measures that should be established for its prevention.
68
Biologia Celular e Molecular
Novas perspectivas sobre a especificidade e modo de ligação de complexos tipo I coesina-doquerina
do Clostridium thermocellum
Fontes, C.M.G.A.1, Dias, F.M.V.1, Carvalho, A.L.2, Prates, J.A.M.1, Nagy, T.3, Gilbert, H.J.3, Davies, G.J.4, Romão,
M.J.2 e Ferreira, L.M.A.1
1 CIISA-Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Técnica de Lisboa, Av. da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa, Portugal
2 REQUIMTE/CQFB, Departamento de Química, Faculdade de Ciências e Tecnologia, Univ. Nova de Lisboa, 2829-516 Caparica, Portugal
3 Department of Biological and Nutritional Sciences, University of Newcastle upon Tyne, Newcastle upon Tyne NE1 7RU, UK
4 Structural Biology Laboratory, Department of Chemistry, University of York, Heslington, York YO10 5DD, UK.
A utilização de complexos multi-enzimáticos para potenciar o sinergismo motivado pela proximidade molecular,
tanto para fomentar a síntese enzimática como para promover a degradação de substratos recalcitrantes, é um tema
em destaque em biologia celular. As bactérias anaeróbias produzem um sistema multi-proteico, denominado por
“celulossoma”, para efectuar uma degradação eficiente da parede celular vegetal. Esta máquina catalítica organiza
um consórcio de várias enzimas sobre uma proteína de agregação multifacetada (denominada CipA) em que os
vários módulos do tipo I coesina se ligam aos módulos doquerina presentes nas unidades enzimáticas. A estrutura
tridimensional do complexo coesina-doquerina do tipo I mostrou que o módulo em folha beta coesina interactua
predominantemente com uma das três hélices identificadas na doquerina. Surpreendentemente, a presença de uma
duplicação da estrutura primária da doquerina manifesta-se numa simetria de grau 2 quase perfeita nesta molécula,
sugerindo que ambas as “metades” da doquerina podem interagir com a coesina de forma similar. Neste trabalho
apresenta-se a estrutura de um complexo tipo I em que os resíduos Ser-45 Thr-46 da doquerina foram mutados para
alanina e que confirma a hipótese anteriormente avançada. Assim, estes dados sugerem que a ligação da doquerina à
coesina se pode efectuar de duas formas diferentes, por interacção de uma ou de outra das “metades” simétricas da
doquerina com o seu parceiro de ligação.
Trabalho financiado pelos projectos POCI/BIA-PRO/2004/59118 e POCI/CVT/2004/61162.
[Novel insights into the binding mode and specificity in type I cohesin-dockerin complexes from
Clostridium thermocellum]
The utilization of organized supramolecular assemblies to exploit the synergistic interactions afforded by close
proximity, both for enzymatic synthesis and for the degradation of recalcitrant substrates, is an emerging theme in
cellular biology. Anaerobic bacteria harness a multi-protein complex, termed the “cellulosome”, for efficient
degradation of the plant-cell wall. This megaDalton catalytic machine organizes an enzymatic consortium upon a
multifaceted molecular scaffold (termed CipA) whose Type I “cohesin” domains interact with corresponding Type I
“dockerin” domains of the enzymes. The crystal structures of the type I cohesin-dockerin complex show that the
beta-sheet cohesin domain interacts predominantly with one of the helices of the dockerin. Significantly, internal
sequence duplication within the dockerin is manifested in a near-perfect internal 2-fold symmetry suggesting that
both “halves” of the dockerin may interact with cohesins in a similar manner. The structure of type I complexes
whose dockerin residues Ser-45 Thr-46 that dominate the hydrogen bonding network with the cohesin at the Cterminal helice where mutated revealed binding through the first half of the dockerin. Together the data confirms
that a dual mode of binding orchestrates the formation of type I cohesin-dockerin complexes.
The financial support (grants POCI/BIA-PRO/2004/59118 and POCI/CVT/2004/61162) are acknowledged.
69
Estrutura e função dos módulos de ligação a carbohidratos CBM30 e CBM44 da celulase bifuncional ctCel9E-Cel44A do Clostridium thermocellum
Guerreiro, C.I.P.D.1, Najmudin, S.2, Carvalho, A.L.2, Bolam, D.N.3, Prates, J.A.M.1, Correia, M.A.S.1, Alves, V.D.1,
Ferreira, L.M.A.1, Romão, M.J.2, Gilbert, H.J.3 e Fontes, C.M.G.A.1
1 CIISA - Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Técnica de Lisboa, Av. Da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa, Portugal
2 REQUIMTE, Departamento de Química, FCT-UNL, 2829-516 Caparica, Portugal
3 School of Cell and Molecular Biosciences, University of Newcastle upon Tyne, The Agriculture Building, Newcastle upon Tyne NE1 7RU,
United Kingdom
A reciclagem do carbono orgânico resultante da acção de celulases e hemicelulases microbianas é um processo
biológico de importância fundamental e que se reveste de um considerável interesse na alimentação animal. Os
sistemas enzimáticos que hidrolisam polissacáridos estruturais contêm módulos não catalíticos que mediam a
ligação das enzimas à parede celular vegetal, que se denominam de módulos de ligação a carbohidratos (CBMs). Os
CBMs desempenham uma função muito importante maximizando a eficiência do processo degradativo. Até hoje
não foram identificados CBMs que se liguem ao xiloglucano, uma das hemiceluloses mais abundantes da parede
celular vegetal que consiste numa cadeia principal de beta-1,4 glucose decorada por resíduos de xilose. Neste
trabalho, demonstra-se que o módulo C-terminal da celulase ctCel9E-Cel44A do Clostridium thermocellum consiste
num novo CBM (designado por CBM44), que se liga com afinidades idênticas à celulose e ao xiloglucano. A
estrutura da CBM44 e do CBM N-terminal da celulase ctCel9E-Cel44A, o CBM30, mostra que estes módulos
possuem um enrolamento tipo β-sanduíche, possuindo uma face côncava e uma face convexa. Estudos de
metagénese informados pelas duas estruturas, permitiram evidenciar que os ligandos se alojam nas faces côncavas
dos CBMs. Finalmente a posição e a orientação dos amino ácidos aromáticos posicionas na fenda de interacção com
os polissacáridos, explicam a possibilidade destes CBMs interagirem com igual afinidade para cadeias de beta-1,4
glucose decoradas (xiloglucano) ou não (celulose).
[Functional and structural insights of CBM30 and CBM44 from bi-functional cellulase ctCel9ECel44A from Clostridium thermocellum]
The recycling of photosynthetically fixed carbon by the action of microbial plant cell wall hydrolases is a
fundamental biological process that is integral to one of the major geochemical cycles and, in addition, has
considerable industrial potential. Enzyme systems that attack the plant cell wall contain non-catalytic carbohydratebinding modules (CBMs) that mediate attachment to this composite structure and play a pivotal role in maximizing
the hydrolytic process. Although xyloglucan, which comprises a backbone of β-1,4-glucan decorated primarily with
xylose residues, is a key component of the plant cell wall, CBMs that bind to this polymer have not been identified.
Here we show that the C-terminal domain of the modular Clostridium thermocellum enzyme ctCel9E-Cel44A
(formerly known as CelJ) comprises a novel CBM (designated CBM44) which binds with equal affinity to cellulose
and xyloglucan. We also show that xyloglucan recognition is a general feature of CBMs that bind to single cellulose
chains. The crystal structure of CBM44 and the other CBM (CBM30) in ctCel9E-Cel44 display a β-sandwich fold,
which contains a convex and concave face. The concave face, or cleft, of both CBMs contains a hydrophobic
platform comprising three tryptophan residues that can accommodate five glucose residues. The orientation of these
aromatic residues is such that the bound ligand would adopt the twisted conformation displayed by
celluloligosaccharides in solution. Mutagenesis studies confirm that the cleft comprises the ligand binding site and
that the hydrophobic platform plays a pivotal role in ligand recognition. In contrast to other CBMs that bind to
single polysaccharide chains, the polar residues in the binding cleft of CBM44 play only a minor role in ligand
recognition. Informed by the structure of CBM44 and the other cellulose binding modules, the mechanism by which
these proteins are able to recognise linear and decorated β-1,4-glucans is discussed.
70
O domínio C-terminal da Celulase 5D de Clostridium thermocellum apresenta actividade esterásica
e capacidade de ligação a vários polissacáridos
Pires, V.M.R.*, Goyal, A., Prates, J.A.M., Ferreira, L.M.A. e Fontes, C.M.G.A.
CIISA - Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Técnica de Lisboa, Av. da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa, Portugal.
A parede celular vegetal é uma fonte natural de celulose, hemicelulose e lenhina. Entender como estes polímeros são
degradados torna-se importante desenvolver aplicações biotecnológicas nas áreas agro-alimentares, industriais, em
nutrição animal, etc. O xilano representa uma das maiores fracções de hemicelulose que constituem a matriz da
parede celular vegetal. Este polissacárido é constituído por unidades de D-xilose conectadas por ligações β-1,4
decoradas com resíduos de arabinosil, glucuronosil e acetil. A hidrólise do xilano requer a cooperação de diversas
enzimas incluindo as esterases. Baseadas na sua sequência homóloga as esterases de carbohidratos (CEs) foram
agrupadas em 14 famílias. Neste trabalho clonou-se uma esterase da família 2 (CE2), que constitui um dos módulos
da celulase 5d (Cel5D) do Clostridium thermocellum. O domínio C-terminal da Cel5D (fragmento de 990 pb) foi
amplificado através da PCR e clonado no vector de expressão procariótico pET-21a. Verificou-se que a proteína
recombinante (CE2) além de apresentar actividade esterásica na presença do substrato xilano acetilado na sua forma
natural ou artificial, se liga a vários carbohidratos. A CE2 interage fortemente com a hidroxietilcelulose, o
glucomanano, o β-glucano de cevada e o liquenano. Por mutagénese dirigida procurou-se compreender quais os
resíduos responsáveis pela actividade esterásica ou de ligação a carbohidratos (CBM). Foram identificados os
aminoácidos Ser 128, Asp 222 e His 307 como triada catalítica. Além disso, as proteínas mutantes D222A e H307A
demonstraram uma redução significativa na sua actividade como CBM, enquanto a S128A apresentou uma melhoria
na sua afinidade para os polímeros de glucose de ligação do tipo β-1,3-1,4. A presença de 0.2% do ligando
(liquenano) conduziu à redução da actividade esterásica para valores inferiores a 20%. Os resultados das
experiências efetuadas sugerem que a CE2 apresenta características bioquímicas únicas, uma vez que, a sua
actividade catalítica e a sua função como CBM são determinadas pelos mesmos aminoácidos.
*Bolseira da Fundação para a Ciência e Tecnologia, MCES, Refª SFRH/BD/12562/2003
[The C-terminal Domain Cellulase 5D of Clostridium thermocellum displays esterase activity while
retaining a carbohydrate-binding function]
Plant cell walls are a natural source of cellulose, hemicellulose and lignin. Understanding how these polymers are
degraded is important for applications such as pulp bleaching, food and feed processing and fuel production. Xylan,
the most abundant hemicellulose, consists of β-1,4 linked D-xylose polymer containing side branches of arabinosyl,
glucuronosyl and acetyl residues. Biodegradation of xylan thus requires co-operation of several enzymes including
esterases. Carbohydrate Esterases (CEs) have been grouped into 14 families based on sequence homology. The most
abundant native forms of xylan are acetylated-xylans and arabinoxylans found in hardwood and softwood,
respectively. Acetyl-xylan esterases cleave ester bonds and remove acetyl moieties from xylan. These esterases are
present in many bacteria and fungi and many occur in multi-enzyme complexes. We have cloned the family 2
carbohydrate esterase (CE2) module of cellulase 5d (Cel5D) of the thermophilic anaerobic bacterium Clostridium
thermocellum. The C-terminal domain of Cel5D (a 990-bp fragment) was amplified through PCR and cloned into an
expression vector pET-21a. Interestingly the recombinant protein (CE2) was shown to display activity towards
acetylated-birchwood xylan and p-nitrophenyl acetate while retaining an expressive carbohydrate-binding function.
CE2 binds strongly to hydroxyethylcellulose, glucomannan, barley β-glucan and lichenan. A comprehensive
mutagenesis study was implemented to identify residues responsible for esterase and CBM activity. The data
identified residues Ser 128, Asp 222 and His 307 as the catalytic triad. In addition, mutant proteins D222A and
H307A displayed significantly reduced CBM activity, while mutation of CE2 S128A resulted in an improved
affinity for β-1,4 and β-1,3-1,4 glucose polymers. Inhibition experiments suggest that in the presence of 0,2% of the
ligand (lichenan), esterase activity is reduced to values below 20%. Taken together the data suggests that CE2
present unique biochemical properties displaying both enzymatic and carbohydrate binding activities orchestrated by
the same amino acids.
* Supported by grant SFRH/BD/12562/2003, from the Fundação para a Ciência e Tecnologia, MCES, Portugal.
71
Estrutura tridimensional de propriedades bioquímicas da Manosidase 5A do Cellvibrio mixtus
Dias, F.M.V.1*, Prates, J.A.M.1, Centeno, M.S.J.1, Vincent, F.2, Pell, G.3, Tailford, L.E.3, Davies, G.J.2, Gilbert,
H.J.3, Ferreira, L.M.A.1 e Fontes, C.M.G.A. 1
1 CIISA-Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Técnica de Lisboa, Av. da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa, Portugal;
2 Structural Biology Laboratory, Department of Chemistry, University of York, Heslington, York YO10 5YW, United Kingdom;
3 School of Cell and Molecular Biosciences, University of Newcastle upon Tyne, Newcastle upon Tyne, NE1 7RU, United Kingdom.
Os polissacáridos vegetais, presentes na parede celular vegetal, são normalmente degradados por um reportório
enzimático complexo, constituindo os açúcares libertados uma preciosa fonte de carbono e de energia para um
vários organismos. O manano representa uma das hemiceluloses da parede celular vegetal, sendo constituído por
uma cadeia de β(1,4)-D-manose, que se apresenta por vezes sob a forma de glucomanano, quando a cadeia principal
contem unidades de D-glucose ligadas à D-manose por ligações β(1,4), ou sob a forma de galactomanano ou de
galactoglucomanano se a cadeia principal se encontrar ramificada em vários pontos, via α-1,6, por resíduos de Dgalactose. A hidrólise da cadeia principal é efectuada por endo-1,4-β-mananases (EC 3.2.1.78), sendo cadeias
laterais removidas por α-galactosidases (EC 3.2.1.22). Os mano-oligossacáridos produzidos por estas enzimas são
posteriormente hidrolisados por β-manosidases (EC 3.2.1.25). Com base na classificação das sequências primárias
das glicosil hidrolases as endo-1,4-β-mananases agrupam-se nas famílias de glicosil hidrolases, GH5 e GH26, as αgalactosidases nas famílias GH4, GH27, GH36 e GH57, e as β-manosidases nas famílias GH1 e GH2. O Cellvibrio
mixtus, uma bactéria aeróbica do solo, é um dos organismos responsáveis pela hidrólise dos polissacáridos vegetais.
No entanto, surpreendentemente, o seu reportório enzimático, bem como os mecanismos desenvolvidos por esta
bactéria para a degradação dos polissacáridos vegetais, encontram-se pouco estudados. Neste trabalho, o gene
codificador de uma β-manosidases da família GH5 do C. mixtus (CmMan5A), foi clonado, caracterizado e a
estrutura tridimensional da CmMan5A determinada. Esta enzima tem capacidade para hidrolisar as terminações não
reduzidas dos mano-oligossacáridos e polissacáridos, libertando manose, uma actividade não demonstrada
anteriormente nesta família de glicosil hidrolases. Verifica-se que esta β-manosidases actua tanto nas regiões
cristalinas como nas regiões amorfas do manano. A sua estrutura tridimensional revelou os condicionantes
moleculares que determinam a sua actividade como exo-enzima. A CmMa5A apresenta uma região glicona (-1),
específica para manose, e duas regiões agliconas (+1 e +2). A região +1 não apresenta afinidade para as cadeias
laterais de D-galactose, e possui fraca afinidade para a glucose ao passo que a região +2 apresenta afinidade para
resíduos de manose esterificados.
* Bolseiro da Fundação para a Ciência e Tecnologia, MCES, Refª Praxis XXI/BD/21250/99.
[Crystal Structure and Biochemical Properties of Mannosidase 5A from Cellvibrio mixtus]
The plant cell wall represents the major source of organic carbon within the biosphere. The polysaccharides
contained within these composite structures are hydrolyzed by an extensive repertoire of glycoside hydrolases, and
the sugars released are then utilized as carbon and energy sources by a range of organisms. Mannose-containing
polysaccharides are an important component of the plant cell wall and are present mainly as galactomannans in
which the β-1,4-linked mannopyranoside backbone is decorated with galactosyl residues at the O-6 position and
glucomannan that contains a heterogeneous backbone of β-1,4-linked glucose and mannose sugars. The polymeric
backbone of these polysaccharides is hydrolyzed by endo-β-1,4-mannanases (EC 3.2.1.78), whereas the side chains
of galactomannan are removed by α-galactosidases (EC 3.2.1.22). The mannooligosaccharides generated by these
enzymes are further hydrolyzed by β-mannosidases (EC 3.2.1.25), which are exo-acting glycoside hydrolases that
catalyze the removal of the nonreducing end β-D-mannose. In the sequence-based classification of glycoside
hydrolases endo-mannanases are found in families GH5 and GH26 with β-mannosidases located in families GH1
and GH2. The metabolism of the hydrolysis products of galactose containing mannans and glucomannans, by
aerobic soil bacteria such as Cellvibrio mixtus, is poorly understood. This is surprising, considering the extensive
attention that the hydrolysis of plant cell wall polysaccharides has received. Here we report the cloning,
characterization, and three-dimensional structure of the Cellvibrio mixtus GH5 β-mannosidase (CmMan5A). This
enzyme releases mannose from the nonreducing end of mannooligosaccharides and polysaccharides, an activity not
previously observed in this enzyme family. CmMan5A contains a single glycone (-1) and two aglycone (+1 and +2)
sugarbinding subsites. The -1 subsite displays absolute specificity for mannose, whereas the +1 subsite does not
accommodate galactosyl side chains but will bind weakly to glucose. The +2 subsite is able to bind to decorated
mannose residues. CmMan5A displays similar activity against crystalline and amorphous mannans, a property rarely
attributed to glycoside hydrolases. The 1.5 Å crystal structure reveals the structural basis for the exoactivity of
CmMan5A; extended loops and a tryptophan residue impose a steric block at the edge of the -1 subsite, preventing
substrate access to the distal glycone-binding sites.
* Supported by grant Praxis XXI/BD/21250/99, from the Fundação para a Ciência e Tecnologia, MCES, Portugal.
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Estudo imunohistoquímico da inervação peptidérgica da glândula mamária da gata
Pinho, M.S.1, Carreira, M.1 e Gulbenkian, S.2
1 CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária, Lisboa, Portugal
2 Instituto Gulbenkian de Ciência, Oeiras, Portugal
Além dos neurotransmissores “clássicos” noradrenalina e acetilcolina, as fibras nervosas da glândula mamária
contêm outros mediadores químicos, nomeadamente neuropéptidos. Embora o papel destes péptidos na mama não
esteja ainda caracterizado, admite-se que possam intervir na regulação neuronal do órgão e influenciar mesmo o seu
crescimento neoplásico. No que se refere à glândula mamária da gata, não existe qualquer estudo publicado sobre
esta matéria. O trabalho que a seguir se apresenta tem assim como objectivo caracterizar a distribuição dos nervos
peptidérgicos na glândula mamária da gata por técnicas de imunohistoquímica.
As amostras utilizadas neste estudo foram obtidas do último par de glândulas mamárias de gatas adultas sem sinais
de lactação. Os tecidos foram fixados no fixador de Zamboni e as reacções imunohistoquímicas efectuadas em
cortes de criostato, usando as técnicas da estreptavidina-biotina e anticorpos primários dirigidos contra os seguintes
neuropéptidos: péptido C-terminal do neuropéptido Y (CPON), péptido relacionado com o gene da calcitonina
(CGRP), substância P (SP), péptido intestinal vasoactivo (VIP), neuropéptido K (NPK) e péptido histidina
isoleucina (PHI). Para marcar a inervação geral e os nervos noradrenérgicos da glândula utilizaram-se ainda
anticorpos dirigidos contra o marcador geral de células nervosas PGP 9.5 e a tirosina hidroxilase, respectivamente.
Os resultados obtidos mostram que a inervação geral da glândula mamária da gata é pouco expressiva e associada
predominantemente à vasculatura arterial do órgão. No interior dos lóbulos mamários, entre os alvéolos, as fibras
nervosas são raras ou inexistentes. As fibras peptidérgicas e noradrenérgicas são escassas e ocorrem sobretudo ao
redor de artérias e arteríolas. Os resultados mostram ainda que a papila mamária exibe uma inervação mais rica, sem
ser no entanto abundante. Nesta região, as fibras nervosas, isoladas ou agrupadas em pequenos feixes, estão
disseminadas pela derme. Algumas destas fibras dérmicas estão em relação com vasos sanguíneos e anexos
cutâneos; outras situam-se logo por debaixo da epiderme, nela penetrando por vezes. Não se observam fibras
nervosas na vizinhança dos ductos galactóforos. As fibras que inervam estruturas não vasculares da papila exibem
imunorreactividade para os neuropéptidos sensoriais CGRP, SP e NPK, mas não para o CPON, VIP e PHI.
Estes resultados sugerem que a inervação da glândula mamária da gata, incluindo o seu componente peptidérgico,
está especialmente ligada à regulação do fluxo sanguíneo local. A presença de neuropéptidos sensoriais em fibras
nervosas da papila aponta no sentido de que estes péptidos desempenham um papel nas vias aferentes do reflexo de
ejecção do leite.
[Peptidergic innervation of the feline mammary gland: an immunohistochemical study]
In addition to the classical neurotransmitters noradrenaline and acetylcholine, mammary gland nerves also contain
other types of mediators including several neuropeptides. Although the role of these peptides in the mammary gland
is still unknown, they are thought to play a role in the neuronal regulation of the gland and even influence its
neoplastic growth. The occurrence of peptide-containing nerves in feline mammary tissues has not so far been
reported. Thus, we describe here the distribution of the peptidergic innervation of the mammary gland of the cat by
immunohistochemical techniques. In addition, the general and the noradrenergic innervations are examined using
PGP 9.5 and tyrosine hydroxylase (TH) immunoreactivities as markers, respectively.
Tissue specimens from the caudal mammary glands and nipples were obtained from adult, non-lactating, female
cats. Tissues were fixed by immersion in Zamboni’s solution and processed for cryostat sectioning. Sections were
immunostained using a streptavidin-biotin immunofluorescence method. The following neuropeptides were
detected: C-flanking peptide of neuropeptide Y (CPON), calcitonin gene-related peptide (CGRP), substance P (SP),
vasoactive intestinal peptide (VIP), neuropeptide K (NPK) and peptide histidine isoleucine (PHI).
Our results show that the overall innervation of the cat mammary gland is exceptionally low and primarily
associated with the arterial vasculature. PGP 9.5-positive nerve fibres are rarely found among the alveoli in the
secretory parenchyma. Peptide- and TH-containing nerve fibres are scarce and almost exclusively associated with
arteries and arterioles. The results show also that the nipple is not richly innervated, although it displays a greater
amount of nerve fibres than the parenchyma of the mammary gland. In the dermis of the nipple, nerve fibres are
seen as components of thin nerve bundles or as freely coursing axons. Some of these dermal nerve fibres are found
in association with blood vessels and skin appendages; others are seen immediately beneath the epidermis and
sometimes even within it. No nerve fibres were detected in association with lactiferous ducts. Nerve fibres supplying
nonvascular structures of the nipple express immunoreactivity for the sensory neuropeptides CGRP, SP
and NPK but not for CPON, VIP and PHI.
Our results indicate that the innervation of the feline mammary gland is mainly affiliated with the vasculature and
comprises peptidergic nerves which may be involved in the regulation of local blood flow. The presence of sensory
neuropeptides in nerves supplying the mammary nipple suggests that these peptides may play a role in the afferent
pathway of the milk ejection reflex.
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Células perivasculares fluorescentes na retina do murganho: um novo tipo celular relacionado com
a manutenção da homeostasia do olho
Mendes-Jorge, L.1, Llombart, C.2,3, Alexandre-Pires, G.1, Carretero, A.2,3, Melgarejo, V.3, Esperança-Pina, A.4 e
Ruberte, J.2,3
1 CIISA-FMV-UTL, Av. da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa; 2 Departamento de Sanidad Animal e Anatomia-Facultad de Medicina
Veterinária-Universidad Autónoma de Barcelona-Espanha; 3 Centro de Biotecnologia Animal e Terapia Genética-Universidad Autónoma de
Barcelona-Espanha;4 Departamento de Anatomia-Faculdade de Ciências Médicas-Universidade Nova-Lisboa
Mato et al. (1986) observaram um tipo de células, existentes no espaço de Virchow-Robin da microvasculatura
cerebral, que designaram por “Fluorescent Granular Perithelial cells” ou células Mato. Estas células, postas em
evidência, em primeiro lugar, pelo facto de exibirem uma marcada autofluorescência, foram caracterizadas ao longo
dos anos, relativamente à sua morfologia, localização anatómica e imunofenótipo, bem como às principais funções
que desempenham a nível do Sistema Nervoso Central. Para além da sua notável capacidade de fagocitose e
pinocitose, e da possibilidade de captação e acumulação de lípidos, proteínas e de uma série de outros produtos
finais de degradação, são também conhecidas as suas importantes funções de imunovigilância, tendo Hickey e
Kimura (1998) demonstrado o seu papel como células apresentadoras de antigenes. Mais recentemente, Williams et
al. (2001) estudaram o envolvimento destas células, como alvo preferencial, nas infecções por HIV (human
immunodeficiency virus) e SIV (simian immunodeficiency virus).
Os autores, neste trabalho, descrevem, pela primeira vez, uma população de células existentes na retina do
murganho que, pelas suas características, podem ser consideradas similares às células Mato referidas.
Retinas de murganhos CD1 foram estudadas por meio de Microscopia Laser Confocal e de Microscopia Electrónica
de Transmissão. Assim, foi possível observar que estas células apresentam autofluorescência devido à presença de
numerosos corpos de inclusão no seu citoplasma e que, em animais alimentados com uma dieta hiperlipídica, o
número destes corpos de inclusão aumenta consideravelmente. De igual modo, relativamente à sua localização,
observou-se que estas células, de forma estrelada, se encontram justapostas aos vasos sanguíneos da retina,
envolvendo-os com os seus prolongamentos, situando-se no espaço perivascular, entre a membrana basal destes e a
membrana glial dos astrocitos. Estas células apresentam à superfície da sua membrana citoplasmática vários
epitopos comuns aos macrófagos (F4/80, BM-8, CD11b). Para além disso, possuem também “scavenger receptors
class A”, responsáveis pela sua particular capacidade de captação de HRP (horseradish peroxidase) e LDL (low
density lipoprotein), quando administradas endovenosamente.
Atendedo às importantes funções atribuidas a estas células no cérebro, os autores fazem uma chamada de atenção
para estas células perivasculares fluorescentes da retina, particularmente no que diz respeito à sua importante
capacidade de captação de macromoléculas de origem endógena ou exógena e para o seu papel na manutenção da
homeostasia do olho.
[Perivascular fluorescent cells in the mouse retina: a new cellular type related with the maintenance
of the eye homeostasis]
Mato et al. (1981) noted the presence of a new type of perivascular cells, situated in the Virchow-Robin space of cerebral
microvasculature, witch they named Fluorescent Granular Perithelial (FGP) cells. These cells were first identified by their
intense autofluorescence, and for the last decade, they have been characterized regarding their morphology, anatomical
localization and immunophenotype, as well as their putative functions in the Central Nervous System. Beyond their ability
to perform phagocytosis and pinocytosis, and their marked uptake and concomitant accumulating capacity of lipids,
proteins and other degradation end products, it is well defined their important immune surveillance role, having Hickey e
Kimura (1998) demonstrated that they are antigen presenting cells. Williams et al. (2001), more recently, studied the
involvement of these perivascular cells, as primary target, in HIV (human immunodeficiency virus) and SIV (simian
immunodeficiency virus) infection.
In this work, the authors describe, for the first time, a cell population present in the mouse retina that for its characteristics
can be classified as the equivalent to the mentioned Mato’s FGP cells. Mouse CD1 retinas were studied by means of Laser
Confocal Microscopy and Electron Transmission Microscopy. Autofluorescence was clearly observed, due to the presence
of numerous inclusion bodies in the cytoplasm of these perivascular cells. In animals fed with high fat diets, the number of
inclusion bodies increases considerably. Concerning their localization, these cells appear apposed to the retinal vessels,
extending long cytoplasmatic projections that enwrap them, lying in the perivascular space, between the blood vessels
basement membrane and the glia limitans of astrocytes. Furthermore, they are provided with several epitopes common to
macrophages (F4/80, BM-8 and CD11b). They also present scavenger receptors class A, responsible for their particular
uptake capacity of lipids or injected HRP (horseradish peroxidase) and LDL (low density lipoprotein).
According to the important functions attributed to the Mato’s FGP cells in the brain, the authors discuss these retinal
fluorescent perivascular cells, particularly with regard to their functions as cells with a potent uptake capacity of
endogenous and exogenous substances and moreover with an important role in the maintenance of the homeostasis of the
eye.
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Validação de um modelo experimental de olho isolado de coelho para estudo da regulação da
circulação ocular
Delgado, E.1, Marques-Neves, C.2, Rocha, I.2, Sales-Luís, J.1 e Silva-Carvalho, L.2
1 Departamento de Clínica, CIISA, Faculdade de Med. Veterinária, Av.da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa, Portugal.
2 Instituto de Fisiologia, Faculdade de Medicina de Lisboa, Av. Prof. Egas Moniz, 1649-028 Lisboa, Portugal
Introdução: Várias doenças com elevada incidência na população humana afectam a circulação ocular, tais como a
retinopatia diabética, o glaucoma e o síndrome vasospástico, o que explica a necessidade de uma melhor
compreensão da regulação da circulação ocular. O objectivo deste estudo foi a criação de um modelo experimental
de olho isolado de coelho que abolisse o controle nervoso do fluxo sanguíneo ocular, para ajudar a clarificar os
mecanismos de controlo locais independentemente de outras interferências presentes num modelo in vivo. Para
validar o nosso modelo testamos as suas respostas na presença de diferentes substâncias vasoactivas de efeitos
conhecidos.
Materiais e Métodos: Artérias oftálmicas externas de cabeças de coelho (n=20) foram canuladas e perfundidas com
uma solução de tirode morno com o auxílio de uma bomba de perfusão contínua (120 µl/min). O catéter de
polipropileno de três vias foi ligado a um transdutor de pressão para avaliar o efeito da pressão intraluminal como
uma medida da resistência vascular total. A pressão de perfusão foi mantida constante a um valor aproximado de 16
mm Hg, e obtiveram-se curvas-resposta após a injecção intraarterial de drogas adrenérgicas agonistas. Todos os
procedimentos experimentais respeitaram as leis Nacionais e Europeias da experimentação animal.
Resultados: Após a injecção intraarterial de fenilefrina verificaram-se aumentos da pressão de perfusão crescentes
de acordo com a dose (25, 250 e 2500 µg/ml). As respostas vasoconstritoras induzidas pela fenilefrina (250 µg/ml)
foram inibidas pela administração de fentolamina (6 mg/ml) (bloqueador α1,2), bem como pela administração de
prazozina (0.5 mg/ml) (bloqueador α1) e de labetalol (5 mg/ml) (antagonista não-selectivo αβ-adrenérgico).
Conclusões: Este estudo identifica pela primeira vez num modelo experimental de olho isolado de coelho os
receptores α-adrenérgicos como sendo responsáveis pela vasoconstrição e os receptores β-adrenérgicos como
responsáveis pela vasodilatação na artéria oftálmica externa e seus colaterais. Conjuntamente com estudos
anteriores, os nossos resultados demonstram que a inervação simpática exerce uma vasoconstrição potente mediada
pelos receptores adrenérgicos α1 na vasculatura ocular do coelho. Uma vez que o controlo nervoso foi abolido pela
morte, este modelo in vitro elimina a interferência de estímulos com origem no exterior do globo ocular, através do
sistema nervoso central e autonómico. Assim sendo, os resultados obtidos são devidos a mecanismos de controlo
locais. A análise das alterações na pressão de perfusão devidas às injecções intra-arteriais destes neurotransmissores
autonómicos valida este modelo e demonstra a sua fiabilidade.
Financiamento: CIISA (Centro de Investigação Interdisciplinar em Sanidade Animal).
[Validation of an experimental model of isolated rabbit eye for the study of the control of ocular
circulation]
Introduction: Various diseases affecting eye circulation, such as diabetic retinopathy, glaucoma and vasospastic syndrome,
are widespread among human population, which explains the need for a better understanding of the control of ocular
circulation. We aimed to create an experimental model of isolated rabbit eye that abolished the neural control of blood
flow in the eye, to help clarifying the local regulatory mechanisms independently of other interferences present in an in
vivo model. To validate our model we tested its reactivity in the presence of different vasoactive substances of known
effects.
Materials & Methods: Rabbit external ophthalmic arteries (n=20) in a head-mounted preparation were cannulated and
perfused with warmed tyrode delivered to the catheter by continuous intravenous infusion apparatus (120 µl/min). The
three-way polypropylene catheter was further connected to a pressure transducer and the effect of intraluminal pressure as
a measure of total vascular resistance was assessed. The perfusion pressure was held constant at approximately 16 mm Hg.
Concentration-response curves to different constrictor and dilator agonists were obtained. All the experimental procedures
conformed to the National and European laws on animal experimentation.
Results: The arteries constricted in response to intraarterial delivered growing concentrations of phenylephrine (25, 250
and 2500 µg/ml). Evoked vasoconstrictor responses with phenylephrine (250 µg/ml) were inhibited by intraarterial
administration of α1,2-adrenergic antagonist phentolamine (6 mg/ml), as well as the selective α1-adrenergic antagonist,
prazozin (0.5 mg/ml) and non-selective αβ-adrenergic antagonist, labetalol (5 mg/ml).
Conclusions: This study identifies α-adrenergic receptors type as responsible for sympathetically evoked vasoconstriction
and β-adrenergic receptors type as responsible for vasodilation in external ophthalmic artery and its collateral arteries, for
the first time in a model of perfused isolated rabbit eye. Together with previous studies our findings show sympathetic
innervation exerts potent α1-adrenoceptor mediated vasoconstriction in the rabbit’s eye vasculature. Since the neural
control was abolished by death, this in vitro model abolishes the interference of stimuli originating outside the ocular
globe, through the central nervous system and the autonomous nervous system, proving that the changes were due to local
mechanisms. The analysis of the changes in perfusion pressure due to the injection of these neurotransmitters intraarterially validates this experimental model and shows its reliability.
Support: CIISA (Centro de Investigação Interdisciplinar em Sanidade Animal).
75
Vasomotricidade intrínseca da artéria oftálmica externa do coelho
Delgado, E.1, Marques-Neves, C.2, Rocha, I.2, Sales-Luís, J.1 e Silva-Carvalho, L.2
1 Departamento de Clínica, CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária, Alameda da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa, Portugal
2 Instituto de Fisiologia, Faculdade de Medicina de Lisboa, Av. Prof. Egas Moniz, 1649-028 Lisboa, Portugal
Introdução: A circulação retiniana é autoregulada. A circulação coroideia é controlada pela sua inervação
autonómica e, segundo alguns autores, também possui autoregulação (Hardy et al., 2000). Neste estudo
caracterizamos a reactividade da vascularização ocular do coelho num modelo experimental de olho isolado.
Materiais e Métodos: Foram utilizados 20 coelhos neozelandeses híbridos de ambos os sexos. A artéria oftálmica
externa foi exposta e canulada com um tubo de polipropileno de 0.6 mm de diâmetro externo. O catéter de 3 vias foi
ligado a uma bomba de perfusão contínua (120 µl/min) e a um transdutor de pressão. A pressão de perfusão foi
mantida constante (aproximadamente 16 mm Hg) e foi avaliado o efeito da pressão intraluminal como uma medida
da resistência vascular total. Todos os procedimentos experimentais respeitaram as leis Nacionais e Europeias da
experimentação animal.
Resultados: Sem se administrar nenhum fármaco, e mantendo constante a pressão de perfusão, observou-se
vasomotricidade intrínseca durante um período de tempo que oscilou entre os 13 e os 120 minutos (média 43
minutos, desvio padrão (SD) 29). As artérias contraíram e dilataram numa tentativa de manter uma perfusão
razoável para o globo ocular, apesar de o animal já estar morto há um período de tempo variável de 1 a 3 horas. A
vasomotricidade intrínseca provocou oscilações na pressão que variaram entre um valor médio de 8 mm Hg (SD
6.4) e 21 mm Hg (SD 7.9), o que se traduziu numa diferença de amplitude de 13 mm Hg (62%). A pressão de
perfusão obtida a partir da artéria oftálmica externa evidenciou oscilações com frequência média de 0.05 Hz (SD
0.05 Hz), que não foram devidas a artefactos da bomba de infusão.
Conclusões: Este estudo identifica, pela primeira vez, a presença de autoregulação na artéria oftálmica externa do
coelho e seus colaterais, num modelo de olho isolado. Este modelo in vitro elimina as interferências de estímulos
com origem no sistema nervoso central e autonómico, logo consegue garantir que a vasomotricidade intrínseca
observada depende de mecanismos reguladores locais. Esta resposta pode ser o reflexo de actividade motora
espontânea da coróide, uma vez que o olho de coelho constitui um bom modelo para estudos coroideus, devido à sua
circulação retiniana merangiótica. Estes resultados são consistentes com a hipótese de que existe autoregulação
coroideia, que pode ser devida a mecanismos miogénicos e/ou endoteliais. São necessários estudos adicionais para
clarificar este assunto.
Financiamento: CIISA (Centro de Investigação Interdisciplinar em Sanidade Animal).
[Intrinsic vasomotricity of the rabbit external ophthalmic artery]
Introduction: Retinal blood flow is autoregulated. Choroidal blood flow is controlled by autonomic innervation and
according to some authors, it is also autoregulated (Hardy et al., 2000). In this study we characterized the reactivity
of rabbit ocular vasculature to intraluminal pressure by perfusing the feeding external ophthalmic artery in a head
mounted preparation.
Materials & Methods: Twenty hybrid neozeland rabbits of either sex were used. The external ophthalmic artery was
exposed and a 0,6 mm outside diameter polypropylene tube was placed in the vessel. The three-way catheter was
connected to a continuous intravenous infusion apparatus (120 µl/min) and to a pressure transducer. The perfusion
pressure was held constant at approximately 16 mm Hg, and the effect of intraluminal pressure as a measure of total
vascular resistance was assessed. All the experimental procedures conformed to the National and European laws on
animal experimentation.
Results: Without any drug administration, intrinsic vasomotricity was observed during a period of time ranging from
13 to 120 minutes (mean 43 minutes, standard deviation (SD) 29). Arteries constricted and dilated in an attempt to
maintain a reasonable perfusion to the eye, in spite of the animal being already dead for a period that ranged from 1
to approximately 3 hours. The intrinsic vasomotricity made the pressure vary between a medium value of 8 mm Hg
(SD 6.4) and 21 mm Hg (SD 7.9), which results in a pressure difference of 13 mm Hg amplitude (62%) without any
drug administration. Basal perfusion pressure recorded from the external ophthalmic artery showed oscillations of
0.05 Hz medium frequency (SD 0.05 Hz), which were not due to artefacts from the infusion pump because they
eventually faded away.
Conclusions: This study provides the first direct evidence of autoregulatory properties in the rabbit external
ophthalmic artery and its collaterals in an isolated eye model. This in vitro model abolishes the interference of
stimuli originating through the central and the autonomous nervous systems, therefore proves that the intrinsic
vasomotricity depends on local regulatory mechanisms. This response may reflect spontaneous choroidal vasomotor
activity, since the rabbit eye is a good model for choroidal studies, due to its merangiotic retina.These results are
consistent with the hypothesis that there is autoregulation in the choroid, which may be due to myogenic tone and/or
endothelial regulation. Further studies are required to further clarify this issue.
Support: CIISA (Centro de Investigação Interdisciplinar em Sanidade Animal).
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A utilização de hemicelulases recombinantes para melhorar o valor nutritivo de dietas à base de
milho e soja para frangos de carne
Centeno, M.S.J.1, Ponte, P.I.P.1, Fontes, C.M.G.A.1, Soares, M.C.2, Gilbert, H.J.3 e Ferreira, L.M.A.1
1 CIISA-Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Técnica de Lisboa, Av. da Universidade Técnica,1300-477 Lisboa, Portugal;
2 Istituto Superior de Agronomia, Universidade Técnica de Lisboa, Tapada de Ajuda, 1349-017 Lisboa;
3 School of Cell and Molecular Biosciences, Univ. of Newcastle upon Tyne, The Agriculture Building, Newcastle upon Tyne NE1 7RU, UK.
O milho e a soja constituem os ingredientes mais comuns em dietas para animais monogástricos. Apesar do milho
apresentar poucos factores anti-nutritivos, a soja pode conter níveis consideráveis de galactanos, mananos ou
oligossacarídeos da série rafinose, causadores de perturbações digestivas severas quando ingeridos. As celulases e
xilanases são bastante eficazes no melhoramento do valor nutritivo de dietas à base de cevada, trigo ou centeio para
frangos de carne, por hidrolizarem glucanos e arabinoxilanos solúveis. Foi efectuado um estudo para identificação
das actividades enzimáticas exógenas mais importantes na diminuição dos efeitos nocivos associados à ingestão de
polissacarídeos solúveis da soja. Os resultados mostraram que as aves alimentadas com dietas farinadas à base de
milho e soja, suplementadas com a mistura enzimática Ronozyme® VP, apresentaram uma melhoria no peso
corporal final, quando comparado com as aves que receberam os preparados enzimáticos Roxazyme® G200 ou
Alpha-Gal® 1000 (P=0.08). Ficou demonstrado que o Ronozyme® VP tem elevadas actividades galactanásicas e
mananásicas. Surpreendentemente esta mistura enzimática ou as hemicelulases recombinantes, mananase Man26A
ou galactanase Gal53A do Cellvibrio japonicus, foram incapazes de melhorarem a performance das aves
alimentadas com dietas granuladas à base de milho e soja. Em conjunto os resultados sugerem, que os mananos e
galactanos são os factores anti-nutitivos mais relevantes em dietas à base de milho e soja. A falta de resposta à
suplementação de enzimas recombinantes pode resultar da necessidade de sinergismo com outras actividades
enzimáticas ou de um perfil biocatalítico inadequado à função, no tracto GI. Por último, a resposta de frangos de
carne à suplementação enzimática, depende da formulação das dietas.
[Improving the nutritive value of maize and soybean based diets for broiler chicks using
recombinant hemicellulases]
Maize and soybean meal are the most common ingredients in diets for monogastric animals. Although maize is low
in anti-nutritive factors soybean meal often contain significant levels of soluble galactans, mannans or
oligosaccharides of the raffinose series, that may cause considerable nutritional disorders when ingested. It is well
established that cellulases and xylanases are very effective in improving the nutritive value of barley, wheat or rye
based diets for broiler chicks by hydrolysing soluble glucans and arabinoxylans. A study was undertaken to identify
the most important exogenous enzymatic activities for decreasing the detrimental effects associated with the
ingestion of soybean meal soluble polysaccharides. The data show that birds fed on a mash maize-soybean based
diet supplemented with the enzyme mixture Ronozyme® VP display improved final body weight, when compared
with birds receiving the enzyme preparations Roxazyme® G200 or Alpha-Gal® 1000 (P=0.08). It is shown that
Ronozyme® VP is high in galactanase and mannanase activities. Surprisingly, this enzyme mixture or the
recombinant hemicellulases mannanase Man26A or galactanase Gal53A from Cellvibrio japonicus were unable to
improve the performance of birds fed on a pelleted maize-soybean based diet. Together the data suggest that
mannans and galactans are the most important antinutritive factors of maize-soybean based diets. Lack of response
to recombinant enzyme supplementation might result from the requirement of other synergistic enzyme activities or
inadequate biocatalyst profile to function in the GI tract. Ultimately, the response of broiler chicks to enzyme
supplementation depends on diet formulation.
77
Produção de frangos de carne em pastagens à base de leguminosas- ultimos progressos
Ponte, P.I.P.1, Fontes, C.M.G.A.1, Rosado, C.M.C.2, Crespo, J.P.2, Crespo, D.G.2, Chaveiro Soares, M.A.3, Mourão,
J.L.4, Gama, L.T.3 e Ferreira, L.M.A.1
1 CIISA-Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Técnica de Lisboa, Av. da Universidade Técnica,1300-477 Lisboa, Portugal;
2 FERTIPRADO, Herdade dos Esquerdos, 7450-250 Vaiamonte;
3 Instituto Superior de Agronomia, Universidade Técnica de Lisboa, Tapada de Ajuda, 1349-017 Lisboa;
4 Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro, Apartado 1014, 5000-911 Vila Real.
Na sua grande maioria, os produtos avícolas encontrados actualmente no mercado provêem de sistemas de produção
em confinamento. No entanto, o consumidor tem vindo cada vez mais a valorizar produtos provenientes de sistemas
de produção alternativos, ao ar livre, que são normalmente associados a um maior bem-estar animal. Portugal tem
reconhecidas potencialidades edafo-climáticas para a produção de pastagens à base de leguminosas, tanto em
condições de regadio como de sequeiro. Continua por esclarecer qual a aptidão destas culturas para poderem
sustentar o desenvolvimento de novos sistemas de produção de carne de aves. Este trabalho pretendeu avaliar a
possibilidade de delinear formas alternativas para a produção de frangos de carne associadas a sistemas pastoris.
Pretendeu-se igualmente averiguar a eficácia da utilização de celulases e hemicelulases na melhoria dos
desempenhos produtivos dos animais sujeitos a estes sistemas de produção. Paralelamente, avaliou-se a evolução do
estado sanitário das aves ao longo do ensaio. De uma forma geral, os resultados evidenciaram que as aves com
acesso à pastagem atingiram pesos significativamente mais elevados e índices de conversão mais baixos
relativamente às aves privadas da biomassa pastoril. Verificou-se, ainda, que a suplementação enzimática não
influência de forma decisiva a eficiência digestiva dos animais com acesso à pastagem. Os resultados encontrados
levaram a uma proposta prática no âmbito do potencial desenvolvimento de um sistema de produção avícola
associado a pastagens de regadio e sequeiro à base de leguminosas.
Projecto financiado pelo Programa AGROS – Proj. 57
[Production of broiler chicks on legume-based pastures – recent progresses]
Today, most marketable poultry products are originated from intensive production systems. Recently, there has been
an increasing demand for poultry products that are derived from less intensive production systems, which are
associated with an improvement in animal welfare. Portugal has recognisable potential for the production of
irrigated or non-irrigated leguminous based pastures. However, the aptitude of these cultures to support a new
broiler production system is not well established. The aim of this work was to evaluate an alternative broiler chicken
production system based on pasture. In addition, we have evaluated the utilization of cellulases and hemicellulases
to improve the nutritive value of plant biomass. Bird health and sanitary conditions were evaluated. The data suggest
that ingestion of pasture biomass enhance animal performance and the quality of poultry meat. However, cellulases
and hemicellulases do not affect the efficiency of biomass utilization by poultry. Taken together the data
demonstrates the feasibility of raising poultry in leguminous-based pastures. The commercial impact of such
products remains to be evaluated.
This work was supported by Programa AGROS – Proj. 57
78
Ovinotecnia e Caprinotecnia
Marcadores químicos na determinação de origem geográfica e do sistema de produção de alimentos
de origem animal
Bessa, Rui J.B.
Estação Zootécnica Nacional – INIAP, Fonte Boa, 2005-048 Vale de Santarém, Portugal, [email protected]
A origem geográfica e o sistema produção dos produtos de origem animal são características particularmente
importantes nos produtos protegidos pela legislação Europeia que establece as DOP (Denominação de Origem
Protegida) e IGP (Indiçação Geográfica Protegida). Estes produtos, de valor acrescentados, deverão possuir
características específicas atribuíveis à sua origem geografica e modo de produção. Como tal, o desenvolvimento de
ferramentas analíticas que permitam o controlo de qualidade e autentificação destes produtos é urgente e constitui
uma área de investigação em franco desenvolvimento. Algumas subtâncias químicas que tem vindo a ser
identificados como potenciais marcadores de origem e do sistema de produção são revistos neste trabalho. Será dado
destaque à utilização dos ácidos gordos como marcadores do sistema de produção e do tipo de dieta forncecida aos
animais. De igual modo, a utilização de metabólitos secundários das plantas (terpenóides e polifenóis) como
potenciais marcadores de origem e do sistema de produção é abordada. Finalmente a utilização de razões isotópicas
e de métodos espectrométricos como ferramentas de autentificação de produtos animais é revista e discutida.
A investigação recente tem produzido resultados promissores que indicam que é possível discriminar a origem
geográfica de carnes e leites (e lactícinios) com base em padrões químicos. Quanto ao modo de produção, a
distinção entre animais produzidos em regimes intensivos e os produzidos em regime de pastoreio é execuível.
Contudo, a previsão da duração do acabamento com alimentos concentrados de animais criados em regime
extensivo e a distinção deste animais dos animais criados e acabados com alimentos concentrados tem se revelado
díficil.
[Discrimination of production system and geographical origin of animal products using chemical
markers]
The geographical origin and production system of meat and dairy products are particularly important for those
legally protected in UE with designation of origin (PDO) and geographical indications (PGI). The development of
analytic tools that allow the quality control and authentication of these products are needed and are an important
research topic. Some chemical markers and techniques are briefly reviewed. Particular emphasis is given to the
potential of fatty acids as markers of production system. In addition, the utilization of plant secondary metabolites as
markers of geographical origin and production system are discussed. The potential of stable isotopes ratios methods
and some spectroscopic methods are also reviewed. The recent research produced interesting and promising results
indicating that effective discrimination of geographical origin and production system of animal foods may be
feasible.
The discrimination between meat (or carcasses) from ruminants finished with concentrated or pasture is easily
achieved with several chemical markers. However, the distinction between animals raised on pasture and finished on
concentrate feeds and animal raised and finished on concentrate feeds seems to be rather difficult. The potential of
δ13C in tissues with different equilibration times and the use of fatty acids combined with other chemical markers
should be explored.
79
Produção de biofilme por Staphylococcus epidermidis responsáveis por mastites subclínicas em
ovinos
Queiroga, M.C.1, Fraústo da Silva, M.2 e Vilela, C.L.2
1 Instituto de Ciências Agrárias Mediterrânicas (ICAM)/Depto de Sanidade Animal e Vegetal, Univ.de Évora, Apartado 94, 7002-554 Évora - PT
2 CIISA - Faculdade de Medicina Veterinária, UTL – Polo Universitário do Alto da Ajuda, Av. da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa, PT.
Staphylococcus epidermidis integra a microbiota da pele e é simultaneamente um dos principais microrganismos
responsáveis por mastites subclínicas em ovelhas na região do Alentejo (1). A relevância da produção de biofilme
como factor de virulência de agentes etiológicos de mastites é ainda controversa (2, 3). No entanto, está descrito que
a capacidade de S. epidermidis formar biofilme facilita a sua persistência no hospedeiro, evadindo-se às suas
defesas, e permite a sua sobrevivência em concentrações de antibióticos superiores à Concentração Mínima
Inibitória (4).
No presente estudo, a produção de biofilme por S. epidermidis foi avaliada in vitro em 109 estirpes isoladas de
glândulas mamárias de ovelhas com diferentes graus de inflamação, conforme resultado do teste californiano de
mastite (TCM). Todas as estirpes foram testadas segundo dois métodos: expressão fenotípica das características das
colónias em Agar Vermelho do Congo (CRA) (5) e quantificação do biofilme produzido em função da densidade
óptica (6). Este ensaio foi realizado seguindo um delineamento em blocos casualisados, utilizando como bloco o dia
da determinação (Dia 1, Dia 2, Dia 3). Na análise estatística dos dados foram avaliados os efeitos da expressão
fenotípica das colónias e da intensidade de descarga de células somáticas, de acordo com o TCM, na produção de
biofilme (7). De acordo com o teste qualitativo, das 109 estirpes de S. epidermidis testadas, apenas 8 revelaram
capacidade para produzir biofilme in vitro. O efeito da expressão fenotípica das colónias em CRA na produção de
biofilme, quando analisado pelo teste quantitativo, é altamente significativo. Não foi possível detectar qualquer
associação entre a produção de biofilme e a intensidade da reacção inflamatória.
Os resultados sugerem que o teste qualitativo permite uma avaliação eficaz da produção de biofilme e que o grau de
infecção intramamária não é influenciado pela capacidade de produção de biofilme por S. epidermidis. Será ainda
necessário averiguar qual a relevância da sua produção sobre a susceptibilidade a antibióticos e a dispersão de
resistências por transferência genética horizontal.
[Biofilm production by Staphylococcus epidermidis responsible for subclinical mastitis in sheep]
Staphylococcus epidermidis are part of the skin microbiota and are simultaneously one of the major responsible for
subclinical mastitis in sheep from the Alentejo region (1). The relevance of biofilm production as virulence factor of
mastitis agents is still controversial (2, 3). However, the ability of S. epidermidis to grow in biofilm facilitates its
persistence in the host, evading their defenses and allows the survival at antibiotic concentrations higher than the
Minimum Inhibitory Concentration (4).
In the present study, biofilm production by S. epidermidis was evaluated in vitro in 109 isolates from ovine
mammary glands with different degrees of inflammation, according to the California Mastitis Test (CMT). All
isolates were tested by two methods: phenotypic expression of colony characteristics in Congo Red Agar (CRA) (5)
and quantification of biofilm produced by optical density (6). The assay followed a randomized block design, using
as block the day of the determination (Day 1, Day 2, Day 3). Statistical data analysis included the effects of colonies
phenotypic expression and intensity of somatic cells discharge, according to CMT, upon biofilm production (7).
According to the qualitative test, from the 109 S. epidermidis isolates, only 8 revealed the ability to in vitro produce
biofilm. The effect of colony phenotypic expression on CRA upon biofilm production, when analyzed by the
quantitative methods, is highly significant. We could not detect a significant association between biofilm production
and the degree of inflammatory reaction.
Taken together, the results suggest that the qualitative method allows the evaluation of biofilm production, and that
the severity of intramammary infection is not influenced by biofilm production by S. epidermidis. Further studies are
required to elucidate the relevance of biofilm formation upon antibiotic susceptibility and resistance dispersion due
to horizontal gene transfer.
(1) Queiroga, MC et al. (1999) Rev. Port. Cienc. Vet. XCIV, 531: 132-140.
(2) Baldassarri, L et al. (1997) Infect. Immun. 65: 1522-1526.
(3) Aguilar, B et al. (2001) Vet. Microbiol. 78: 183-191.
(4) Fux CA, Costerton JW, Stewart PS, Stoodley P., 2005. Survival strategies of infectious biofilms. Trends Microbiol. 13 (1): 34-40.
(5) Freeman, DJ et al. (1989) J. Clin. Pathol., 42: 872-874.
(6) Cucarella, C et al. (2002) Infect. Immun., 70 (6): 3180-3186.
(7) SAS, 1991. SAS Systems for linear models. Statistical Analysis Systems Institute, Inc., Cary, NC, 329 pp.
80
Tipo e grau de parasitismo em ovinos de leite do Concelho de Mafra*
Morgado, M.1, Crespo, M.V.1, Rosa, F.2, Rodrigues, T.1
1 Escola Superior Agrária de Santarém, Apartado 310-2001 904 Santarém
2 Instituto de Investigação Científica Tropical/Zoologia, Rua da Junqueira, 14, 1349-007 Lisboa
O parasitismo provoca graves alterações na produção e na saúde dos animais. No sentido de contribuir para um
melhor conhecimento do tipo e do grau de parasitismo existente em ovinos, realizou-se um estudo em 40 animais de
raça Saloia e nos seus cruzamentos, no Concelho de Mafra.
Entre Setembro de 2002 e Junho de 2003, com a periodicidade de 21 dias, efectuaram-se colheitas directas de fezes,
em dez animais por exploração, que foram sujeitas a análises qualitativas e quantitativas para pesquisa de ovos de
helmintes, oocistos e larvas de primeiro estádio de estrongilídeos pulmonares. Realizaram-se ainda coproculturas
para a identificação de larvas de 3º estadio de estrongilídeos gastrintestinais.
Registou-se a presença de ovos de Monieza expansa e M. benedeni, de Fasciola sp., de estrongilídeos
gastrintestinais, de Strongyloides sp., de Skrjabinema sp. e de ascarídeos. Foram ainda observadas larvas de primeiro
estadio de estrongilídeos pulmonares e oocistos de Eimeria sp. Identificaram-se larvas de 3º estadio dos géneros
Ostertagia, Haemonchus, Oesophagostomum e Cooperia.
A eliminação de ovos de estrongilídeos gastrintestinais e de oocistos indicou a presença de infecções ligeiras,
predominando as duplas seguidas das simples.
Os resultados obtidos sugerem que o esquema profiláctico contra os parasitas internos existente na exploração,
consistindo apenas de uma desparasitação oral anual, é suficiente para manter os níveis de eliminação parasitária
baixos.
* Trabalho realizado no âmbito do Curso de Produção Animal da Escola Superior Agrária de Santarém, conducente
ao grau de Bacharel.
[Type and degree of parasitism in milk ewes at Mafra Region]
The gastrointestinal parasitism is one of the constraints in animal health and production. In order to contribute to a
better knowledge of the diversity and degrees of parasitism present in sheep in Mafra region, a study was performed
on 40 Saloia’s ewes, every 21 days, between September 2002 and June 2003.
Helminthological eggs and oocysts output and 1st stage lung strongyles larvae were researched on faeces samples.
Fecal culture was done to identify the 3rd stage larvae of gastrointestinal strongyles.
Moniezia sp., Fasciola sp., gastrointestinal strongyles, Strongyloides sp., Skrjabinema sp. and ascarids eggs were
observed, as well as lung strongyles 1st stage larvae and Eimeria sp. oocysts. Ostertagia, Haemonchus,
Oesophagostomum and Cooperia were the 3rd stage larvae of gastrointestinal strongyles identified.
The gastrointestinal strongyles eggs and oocysts output evidenced the presence of light infection with the
predominance of double parasite associations followed by simple.
The results obtained suggested that the prophylactic program against internal parasites in this farm, based in one
only annual per os deworming, is enough to maintain the helmintic egg output at low levels.
81
Controlo Biológico do Parasitismo Gastrintestinal em Borregos Serra da Estrela*
Madeira, M.1, Jorge, H.1, Ribeiro, J.1, Crespo, M.V.2, Rosa, F.3, Simões, J.1, Silva Pereira, M.1, Madeira de
Carvalho, L.4, Fazendeiro, I.4
1 Estação Zootécnica Nacional (INIAP) – Fonte Boa – 2005-048 Vale de Santarém; 2 Escola Superior Agrária do Instituto Politécnico de
Santarém, 310-2004 Santarém Codex; 3 Centro de Zoologia do Instituto de Investigação Científica Tropical, R da Junqueira, nº14, 1349-007
Lisboa; 4 Centro de Investigação Interdisciplinar em Saúde Animal/Fac. Med. Veterinária (CIISA/FMV), Pólo Univ. Ajuda, Avenida da
Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa, Portugal, [email protected].
O uso intensivo de anti-helmínticos no controlo dos parasitas gastrintestinais em Ruminantes levou ao aparecimento
de resistências e determinou a pesquisa de alternativas ao controlo anti-parasitário clássico, com menores impactos
económicos e ambientais. No presente trabalho efectuou-se um estudo para avaliar a eficácia do fungo nematófago
Duddingtonia flagrans no controlo biológico do parasitismo gastrintestinal em borregos da raça Serra da Estrela,
durante o período de Janeiro a Maio de 2003.
Vinte e quatro animais foram divididos por três grupos de 8 borregos, cada um numa folha de pastagem, sendo o
grupo 1 alimentado com um suplemento diário contendo uma grama por animal de clamidosporos de fungo
Duddingtonia flagrans, o grupo 2, o controlo e o grupo 3, sujeito a desparasitações mensais com um anti-helmíntico
(albendazol). Quinzenalmente, realizaram-se colheitas directas de fezes para pesquisa de ovos de nematóides,
determinação da redução da contagem média de OPG e colheitas de erva da pastagem para calcular o género/espécie
e o número de larvas do terceiro estádio (L3) de nematóides gastrintestinais. Os dados foram analisados através dos
métodos não paramétricos de Mann-Whitney e Wilcoxon.
A média de eliminação de ovos de estrongilídeos gastrintestinais foi superior para o grupo testemunha (236 OPG),
tendo havido uma redução média de OPG de 93% para o grupo desparasitado com albendazol (OPG médio de 17) e
de 45% no grupo alimentado com esporos de D. flagrans (OPG médio de 131). Verificou-se ainda a presença de
ovos de Strongyloides sp. e de Moniezia sp. e oocistos de Eimeria spp. nos 3 grupos. Na pastagem verificaram-se
níveis mais baixos de L3 no grupo com anti-parasitário, embora a análise estatística não tenha permitido assinalar
valores significativamente diferentes entre as 3 pastagens. Identificaram-se larvas de terceiro estádio de Ostertagia
sp. e Cooperia sp. nas pastagens dos 3 grupos, enquanto as de Haemonchus sp. apareceram apenas nos grupos 1 e 2.
Embora o estudo estatístico não tenha permitido confirmar a eficácia do uso do fungo nematófago, os nossos
resultados apontam para uma diminuição do número de ovos e formas larvares L3, principalmente após o pico de
eliminação primaveril na 5ª colheita, em que as contagens de larvas na pastagem permaneceram baixas e a zero nas
duas últimas colheitas. Consequentemente, esta nova forma de controlo permite um menor grau de infecção para os
animais, pois embora não actuando como um anti-helmíntico, reduz a contaminação do ambiente, mantendo o nível
de parasitismo típico de um estado de pré-munição. Além disso, o D. flagrans permite um controlo integrado mais
eficaz, utilizado isoladamente ou em associação com anti-parasitários, permitindo a sua utilização de forma mais
racional.
* Financiado pelo Projecto AGRO nº 235, medida 8.1. - “Produção de Borregos através do Controlo Biológico de Parasitas”.
[Biological Control of Gastrointestinal Parasites in Serra da Estrela Lambs]
The intensive use of anthelminthics for the control of gastrointestinal parasites in Ruminants increased the
phenomenon of resistance and led to the search of alternative anti-parasitic control options, with less economic and
environmental impacts. In the present work a study was perfomed to evaluate the efficacy of the nematophagous
fungus Duddingtonia flagrans in the biological control of gastrointestinal helminths in lambs of Serra da Estrela
breed, during 5 months between January and May 2003.
A total of 24 lambs were divided in three groups with 8 animals each: group 1, fed a daily dosage of 1 g per animal
with the fungi Duddingtonia flagrans clamidospores; group 2, the control group; group 3, dewormed on a monthly
base with albendazol. Faecal samples from the rectum and herbage samples from pasture were collected every
fortnight for nematode egg counts (Eggs per Gram, EPG) and infective strongylid larvae (L3) counts. Statistical
analysis was carried out with the non parametric methods of Mann-Whitney and Wilcoxon.
The average EPG for GI strongyle was higher in the control group (236 eggs/g), while there was an average
reduction of 93% of faecal eggs in the albendazol group (17 EPG) and 45% in the D. flagrans group (131 EPG).
Strongyloides sp. and Moniezia sp., eggs and Eimeria spp. oocysts were identified in all groups. On the pasture there
were lower L3 counts in the albendazol group, although the statistical analysis did not show significant differences
between the 3 pastures. In the herbage, third-stage larvae of Ostertagia sp.and Cooperia sp. were identified in all
groups, while Haemonchus sp. was only found in groups 1 and 2. Although the statistical analysis did not confirm
significant values for the efficacy of the nematophagous fungus, our results show a reduction of faecal egg counts
and pasture L3 counts, mainly after the spring rise during the 5th sample collection, since the larval counts remained
low on the pasture of animals fed fungi and reached zero values for the two last collections. As a consequence, this
new form of control allows a lower infection level of the animals, and not being an anthelmintic, it reduces the
enviroment contamination, keeping the parasitic level in a premunition state. Besides, D. flagrans can be used for an
effective integrated control, both isolated or in association with anti-parasitic compounds, aiming its rational use.
* Research funded by the Project AGRO nº 235, measure 8.1. - “Production of Lambs through Biological Control of Parasites”.
82
Controlo metabólico da ovelha leiteira
Caldeira, Rui M.
Centro Interdisciplinar de Investigação em Sanidade Animal – Faculdade de Medicina Veterinária. Av. da Universidade Técnica, Alto da Ajuda,
1300-477 Lisboa, telf. 213652873, [email protected]
A avaliação no animal da adequação do plano alimentar às suas necessidades nutricionais e do seu estado
metabólico são informações fundamentais para melhorar a eficiência da produção e para evitar desequilíbrios que
conduzam às denominadas doenças metabólicas. Para atingir estes objectivos apontam-se dois tipos de
metodologias: 1) a estimativa da quantidade de reservas corporais e do sentido da sua variação e 2) a determinação
da concentração em fluidos corporais de parâmetros que fornecem indicações sobre o estado metabólico do animal.
A condição corporal (CC) é sem dúvida o método mais simples, barato e eficiente de avaliar a quantidade de
reservas corporais, reflectindo a abundância ou carência de nutrientes no passado próximo e permitindo introduzir
atempadamente correcções ao plano alimentar. Avaliações sucessivas da CC permitem ainda avaliar se o animal está
em fase de deposição ou de mobilização dessas reservas. Esses excessos ou deficits alimentares demoram contudo
algum tempo a reflectir-se na CC, podendo, em sistemas mais intensivos, estar já a comprometer o desempenho
produtivo do animal quando identificados. Assim, surgiram metodologias que permitem uma detecção mais rápida
dos desequilíbrios nutricionais, os denominados testes metabólicos. Entre os numerosos parâmetros testados até à
data, alguns merecem já algum consenso como indicadores fiáveis do estado metabólico.
O aumento da concentração sérica de ácidos gordos livres (AGL) traduz um crescente balanço energético negativo
do animal. Também o β-hidroxibutirato (β-HBA) avalia a magnitude deste balanço negativo e, em particular, a
eficiência da utilização dos ácidos gordos mobilizados. Em conjunto com estes dois parâmetros, a glucose sérica
pode contribuir decisivamente para o diagnóstico de um quadro de pré-cetose. No que respeita ao metabolismo
proteico, a albumina é um bom indicador a médio longo prazo de uma subnutrição proteica enquanto a ureia sérica
fornece informação sobre a quantidade e qualidade da proteína da dieta e da eficiência da sua utilização pelo animal.
No caso de fêmeas em lactação, a ureia e o β-HBA podem ainda ser doseados no leite.
A informação oriunda destes controlos, sempre em conjunto com o conhecimento da fase do ciclo produtivo e das
dietas utilizadas, permite aferir a adequação dos planos alimentares implementados, possibilitando correcções
imediatas ou alterações das estratégias nos ciclos produtivos seguintes. Este tipo de planos de monitorização em
vacas leiteiras tem conduzido a uma maior eficiência da utilização dos alimentos e à prevenção numa fase mais
precoce de doenças metabólicas, compensando claramente os seus custos.
[Control of metabolic status in ewes]
The assessment in the animal of feeding plan adequacy to nutritional requirements and of the metabolic status is
important to increase production efficiency and to prevent metabolic diseases. To achieve these objectives two
different types of methodologies are commonly used: 1) the estimation of body reserves and of its pattern of
changing and 2) the determination of some metabolites in body fluids that provide information about the metabolic
status.
Body condition (BC) is undoubtedly the simplest and cheapest and way to assess the amount of body reserves,
reflecting the abundance or shortage of nutrients on the early past and enabling corrective actions when necessary.
Regular BC assessment also provides the indication if the animal is on a phase of mobilization or storing body
reserves. However, these feeding surplus or deficits would take several weeks to be detectable as a BC changing,
and so, when they are finally identified they could already being detrimental for the animal productive performance,
especially on the more intensive systems. Thus, other methodologies have been developed that allow a quicker
detection of nutritional unbalances, the metabolic tests. Among several variables tested until now, some deserve
already a general recognition as reliable indicators of the metabolic state. The raise of serum non-esterified fatty
acids (NEFA) indicates an increasing negative energy balance. Serum β-hydroxybutyrate (β-HBA) also evaluate the
extent of that negative balance and, especially, the efficiency of the mobilized fatty acids utilization. Additionally to
these two metabolites, serum glucose contributes for a better metabolic diagnose, particularly in pre-ketosis
circumstances. In what refers to protein metabolism, albumin is a fine indicator of medium long-term protein
nutritional deficiency while serum urea provides valuable information about the quality and quantity of diet protein
and how efficiently the animal uses it. Urea and β-HBA concentrations could also be determined in milk with.
BCS and blood metabolites, always together with information about production stage and diets, provide a good
evaluation of feeding plans adequacy, allowing immediate corrections or later changes on feeding strategies. This
type of monitoring in dairy cows has led to a greater efficiency on feed utilization and to a better prevention of
metabolic diseases, clearly compensating its costs.
83
Produção biológica de leite de ovelha
Crespo, João P.
Fertiprado, Vaiamonte, Portugal
As Herdades dos Esquerdos e Romacho estão integradas no Grupo Fertiprado, perfazem uma área total de 387
hectares, dos quais 52 estão destinados a regadio. Nestas explorações é mantido um efectivo de ovinos leiteiros de
2400 fêmeas reprodutoras da raça Assaf (obtida através de cruzamentos de absorção a partir de 1990). O sistema de
produção é o extensivo, tendo a exploração sido convertida ao Modo de Produção Biológico (MPB) em Maio de
2001. Ao longo dos tempos, a empresa vem baseando o maneio alimentar em pastagens e forragens ricas em
leguminosas, o que tem permitido abdicar da utilização de adubos azotados, beneficiando as características físicoquímicas do solo. O maneio geral dos animais é feito em lotes que são constituídos em função dos estados
produtivo, reprodutivo e sanitário. Os animais permanecem em pastoreio durante todo o ano, excepto as ovelhas de
alta produção e animais sanitariamente debilitados que, nas alturas de chuva são abrigados no ovil durante a noite. A
suplementação alimentar baseia-se em rações feitas na própria exploração recorrendo a diversas matérias primas
disponíveis no mercado. Aproximadamente 80% das matérias primas biológicas utilizadas é trigo duro. Como fonte
proteica tem sido adquirido bagaço de soja, cujo custo é praticamente o dobro comparativamente ao produzido
segundo o sistema convencional. A limitação das matérias primas permitidas em MPB na formulação da
suplementação alimentar teve um impacto negativo na produção unitária do leite. De facto, a exploração vinha
experimentado aumentos anuais na produção de leite de cerca de 30%, após 3 anos em MPB a mesma estabilizou,
não obstante o aumento do efectivo. Em termos sanitários, o programa adoptado consiste em vacinações contra
enterotoxémia, mamites gangrenosas, agalaxia e peeira, sendo esta última doença a mais difícil de combater.
Procede-se regularmente à análise de fezes e utilizam-se 2 desparazitações anuais. A produção de leite inicia-se após
o parto recorrendo-se ao aleitamento artificial dos borregos. Tendo em vista que a produção de borregos neste
sistema não trazia mais valia para a exploração, foi decidido retirá-la do MPB. Em 2004 concluiu-se a construção de
uma queijaria (QUAL – Queijos do Alentejo, Lda.) tendo em vista a produção e certificação Bio dos queijos na
expectativa de criar diferenciação na qualidade e valorizar o leite produzido. Apesar de não haver grandes alterações
no processo de fabrico de queijo, observa-se contudo um rendimento mais baixo. Em termos de comercialização,
denota-se em Portugal uma pequeníssima faixa de consumidores com apetência para este tipo de produtos e a
estratégia da empresa tem passado pela promoção de produtos em certames nacionais e internacionais na tentativa
de encontrar canais de escoamento e distribuição deste produto. Nesta apresentação serão abordados os principais
aspectos relativos a 4 anos de experiência no maneio geral em Modo de Produção Biológico de ovinos de leite,
produção e comercialização de queijo, assim como aspectos burocráticos decorrentes desta opção de produção.
[Sheep milk production under organic farming]
Esquerdos and Romacho are two private farms of the Fertiprado Group located near Portalegre, with a total area of
387 hectares, including 52 hectares or irrigated soil. These farms maintain a flock of 2400 ewes of the Assaf breed
(resulting from crossbreeding and absorption since 1990), raised for milk production under an extensive production
system. Organic sheep farming is practiced since May/2001. The feeding management policy of this enterprise was
defined long ago and consists of pastures and forages based mainly on legumes, in order to avoid the use of nitrogen
fertilizers and to improve soil characteristics. Animals are managed in groups according to their production,
reproduction and health status. All ewes graze on pastures year round, except high production and unhealthy
animals, which are housed at night during the winter. Supplemented feeds are produced in the farm using raw
products from organic farming available in the market. Approximately 80% of cereal used is wheat and, and as
protein source, organic produced soybean meal has been purchased at prices that double that of conventional
soybean. There are severe limitations in the availability of allowed raw products for supplemented feeds under
organic farming in Portugal. As a result, milk production level has been increasing around 30% per year, and after 3
years of organic farming, levelled out, despite an increase in the number of animals. With respect to health
prevention, vaccines against enterotexemia, mastitis, agalactiae and foot rot are routinely used, being this last
disease very difficult to eradicate. Animals are also drenched for internal and external parasites twice a year.
Milking of ewes is done mechanically and starts right after lambing with lambs being artificially reared. Due to
economic reasons, lamb production in the farm is not organic. A cheese factory (QUAL-Queijos do Alentejo Lda.)
was constructed to produce organic certified cheese in order to differentiate the product and obtain larger profit
margins from milk produced in the farm. The cheese manufacturing process under organic regulations is similar to
that produced in the conventional way, but lower cheese yields have been obtained. In Portugal, there is still a small
number of organic food consumers and some constraints regarding marketing of organic cheese. The enterprise is
promoting the product in regional, national and international fairs and there are some prospects regarding marketing
and distribution of organic cheese, mainly to the European Nordic countries in the near future. In the
communication, the experience of 4 years of sheep milk organic farming will be detailed, with emphasis on feeding
management, organic cheese production/commercialization and major constraints to organic farm regulations in
Portugal.
84
Produção Intensiva de Leite e a Comercialização do Queijo
Venâncio, José M.
Herdade dos Cotéis, 7860-042 MOURA
A Herdade dos Cotéis é uma marca comercial de produtos agro-alimentares que engloba uma unidade de produção
de ovinos de leite e fabrico de queijo Serpa. A unidade de produção de ovinos tem uma área total de 300 hectares,
um efectivo ovino de 2000 ovelhas da raça Lacaune e uma unidade de fabrico de alimentos compostos para autoconsumo. O esquema reprodutivo adoptado consiste em 3 épocas de parto/ano de modo a manter produção de leite
durante todo o ano. O desmame dos borregos ocorre normalmente a uma idade média de 30 dias, seguindo-se o
período de ordenha das ovelhas. A comercialização dos borregos varia consoante as circunstâncias do mercado,
sendo a maioria vendidos para abate com cerca de 25 Kg de peso vivo. O maneio alimentar varia ao longo do ano,
em função do estado produtivo e reprodutivo e das disponibilidades em pastagens. Assim, as ovelhas em lactação
utilizam pastagens naturais melhoradas durante o dia, são estabuladas durante a noite, altura em que é distribuída
alimentação concentrada (aprox. 1 Kg /cabeça dia) duma mistura composta por cereais, fenos, palha, luzerna,
bagaço de girassol, pré-misturas minerais e vitamínicas. Durante a ordenha é distribuído alimento concentrado sem
restrição. As ovelhas em final de gestação são suplementadas com alimentos concentrados e/ou com mistura de
alimentos atrás mencionada, em função da época do ano e disponibilidade de pastagens. As ovelhas secas ou em
início de gestação são alimentadas em pastoreio, excepto no Verão e início de Outono, épocas em que são
suplementadas com misturas de alimentos produzidos na própria exploração ou adquiridos ao exterior. Duma
maneira geral, e numa determinada época do ano, a formulação da alimentação suplementar baseia-se nos mesmos
produtos variando a composição em função do estado produtivo e reprodutivo dos animais. A produção de leite é
contínua durante o ano, com picos mais significativos no Outono e Primavera. Em termos médios a produção por
ovelha adulta ronda os 200 litros de leite. O leite é transformado na totalidade em queijo Serpa na própria
exploração, sendo o volume anual médio de produção de aproximadamente 50 toneladas. Deste quantitativo 60% é
comercializado como “Queijo Serpa DOP”, 20% como “Queijo de Ovelha” e 20% como “Queijo Curado” (mais de
3 meses de cura). O Queijo Curado é maioritariamente comercializado no Verão. Em termos de distribuição, 50% da
produção é canalizada para grandes superfícies comerciais, 40% para pequeno comércio e restauração através de
distribuidores e 10% para venda directa ao público. O preço médio por Kg ronda 10,50 € para o Queijo Serpa
(DOP), 9,00 € para o Queijo de Ovelha e 8,00 € para o Queijo Curado. Estes preços têm-se mantido estáveis nos
últimos 7 – 8 anos. Nesta comunicação serão detalhados aspectos referentes às estratégias alimentares adoptadas, ao
maneio reprodutivo e sanitário dos efectivos e à transformação e comercialização do queijo.
[Sheep milk production and cheese trading]
Herdade dos Cotéis is a trade mark for agro-food products located in the Alentejo region. For sheep cheese
production, this enterprise runs a 300 ha farm, a flock of 2000 head of Lacaune breed and a facility for self feed
production. The breeding system was designed in order to maintain continuous milk production through the year and
consists of three lambing periods/year. Lambs are weaned at approximately 30 days of age and ewes are machine
milked afterwards. Lambs are usually sold for slaughtering with approximately 25 Kg live weight or
commercialized at lighter weights depending on market conditions. Feeding management of ewes varies throughout
the year, depends on production and reproduction status and pasture availability. During lactation, ewes graze on
improved seeded pastures during the day, and at night are supplemented with approximately 1 kg/head of a mix
composed of cereal grains, cereal straw, hay, alfalfa, minerals and vitamins, etc. At the milking parlour, concentrates
are offered without restriction. The definition of the mixture of raw components depends on self availability and
product market prices. Ewes at the end of the gestation period are also supplemented and graze on pasture. Dry ewes
graze on pasture most of the year, except during Summer and beginning of Fall, when some supplementation is also
offered. In general, in a given period or season, the feed formulation is based on the same raw products for the
whole flock, but composition varies according to production and reproduction status of the animals. Milk is
produced all year round with observed peaks in the Fall and Spring. Average milk production is about 200 l per
adult ewe. Milk is transformed into Serpa cheese (Denomination of Origin - D.O.) locally, and annual cheese
production averages 50 tones. Sixty percent of cheese production is sold as “Serpa Cheese, D.O.”, 20% as “Sheep
Cheese” and 20% as “Dry Cheese” (after a 3 months dry period). With respect to trading and distribution, 50% of
total cheese production is canalized for national large supermarkets, 40% for small food stores and restaurants and
10% is sold directly to the public. Average prices per Kg are 10,50 € for Serpa Cheese, 9,00€ for Sheep Cheese and
8,00€ for Dry Cheese. Prices have been stable in the last 7-8 years. The purpose of this communication is to
emphasize particular management aspects of the flock and to address questions regarding cheese production and
trading.
85
Influência do nível de produção de leite nas curvas de lactação, condição corporal e perfis
metabólicos em ovelhas da raça Assaf
Marques Almeida, M.1, Martins, A.P.L.2, Gama, L.T.3 e Caldeira, R.M.1
1 Centro Interdisciplinar de Investigação em Sanidade Animal – Faculdade de Medicina Veterinária. Av. da Universidade Técnica, Alto da
Ajuda, 1300-477 Lisboa
2 Núcleo de Tecnologia do Leite e Derivados do Departamento de Tecnologia dos Produtos Agrários da Estação Agronómica Nacional, INIAP.
Instituto Superior de Agronomia, Tapada da Ajuda, 1349-017 Lisboa
3 Estação Zootécnica Nacional, INIAP, 2000-775 Vale de Santarém
Numa exploração comercial da região de Azeitão, foram acompanhadas 36 ovelhas da raça Assaf, de um rebanho
com uma produção média leiteira de 250 litros aos 150 dias, com o objectivo de avaliar o efeito de dois níveis de
produção de leite nas curvas de lactação e na evolução da condição corporal e dos perfis metabólicos ao longo da
lactação. Para tal utilizaram-se 18 ovelhas consideradas de nível produtivo alto (A) e 18 de nível produtivo baixo
(B), consoante a produção foi superior ou inferior à média do rebanho, respectivamente. Todos os animais tiveram
acesso livre à mesma dieta, constituída maioritariamente por alimentos compostos e feno de luzerna, tendo também
acesso diário a uma pastagem natural, cuja produção foi muito limitada face à baixa pluviosidade registada. Entre o
dia 30 e o dia 220 pós-parto foi realizado o contraste leiteiro, com uma periodicidade quinzenal. Foram colhidas
amostras de sangue a 10 ovelhas de cada nível produtivo nos dias 5, 21, 45, 81 e 130 pós-parto para caracterização
dos perfis metabólicos. As variáveis avaliadas foram a produção de leite aos 150 dias (P150d) e total (PTOT), o teor
butiroso (TB) e proteico (TB) e a evolução da condição corporal (CC) e das concentrações séricas de glucose, ácidos
gordos livres (AGL), β-hidroxibutirato (β-HBA), ureia e albumina. A lactação teve uma duração média de 220 dias.
As médias e desvios padrão para os níveis de produção A e B foram de, respectivamente, 441±77.8 e 284.5±41.5 kg
para a PTOT, 338±53.6 e 214±36.1 kg para a P150d, 5.12±0.22 e 5.32±0.26 % para o TP e 6.89±0.66 e 6.99±0.76%
para o TB. As ovelhas de ambos os níveis pariram na mesma nota média de CC (2.25) tendo as do nível B
recuperado mais rapidamente que as do nível A até ao dia 130 (A- 2.79 e B- 3.09). A evolução das concentrações
séricas dos vários metabolitos não variou com o nível de produção, à excepção dos AGL que foram
significativamente mais elevados nas ovelhas de alta produção no início da lactação. A evolução da CC e das
concentrações séricas avaliadas demonstrou um estado metabólico equilibrado, reflexo de um bom maneio
alimentar, embora ainda com aspectos passíveis de serem melhorados, nomeadamente a quantidade e qualidade da
proteína alimentar utilizada. A raça demonstrou elevadas produções de leite sem exigir para isso um maneio
excessivamente complexo.
[Effect of milk yield on lactation curves, body condition score and metabolic profiles in Assaf ewes]
A study was conducted in a commercial farm in the Azeitão region in 36 Assaf ewes with an average milk yield of
250 kg in 150 days. The effects of milk yield on lactation curves, body condition and metabolic profiles were
evaluated. Depending on their production level being above or below the flock’s average, 18 ewes were assigned to
the high milk yield level (H) and other 18 to the low milk yield (L). All animals had free access to the same diet,
mainly composed of commercial concentrate mixtures and alfalfa hay. A daily grazing period was also allowed on a
natural pasture but grass production was very low due to scarce rainfall. Milk data were recorded every 15 days
between days 30 and 220 after lambing. Blood samples were collected from 10 ewes from each group at days 5, 21,
45, 81 and 130 after lambing to evaluate blood metabolites. The variables analysed were total milk yield (TMY) and
at 150 days (Y150d), milk fat (MF) and milk protein (MP) contents, and the evolution of body condition score
(BCS) and serum concentration of glucose, non-esterified fatty acids (NEFA), β-hydroxybutyrate (β-HBA), urea
and albumine. Average lactation length was 220 days. Means and standard deviation for levels H and L were,
respectively, 441±77.8 and 284.5±41.5 kg for TMY, 338±53.6 and 214±36.1 kg for Y150d, 6.89±0.66 and
6.99±0.76% for MF and 5.12±0.22 and 5.32±0.26 % for MP. Ewes of both levels lambed with the same mean BCS
(2.25), but ewes of level L recovered BCS more rapidly than those of level H until day 130 of lactation (H - 2.79 and
L - 3.09). Serum concentrations of metabolites showed no difference between the two production levels, except for
NEFA which were higher in H ewes in the beginning of lactation. BCS and blood metabolites demonstrated a
balanced metabolic status, resulting from an adequate feeding plan, although some aspects could still be improved,
such as the quantity and quality of diet protein. This breed exhibited high production levels, with no particular
management complexities.
86
Adaptabilidade – diferenças hemáticas em caprinos
Delgado, F.1, Henggeller, F.2, Curado, F.3, Colaço, A.4
2 Instituto Português de Sangue – Centro Regional de Coimbra, Pavilhão de Celas, 3000 Coimbra
3 Centro de Experimentação do Loreto – Direcção Regional de Agricultura da Beira Litoral, 3020-201 Coimbra
4 Dept. de Patologias e Clínicas Veterinárias - Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro, Apartado 202, 5001-911 Vila Real
Com o objectivo avaliar a adaptabilidade das espécies caprinas exóticas exploradas na Região Centro compararamse (Anova/Glm - SAS) os perfis hematológicos obtidos de 54 amostras individuais de sangue de cabras entre o 3º e
5º mês de lactação.
Os animais pertenciam a 6 diferentes explorações (9 cabras de cada) e foram agrupados por classes de «nível de
produção» [NÍVEL], de acordo com a classificação do proprietário: «Excelentes» (nE =3), «Medianas» (nM =3) e
«Fracas» (nF =3). Cada exploração tinha apenas uma raça, sendo todas elas diferentes, o que origina sobreposição de
efeitos (Raça vs. Exploração) para estudo estatístico. As raças estudadas foram agrupadas segundo a origem
[ORIGEM], em dois blocos: «Nacionais» com 3 variedades da raça Serrana e «Exóticas» com 3 grupos étnicos
distintos. A saber: Serrana var. Jarmelita (nJ =9), Serrana var. Transmontana (nT =9), Serrana var. Ribatejana (nR
=9), Alpina (nA =9); Saanen (nS =9) e cruzadas de Nubiana (nN =9).
Os parâmetros analisados foram os valores de HEMOGLOBINA [HGB], o HEMATÓCRITO [HCT], o VOLUME
CORPUSCULAR MÉDIO [MCV], a HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MÉDIA [MCH], a CONCENTRAÇÃO MÉDIA DA
HEMOGLOBINA CORPUSCULAR [MCHC], o DIÂMETRO DE DISTRIBUIÇÃO DOS GV [RDW], o VOLUME PLAQUETÁRIO
MÉDIO [MPV], as contagens de GLÓBULOS VERMELHOS [GV], de GLÓBULOS BRANCOS [GB], de NEUTRÓFILOS
[NEUT], de BASÓFILOS [BASO], de EOSINÓFILOS [EOSI], de MONÓCITOS [MONO] e de LINFÓCITOS [LINF], bem
como as correspondentes percentagens da Fórmula Leucocitária, respectivamente, NEUTRÓFILOS [N%], de
BASÓFILOS [B%], de EOSINÓFILOS [E%], de MONÓCITOS [M%] e de LINFÓCITOS [L%]. Não foi possível determinar
o número de Plaquetas.
A Exploração foi influente na maior parte dos parámetros, como era esperado. A Origem da raça influenciou
(P<0,001) os parâmetros: GV, HCT, MCH e MCHC. O Nível produtivo mostrou influenciar (P<0,05) os parâmetros
GB e HGB. A interacção entre este dois factores foi ainda influente (P<0,05) para HGB e HCT.
Os resultados reflectem adaptação para a Serrana que, comparativamente com as exóticas, apresentou valores
superiores para MCH e MCHC e inferiores para GV e HCT. Ainda que não estatisticamente significativo, os
exóticos tendem a apresentar maiores valores em toda a linha branca, à excepção dos Monócitos.
[Fitness – hematic differences in goats]
Pursuing the objective of evaluating fitness of exotic breeds of goats bred in Central Region, the hematological
profiles of 54 individual blood samples withdrawn from goats facing 3rd to 5th month of lactation were compared
(Anova/Glm - SAS).
Goats belonged to 6 different farms (9 per farm) and were grouped by classes of «production level» [NÍVEL],
according to owner appraisal, as: «Excellent» (nE =3), «Median» (nM =3) e «Poor» (nF =3). There was just one breed
per farm, which could cause confounding effect under statistic analysis (Breed vs. Farm). Breeds were then grouped
by origin [ORIGEM], in two blocks: «Nationals» with 3 varieties of Serrana breed and «Exotics» with 3 distinct
ethnic groups. Precisely: Serrana var. Jarmelita (nJ =9), Serrana var. Transmontana (nT =9), Serrana var. Ribatejana
(nR =9), Alpina (nA =9); Saanen (nS =9) e cruzadas de Nubiana (nN =9).
Values for HEMOGLOBINE [HGB], o HEMATOCRIT [HCT], MEAN CORPUSCULAR VOLUME [MCV], MEAN
CORPUSCULAR HEMOGLOBINE [MCH], MEAN CORPUSCULAR HEMOGLOBINE CONCENTRATION [MCHC], o RED
BLOOD CELLS DISTRIBUTION WIDTH [RDW], MEAN PLATELET VOLUME [MPV], as well as cell counting for RED
BLOOD CELLS [GV], WHITE BLOOD CELLS [GB], NEUTROPHILS [NEUT], BASOPHILS [BASO], EOSINOPHILS [EOSI],
MONOCYTES [MONO] and LINPHFOCYTES [LINF], AND and the corresponding differential cell counting percentage,
respectively, NEUTROPHILS [N%], BASOPHILS [B%], EOSINOPHILS [E%], MONOCYTES [M%] and LINPHFOCYTES
[L%] were determined. PLATELETS failed to be counted.
Farm was influent over most parameters, as expected. Breed origin influenced (P<0,001) GV, HCT, MCH and
MCHC. Production level showed influence (P<0,05) on GB and HGB. The interaction between these two factors
was yet influent (P<0,05) on HGB e HCT.
The results reflect adaptation (fitness) for Serrana which comparatively to exotics, showed higher values for MCH
and MCHC and lower for GV e HCT. Even though statistically not significant, exotics tend a present higher values
over all white cells, except to Monocytes.
87
Variabilidade do caseínato em cabras
Delgado, F.1, Veríssimo, P.2,3, Castanheira, P.2,3, Simões, I.2,3, Pires, E.2,3, Colaço, J.4
2 Dept. Bioquímica – Faculdade Ciências e Tecnologia - Univ. Coimbra (FCT-UC), Apartado 3126, 3001-401 Coimbra
3 Dept. Biologia Celular e Biotecnologia - Centro de Neurociências e Biologia Celular (CNC) - Univ. Coimbra, 3020-201 Coimbra
4 Dept. Zootecnia - Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro, Apartado 202, 5001-911 Vila Real
O caseínato constitui a matéria prima do queijo e tem uma composição variável, tanto individual como ao longo da
lactação, o que se reflecte em todos os aspectos produtivos da fabricação do queijo, incluindo o próprio rendimento.
Com o objectivo de se caracterizar o perfil de excreção do caseínato em caprinos, acompanhou-se a lactação de 14
fêmeas caprinas e 5 ovinas
Durante 25 semanas, uma amostra semanal do leite da ordenha matinal de 11 cabras “Serranas Ribatejanas”, 3
cabras “cruzadas de Saanen” e 5 ovelhas foi sujeito a espectrofotometria para quantificação do conteúdo proteico
que foi aumentando ligeiramente ao longo da lactação e, de seguida, alíquotas uniformizadas a 6 mg de proteína
total foram submetidas a electroforese em SDS-PAGE com 3 repetições. Os géis foram digitalizados após coloração
com Comassie BBG250 e as bandas correspondentes às caseínas α-cas, β-cas e k-cas foram quantificadas
proporcionalmente por ImageQuant® usando 3 procedimentos diferentes.
Recorreu-se a análise dos mínimos-quadrados. O leite ovino foi mais rico (P<0,001) em proteína que o caprino
(4,97% vs 3,07%, respectivamente). A proporção das 3 caseínas dependeu da espécie (P≤0,01), excepto a k-cas com
valores quase idênticos nas duas espécies, da fêmea em si (P<0,001) e da semana de lactação (P<0,001). A α-cas
apresentou um perfil de excreção ondulante mas estável, a β-cas decaíu e a k-cas viu incrementada a sua proporção de
7,5% para 17,5% para o fim da lactação.
[Casein-fraction variability in goats]
The casein fraction of milk protein is the raw-material for cheese and it has a variable composition, due to individual
or lactation length factors, which will reflect over all aspects of cheese production, including the production ratio.
Pursuing the characterization of the caseins excretion profile in goats, lactation of 14 goats and 5 ewes were studied.
Along 25 weeks, a milk sample of 11 “Serranas Ribatejana” goats, 3 “Saanen crossed” goats and 5 ewes was
withdraw weekly from the morning milking, submitted to spectrophotometer for protein content quantification
which showed a slight increase along the lactation period, and then, uniform aliquots with 6 mg of total protein were
run in SDS-PAGE electrophoresis with 3 repetitions. Gels were digitalized after Comassie BBG250 staining and the
bands corresponding to α-cas, β-cas e k-cas caseins were proportional quantified by ImageQuant® using 3 different
procedures.
Least square analysis was carried out. Sheep milk was richer (P<0,001) in protein content than goat’s milk (4,97% vs
3,07%, respectively). The proportion of the 3 caseins depended on the specie (P≤0,01), except for k-cas with identical
values between the 2 species, on the female itself (P<0,001) and on the week of lactation (P<0,001). α-cas showed an
wavy but steady excretion profile, β-cas decreased and k-cas proportional excretion increased from 7,5% to 17,5%, at
the end of lactation period.
88
Bem-estar animal
Avaliação e controlo da dor em animais de produção
Stilwell, George, Mateus, L., Lima, M.S.
Uma das formas de garantir o Bem-estar dos animais de produção tem sido a aplicação prática das chamadas “Cinco
Liberdades”. Uma das mais importantes é a que apela à criação de animais “livres de dor, stress e desconforto”.
Apesar de, aparentemente, a necessidade de observância desta condição ser lógica e evidente, somos frequentemente
confrontados com situações em que o seu cumprimento deixa muito a desejar.
Várias razões concorrem para tornar o controlo da dor numa prioridade – não só é um obrigação ética e profissional,
mas é também reconhecido que as performances são influenciadas pela ocorrência de situações de dor.
O que leva então a ser esquecida?
É óbvio que se deve sempre pôr a hipótese de que os humanos simplesmente não se interessam se causam dor aos
animais, mas normalmente esta negligencia não é propositada, mas resulta do facto de não se identificar
convenientemente os sinais de dor e da incapacidade de medir a sua severidade.
É portanto essencial reconhecer as intervenções potencialmente dolorosas, saber identificar os sinais de dor exibidos
pelos animais de produção, saber valorizar cada um desses sinais e decidir quais são os melhores métodos para
controlar a dor.
Ao longo dos trabalhos que temos efectuado nestes últimos dois anos, tentamos elucidar alguns destes pontos. Após
intervenções de rotina, reconhecidamente dolorosas, em explorações de bovinos, tentámos avaliar o comportamento
dos animais expostos a vários regimes de controlo de dor. A medição dos níveis de cortisol plasmático tem também
permitido perceber quais as intervenções mais dolorosas, quais os regimes de analgesia mais eficientes e quais os
comportamentos mais significativos.
Estes ensaios têm permitido, por exemplo, confirmar que alguns métodos de descorna de vitelas em explorações de
leite conduzem a aumento dos níveis de cortisol e a comportamentos de dor que se podem considerar intoleráveis.
Mesmo com estratégias de analgesia bastante complexas, é difícil controlar a dor nestes animais.
Como, na prática rotineira, algumas estratégias de controlo da dor podem ser utópicas é essencial estudar aquelas
que terão aplicação no campo. No caso dos animais de produção é essencial que o método reflicta as questões
económicas, a necessidade de mão-de-obra, a exequibilidade, segurança do operador, saúde pública e possibilidade
de resíduos, para além das preocupações de foro ético.
A observação, avaliação e registo sistematizado do comportamento após estas intervenções tem sido importante
porque tem permitido confirmar que certas atitudes são sinais de dor profunda (sonolência, por exemplo) enquanto
outras, tradicionalmente usadas para avaliar a dor em bovinos, são muito pouco precisas (o consumo de alimento,
por exemplo).
[Evaluation and alleviation of pain in cattle]
One of the ways used to evaluate farm animals welfare, is the “Five Freedoms” list. One of the most important is the
one referring to “freedom from pain, stress and discomfort”, but although it seems obvious and logic to fulfil such a
condition, we sometimes witness to serious trampling of the concept.
Prevention of pain should be a priority – it’s not only an ethical and professional obligation, but it is well known that
it also influences performance.
Then why is it so often forgotten?
Obviously we could argue that humans simply do not care, but fortunately this kind of negligence is not usually
voluntary but results from the incapacity to identify signs of pain, to value its severity and to establish efficient
measures of control. So it’s essential to recognise what are painful management interventions, how animals react to
them and what do those reactions mean. Additionally we have to decide which are the best ways to control the pain
inflicted.
Over the last few years we have been working with cattle exposed to some of these painful routine operations, like
dehorning and castration. We will present some of the findings related to behaviour and plasma cortisol levels, in
animals that were subject to different methods or treated with different analgesic strategies.
For example, we have concluded that some methods of dehorning will cause severe and prolonged effect in cortisol
and pain behaviour, and so should not be allowed. Also local nerve blocking is not efficient in some cases of
disbudding. Farm animal pain control in field conditions is subject to some constrains. So we have tried to study the
procedures that are applicable in the field and not the perfect (but also utopic) strategies.
The methodical observation, evaluation and record of pain related behaviour is very important because it has
allowed us to verify that certain behaviours are important (sleepiness and depression, for example) in young calves
but some others, like food intake, traditionally used to measure pain, are not.
89
Anestesia e dor – as suas implicações no bem estar de animais de laboratório
Antunes, Luis M.
Departamento de Ciências Veterinárias, UTAD, 5000 Vila Real
É interessante observar que a primeira carta que descreve os planos de anestesia publicada em 1847, foi seguida por
uma outra carta a respeito da maneira como um animal "não foi privado das sensações". Este problema foi
identificado claramente em 1847 como uma causa muito séria de desrespeito pelo bem-estar animal e da validação
dos dados científicos. A importância da anestesia e do uso ético dos animais envolvidos em investigações científicas
são documentados em relatórios e guidelines de diferentes organizações. O uso de técnicas anestésicas obsoletas
sem o conselho de um anestesista veterinário aumenta as possibilidades de períodos de anestesia inadequada durante
os trabalhos experimentais. Estas situações podem ter sérios efeitos sobre o bem-estar dos animais e resultados das
pesquisas, porque uma variedade de respostas relacionadas com o stress podem afectar a validade dos dados.
Diversos estudos realizados em animais de laboratório sob anestesia geral exigem também uma profundidade de
anestesia constante e reproduzível durante o procedimento experimental. Se este não for o caso a aplicação da “Lei
dos 3 Rs" (reduction, replacement and refinement) proposta por Russell e por Burch em 1959, está a ser
severamente negligenciada. O conhecimento do estado anestésico reduz a variabilidade entre animais, e aumenta
subsequentemente o poder estatístico dos estudos. Se o oposto acontecer mais animais serão usados
desnecessariamente.
O alívio eficaz da dor pós operatória em animais de laboratório deve também ser considerado como um importante
objectivo em todos os protocolos experimentais. Apesar da importância dada ao tratamento humano de animais de
laboratório na legislação nacional de muitos países, os analgésicos não são ainda administrados rotineiramente no
período pós-operatório. A falta de meios objectivos para avaliação da dor pode explicar em parte o uso
relativamente baixo dos analgésicos nos animais, em comparação com seu uso nos seres humanos. Contudo, os
preconceitos sobre a dor animal podem ser a principal razão para o seu uso limitado.
As variações nas respostas individuais aos anestésicos e analgésicos ocorrem com muita frequência. Tais variações
são mais significativas nos animais, onde as diferentes raças e estirpes podem apresentar respostas muito distintas, e
devido ao facto de relatórios verbais da dor não poderem ser obtidos dos animais. As técnicas correctas de anestesia
permitem um nível mais constante de anestesia, com aquisição de melhores dados, uma redução no número dos
animais usados e melhoria do bem estar animal.
[Anaesthesia and pain – implications in laboratory animals welfare]
It is interesting to notice that the first letter describing a scheme of stages of anaesthesia published in 1847, was
followed by another letter regarding the way the animal was not “deprived of sensation”. This problem was clearly
identified in 1847 as a very serious issue regarding animal welfare and validation of scientific data. The importance
of anaesthesia and the appropriate and ethical use of animals involved in scientific investigations are documented in
reports and guidelines from different organisations.
The use of obsolete anaesthetic techniques without the advice of a veterinary anaesthesiologist increases the
possibilities of periods of inadequate anaesthesia during research experiments. These situations may have
detrimental effects on the welfare of the animals’ and on research results if these periods remain undetected and
untreated. A variety of stress related responses will develop and these may affect the variability and quality of the
data. Several studies carried out in research animals under general anaesthesia also demand that a constant and
reproducible depth of anaesthesia is maintained throughout the procedure. If this is not the case the application of
the “Three Rs” rule (reduction, replacement and refinement) proposed by Russell and Burch in 1959, is being
severely disregarded. Knowledge of the anaesthetic state reduces variability between animals, and subsequently
increases the statistical power of the studies. If the opposite happens more animals will be used unnecessarily.
The effective alleviation of post-operative pain in laboratory animals should also be considered an important goal in
all research establishments. Despite the emphasis given to humane treatment of laboratory animals in the national
legislation of many countries, analgesics may still not be administered routinely in the post-operative period. The
lack of an objective means of pain assessment may account in part for the relatively infrequent use of analgesics in
animals, in comparison with their use in humans. However preconceptions about animal pain may be the major
reason for the limited use.
Variations in individual’s response to anaesthetics and analgesic occur relatively frequently. Such variations are
even more significant in animals, where different breeds and strains may present distinct responses and the fact that
verbal pain or awareness reports cannot be obtained from animals. Correct anaesthesia techniques allow a more
constant level of anaesthesia with better data acquisition from research animals, with a reduction in the number of
animals used and improved welfare.
90
Os peixes sentem dor?
Diniz, D.1 e Pereira, N.2
1 Oceanário de Lisboa (estagiário), Espl. D. Carlos I - Doca dos Olivais 1990-005 Lisboa
2 Oceanário de Lisboa, Espl. D. Carlos I - Doca dos Olivais 1990-005 Lisboa
O conhecimento da percepção da dor nos peixes ainda é escasso. Nas últimas décadas este tema tem vindo a ser
estudado e debatido, tendo gerado uma enorme controvérsia.
A noção de dor pressupõe uma componente sensorial, mas também uma componente emotiva (sofrimento). Esta não
só não é possível avaliar objectivamente, como também induz abordagens antropomórficas, que distorcem o estudo
do tema. É aceite, que a resposta a estímulos nocivos, capazes de conduzir ao dano ou destruição tecidular, constitui
um mecanismo protector intrínseco em qualquer animal. Neste contexto, o que importa diferenciar é se ocorre o
processamento dessa informação, pelo sistema nervoso, como dor, ou se ocorre apenas um acto reflexo nocicepção. Embora exista grande variação nas diferentes espécies, é aceite que os peixes possuem mecanismos de
nocicepção. As vias sensitivas, envolvidas na transmissão de estímulos nocivos, são semelhantes às encontradas nos
mamíferos, sendo observada a existência de fibras nervosas periféricas, quer mielinicas do tipo A-delta, de condução
rápida, quer do tipo C (amielinicas), de condução lenta. Está igualmente documentada a participação de
neurotransmissores, análogos aos que intervêm na nocicepção dos mamíferos, bem como, a produção de
neuromodeladores, nomeadamente opioides.
A nocicepcção não pressupõe o reconhecimento da dor. Deste modo a polémica reside na questão se nos peixes
existe de facto o reconhecimento da dor ou simplesmente nocicepção. Por um lado, a inexistência de neocortex nos
peixes, identificado nos humanos como uma estrutura fundamental na percepção consciente da dor, sugere essa
incapacidade nos peixes. Por outro lado, a observação do comportamento e a avaliação de capacidades cognitivas
dos peixes, sugerem capacidade na percepção de dor, nomeadamente pela manifestação de “memória” perante
estímulos dolorosos. Deste modo, a inexistência de estruturas neurológicas não exclui a possibilidade que os peixes
não possam experimentar reacções negativas similares à dor experimentada por outros vertebrados, situados num
nível superior da escala filogenética. A compreensão da percepção da dor nos peixes deverá ter como base os dados
disponíveis da sua neuroanatomia e neurofisiologia, bem como a observação do seu comportamento e a avaliação
das suas capacidades cognitivas. Apesar da controvérsia e do conhecimento cientifico ainda inconsistente, os dados
disponíveis não eliminam a possibilidade do reconhecimento da dor pelos peixes. Este facto por si só justifica a
necessidade de evitar ou minimizar a exposição dos peixes a potenciais estímulos dolorosos.
[Do fish feel pain? ]
Knowledge of pain perception in fish is still scarce. During the last decades this issue has been object of further
study and discussion, generating enormous controversy.
Pain includes a sensory component, but also a component of emotional feeling (suffering). Pain is not possible to
evaluate in an objective way, and anthropomorphic approaches undermine further understanding of this subject. It is
commonly accepted that the ability to react to noxious stimuli, which lead to tissue damage or destruction, is a
protecting mechanism inherent to every animal. In this context, it matters to distinguish if the registration of this
information by the nervous system occurs as pain, or if only as a reflected act – nociception. In spite of the variation
between different fish species it is recognized that fish have a nociceptive system. The neuropath ways involved in
the transmission of noxious stimulus are analogous to those found in mammals, in which two types of nerve fibres
are observed: A-delta, myelinated nerve fibres of fast conduction; and C fibres, unmyelinated nerve fibres of slow
conduction. The participation of neurotransmitters, analogous to those acting in mammal nociception, as well as the
production of neuromodulators, like endogenous opioids, is also documented. Nociception does not imply pain
perception. The controversy remains whether fish really percept pain, or if only nociception occurs. The inexistence
of neocortex in fish, identified in humans as a basic structure in pain awareness, suggests this inability in fish. On
the other hand, observation of fish behaviour and the evaluation of their cognitive abilities, suggest a capacity in
pain perception, for example trough the manifestation of “pain memory”. Therefore, the inexistence of neurological
structures does not exclude the possibility that fish can experiment negative reactions, similar to pain experimented
by other vertebrates in a superior level of the phylogenetic scale. The understanding of pain perception in fish must
be based in the available data of its neuroanatomy and neurophysiology, as well as in behavioural observation, and
the evaluation of their cognitive capacities. Despite the controversy and scarce scientific knowledge, the available
data does not eliminate the possibility of pain recognition by fish. This fact justifies, by itself, the necessity to
prevent or minimize potential painful stimuli in fish.
91
Bem-estar animal: um conceito legítimo para peixes?
Galhardo, L.1, Oliveira, R.2
1 Bolseira de Doutoramento da FCT, Unidade de Investigação em Eco-Etologia, Instituto Superior de Psicologia Aplicada, Rua Jardim do
Tabaco, 34 1149-041 Lisboa, [email protected].
2 Professor Associado com Agregação, Unidade de Investigação em Eco-Etologia, Instituto Superior de Psicologia Aplicada, Rua Jardim do
Tabaco, 34 1149-041 Lisboa, [email protected].
Os peixes constituem um valioso recurso para os humanos. O seu bem-estar tem sido alvo de consideração
crescente, fazendo parte da legislação Europeia de protecção, apesar das lacunas de informação existentes. O
conceito de bem-estar animal tem vindo a ser aplicado a peixes, com alguma controvérsia ligada à sua capacidade de
sofrimento. A formação de representações mentais declarativas é um pre-requisito para a existência de senciência e
tem vindo a ser descrita em peixes em contextos de interacção social, memória espacial e aprendizagem. Tal como
na fisiologia do stress, estudos recentes acerca da percepção de dor e medo em peixes têm mostrado que eles
possuem características neuroanatómicas, fisiológicas e comportamentais semelhantes à dos tetrápodes. O efeito
psicológico do stress em peixes tem também sido alvo de estudos recentes. A complexidade cognitiva dos peixes
tem implicações relevantes para o seu estatuto moral e recomendações relacionadas com a manutenção em cativeiro.
[Animal welfare: a legitimate concept for fish?]
Fish stocks are a valuable resource for mankind. Fish welfare is an issue that is gaining increased relevance, being
part of European legislation despite the fact that some information is still missing. The concept of animal welfare
has been applied to fish even though some significant discussion on its capacity to suffer is still going on. Producing
mental representations is a perquisite for the recognition of a sencient capacity and this has been described in fish
exposed to studies on social interaction, spatial memory and learning. Recent studies have demonstrated that,
similarly to what happens with stress physiology, neuroanatomic, behaviour and physiology characteristics behind
pain and fear perception in fishes, are identical to tetrapodes. The psychological effect of stress has also been the
target of recent investigations. Fish cognitive complexity has important implications on its moral status and the
recommendations for convenient confinement and farming.
92
O stress em peixes em cativeiro e estratégias para o mitigar
Pereira, N., Nunes, G.
Oceanário de Lisboa, Esplanada D. Carlos I, 1990-005, Lisboa.
O stress pode contribuir para o aumento da morbilidade e mortalidade em peixes.
Os peixes como todos os organismos vivos necessitam de manter um estado fisiológico de equilíbrio interno, a
homeostasia. Na presença de um estímulo destabilizador deste equilíbrio (factor stressante) o peixe desencadeia uma
série de mecanismos de resposta quer comportamentais quer fisiológicos para manter a homeostasia - a resposta
fisiológica ao stress. Este mecanismo é semelhante ao dos mamíferos. Sendo uma resposta fisiológica e
imprescindível para a sobrevivência se é ultrapassado o limiar de tolerância ao stress começam a surgir alterações
que prejudicarão a saúde do peixe.
Os factores stressantes poderão estar relacionados com a qualidade de água, serem de carácter físico, biológico ou
nutricional.
Os autores compilaram algumas estratégias que deveram ser seguidas para mitigar os efeitos do stress em peixes em
cativeiro, diminuindo a susceptibilidade às doenças e aumentando o bem-estar animal.
Estas estratégias incluem diferentes aspectos desde o respeito pela carga biológica correcta evitando excesso de
animais, existência de protocolos de maneio adequados que providenciem parâmetros adequados de qualidade de
água e que minimizem a exposição dos peixes aos factores de stress nomeadamente com a aplicação de técnicas de
sedação e anestesia sempre que necessário.
[Stress in captive fish and strategies to mitigate it]
Stress in fish can contribute for the morbility and mortality increase. Fish as all living organisms, are creatures that
need to keep a physiological state of internal balance, the homeostasis. In the presence of a destabilizing stimulus
(stress factor) for this balance, fish will unchain a series of physiological and behavioural response mechanisms in
order to keep homeostasis - the physiological response to stress. This mechanism is similar to the one found in
mammals. This physiological reaction is essential for fish survival, if the threshold of stress tolerance is exceeded,
then alterations will start to appear that will harm fish health. The stress factors can be related with water quality,
and physical, biological or nutritional disorders. The authors have compiled some strategies that must be followed in
order to mitigate the effects of stress in captive fish, therefore diminishing illness susceptibility and increasing
animal welfare.
These strategies will show that everything must be taken into account, from providing the right space for fish and
avoiding crowding, to correct fish handling procedures, from enabling good and stable water quality parameters to
minimize exposure to stress factors namely the by the use of anaesthesia and sedation techniques whenever
necessary.
93
Biotecnologia animal – a perspectiva ética
Olsson, I.A.S.1 e Sandøe, P.2
1 Instituto de Biologia Molecular e Celular, Porto, Portugal
2 Danish Centre for Bioethics and Risk Assessment, Copenhagen, Denmark
Cientistas e indústria defendem os benefícios da aplicação das novas tecnologias na produção animal, mas o público
Europeu encara biotecnologia na pecuária com precaução. Esta diferença de atitudes não pode ser explicada meramente
em termos de diferença de conhecimentos – existe também uma diferença de valores subjacente. Enquanto que os
proponentes da biotecnologia realçam os seus benefícios, as preocupações do público colocam outras questões em
evidência. Esta controvérsia é um motivo para analisar as diferentes perspectivas de como os humanos deveriam tratar os
outros animais, e para discutir as implicações destas diferentes posições na biotecnologia animal, como também outras
formas de utilização dos animais.
Na actualidade, a maioria das pessoas defende que a forma como os animais são tratados é, até certo ponto, importante.
Alguns dizem que a única responsabilidade dos humanos é manter os animais com uma boa saúde fisica. Existem pelo
menos duas razões diferentes para escolher esta limitação: a primeira baseada na ideia de que os animais não são seres
sencientes e, por isso, o que interessa é apenas a sua saúde física; a segunda argumenta que embora as experiências
subjectivas dos animais sejam importantes, é algo que não pode ser medido. Este segundo ponto de vista aborda uma
noção alternativa (ou mais abrangente) da responsabilidade humana, nomeadamente que esta requer a consideração pelos
sentimentos subjectivos dos animais. As duas posições sobrepõem-se amplamente: na maioria dos casos a doença é
acompanhada por sentimentos negativos (dor, desconforto), mas a diminuição da saúde pode ocorrer, pelo menos
temporariamente, sem dor ou sofrimento, e os sentimentos negativos podem com certeza surgir sem que existam
problemas de saúde. A terceira noção do que é eticamente importante foi formulada para abranger intervenções que
prejudiquem a integridade animal sem afectar directamente a saúde ou sem causar sentimentos negativos (tal como
castrações com anestesia). A biotecnologia tem efeitos óbvios na saúde animal, quer de uma forma positiva (ex. Markerassisted selection para resistência a doenças) quer negativa (ex. aumento da morbilidade e mortalidade perinatal após a
clonagem), mas o mesmo acontece com as técnicas mais tradicionais de produção animal. Quanto aos efeitos da
biotecnologia nos sentimentos subjectivos dos animais, estes são maioritariamente devidos aos efeitos na saúde. Alguns
argumentam que a biotecnologia – pelo menos no caso da modificação genética – prejudica, por si só, a integridade
animal. Mas também as técnicas mais tradicionais interferem com a integridade dos animais, tal como quando o
melhoramento animal produz animais que são incapazes de acasalar naturalmente ou de criar uma ninhada inteira.
Resumindo, os problemas que a biotecnologia, de facto, origina não parecem ser radicalmente diferentes dos associados às
técnicas mais tradicionais de produção animal. Esta evidente semelhança tem sido usada para defender que não existem
razões para as preocupações com a biotecnologia animal. Nós iremos reverter este argumento e discutir que a controvérsia
com a biotecnologia animal deveria ser usada para estimular uma discussão mais geral sobre o que pode e o que não pode
ser feito aos animais.
[Animal biotechnology – the ethics perspective]
Both scientists and industry argue for the benefits of applying new technologies on farm animals, but the European public
views farm animal biotechnology with caution. This difference in attitude cannot be explained merely in terms of differing
knowledge – there is also a difference in underlying values. While biotechnology proponents focus on benefits, public
concern brings up other issues at stake. The controversy gives reason to analyze the different views on how humans should
treat other animals and discuss the implications of these differing positions on animal biotechnology as well as other ways
of using animals. Most people today would defend that how animals are treated matter to some extent. Some say that
the only human responsibility is to keep animals in good physical health. There are at least two different reasons for
choosing this limitation: the first based on the idea that animals are not sentient and so their physical health is all
that matters, the second arguing that although animal subjective experience matter, this cannot be measured. This
second view meets an alternative (or extended) notion of human responsibility, namely that which requires
consideration of animal subjective feelings. The two positions are largely overlapping: in most cases ill health is
accompanied by negative feelings (pain, discomfort), but bad health may occur, at least temporarily without pain or
suffering, and negative feelings can certainly occur without there being a health problem. The third notion of what
matters ethically was formulated to cover interventions that harm animal integrity without directly affecting health
or causing negative feelings (such as castration under anaesthesia). Biotechnology has obvious effects on animal
health, in both positive (eg marker-assisted selection for disease resistance) and negative (increased perinatal
morbidity and mortality after cloning) directions, but so does more traditional techniques applied to animals. As
regards biotechnology effects on animal subjective feelings, these are mainly coupled to health effects. Some argue
that biotechnology – at least in the case of genetic modification – in itself harms animal integrity. But also more
traditional uses of animals interfere with integrity, such as when selective breeding produces animals that are unable
to mate naturally or to raise an entire litter. In summary, it seems that the problems that biotechnology indeed gives
rise are not radically different from those associated with more traditional ways of using animals. This perceived
similarity has been used to defend that there is no reason to worry about animal biotechnology. We will reverse this
argument and argue that the controversy over animal biotechnology should be used to stimulate a more general
discussion of what may or may not be done to animals.
94
As novas imposições europeias ao nível do ambiente e do bem-estar animal e a sua implementação
na Escola Superior Agrária de Coimbra.
Ferreira, A.J.D., Conceição, M.A., Amaro, R., Feio, G., Oliveira, A.E., Lopes, M.A.R.
Centro de Estudos dos Recursos Naturais, Ambiente e Sociedade (CERNAS), Escola Superior Agrária de Coimbra, Bencanta, 3040-316
Coimbra, [email protected]
O desempenho ambiental das explorações agrícolas é cada vez mais motivo de preocupação. Com efeito as
actividades agro-pecuárias podem ser bastante poluentes e os seus impactes são regra geral difíceis de resolver com
soluções de fim de linha.
Por outro lado, o acesso dos agricultores a subsídios europeus dependerá cada vez mais do seu desempenho
ambiental e de questões de bem-estar animal, tendência que é já observável nos em vários regulamentos
comunitários, como é o caso do Regulamento (CE) nº 1257/1999 e sobretudo do Regulamento (CE) nº1782/2003.
Ao nível ambiental, este regulamento, que condiciona a atribuição de subsídios europeus às explorações agropecuárias, pressupõe a observância de algumas directivas, a partir de 1 de Janeiro de 2005, nomeadamente a
directiva relativa à conservação das aves selvagens (Directiva 79/409/CEE), a directiva de protecção dos aquíferos
contra a poluição por substâncias perigosas (Directiva 80/68/CEE), a directiva relativa à protecção dos solos na
utilização agrícola de lamas de depuração (Directiva 86/278/CEE), a directiva relativa à protecção das águas contra
a poluição causada por nitratos de origem agrícola (Directiva 91/676/CEE), e a Directiva 92/43/CEE relativa à
preservação dos habitats naturais e da fauna e flora selvagens.
Em 1 de Janeiro de 2007 entram em vigor as directivas sobre bem-estar dos animais, nomeadamente a Directiva
91/629/CEE relativa às normas mínimas de protecção de vitelos, a directiva 91/630/CEE relativa às normas mínimas
de protecção de suínos e a directiva 98/58/CE relativas à protecção dos animais nas explorações pecuárias.
As implicações do regulamento (CE) nº1782/2003 para as explorações agro-pecuárias serão discutidas nesta
comunicação, que apresentará a estratégia seguida pela Escola Superior Agrária de Coimbra no sentido de responder
a estas novas solicitações ambientais e de bem-estar animal, no âmbito da implementação de um Sistema de Gestão
Ambiental, sob os auspícios do projecto Life Ambiente. LIFE03 ENV/P/000501, EMAS@SCHOOL,
“Environmental Management and Audit Scheme implementation at a complex school”.
[The new European requirements on environment and animal welfare and its implementation at
ESAC]
Farm environmental performance is increasingly a matter of concern. This adds to the fact that agriculture and
husbandry are often very pollutant activities where end of pipe solutions are difficult to implement.
An additional factor pushing towards the relevance of farm environmental performance and animal welfare is the
access to EU aid schemes. This tendency is already observable in several EU Regulations, such as Regulation (EC)
nº 1257/1999, and above all on Regulation (EC) nº 1782/2003.
At the environmental level the Regulation (EC) nº 1782/2003 links farm access to EU agriculture aid schemes to the
observation of several directives. From the 1st of January 2005 onwards several environmental directives have to be
observed to access EU financing, namely: Council Directive 79/409/EEC on the conservation of wild birds; Council
Directive 80/68/EEC on the protection of groundwater against pollution caused by certain dangerous substances;
Council Directive86/278/EEC on the protection of the environment, and in particular of the soil, when sewage is
used in agriculture; Council Directive 91/676/EEC concerning the protection of waters against pollution caused by
nitrates from agricultural sources, and Council Directive 92/43/EEC on the conservation of natural habitats and of
wild flora and fauna.
For the 1st of January 2007 onwards, several animal welfare directives will be enforce, namely Council Directive
91/629/EEC, laying down minimum standards for the protection of calves, Council Directive 91/630/EEC, laying
down minimum standards for the protection of pigs and Council Directive 98/58/EC, concerning the protection of
animals kept for farming purposes.
The implications of EU Regulation (EC) nº 1782/2003for the farms will be discussed at the light of the “Escola
Superior Agrária de Coimbra” experience acquired by the implementation of an Environmental Management
System under the EU Life Environment project LIFE03 ENV/P/000501, EMAS@SCHOOL, “Environmental
Management and Audit Scheme implementation at a complex school”.
95
Equinos
Patologias do sistema musculo-esquelético
Núncio Fragoso, José
Rua Sousa Lopes, LT PO AP 167, 1600 Lisboa, Tel: 21 797 9735
Servindo-se de meios audiovisuais, pretende-se mostrar, especialmente aos colegas menos avisados ou aos iniciados
em prática equina, em primeiro lugar, a base do diagnóstico e os seus métodos, no que concerne à patologia dos
diversos tipos de claudicação.
Mostrar-se-ão casos mais frequentes de claudicação e, por último a utilização e os resultados de exames
complementares de diagnóstico nas diversas patologias do sistema musculo-esquelético.
[Musculoskeletal system pathologies]
Using audiovisual materials, the objective of the presentation is to show, specially to less attentive colleagues or
those beginning the equine practice, firstly, the basis of the diagnosis and its methods concerning the pathology of
several types of lameness. Most frequent lameness cases will be shown and, at last, the use of the results of
complementary diagnostic exams in several pathologies of the musculoskeletal system.
96
Um caso recorrente do sindroma da ampola ocluída num garanhão Puro Sangue Inglês
Atayde, L.1, Love, C.C.2, Rocha, A.1,3
1 Instituto de Ciências Biomédicas Abel Salazar, Universidade do Porto,
2 Texas A&M University, College Station, TX, USA,
3 Ceca/ICETA, Universidade do Porto
Fizeram-se 12 tentativas de recolha de sémen com vagina artificial, a um garanhão puro sangue Inglês com 12 anos
de idade. O mesmo denotava excelente libido, fazendo enérgicas intromissões do pénis, fortes movimentos pélvicos,
sem ejacular. Uma monta natural numa égua em cio, também não produziu resultado. O garanhão tinha sido
utilizado na época reprodutiva anterior (2004), tendo produzindo consistentemente ejaculados de boa qualidade e
fertilidade comprovada. Submeteu-se o garanhão a um exame clínico genital, incluindo exame manual e ecografico
da genitália interna e externa. À palpação rectal notou-se que a ampola direita estava aumentada. Todas as outras
características genitais encontravam-se dentro dos parâmetros normais. Ao exame ecográfico, ambas as ampolas
estavam aumentadas e a linha ecolucente do lúmen ausente, sugerindo acumulação de sémen. Baseado nestes
resultados, chegou-se a um diagnóstico preliminar de síndroma da ampola ocluída (1). Como tratamento para esta
patologia foram realizadas massagens vigorosas das ampolas per rectum e administradas 20 UI de oxitocina iv,
antes de cada tentativa de recolha de sémen. Durante 3 dias consecutivos o cavalo ejaculou respectivamente ao 3º, 2º
e 3º salto, tendo o programa de recolha sido interrompido durante 3 dias. Quando se recomeçou o programa de
tratamentos e de recolha de sémen, obteu-se um ejaculado tingido de sangue ao 4º salto, mas o cavalo não ejaculou
no dia seguinte. Nos 2 dias subsequentes e em 8 tentativas de recolha, o garanhão produziu 3 ejaculados (todos
tingidos de sangue). As análises do sémen revelaram que a percentagem de espermatozóides normais variou de 50%
a 58%, com 8% a 14% de cabeças soltas (menos que os 20% ou mais relatados anteriormente para esta patologia 1). O volume da fracção filtrada do ejaculado foi de 105±58 mL, sendo a motilidade e a concentração média
respectivamente de 53±4% e 119±90 x 10 6 espermatozóides/mL. As tentativas de recolha de sémen foram então
interrompidas durante 5 semanas, após as quais não se conseguiu obter mais nenhum ejaculado. Nesta altura o
exame ecográfico revelou ampolas muito distendidas, sem a linha ecolucente do lúmen. O garanhão continuou a
exibir excelente libido. Segundo o conhecimento dos autores, este é o primeiro caso descrito em Portugal, do
síndroma da ampola ocluida. Os veterinários deverão estar atentos a esta situação.
Referencias: (1) Love CC et al. (1992) Sperm occluded (plugged) ampullae in the stallion. Society of
Theriogenology. Proceedings. pp:117-127
[A recurrent case of sperm occluded (plugged) ampullae in a Thoroughbred stallion]
A 12 year-old Thoroughbred stallion, with very good libido, displaying energetic intromissions and pelvic thrust
movements, failed to ejaculate after 12 attempts to collect semen with an artificial vagina, and after one natural
service. This stallion was routinely used as a semen donor in the previous (2004) breeding season, producing
ejaculates of good quality and proven fertility. After the unsuccessful semen collection attempts, a breeding
soundness evaluation (BSE) was performed including manual and ultrasonographic evaluation of the internal and
external genitalia. Palpation per rectum identified an enlarged right ampulla. All other aspects of the evaluation were
within normal limits. The ultrasound evaluation determined that both ampullae were enlarged and the echolucent
lumen characteristic of the normal gland was absent, suggesting sperm accumulation. Based in these results, a
preliminary diagnosis of plugged ampullae syndrome was made (1). To treat the condition, vigorous massages of the
ampullae were performed per rectum and 20 iu of oxytocin (iv) were administered, immediately before all
subsequent semen collection attempts. During three consecutive days, the stallion ejaculated either at the 2nd or 3rd
mount, after which semen collection was discontinued for 3 days. When the program was re-initiated, a blood-tinged
ejaculate was obtained in the 4th mount, but the stallion failed to produce semen in the following day. In the next two
days, the stallion produced 3 ejaculates (all blood-tinged) out of 8 collection attempts. Semen collection was then
discontinued for a 5- week period, after which no ejaculate could be obtained despite treatments and repetitive
collection attempts. Percentage of normal sperm cells in the ejaculates varied from 50 to 58%, with 8% to 14% of
tailless heads (less than the > 20% previously reported for this condition). Mean gel-free volume was 105±58 mL,
and mean progressive motility and concentration was 53±4% and 119±90 x 106 sperm cells/mL, respectively. The
stallion kept displaying excellent libido throughout the all period. After the 5-week rest period, ultrasound scanning
revealed grossly enlarged ampullae without an echolucent lumen. To the authors’ knowledge this is the first reported
case of plugged ampullae in a stallion, in Portugal. Horse veterinarians need to be aware of this condition.
References: (1) Love CC et al. (1992). Sperm occluded (plugged) ampullae in the stallion. Society of
Theriogenology. Proceedings. pp:117-127
97
Um caso de miíase nasal por Rhinoestrus
Waap, H.1, Gomes, J.1, Rebêlo, E.1, Bastos, J.G.1, Afonso, A.1, Carvalho, P.1, Fragoso, L.2, Almeida, A.P.G.3
1 Laboratório Nacional de Investigação Veterinária, 1549-011 Lisboa
2 Luso-Pecus, 2135 Porto Alto
3 Instituto de Higiene e Medicina Tropical/UNL (Unidade de Entomologia Médica), 1349-008 Lisboa
Descreve-se um caso de miíase nasal por Rhinoestrus sp. num cadáver de cavalo.
Os Rhinoestrus fazem parte da subfamília Oestrinae e as suas larvas são parasitas obrigatórios das fossas nasais,
seios frontais, faringe e laringe de equídeos. A presença das larvas está associada a sintomatologia de grau variável,
podendo nalguns casos estar na origem da morte do animal.
No Homem, foram descritos casos de oftalmomiíase por larvas de Rhinoestrus.
Apesar de se tratar de uma parasitose pouco conhecida, estudos recentes confirmam a ocorrência de miíase nasal por
Rhinoestrus em equinos no Sul da Europa. Em Portugal desconhece-se a epidemiologia da rinoestrose, bem como o
possível impacto clínico e económico.
A classificação do género foi realizada com base nos caracteres morfológicos descritos por Zumpt (1965). A
presença de características mistas de R. purpureus e R. usbekistanicus nos exemplares observados não permitiu
diferenciar as duas espécies. Os resultados obtidos sugerem uma espécie única, hipótese corroborada por
observações semelhantes e estudos filogenéticos recentemente publicados.
[A case of nasal myiasis caused by Rhinoestrus]
This report describes a case of nasal myiasis caused by Rhinoestrus in a horse cadaver.
The Rhinoestrus belong to the Oestrinae subfamily and their larvae are obligatory parasites of the nasal cavities,
sinuses, pharynx and larynx of equids. The presence of larvae is associated to different degrees of clinical severity,
including death.
Rhinoestrus is known to affect humans, causing ophthalmomyiasis.
Although little is known on this parasitosis, recent studies confirm the occurrence of nasal myiasis by Rhinoestrus in
Southern Europe. In Portugal, there is no information available regarding the epidemiology, clinical and economic
impact of rhinoestrosis.
The genus was classified on basis of the morphological characters described by Zumpt (1965). The presence of
mixed characteristics of R. purpureus and R. usbekistanicus on the observed specimens did not allow species
differentiation. The hypothesis that we are dealing with a single species is corroborated by recently published
similar observations and filogenetic studies.
98
Inseminação artificial em equinos em Portugal
Vila-Viçosa, Maria José C.
Universidade de Évora
A inseminação artificial de equinos, em Portugal, esporadicamente realizada antes da década de 80, sofreu a partir
de então um incremento difícil de quantificar.
A regulamentação existente é pouca, confusa, incompleta e resultado de más traduções e interpretações de directivas
comunitárias.
Alguns livros genealógicos não aceitam a inscrição de poldros nascidos de inseminação artificial.
A APSL emitiu um Regulamento de Reprodução da Raça Lusitana, Anexo V do Regulamento do Livro
Genealógico, condicionando a inscrição de poldros nascidos de inseminação artificial a regras de implementação
difícil e por isso desmotivantes.
Entretanto as equipas, dedicadas à reprodução animal, de instituições oficiais como centros de investigação,
universidades e escolas superiores agrárias têm desenvolvido alguns projectos na área da reprodução equina. Nestas
instituições, a inseminação artificial tem sido aplicada como prestação de serviço à comunidade com as limitações
daí resultantes para a investigação propriamente dita.
Têm sido os veterinários privados dedicados à clínica de equinos, que sobretudo nos últimos anos e que procurando
satisfazer a pretensão dos clientes, mais se têm dedicado à aplicação da inseminação artificial quer com sémen local
quer vindo do estrangeiro, congelado ou refrigerado, este até transportado de avião no próprio dia da colheita.
As condicionantes legais e regulamentares acima referidas têm sido impeditivas da divulgação da actividade
desenvolvida e dos respectivos resultados.
Procurando contornar as limitações expressas, vamos tentar dar uma ideia da situação da inseminação artificial dos
equinos em Portugal.
Faremos uma breve revisão sobre a inseminação artificial nos equinos, suas eficiência, contingências e técnicas
actualmente disponíveis.
Apresentaremos uma revisão comentada sobre a legislação portuguesa e comunitária referente não só à aplicação da
técnica como também ao comércio de sémen equino.
A base do trabalho será a consulta de material bibliográfico, o contacto com os colegas no terreno, a experiência
própria e a consulta de material legislativo e regulamentar.
Esperamos, com este contributo, motivar os interessados a encetar as iniciativas necessárias à implementação de
legislação que permita o desenvolvimento da inseminação artificial em equinos em Portugal com os benefícios a ela
inerentes para a produção coudélica nacional.
[Equine artificial insemination in Portugal]
In Portugal, the equine artificial insemination has been sporadically performed before 1980 and his development,
after that time is difficult to value precisely.
The few present portuguese legislation about, is confused and deficient.
Some Stud Books don’t accept foals conceived by artificial insemination.
The Lusitano Breeders Association, approved a reproduction statute that rends conditional, to rules difficult to
implement, the registration in the stud book of foals conceived by artificial insemination. This situation is not
motivating of the use of the technique.
In the mean time, the animal reproduction teams of research stations, universities and agricultural schools developed
some research projects on equine reproduction. Here the artificial insemination has been done as a service for the
community with the expected limitations for the research work.
In the last years, the artificial insemination on horses had been performed mainly by some equine practitioners.
Corresponding to horse owners requests they are using whether local semen or frozen or chilled achieved abroad.
The diffusion of their work and publishing of the results has not been done on account of the legal and regulatory
constrictions above refereed.
Trying to by pass all the announced limitations, we will make a review on the state of the art in Portugal.
We will make a short review about the efficacy, fortuitousness and actual techniques on equine artificial
insemination.
We will present a commented review of the Portuguese and Communitarian legislation around equine artificial
insemination and trade of equine semen.
The ground of the work will be bibliography research, the contact with colleagues on the field, own experience and
legislation research.
With this contribution, we hope to motivate the partners to start the necessary initiatives to implement legislation
with which the development of equine artificial insemination will be possible and will contribute to the development
of the portuguese horse industry.
99
Estudo ecográfico do feto e do complexo útero-placentário na égua Lusitana no último terço da
gestação
Agrícola, R.1, Ferreira-Dias, G.2, Barbosa, M.1, Medeiros, J.A.S.3
1 Coudelaria Nacional, Vale de Santarém; 2 CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária, R.Prof. Cid dos Santos, Lisboa; 3 Faculdade de
Medicina, Universidade de Coimbra, Instituto de Fisiologia, Coimbra.
Actualmente, os elevados custos económicos associados à tecnologia reprodutiva equina, justificam um
acompanhamento ecográfico seriado da gestação, reduzindo potenciais situações de aborto ou distócia. Pretendeu-se
estabelecer no último terço de gestação na égua Lusitana, os parâmetros normais referentes (i) ao complexo uteroplacentário (CTUP)* (espessura conjunta utero-placentária); (ii) ao diâmetro ocular fetal; (iii) ao diâmetro da aorta
fetal; (iv) à frequência cardíaca e (v) à actividade fetal.
Foram observadas 10 éguas (5-9 anos) da Coudelaria Nacional, por ecografia transrectal e transabdominal, a partir
do 9 mês até ao início do 11 mês de gestação. O acompanhamento ecográfico seriado foi realizado mensalmente,
com o ecógrafo “Parus 240” (Pie Medical) equipado com sonda rectal linear 6/8 Mhz e sonda sectorial convexa
3,5Mhz. As medições do CTUP, da frequência cardíaca, do diâmetro da aorta em sístole, e da actividade fetal foram
efectuadas por ecografia transabdominal. A recolha de dados adicionais referentes ao CTUP e ao diâmetro ocular
fetal foi realizada por técnica transrectal. A actividade fetal foi determinada de acordo com uma escala de
movimento fetal (0=inactividade a 3=hiperactividade).
A análise dos dados ecográficos demonstrou não haver qualquer diferença significativa entre as técnicas transrectal
vrs. transabdominal para a avaliação do CTUP no último trimestre da gestação. Verificou-se um aumento
significativo do CTUP dorsal e ventral, do 9º ao 10ª e do 10º ao 11º mês (p<0.0001)(ANOVA, LSD test, Scheffe
test). Os diâmetros ocular e da aorta do feto sofreram igualmente aumentos significativos ao longo do trimestre
avaliado (p<0.001). A frequência cardíaca inicial do feto diminui mensalmente (p<0.001). Contudo, a frequência
cardíaca final reduziu apenas no 11º mês. No 9º mês, 30% dos fetos apresentaram hiperactividade (3), enquanto que
no 10º, apenas 20%. No 11º mês todos os fetos apresentaram uma actividade normal (2).
Na raça Lusitana, à semelhança de outras raças equinas, o exame ecográfico seriado da gestação permite avaliar o
crescimento, a evolução e o bem estar fetal, assim como o desenvolvimento do complexo útero – placentário. O
estabelecimento de parâmetros próprios da raça Lusitana poderão contribuir para um acompanhamento clínico da
gestação mais específico.
* “Combined thickness of uterus and placenta”- CTUP.
[Ultrassonographic study of the fetus and combined thickness of uterus and placenta in the
Lusitano mare during the last trimester of pregnancy]
Nowadays, high economical costs associated with the most up-dated equine reproductive technologies, justify a
serial ecographic follow-up of gestation, reducing potential risks of abortion and dystocia. The aim of this study was
to establish, during the last trimester of pregnancy in the Lusitano mare, the following normal parameters: (i)
combined thickness of uterus and placenta (CTUP); (ii) fetal ocular diameter; (iii) fetal aorta diameter; (iv) heart rate
and (v) fetal activity. A group of 10 mares (5-9 years of age) from Coudelaria Nacional was followed by transrectal
and abdominal ultrasonography, from the 9th to the 11th month of gestation. Serial ecographic exams were performed
monthly, with the ultrasound “Parus 240” (Pie Medical), equipped with a linear rectal probe 6/8Mhz and a sectorial
convex probe 3,5Mhz. The evaluation of CTUP, fetal heart beat, diameter of the aorta in systole and fetal activity
was accomplished by transabdominal ultrassonography. Additional data referring to CTUP and fetal ocular diameter
was obtained by transrectal technique. Fetal activity was based on a fetal movement scale (0=inactivity to
3=hyperactivity).
The analysis of ecographic data showed no difference between transrectal vrs. transabdominal techniques for the
evaluation of CTUP in the last trimester of pregnancy. There was an increase in dorsal and ventral CTUP from the
9th to the 10th and from the 10th to the 11th months (p<0.0001)(ANOVA, LSD test, Scheffe test). Fetal ocular and
aorta diameters also increased significantly throughout the last trimester (p<0.001). The fetal initial heart beat
decreased monthly (p<0.001). However, the final heart beat was only reduced in the 11th month. In the 9th month,
30% of the fetuses presented hyperactivity (3), while in the 10th month only 20%. In the 11th month all fetuses
showed normal activity (2).
In the Lusitano breed, like in other equine breeds, serial ultrassound exam of gestation allows for the evaluation of
growth, evolution and welfare of the fetus, as well as the development of the uterus and placenta. The establishment
of parameters for the Lusitano breed might contribute for a more specific clinical follow-up of gestation.
100
Comportamento reprodutivo do Cavalo do Sorraia em regime extensivo
Barão da Cunha, M.1 e Almada, V.C.2
1 Jardim Zoológico de Lisboa, Estrada de Benfica, 158-160, 1549-004 Lisboa
2 Instituto Superior de Psicologia Aplicada, Rua Jardim do Tabaco, 34, 1149-041 Lisboa
Dada a importância de se preservar o cavalo do Sorraia, elemento de enorme valor no nosso património biológico e
em estado crítico de ameaça, pareceu-nos importante investigar se o comportamento reprodutivo e maternal dos
adultos e o desenvolvimento do comportamento dos poldros se enquadram dentro dos parâmetros considerados
“normais” ou “saudáveis” quando comparado com outras raças de equinos e até mesmo com outras espécies de
equídeos.
Os objectivos específicos consistiram na elaboração de uma lista dos comportamentos observados e descrição dos
mesmos, na quantificação dos comportamentos dos poldros determinantes para o seu desenvolvimento, na análise
dos comportamentos e interacções progenitora-poldro e na análise dos comportamentos e interacções reprodutivas
égua-garanhão. A amostra compreendeu uma população de 16 cavalos do Sorraia – um garanhão, 10 éguas e cinco
poldros – em regime extensivo, localizada na Coudelaria de Alter, em Alter do Chão, alternadamente em dois
cercados, com áreas aproximadas de 23 e cinco hectares.
A metodologia desta investigação fundamentou-se na descrição de todos os comportamentos observados. Em termos
quantitativos, os poldros foram observados em simultâneo, em intervalos regulares de 30 minutos, sendo o seu
comportamento individual registado nesse momento – registo instantâneo de varrimento (Martin & Bateson, 1994).
Nestes pontos de observação foram também registadas as distâncias a que os poldros se encontravam das mães. Nos
adultos foram realizadas observações contínuas para os comportamentos considerados relevantes para o estudo –
registo contínuo em amostragem de todas as ocorrências de comportamento (Martin & Bateson, 1994) e
quantificadas as interacções reprodutivas e respectivos comportamentos. Nos procedimentos destaca-se, ainda, o
calendário geral das observações sistemáticas que decorreram entre 10 de Fevereiro e 9 de Junho de 2000, realizadas
durante 38 dias, totalizando 304 horas de observação.
Os resultados obtidos das observações qualitativas evidenciam o repertório comportamental referido para outras
raças de cavalos e, inclusivamente, para outros equídeos. De um modo geral, os resultados obtidos na análise
quantitativa apontam para um desenvolvimento do comportamento que segue os padrões conhecidos para a espécie
não parecendo revelar qualquer indício de patologia. Os comportamentos maternais e as interacções entre
progenitora e poldro foram totalmente adequados de forma a possibilitarem a sobrevivência do poldro. O
comportamento sexual dos adultos mostrou-se inteiramente compatível com a possibilidade desta população se
reproduzir por si própria.
Em conclusão, a gestão de programas de conservação exige uma abordagem multidisciplinar em que o estudo do
comportamento representa um contributo fundamental mas insuficiente, por si só.
[Reproductive behaviour of the Sorraia Horse in pasture breeding]
Having present the importance of preserving the Sorraia horse, an extremely valuable element in our biological
heritage and critically endangered, it seemed worth while researching whether the reproductive and maternal
behaviour of the adults and the behavioural development of the foals fit in the so-considered “normal” and healthy
parameter as compared with other races of equines and even other species of equids.
The specific objectives consisted in the elaboration of a list of behaviours and their description, in the quantification
of foal’s behaviours, which were important for their development, in the analysis of the behaviours and interactions
mare-foal and in the analysis of the reproductive behaviours and interactions mare-stallion.
The sample was composed by a population of sixteen individuals – one stallion, ten mares and five foals – in pasture
breeding, at Coudelaria de Alter, at Alter do Chão, in Portugal, alternately located in two yards of approximately
twenty-three and five hectares. The methodology of this research was based on the description of all observed
behaviours. Quantitatively the foals were observed simultaneously in regular thirty minutes breaks and their
individual behaviour was recorded on that moment (scan sampling) (Martin & Bateson, 1994). On these point
samples the distance between foal and mare was recorded. All occurrences of behaviour sampling (Martin &
Bateson, 1994) were recorded on the adults as well as the quantification of reproductive interactions and behaviours.
Systematic observations totalized 304 hours of observation, taking place in a period of 38 days, between the 10th of
February and the 9th of June 2000,
The obtained results of the qualitative study show clearly that the behaviour patterns exhibited, referred to other
horse races, inclusively to other equids, is similar. In general, the results achieved in the quantitative analysis point
towards a development of behaviour that follows the standard for that species not showing any trace of pathology.
The maternal behaviours and the interactions between mother and foal were totally fit in order to enable the foal’s
survival. The sexual adult’s behaviour appeared completely consistent with the possibility for this population to
reproduce on their own initiative. In conclusion, the management of programmes for the conservation requires a
multidisciplinary approach where the behaviour research plays an essential role but insufficient in itself.
101
Descrição de um caso de encefalopatia equina por herpes virus-4 (EHV-4) no Alentejo
Romão, R.J.1, Bettencourt, E.M.1, Branco, S.M.1, Fevereiro, M.2, Fialho, L.1
1 Hospital Veterinário da Universidade de Évora, Polo da Mitra, Apartado 94, 7002-554 Évora, Portugal. E-mail: [email protected];
2 Laboratório Nacional de Investigação Veterinária, Estrada de Benfica, 701; 1549-011 Lisboa, Portugal
Nos equinos os vírus herpes estão associados a diversos tipos de patologia com alterações a nível reprodutivo,
respiratório e neurológico. A forma neurológica manifesta-se por sinais de encefalopatia e está descrita como sendo
provocada pelo herpesvirus equino do tipo 1 (EHV-1), havendo apenas referência esporádica ao herpesvírus tipo 4
(EHV-4), habitualmente associado a patologia respiratória.
No presente trabalho descreve-se um caso de afecção neurológica num equino, com 2 anos de idade, presente no
Hospital Veterinário da Universidade de Évora com manifestações clínicas de encefalopatia e virémia associada ao
EHV-4. O cavalo estava em tratamento de cólica há 5 dias tendo manifestado sinais de extensão marcada dos
membros e dor abdominal. Ao exame físico o animal manifestava ataxia, dificuldade de locomoção marcada,
cruzamento dos membros, sobretudo a nível dos posteriores, ocorrendo mesmo quedas. O exame do estado geral
revelava sinais de desidratação e hipomotilidade intestinal, sem sinais de dor abdominal.
O tratamento preconizado baseou-se na manutenção do estado geral do animal com fluidoterapia intravenosa,
antibioterapia e administração de AINE com monitorização hospitalar contínua. A partir do dia 2 o animal mantevese em decúbito lateral (alternando com decúbito esternal quando auxiliado), com fases de agitação e diarreia. Ao
exame neurológico começou a manifestar parésia dos posteriores e hiporreflexia. No dia 3 fez-se a colheita de
sangue para pesquisa de Vírus do Nilo Ocidental (WNV), EHV-1 e EHV-4, tendo-se identificado este último pela
técnica de PCR. O fragmento de 458 pb amplificado por PCR, correspondente a uma região do gene C do EHV, foi
clonado e sequenciado. A comparação da sequência nucleotídica obtida com sequências já publicadas de EHV,
revelou uma identidade >99% com o EHV-4. No dia 7 foi feita nova colheita de sangue e zaragatoas nasal e rectal.
A presença do EHV-4 nestas amostras foi de novo detectada por PCR. A pesquisa de anticorpos WNV, EHV-1 e
EHV-4 resultou sempre negativa. No dia 8 o animal foi eutanasiado e colheu-se líquido cefaloraquidiano
imediatamente após a morte, tendo-se Identificado células inflamatórias, predominantemente linfocitárias. O EHV-4
foi ainda detectado por PCR na traqueia, rim e fígado. À necrópsia observou-se intensa congestão das meninges e
parênquima cerebral, apresentando-se o mesmo muito friável. As lesões histopatológicas mais significativas
identificaram-se no cérebro com congestão e edema das meninges e córtex, necrose de liquefacção, imagens de
satelitismo e proliferação das células da glia. Na substância branca observou-se intensa congestão e presença de
petéquias. A sintomatologia manifestada, as lesões anátomo-histopatológicas e a detecção do vírus, permitiram
diagnosticar como causa provável de encefalopatia a infecção pelo EHV-4.
[One case of equine encephalopathy by herpesvirus EHV-4 (EHV-4) in Alentejo]
Equine herpesvirus-1 (EHV-1) and equine herpesvirus-4 (EHV-4) are pathogens associated with respiratory,
reproductive, and central nervous system diseases. EHV-1 is responsible of epidemic abortion and neurological
disorders while EHV-4 causes respiratory disease, and on rare occasions abortion.
This work describes a fatal case of neurological disorder in a horse, with 2 years old, present at the Veterinary
Hospital of the University of Évora (HVUE) showing clinical signs of encephalopathy and EHV-4 leukocyteassociated viraemia. The horse had been under treatment for colic symptoms for 5 days, and showed ataxia and
abdominal pain. The clinical examination at HVUE, revealed hind limbs ataxia with occasional recumbence,
dehydration and low motility of the bowels. Treatment was directed to maintain the general condition and hydration
of the animal. To minimize the complications arising from bacterial superinfection antibiotics and AINE were given
under continuous monitoring. From the second day on the animal remained recumbent with periods of agitation and
diarrhea. Neurological examination revealed hind legs paresis and diminished reflexes. On day 3, blood was
collected and tested for EHV-1, EHV-4 and West Nile virus (WNV). EHV-4 was identified by PCR and the
resulting amplicon of 458 bp, corresponding to a partial amplification of the gene C, was cloned and sequenced. The
nucleotide sequence showed an identity > 99% with EHV-4 sequences already published. On day 7, the horse was
blood sampled again and nasal and rectal swabs were collected. Again, the presence of EHV-4 was detected in the
samples by PCR. The plasma was negative for antibodies against WNV, EHV-1 and EHV-4. On day 8, the animal
was euthanized and the cerebrospinal fluid was immediately examined showing the presence of inflammatory cells,
predominantly lymphocytes. EHV-4 was detected in the trachea, kidneys and liver by PCR.
The necropsy revealed congestion of the meninges and cerebral parenchyma that was very friable. The most evident
histopathological lesions were located in the brain and consisted in congestion and edema of the meninges and
cortex, necrosis with liquefaction of cerebral parenchyma, satelitism images and proliferation of glial cells. In the
white matter was observed intense congestion and petechia.
The symptoms and lesions observed, and the detection of EHV-4 viraemia, suggest that the cause of encephalitis in
this horse was likely due to an EHV-4 infection.
102
Infecciologia
Dinâmica da infecção do virus da peste suína africana (VPSA) em argasídeos Ornithodoros erraticus
após um surto esporádico de doença em Portugal em 1999
Basto, A.1, Nix, R.J.2, Boinas, F.1, Portugal, R.S.1, Silva, M.J.1, Cruz, B.3, Cartaxeiro, C.1, Leitão, A.4, Dixon, L.2,
Martins, C.1
1 Laboratório de Doenças Infecciosas, CIISA, FMV-UTL, Av. da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa
2 Institute for Animal Health, Ash Road, Pirbright, Surrey, GU24 ONF
3 Laboratório Nacional de Investigação Veterinária, Lisboa
4 Instituto de Investigação Científica Tropical, CVZ, Lisboa
A peste suína africana (PSA) é considerada uma das doenças mais ameaçadoras para a exploração de suínos a nível
mundial e para a qual não existe vacina. Sabe-se que argasídeos Ornithodoros spp. são reservatórios do VPSA,
tendo sido associados com a ocorrência da doença na Península Ibérica, antes da sua erradicação. Portugal é
considerado livre de PSA desde 1993, no entanto, um surto esporádico foi declarado no Alentejo, em Novembro de
1999, em explorações rurais infestadas por O. erraticus. O objectivo deste trabalho consistiu em estudar o
desenvolvimento da infecção em populações destes argasídeos, em contacto com porcos afectados durante o surto
ou infectados experimentalmente em laboratório, de modo a avaliar em que medida os argasídeos podem
desempenhar um papel na transmissão do VPSA no campo. A infecção viral foi avaliada em argasídeos colhidos em
diferentes tempos (0, 28 e 56 semanas) após a ocorrência do surto numa exploração, através de PCR e isolamento de
vírus em culturas de macrófagos de suíno e também em O. erraticus infectados experimentalmente com VPSA
isolado do vector colhido no mesmo surto. O ADN viral foi detectado por PCR em 34 a 50% dos argasídeos
colhidos no campo na semana zero (0), dependendo do estadio de desenvolvimento, tendo decrescido para 13 a 27%
na semana 56. Entre as semanas 0 e 28, a percentagem de isolamentos virais diminuiu no caso dos ninfas pequenas
de 5 para 1,3% e aumentou no caso das ninfas grandes e adultos de 2 para 9% e de 5 para 11%, sugerindo replicação
viral. Na semana 56 estas percentagens diminuiram em todos os estadios para 0%, 1,9% e 5%, respectivamente. As
infecções experimentais de O. erraticus revelaram taxas de infecção de até 100%, tendo-se observado replicação
viral logo nas primeiras 4 semanas após infecção. Títulos elevados (104,5 a 106 HAD50/ml) mantiveram-se até 20
semanas, porém, às 41 e 61 semanas observou-se um decréscimo significativo de aproximadamente 102 HAD50/ml.
Os resultados demonstram que o O. erraticus deve ser considerado relevante para a manutenção do VPSA em
explorações rurais após a ocorrência de surtos, sugerindo que na ausência de porcos, este perigo é reduzido a longoprazo. Outros estudos são necessários para estabelecer períodos de quarentena seguros para repovoamento após
surtos de PSA, porém, os nossos dados sugerem que antes das 40 semanas existe um risco elevado para ocorrência
de infecção de porcos por picada de O. erraticus infectados.
Financiamento: Projecto QLK2-CT-2001-02216, EU.
[Dynamics of African swine fever virus (ASFV) infection in Ornithodoros erraticus ticks after a
sporadic outbreak of disease in Portugal in 1999]
African swine fever (ASF) is considered one of the most threatening diseases for pig industry for which no vaccine has
been obtained. Relevant to the epidemiology of ASF, soft ticks Ornithodoros spp. have been demonstrated to act as
reservoirs of ASFV and have been associated with previous occurrences of disease in Iberian Peninsula. Portugal is free of
ASF since 1993, however, a sporadic outbreak occurred in November 1999 in Alentejo on traditional rural pig-pens
infested by O. erraticus some of which were found infected with ASFV. The objective of this work was to assess if O.
erraticus exposed both to viraemic pigs in natural conditions or experimentally infected in the laboratory, develop
infection enabling them to play a role on ASFV transmission in the field. With this purpose, we have assessed viral
infection in ticks collected from an affected farm at different times (0, 28 and 56 weeks) after the last outbreak, trough
PCR and virus isolation on pig macrophage cultures. Dynamics of viral infection was further studied in laboratory
colonies of O. erraticus experimentally infected with ASFV isolated from ticks at the time of the outbreak. Virus DNA
was detected by PCR in 34 to 50% of ticks collected in the field at week zero (0) depending on developmental stage and
decreased to 13 to 27% by week 56. Between week 0 and 28, virus isolations decreased for the small nymph stages from
5% to 1.3% and increased for large nymphs and adults from 2% to 9% and from 5% to 11%, suggesting viral replication.
At week 56 the percentages decreased for all the stages to 0%, 1.9% and 5%, respectively. Experimental infections of O.
erraticus have shown infection rates of up to 100% with virus replication observed within 4 weeks post-feeding. High
titres of virus (104.5 to 106 HAD50/ml) were maintained until 20 weeks post-infection but at 41 and 61 weeks a significant
drop by approximately 102 HAD50/ml was observed. Overall our data strongly suggest that O. erraticus are to be
considered relevant for the maintenance of ASFV in rural pig-pens following disease outbreaks. However, in the absence
of pigs this danger is reduced in the long-term. Further studies are required to establish safe quarantine periods for
restocking after ASF outbreaks although our data suggest that periods of less than 40 weeks are likely to present a high
risk of pigs becoming infected by bites from infected ticks. Research supported by Project QLK2-CT-2001-02216, EU.
103
A delecção do gene A238L no isolado virulento no vírus da Peste suína Africana E70 (VPSA/E70)
induz um aumento da expressão de RNAm de TNFα em suínos inoculados, sem alteração da
virulência do agente
Gil, S.1, Salguero, J.2, Revilla, Y.3, Martins, C.1
1 Faculdade de Medicina Veterinária, Lab. Doenças Infecciosas, CIISA. Av. Da Universidade Técnica. 1300-477 Lisboa
2 CISA-INIA, Valdeolmos, Madrid
3 CBM, Universidade Autónoma Madrid, Cantoblanco, Madrid
O VPSA provoca uma doença altamente contagiosa no suíno doméstico em que as respostas imunitárias serão em parte
reguladas por genes virais que permitem a evasão à resposta imunitária do hospedeiro.Diferentes isolados do VPSA
apresentam um espectro alargado de virulência, cujo mecanismo não é ainda bem conhecido. Diferentes autores estudaram
o papel de genes do VPSA como factores de virulência através da construção de diferentes mutantes virais deletados. Esta
estratégia identificou alguns genes e famílias multigénicas cuja deleção no vírus parental induziu uma redução da sua
virulência. Outros genes modulam vias de regulação que interferem com a expressão de genes imunomoduladores, entre
os quais o gene que codifica a proteína A238L que tem uma grande capacidade imunomoduladora por inibição da
activação do factor de transcricão NFκB, a actividade da fosfatase calcineurina e a expressão da ciclooxigenase-2 através
da via NFAT.
De modo a melhor caracterizar o papel do gene A238L como modulador das vias de regulação de citocinas e aprofundar o
conhecimento acerca do seu papel na virulência do agente, 2 grupos de 4 suínos LandraceXLarge White foram inoculados
com o isolado virulento VPSA/E70 e com o mutante deletado em A238L (VPSA/E70∆A238L). Os suínos foram
observados diariamente para observação de sinais clínicos, e procedeu-se à recolha de amostras de sangue para a
quantificação de citocinas por PCR em tempo real, a diferentes dias de infecção e finalmente foram eutanasiados para
exame post-mortem. Suínos de ambos os grupos desenvolveram sinais clínicos e lesões anatomohistopatológicas
semelhantes aos observados nos animais inoculados com isolados de VPSA de elevada virulência. Encontraram-se
hemorragias e apoptose nos linfócitos de todos os animais. Observou-se no entanto um aumento significativo da expressão
de RNAm de TNFα nos LMN dos suínos inoculados com VPSA/E70∆A238L. Pelo contrário, observámos um decréscimo
de expressão desta citocina nos LMN dos suínos inoculados com o isolado parental E70. A expressão de RNAm de IL1
apresenta a mesma tendência embora sem significado estatístico. Não se observaram diferenças significativas de expressão
de IL4 e IFNγ em relação aos valores dos controlos.
Estes resultados reforçam o papel do gene A238L na inibição in vivo da via regulação de TNFα através do NFkB embora
não se observem diferenças nos sinais clínicos e na patologia dos animais inoculados com o mutante viral deletado em
A238L.
Financiamento: Projecto QLK2-CT-2001-02216, EU e BPD/14676/2003, FCT
[Deletion of A238L gene in the virulent African swine fever virus E70 (ASFV/E70) induces
upregulation of TNFα mRNA expression in experimentally inoculated pigs and no changes in the
virulence of the agent]
ASFV causes a highly contagious disease in domestic pigs in which immune responses are thought to be in great extent
regulated by viral genes encoding several products that interfere with host capacity to mount protection against the
etiological agent enabling it to evade host defence systems. ASFV isolates have a broad spectrum of virulence. However
mechanisms underlying these characteristics are not fully understood. Different authors have assessed the role ASFV
genes as virulence factors through the construction of different ASFV deletion mutants. These strategy identified genes
and multigenic families whose deletion in the parental virus reduced the virulence of these isolates. Other genes modulate
signalling pathways interfering with expression of immunomodulatory genes. One potent immunomodulatory protein,
A238L, inhibits in vitro activation of the host NFκB transcription factor, the calcineurin phosphatase activity and
cyclooxygenase-2 expression through a Nuclear Factor of activated T cell-dependent transactivation pathway.
In order to better characterize A238L role as a modulator of the cytokine signalling pathways and further to understand it’s
role in virulence, Landrace X Large White pigs in groups of 4 were inoculated either with the highly virulent isolate
ASFV E70 or with the deletion mutant ASFV/E70 ∆A238L. Pigs were daily followed for clinical signs and PBMC were
isolated from blood samples at different days of infection to study cytokine mRNA expression by quantitative real time
PCR and finally animals were sacrificed for post-mortem examination. Animals from both groups developed clinical
signs, gross lesions and histopathological findings similar to those observed in animals inoculated with highly virulent
ASFV isolates. Haemorrhages and lymphocyte apoptosis were observed in lymphoid organs from all animals. However
quantitative mRNA expression of TNFα showed an enhancement of this cytokine in PBMC from pigs inoculated with the
deletion mutant ASFV/E70 ∆A238L. In opposition, we found a decrease on the expression of this cytokine in the PBMC
of pigs inoculated with the parental E70. Results on mRNA expression of IL1 are not so obvious but they suggest the same
trend found for TNFα. IL4 and IFNγ didn’t show differences in comparison with the control values.
Our results reinforce the role of the A238L gene in the inhibition of the NFkB pathway of in vivo expression of the proinflammatory TNFα even though no significant differences has been observed in the clinical signs and pathology of
animals inoculated with the deletion mutant.
Supported by Project QLK2-CT-2001-02216, EU and by fellowship BPD/14676/2003, FCT
104
Evasão ao sistema imunitário pelo VPSA por inibição da resposta por interferão
Reis, A.L.1, Correia, S.1, Crespo, A.1,Goodbourn, S.2, Leitão, A.3, Parkhouse, R.M.E.1
1 Instituto Gulbenkian de Ciência, Rua Quinta Grande Apartado 14, 2786-901 Oeiras
2 St George's Hospital Medical School, University of London, London-UK
3 Instituto de Investigação Científica Tropical, CVZ, CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária, 1300-477 Lisboa
A patogénese das infecções depende da interacção entre o sistema imunitário do hospedeiro e o agente patogénico.
Esta interacção não é unilateral. Os agentes patogénicos desenvolveram mecanismos para evadir e modificar a
resposta imunitária do hospedeiro, conseguindo, idealmente, a sobrevivência de ambos. Os vírus tem sido
particularmente eficientes no desenvolvimento destas estratégias e possuem um reportório de moléculas de “evasão”
que modificam a resposta imunitária dos seus hospedeiros.
A identificação de genes de “evasão” no genoma do virus da peste suína africana (VPSA) pode ter uma aplicação
prática imediata, já que estes genes apesar de conferirem uma vantagem sobre o hospedeiro, em geral não são
essenciais para a replicação viral in vivo. Assim, a construção de vírus mutantes em que estes genes são deletados
representa uma boa estratégia para a construção de uma vacina.
No passado, a maioria destes genes de “evasão” foram identificados através das suas homologias com proteínas
celulares. Com o objectivo de identificar moléculas de “evasão” sem homologia, testámos genes do VPSA de função
desconhecida em ensaios funcionais de modulação da resposta por interferão (IFN).
A produção de IFN é um dos primeiros mecanismos de defesa contra os vírus. Quando as células são infectadas a
expressão de IFN-β é induzida pelo dsRNA proveniente do genoma viral ou como resultado da replicação viral.
Estas moléculas são secretadas e alertam as células vizinhas para a infecção viral através da activação das Jak, o que
resulta na fosforilação das STAT e na expressão de diversas proteínas anti-virais.
Identificámos um gene do VPSA capaz de inibir a indução do promotor do IFN-β por um análogo do dsRNA e a
resposta das células ao IFN-α e IFN-γ. O efeito do gene viral transfectado foi determinado pela avaliação da indução
de factores de transcrição que controlam as respostas por IFN, em células tratadas com dsRNA, IFN-α ou IFN-γ,
usando ensaios reporter de luciferase, desenhados para os promotores PRDII, IFN-β, ISRE e GAS.
Com o objectivo de definir os mecanismos desta inibição fizemos um ensaio de duplo híbrido em levedura com o
intuito de identificar o(s) alvo(s) celulares desta proteína. Um dos clones positivos identificados foi a proteína
STAT2, sugerindo que a inibição resulta da alteração da função das STAT.
Alem de oferecer um meio para a construção de uma vacina, a transfecção deste gene pode também ser utilizada
para obter células que produzem maiores quantidades de vírus vacinais.
[Immune evasion by ASFV through inhibition of the interferon response]
The pathogenesis of infections depends on interaction between the immune system of the host and the pathogen.
This is not a one-sided interaction as pathogens have evolved mechanisms to evade and modify host immune
responses, ideally achieving long-term survival of both the pathogen and the host. Viruses have been particularly
efficient in evolving such strategies and have a repertoire of “evasion” molecules, which modify immune responses
of their hosts.
Identification of African Swine Fever Virus (ASFV) “evasion” genes may have immediate practical input, as in
general such genes, whilst giving the virus an advantage over the host, are non-essential for virus growth in vivo.
Thus deletion of virus “evasion” genes offers a rational strategy for the development of non-pathogenic, deletion
mutant vaccines.
In the past, the majority of such “evasion” genes have been identified through their homologies. In order to identify
“evasion” molecules without known structural homologues, unassigned ASFV genes were screened in functional
assays for modulation of interferon (IFN) responses.
The IFN response is one of the first mechanisms of defense against viruses. When cells are infected the expression
of IFN-β is induced by dsRNA provided by the viral genome itself or as a result of viral replication. These IFN
molecules are secreted and alert neighboring cells to virus infection by stimulating the activation of Jak tyrosine
kinases, which results in STAT phosphorylation and expression of several anti-viral proteins.
We have identified an ASFV gene able to inhibit both the induction of IFN-β promoter by a dsRNA analogue and
the response of the host cells to IFN-α and IFN-γ. The effect of the transfected virus gene was determined by
assessing the induction of selected transcription factors controlling IFN responses, in cells treated with dsRNA, IFNα or IFN-γ, using a series of luciferase reporter gene assays, designed for the PRDII, IFN-β, ISRE (Interferon
Stimulated Response Element) and GAS (Gamma Activated Site) promoters.
To further investigate the mechanisms of this inhibition, the gene was screened in the Yeast Two Hybrid system in
order to identify cellular target(s) of the protein. One of the positive clones identified in this screening was STAT2,
suggesting that inhibition of the IFN response is through modification of STAT function.
Apart from offering a route towards a vaccine, transfection of this gene might also provide cells giving higher yields
of virus vaccines.
105
Modulação da apoptose in vitro em macrófagos de suíno infectados por vírus da peste suína
Africana (VPSA) de diferente virulência
Portugal, R. e Martins, C.
Laboratório de Doenças Infecciosas, CIISA, FMV-UTL, Av. da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa
O VPSA provoca uma doença altamente contagiosa em suínos, que consiste numa ameaça mundial para a
exploração de suínos e para a qual não existe vacina. O agente é um vírus complexo que replica em monócitos e
macrófagos, factor chave da patogénese sendo os macrófagos células centrais em defesa imunitária. De notar, o
VPSA possui genes potencialmente inibidores da apoptose como os homólogos de bcl-2 e iap que podem constituir
importantes ferramentas para a eficácia da infecção e evasão imunitária. Em macrófagos de suíno, hospedeiro
natural da replicação viral, a apoptose induzida por VPSA de diferente virulência e suas implicações na patogénese
não são conhecidas. Com o objectivo de i) caracterizar o processo apoptotico em macrófagos infectados e ii)
investigar a possível existência de protecção da apoptose, culturas de macrófagos foram infectadas em paralelo com
os isolados ASFV/L60 altamente virulento e ASFV/NH/P68 de baixa virulência. Os níveis de apoptose foram
determinados nas fases de infecção precoce (8h, replicação viral activa) e tardia (18h, replicação concluída) e após
indução exógena de apoptose com staurosporina (ST) ou ciclohexida (CHX). Fragmentação internucleossómica de
DNA, actividade de caspase-3 e avaliação da morfologia nuclear por coloração Hoechst foram determinados em
culturas infectadas versus controlo. A expressão dos genes virais bcl-2 e iap ao longo da infecção (1,30h, 4h, 8h,
12h, 16h) foi estudada por RT-PCR.
Observou-se indução clara de apoptose apenas em fase tardia de infecção (18h) com ambos isolados, suportando a
existência de protecção enquanto decorre a replicação viral (8h). De notar, na infecção com L60 os níveis de
actividade de caspase-3 foram inferiores aos detectados em infecção com NH/P68. Contrariamente ao esperado não
se observou protecção da apoptose após indução exógena com ST ou CHX em infecção com nenhum dos isolados.
Interessantemente, foi detectada a expressão muito precoce do gene viral iap (1,30h, 4h) após infecção, em oposição
ao relatado previamente por outros autores, descrevendo este gene como sendo de expressão tardia em infecção com
VPSA adaptado a células de linha Vero. Infecção com o isolado L60 revelou níveis mais elevados na expressão de
ambos bcl-2 e iap a tempos precoces (1,30h, 4h).
Estes resultados sugerem uma maior capacidade do isolado de elevada virulência VPSA/L60 para regular a apoptose
em macrófagos de suíno através de uma maior expressão de genes potencialmente inibidores em fases precoces de
infecção e da diminuição da actividade de caspase-3, factores que poderão facilitar a evasão viral e
consequentemente estar relacionados com a virulência.
Financiado pelo Projecto QLK2-CT-2001-02216 EU e Bolsa FCT SFRH/BD/10576/2002.
[In vitro modulation of apoptosis on porcine macrophages infected with African swine fever virus
(ASFV) of different virulence]
ASFV is the agent of a highly contagious pig disease and a major threat for swine industry for which no vaccine
exists. It is a large DNA virus replicating in pig monocytes and macrophages, a key aspect of pathogenesis since
macrophages are central immune defence cells. Interestingly ASFV possesses genes potentially capable of
controlling apoptosis such as bcl-2 and iap homologues that may confer valuable tools for effective infection and
immune evasion. In pig macrophages, the natural host cell for viral replication, apoptosis induced by ASFV of
different virulence and its implications in pathogenesis is poorly understood. Aiming at characterizing i) the
apoptotic process on ASFV infected macrophages and ii) investigating a possible ASFV role in host cell protection
from apoptosis, macrophage cultures were infected in parallel with highly virulent ASFV/L60 and low virulent
ASFV/NH/P68. Apoptosis levels were determined at early (8h, ongoing viral replication) and late (18h,
accomplished replication) infection phases and after exogenous apoptosis induction with staurosporin (ST) or
cycloheximide (CHX). DNA internucleossomic fragmentation, caspase-3 activity and nuclear morphology after
Hoechst staining were assessed in infected versus mock infected cultures. Expression of viral bcl-2 and iap genes
along the infection (1,30h, 4h, 8h, 12h, 16h) was studied by RT-PCR. Clear apoptosis induction was observed only
late after infection (18h) with both isolates, supporting protection when viral replication is still ongoing (at 8h).
Noteworthy, lower caspase-3 activity at 18h p.i. was detected in highly virulent L60 infection when compared to
low virulent NH/P68. In opposition to expected no apoptosis protection after exogenous induction with ST or CHX,
in either ASFV/L60 or ASFV/NH/P68 infections was observed. Interestingly, viral iap expression was found very
early after infection in our system (1,30h, 4h p.i.), in opposition to previous data by other authors, describing iap as
a late expression gene in a Vero cell line adapted ASFV infection. A higher expression of both iap and bcl-2 viral
genes was observed in L60 infection at early times p.i. (1,30h, 4h), when compared to NH/P68.
Overall our results strongly suggest a higher capacity of ASFV/L60 to regulate apoptosis in pig macrophages, by
increasing expression of potentially protective genes at early phases of infection and lowering caspase-3 activity,
factors that may facilitate viral evasion and consequently relate to virulence.
Supported by project QLK2-CT-2001-02216 EU and FCT SFRH/BD/10576/2002
106
Vírus da Língua Azul do serotipo 4 em Portugal
Fevereiro, M., Luís, T., Vaz, A., Ramos, F., Fagulha, M.T., Barros, S., Duarte, M.M. e Cruz, M.B.
Em 1956 foi feito em Portugal o primeiro diagnóstico da febre catarral dos ovinos, vulgarmente conhecida por
língua azul (Silva, F.E. 1956). Após um longo período de silêncio o vírus reapareceu no nosso país durante o mês de
Outubro de 2004.
O vírus da língua azul (BTV), do qual se conhecem 24 serotipos diferentes, é um Orbivirus da família Reoviridae,
transmitido por artrópodes da espécie Culicoides.
O BTV-10 isolado em 1956 (Ribeiro, J. M. e al. 1956), é actualmente utilizado na África do Sul no fabrico de uma
vacina viva atenuada. O vírus de 2004, isolado em ovinos no concelho do Alandroal, Alentejo, foi inicialmente
identificado como BTV pela amplificação parcial do gene NS1 (S6 RNA) por RT-PCR. Posteriormente, a
sequenciação do RNA L2 que codifica a cápside externa (VP2), permitiu determinar que o vírus agora isolado
pertence ao serotipo 4. A análise filogenética do RNA L2 revelou ainda que o BTV-4 nacional de 2004, tem grande
identidade com os vírus do serotipo 4, Córsega 2003 (99%) e Grécia 1999-2000 (94%). Na origem desta nova
introdução do BTV no nosso país está um surto que ocorreu na Andaluzia. Por não estar disponível nas bases de
dados internacionais informação sobre o genoma do BTV isolado em Espanha, não foi possível, até à data, fazer
uma análise comparativa da sequência VP2 do BTV-4 nacional com o BTV isolado no país vizinho.
Com base na sequência nucleotídica do RNA L2, foi desenvolvido um método de RT-PCR em tempo real que
permite, com rapidez e grande sensibilidade, não só detectar a presença do BTV-4 nacional em amostras de sangue e
órgãos de animais infectados, como também distinguir o vírus selvagem do vírus vacinal actualmente utilizado na
imunização de ovinos. Este método, permitiu ainda detectar com sucesso a presença do vírus em Culicoides
capturados nas regiões afectadas e tem sido de crucial importância no controlo da movimentação de animais das
zonas infectadas para zonas limpas.
[Bluetongue Virus of serotype 4 in Portugal]
The first outbreak of Bluetongue Virus (BTV) registered in Portugal occurred in 1956 (Silva, F.E.1956). After a
long period of epidemiological silence a new introduction of the virus was registered in October 2004. Bluetongue
virus is an Orbivirus of the Reoviridae family, transmitted by Culicoides. Within the BTV serogroup there are 24
different serotypes.
The virus isolated forty-eight years ago in Portugal belongs to serotype 10 (Ribeiro, J. M. et al. 1956) and has been
used as a live attenuated vaccine in South Africa where the disease is endemic.
The 2004 virus was isolated from sheep in the village of Alandroal in Alentejo and identified as BTV after RT-PCR
amplification of the NS1 gene (S6 RNA). Subsequent sequence analysis of the L2 RNA that encodes the outercapsid (VP2) showed that the 2004 isolate belongs to serotype 4. Phylogenetic analysis revealed that the Portuguese
BTV-4 / 2004 is highly identical to BTV-4 Corsica 2003 (99%) and Greece 1999-2000 (94%) isolates. The origin of
this new introduction of BTV in our country is imputable to an outbreak that occurred in Andaluzia (Spain). To date,
the information on the genome sequence of the Spanish isolate is not available in the international databases,
precluding the possibility of doing a comparative study between the sequences of the Portuguese and the Spanish
isolates.
Based on the L2 RNA nucleotide sequence of the new isolate a fast and highly sensitive real time RT-PCR system
was developed allowing the detection of BTV-4 in blood and tissue samples of infected animals. The
oligonucleotides and probe were designed to discriminate wild type virus from the BTV-4 vaccine virus presently
used in sheep. The method was also useful to detect the presence of the virus in infected Culicoides captured in
Alentejo during the outbreak and has been crucial to guarantee that animals moving from infected areas to BTV free
zones, are in a virus free status.
107
Subtipificação genética do Virus da Imunodeficiencia Felina numa população de gatos errantes
Castro, I. 2, Duarte, A.1, Vaz, Y.1, Tavares, L.1
1 CIISA, FMV-UTL. Av da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa
2 Aluna de Mestrado de Microbiologia Médica. IHMT-UNL. Rua da Junqueira 96, 1349-008 Lisboa.
O Virus da Imunodeficiência Felina (FIV) é um Lentivírus patogénico que provoca nos felinos domésticos uma
síndrome de imunodeficiência adquirida com uma patogenia de infecção similar ao Virus da Imunodeficiência
Humana (HIV).
O estudo da prevalência deste vírus em colónias de gatos errantes, permite conhecer qual o seu impacto patogénico
em populações não controladas e heterogeneas.
Actualmente o FIV é classificado em diferentes subtipos filogenéticos (A-E) os quais apresentam alguma variação
nas suas propriedades biológicas. A subtipificação de diferentes sequências virais obtidas de animais seropositivos,
que partilham um determinado espaço territorial permite aferir o padrão de disseminação e evolução genética viral.
De forma a conhecer a incidência do FIV nos gatos errantes da região da Grande Lisboa, foi efectuado um rastreio
serológico com base em amostras de sangue colhidas em animais sujeitos a esterilização, incluidos num programa
coordenado pela CATUS. Foram processadas 159 amostras de sangue num periodo compreendido entre Nov de
2003/2004, tendo sido identificados 21 animais seropositivos (13,2%). Todas as amostras positivas foram sujeitas a
PCR para amplificação de um fragmento de 329 pb incluído no gene estrutural gag altamente conservado. Esta
região pode ser utilizada num ensaio de RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) para subtipificação
rápida de novas sequências virais.
Os resultados obtidos indicaram a presença na população estudada de 2 grupos distintos. Determinou-se a presença
do subtipo A em 5 amostras (24%) e a presença dum grupo caracteristico, incluido no subtipo B nas restantes
amostras (76%). Estas sequências virais são exclusivas de FIVs nacionais.
[Genetic subtyping of Feline Immunodeficiency virus in a stray cat population]
Feline Immunodeficiency Virus (FIV) is a pathogenic Lentivirus associated with an immunodeficiency like
syndrome in the domestic cat, presenting a similar pathogeny of Human Immunodeficiency Virus (HIV).
The study of FIV prevalence in stray cat’s colonies allows the understanding of the virus pathogenic impact in
heterogeneous and uncontrolled populations.
FIV is classified in several phylogenetic subtypes (A-E) with different biological properties. The subtyping of viral
sequences from seropositive animals, sharing a characteristic territorial space is useful to assess the dissemination
pattern and genetic viral evolution.
A serological survey was conducted in different colonies of stray cats in Lisbon, based on blood samples collected
from animals subjected to neutering, included in a program coordinated by CATUS. 159 samples were processed
during November 2003/2004 and 21 seropositive animals were identified (13,2%). All the positive samples were
subjected to PCR for amplification of a 329bp fragment included in the viral gag gene, highly conserved. This
region may be used in a RFLP assay for rapid subtyping of new viral sequences.
Our results indicated the presence of two FIV subtypes in the seropositive samples. Subtype A was detected in 5
samples (24%) and in the 16 remaining samples a Portuguese subcluster of subtype B was present (76%). This B
subcluster is found only in Portugal.
108
Peripneumonia Contagiosa Bovina (PPCB) – Resposta imunológica de bovinos vacinados com as
estirpes T1-SR and KH3J-SR – resultados preliminares
Coelho, P.1, Gonçalves, R.2, Ferreira, H.2 e Regalla, J.2
1 ISHT – Instituro Superior de Humanidades e Tecnologias, Rua Braamcamp, 9, 1250-048 Lisboa
2 LNIV – Laboratório Nacional de Investigação Veterinária, Estrada de Benfica, 701, 1549-001 Lisboa
A Peripneumonia Contagiosa Bovina (PPCB) é uma doença respiratória dos bovinos, causada por Mycoplasma
mycoides subsp. mycoides SC (MmmSC). Está presente em diversas regiões do mundo, nomeadamente em África
onde está largamente espalhada e tem uma importância económica elevada. Foi erradicada da Europa meridional no
final da década de 90 do século passado, tendo Portugal sido considerado livre da doença em 2003 pelo OIE.
Embora a vacinação esteja, actualmente, proibida na Europa, no início do surto no nosso País, em 1983, foi
ponderada a possibilidade de vir a ser aplicada ao efectivo bovino nacional. Assim, em 1985, foi realizada uma
experiência no continente português com bovinos provenientes de uma zona indemne (Açores), para testar a eficácia
de duas estirpes vacinais usadas em África e, paralelamente, verificar a reacção destes animais vacinados quando
postos em contacto com outros infectados experimentalmente por via endobrônquica e se um outro grupo de animais
(testemunha) adquiria infecção.
Os resultados preliminares apresentados aqui referem-se, apenas, à resposta imune humoral detectada ao nível das
IgG pelo teste de immunoblotting e na prova de fixação do complemento (FC) dos grupos de animais vacinados com
as estirpes MmmSC T1-SR e KH3J-SR, variantes estreptomicina-resistentes obtidas das estirpes T1/44 and KH3J.
Estes resultados apontam para uma resposta serológica individual à infecção, indicando uma protecção conferida
pelas vacinas em ambos os grupos embora fraca e transitória no grupo vacinado com a KH3J-SR, cerca de 42%
versus 75% nos vacinados com a T1-SR.
Os bovinos que iniciaram uma resposta imune humoral aos 73 dias pós-contacto com os infectados apresentaram
sequestros e reacção ganglionar, confirmando a falta de protecção vacinal.
[Contagious Bovine Pleuropneumonia (CBPP) – Humoral immune response of cattle vaccinated
with T1-SR and KH3J-SR strains - preliminary results]
Contagious bovine Pleuropnemonia (CBPP) is a respiratory disease of cattle, caused by Mycoplasma mycoides
subsp. mycoides SC (MmmSC). It is present in several regions of the world, namely in Africa where is widely
present and has a high economic importance. CBPP was eradicated from the Southern Europe at the end of the
nineties of the last century. OIE declared Portugal free from the disease without vaccination since 2003. After the
disease appearance in Portugal in 1983, it was undertaken, in 1985, a study in mainland Portugal with cattle
provided from a free region (Azores) to test the efficacy of two vaccines produced with two different vaccine strains
T1-SR and KH3J-SR streptomycin-resistant variants provided from the strains T1/44 and KH3J used at that time in
Africa. In that study the reaction of the vaccinated cattle in contact with experimentally infected animals by
endobronchial route and healthy cattle (Control) was verified.
The preliminary results show only the humoral immune response detected at IgG level by immunoblotting test and
in complement fixation test (CFT) of the vaccinated cattle with the strains of MmmSC T1-SR and KH3J-SR. The
serological results indicate an individual response to infection. However, both vaccines provide protection although
weak and transitory, around 42% in KH3J-SR and 75% in T1-SR.
Cattle that started a humoral immune response 73 days post-contact with infected animals, showed at post-mortem
examinations sequestra and lymph node reactions confirming lack of vaccine protection.
109
Tipificação molecular de estirpes do complexo M. avium isoladas de suínos, rações e meio ambiente
Botelho, A., Albuquerque, T. e Amado, A.
O complexo Mycobacterium avium (MAC) inclui micobactérias patogénicas obrigatórias e oportunistas
para o homem e animais. Ao complexo pertencem duas espécies: M. avium e M. intracellulare. Com base
em testes serológicos, bioquímicos e análise de DNA, dividiu-se a espécie M. avium em subespécies com
características de patogenicidade e hospedeiros distintos: M. avium subsp. avium, M. avium subsp. silvaticum e
M. avium subsp. paratuberculosis. A designação M. avium subsp. hominissuis foi sugerida para isolados de M.
avium de humanos e suínos com características fenotípicas e genotípicas distintas de isolados de M. avium do tipo
aviário. Assim, várias técnicas clássicas e moleculares são utilizadas para identificar e tipificar isolados do MAC
com fins taxonómicos e epidemiológicos. No início de 2005 houve uma incidência de lesões de tuberculose nos
nódulos linfáticos de suínos abatidos em Portugal. Micobactérias foram isoladas das amostras de tecidos por
métodos convencionais bacteriológicos e identificadas por INNO-LIPA e PCR desenvolvido no LNIV, baseado nas
sequências de inserção IS1245 e IS901. Mais de cem isolados foram identificados como M. avium subsp.
hominissuis (genótipo IS1245+, IS901―). Esta subespécie do complexo MAC tem sido referida como o principal
agente causal de micobacterioses em suínos. Para detectar fontes de infecção, amostras do meio ambiente externo
foram também analisadas em algumas explorações. Para melhor identificar o reservatório da infecção, alguns
isolados de M. avium subsp. hominissuis foram seleccionados para tipificação molecular por RFLP, usando a
sequencia de inserção IS1245 como sonda.
[Molecular typing of Mycobacterium avium complex strains isolated from pigs, feed and
environment]
The Mycobacterium avium complex (MAC) comprises opportunistic and obligate pathogens of animals and humans.
The MAC contains two clearly defined species: M. avium and M. intracellulare. Based on serotyping, biochemical
and DNA analysis, M. avium is subdivided into subspecies with distinct pathogenic and host-range characteristics:
M. avium subsp. avium, M. avium subsp. silvaticum and M. avium subsp. paratuberculosis. More recently the
designation M. avium subsp. hominissuis has been suggested for M. avium isolates from human and pig, with
distinct phenotypic and genotypic characteristics from M. avium bird-type isolates. Several classical and molecular
techniques are, therefore, used to identify and type MAC isolates for taxonomic and epidemiological purposes. In
the beginning of 2005 there was an incidence of tuberculosis lesions in the lymph nodes of slaughtered pigs in
Portugal. Mycobacteria were isolated from tissue samples by conventional bacteriological methods and identified by
INNO-LIPA and in house PCR based on IS1245 and IS901 insertion sequences. More than a hundred isolates were
identified as M. avium subsp. hominissuis (genotype IS1245 +, IS901 ─). This subspecies of the Mycobacterium
avium complex (MAC) is the major causal agent of mycobacterial infections in pigs. In search of infection sources,
samples from the external environment (feeds, bedding material, drinking water, scrapings from the walls and
floors, dust, spider webs, faeces, peat) were also examined in some herds. In order to better detect the reservoir and
source of the infection, several M. avium subsp. hominissuis isolates were selected for restriction fragment length
polymorphism (RFLP) typing, using insertion sequence IS1245 as a probe.
110
Padrões de resistências a antibióticos de Staphylococci isolados de mastites subclínicas bovinas
Bexiga, R.1,2, Nunes, S.F.1, Cavaco, L.M.1 e Vilela, C.L.1
1 CIISA-Faculdade Medicina Veterinária, Av.da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa
2 Presentemente na University of Glasgow - Veterinary Faculty, Reino Unido
A mastite continua a ser a afecção com maiores custos financeiros e a razão mais frequente para a utilização de
antibióticos em explorações leiteiras. Staphylococci são agentes etiológicos de mastites bovinas, tanto como agentes
patogénicos contagiosos - Staphylococcus aureus –como ambientais - Staphylococci coagulase-negativos (CNS),
como Staphylococcus epidermidis.
O estudo visa a identificação de padrões de resistência a antibióticos de Staphylococci isolados de mastites
subclínicas bovinas em 12 explorações leiteiras da Região Ribatejo-Oeste em Portugal. Um total de 61 isolados de
campo (S. aureus n=30 e S. epidermidis n=31), foram estudados para detecção de resistências a antibióticos, por
determinação da concentração mínima inibitória (CMI) de seis fármacos antimicrobianos frequentemente utilizados
no tratamento de mastites bovinas. As CMI de penicilina, cefazolina, gentamicina, oxitetraciclina, enrofloxacina e
trimetoprima/sulfametoxazole foram determinadas pelo método de microdiluição em caldo, de acordo com as
recomendações do NCCLS. Todos os valores foram reportados em micrograma por mililitro e subsequentemente
comparados com os limites de resistência descritos. Todos os isolados que apresentaram sensibilidade intermédia
foram considerados como resistentes na análise dos dados. As CMI que inibiram 90% dos isolados testados (CMI90)
de penicilina, cefazolina, gentamicina, oxitetraciclina, enrofloxacina e trimetoprima/sulfametoxazole foram,
respectivamente, 4, 1, 1, 0.25, <0.125, 0.06/0.25 para S. aureus e >64, 1, 32, >64, 0.06, 16/128 para S. epidermidis.
Não foi detectada resistência a cefazolina ou enrofloxacina nas estirpes de S. epidermidis nem para cefazolina,
gentamicina, enrofloxacina ou trimetoprima/sulfametoxazole nos isolados de S. aureus. A maioria dos isolados de S.
epidemidis (67.4%) foram resistentes a três ou mais dos fármacos testados. Foram encontrados níveis elevados de
resistência a gentamicina (64.5%), oxitetraciclina (77.4%) e a penicilina (90.3%). Os isolados de S. aureus
apresentaram níveis elevados de resistência apenas face a penicilina (66.7%) e a maioria (63.3%) apresentava
resistência a apenas um dos fármacos testados. Os resultados sugerem que, apesar da natureza contagiosa das
infecções causadas por S. aureus, são baixos os níveis de resistência a antibióticos, com excepção da penicilina, um
beta-lactâmico sobre o qual frequentemente recai a primeira escolha para o tratamento de mastites. É entre os CNS,
saprófitas da pele e actualmente emergindo como os agentes patogénicos mais frequentes em explorações com
maneio adequado, que foram encontrados elevados níveis de resistência. Sendo difíceis de controlar pelo plano dos
5 pontos, as infecções causadas por S. epidermidis podem apresentar baixas taxas de cura, funcionando as bactérias
como reservatórios de genes de resistência a antibióticos para S. aureus.
[Antimicrobial resistance patterns of Staphylococci isolated from bovine subclinical mastitis]
Mastitis remains the most costly disease and the most common reason for antibiotic use in dairy herds.
Staphylococci are important causes of bovine mastitis either as contagious - Staphylococcus aureus - or as
environmental pathogens - coagulase-negative Staphylococci, such as Staphylococcus epidermidis.
This study aims at identifying the antimicrobial resistance patterns of Staphylococci pathogens isolated from
subclinical bovine mastitis, in 12 dairy herds from the Ribatejo-Oeste region of Portugal. A total of 61
Staphylococci field isolates (S. aureus n=30 and S. epidermidis n=31), were tested for antimicrobial resistance,
determining the minimum inhibitory concentration (MIC) of six antimicrobial drugs commonly used in the
treatment of bovine mastitis. MICs of penicillin, cefazolin, gentamicin, oxytetracycline, enrofloxacin and
trimethoprim/sulfamethoxazole were determined by the broth microdiluition method, according to the NCCLS
guidelines. All values were reported in micrograms per millilitres and subsequently compared with the described
resistance breakpoints. All isolates showing intermediate susceptibility were considered as resistant for data analysis
purposes. The MIC that inhibited 90% of the tested isolates (MIC90) for penicillin, cefazolin, gentamicin,
oxytetracycline, enrofloxacin and trimethoprim/sulfamethoxazole were, respectively, 4, 1, 1, 0.25, <0.125, 0.06/0.25
for S. aureus and >64, 1, 32, >64, 0.06, 16/128 for S. epidermidis. No resistance was detected to cefazolin or
enrofloxacin in the S. epidermidis strains neither to cefazolin, gentamicin, enrofloxacin or trimethoprim/
sulfamethoxazole in S. aureus. The majority of the S. epidemidis isolates (67.4%) were resistant to three or more of
the antimicrobials tested. High levels of resistance to gentamicin (64.5%), oxytetracycline (77.4%) and penicillin
(90.3%) were found. The S. aureus isolates presented high levels of resistance only against penicillin (66.7%) and
most of these isolates (63.3%) showed resistance to only one of the antimicrobials tested.
The results suggest that, despite the contagious nature of S. aureus infections, the levels of antimicrobial resistance
are low in these isolates, with the exception of penicillin, a beta-lactam commonly considered as a first choice drug
for mastitis treatment. It is among the CNS, skin saprophytes and currently emerging as the most frequent pathogens
in well-managed herds, that high levels of multi-resistance were encountered. Being difficult to control by the 5point plan, S. epidermidis infections may present low cure rates and the bacteria may act as reservoirs for antibiotic
resistance genes for S. aureus.
111
O citoesqueleto de microtúbulos de Besnoitia besnoiti e da célula hospedeira sofre alterações
profundas durante o processo de invasão
Reis, Y.1,4, Cortes, H.2, Viseu Melo, L.3, Leitão, A.1 e Soares, H.4,5
1 Instituto de Investigação Científica Tropical, CVZ, CIISA, Av. Universidade Técnica, Lisboa, 1300-477, Portugal.
2 Laboratório de Parasitologia, Núcleo da Mitra, Universidade de Évora (ICAM), Ap. 947002-554, Portugal.
3 Departamento de Física, Instituto Superior Técnico, Lisboa, 1049-001, Portugal.
4 Instituto Gulbenkian de Ciência, Apartado 14, 2781-901 Oeiras, Portugal.
5 Escola Superior de Tecnologia da Saúde de Lisboa, 1990-096 Lisboa, Portugal.
O protozoário Besnoitia besnoiti (Apicomplexa: Sarcocystidae), agente etiologico da besnoitiose bovina, é
responsável por perdas económicas significativas na produção bovina. O mecanismo pelo qual este protozoário
invade as células hospedeiras é mal conhecido. Neste trabalho, investigou-se o papel do citoesqueleto de
microtúbulos (Mts) de B. besnoiti durante a fase inicial de invasão celular. Utilizando imunofluorescência indirecta
(IFI) foi possível observar o citoesqueleto de Mts em parasitas isolados. À semelhança de outros Apicomplexa, este
é constituído por um conjunto de Mts subpeliculares dispostos numa espiral que irradia da extremidade apical e
percorre mais de 2/3 do corpo do parasita em direcção à região posterior. Durante o processo inicial de invasão B.
besnoiti sofre acentuadas alterações morfológicas tal como se observou por microscopia de força atómica (AFM).
Estas alterações dramáticas são acompanhadas por uma re-organização do citoesqueleto de Mts do parasita. Assim,
observa-se o desaparecimento dos Mts subpeliculares que parecem dar origem a estruturas globulares de tubulina.
Por seu lado, os Mts da célula hospedeira sofrem igualmente uma reorganização na zona de entrada do taquizoíto. O
tratamento de taquizoítos extracelulares com o agente anti-mitótico nocodazole não afecta os Mts subpeliculares e
não impede a invasão celular. Por outro lado, constatou-se que a perda do citoesqueleto de Mts das células
hospedeiras causada pelo mesmo agente não impede a invasão. Curiosamente, nestas condições, as alterações do
citoesqueleto do protozoário que acompanham a invasão da célula hospedeira não são detectáveis. Os nossos
resultados sugerem um papel activo do citoesqueleto de Mts quer do parasita quer da célula hospedeira na fase
inicial de invasão.
[Besnoitia besnoiti and its host cell microtubule cytoskeleton deeply rearranges during the invasion
process]
The coccidium Besnoitia besnoiti (Apicomplexa: Sarcocystidae) is a cyst-forming parasite responsible for bovine
besnoitiosis that causes high losses in the bovine production. The process of host cell invasion by this parasite is
poorly documented. In this work we investigated the role of protozoa microtubule (Mt) cytoskeleton in the first steps
of host cell invasion. Using indirect immunofluorescence we observed that isolated B. besnoiti, like other
Apicomplexans, possesses a set of subpellicular Mts spirally arranged that extend from the apical end for more than
2/3 of the cell body towards the posterior edge. Noteworthy, upon interaction with the host cell B. besnoiti
undergoes dramatic modifications of its shape and surface, as revealed by atomic force microscopy. These
alterations are accompanied by a re-organization of the protozoa Mt cytoskeleton, characterized by the loss of the
subpellicular Mts giving raise to tubulin globular-like structures. In the host cell, Mt cytoskeleton also re-organizes
around the invading parasite. The treatment of extracellular tachyzoites with the anti-mitotic agent nocodazole does
not affect their subpellicular Mts while maintain their capacity to invade the host cells. Depolimerization of host cell
Mts by the same agent does not inhibit the invasion by the protozoa, although the morphological modifications
previously observed were not longer detectable. Our results strongly suggest an active role of both the parasite Mt
cytoskeleton and that of the host cell during active host cell invasion.
112
Resposta mediada por anticorpos na infecção intragástrica por Neospora caninum num modelo
murino
Teixeira, L.1, Botelho, A.S.1, Batista, A.R.1, Meireles, C.S.2, Faustino, A.M.R.1, Ribeiro, A.1, Castro, A.G.3, Correia
da Costa, J.M.2,3, Vilanova, M.1,4
1 ICBAS – Instituto de Ciências Biomédicas de Abel Salazar, Largo do Professor Abel Salazar 2, 4099-003, Porto, Portugal
2 CECA – Centro de Estudos de Ciência Animal, Universidade do Porto, Campus Agrário de Vairão, Rua do Monte Crasto, Vairão
3 Centro de Imunologia e Biologia Parasitária, INSA, Rua de S. Luís 16, Porto, Portugal
4 Instituto de Biologia Molecular e Celular, Rua do Campo Alegre, Porto, Portugal
A infecção com o protozoário apicomplexa Neospora caninum tem sido descrita em modelos murinos infectados
pelas vias intraperitoneal e intradérmica. Contudo, naturalmente a infecção por N. caninum é estabelecida como
consequência da ingestão de oocistos do parasita. Com o objectivo de estudar a infecção intragástrica com este
parasita num modelo murino, ratinhos C57BL/10ScCr foram inoculados i.g. com taquizoítos de N. caninum. Todos
os ratinhos infectados com o parasita morreram após infecção. Nestes ratinhos, a análise imonohistoquímica
demonstrou taquizoítos disseminados nos pulmões, coração, pâncreas, fígado, baço, rim e cérebro. Estes resultados
sugerem que, nos ratinhos C57BL/10ScCr, a infecção por N. caninum pode ser estabelecida com sucesso através da
administração i.g. de taquizoítos. Ainda de acordo com os resultados acima mencionados, estudamos
comparativamente a resposta imune desenvolvida nas Placas de Peyer e Baço de ratinhos BALB/c fêmeas injectadas
intragástricamente ou intraperitonealmente com taquizoítos de N. caninum. Nos ratinhos injectados com N. caninum
por ambas as vias foi observado, através da análise por FACS, um aumento no número de células B e T no Baço,
mas não nas Placas de Peyer, aos dias 8 e 21 após infecção. Através da análise por PCR quantitativo em Tempo
Real, verificou-se um aumento nos níveis de mRNA de IFN-γ em ambos grupos de ratinhos infectados com N.
caninum, em comparação com os controlos não infectados. Os níveis de anticorpos IgG1 totais e de IgG2a foram
medidos por ELISA nas lavagens intestinais dos ratinhos, após 8 e 21 dias de infecção i.p ou i.g. com taquizoítos de
N. caninum. Os resultados descritos sugerem que a infecção por N. caninum pode ser estabelecida com sucesso
através da administração i.g. de taquizoítos nos ratinhos.
[Antibody-mediated response in a murine model of intra-gastric Neospora caninum infection]
Infection with the apicomplexan protozoan Neospora caninum has been reported in murine models where the
parasitic challenge was performed by the intra-peritoneal or intradermal routes. However, in nature, N. caninum
infection is established as the consequence of ingestion of parasite oocysts. Therefore, in order to study the
possibility of intra-gastric infection with this parasite in a murine model, C57BL/10 ScCr mice were challenged i.g.
with N. caninum tachyzoites. All parasitic-challenged mice died after infection. In these mice, immunohistochemical
analysis showed tachyzoites spread throughout the lungs, heart, pancreas, liver, spleen, kidney and brain. These
results suggest that, in C57BL/10 ScCr mice, N. caninum infection can be successfully established by i.g.
administration of tachyzoites. Moreover, taking into account the above results, we comparatively studied the
immune response elicited in the Peyer’s Patches and Spleen of female BALB/c mice challenged intra-gastrically or
intra-peritoneally with N. caninum tachyzoites. In the mice challenged with N. caninum by either of these two routes
it was observed by FACS analysis an increase in the numbers of B and T cells in the spleen, but not in the Peyer’s
Patches, at days 8 and 21 after challenge. In both groups of N. caninum-infected mice an increase in the splenic
levels of IFN-γ mRNA, comparatively to non-infected controls, was detected, as assessed by quantitative RT-PCR.
The levels of total IgG1 and IgG2a antibodies were measured by ELISA in the intestinal lavage of mice, 8 and 21
days after challenge i.p. or i.g. with N. caninum tachyzoites. All together, these results suggest that N. caninum
infection can be successfully established by i.g. administration of tachyzoites in mice.
113
Reprodução
Construção de gâmetas por transferência nuclear e haploidização
Sousa, Mário1-4, Cremades, N.2, Alves, C.3 e Barros, A.3,4
1 Lab Biologia Celular, ICBAS-UP ([email protected])
2 Unidade FIV, Serviço de Ginecologia, Hospital Geral Universitário de Alicante, Espanha
3 Serviço de Genética, FMUP
4 Centro de Genética da Reprodução Prof. A.Barros, Porto (22-600.75.17)
Objectivos: Estudar a possibilidade de indução da haploidização de células somáticas adultas diplóides após
transferência nuclear, para construção sintética de gâmetas.
Materiais e Métodos: Sob consentimento informado, usaram-se ovócitos maduros excedentários (MII), células
foliculares (CF) e linfócitos masculinos (LM) do sangue periférico isolados por Ficoll. Construção de gâmetas
femininos. Enucleação (EN): meio com 5µg/ml Citocalasina-B, zona-drilling (Tirode ácido), aspiração do 1º glóbulo
polar (1GP) e ooplasma subjacente contendo a placa metafásica-II (Carioplasto). Eficiência EN: DAPI
(1GP/Carioplasto). Transferência nuclear (TN): microinjecção CF, 2-4h pos-EN (1). Cultura (condensação do DNA
pelo MPF; criação de fuso): 14h. Activação: microinjecção de espermatozóide (ICSI) (2). Análise da constituição
cromossómica: FISH (3). Construção de gâmetas masculinos. TN: microinjecção LM, 2-4 h pos-EN. Activação:
ionoforo-Ca2+ (5 min, 10µM A23187) (4).
Resultados: Construção de gâmetas femininos. 5h pos-ICSI, 3/14 (21%) dos MII libertaram um pseudo-glóbulo
polar (PGP). A FISH de dois PGP revelou uma constituição haplóide (13,18,21,X,Y). 10h pos-ICSI, 2/14 (14%)
desenvolveram um pseudo-pronúcleo (1PPN) e o PN-masculino, clivaram, e os dois embriões foram
criopreservados no dia 2 (5). Estes resultados representam os primeiros embriões humanos gerados por clonagem,
clonagem terapêutica e haploidização. Construção de gâmetas masculinos. 89/110 (81%) MII foram EN com
sucesso. Após TN e activação, 38/89 (43%) formaram 1PPN/1PGP. 20/38 (53%):20/89 (23%) clivaram e 5/20
(25%):5/89 (6%) atingiram a fase de mórula/blastocisto. A FISH revelou 9/38 (24%):9/89 (10%) embriões haplóides
(16,18,X,Y) (6). Efectuamos TN de LM para 37 MII não-enucleados, seguindo-se activação 6h, 4h e 2h após. No
grupo das 2h, 3/10 (30%) apresentaram 1PN,1GP e 2/3/10 (75%, 20%) placa metafásica-LM (7).
Conclusões: Os resultados de TN de LM indicam que: (a) a eficiência da EN e da TN sem activação extemporânea
do ovócito atinge os 81%, um requisito essencial para a reprogramação do genoma do linfócito; (b) a activação ideal
é 2-3h pos-TN; (c) a meiose-II do ovócito é reactivada em 30% dos casos, com indução da condensação da
cromatina e formação de placa metafásica dos linfócitos (20%); (d) a segregação dos homólogos do linfócito, com
citocinese desigual (haploidização), é mais eficiente em ooplastos (10%) do que em MII; (e) a placa metafásica II e
a retoma da meiose inibem a condensação da cromatina, a formação do fuso e a segregação dos homólogos do
linfócito; (f) a activação pelo ionoforo-Ca2+ (induz pico único de libertação endógena de cálcio), não é o estímulo
mais eficaz para indução da haploidização.
Referências:
(1) Sousa etal (1996) Mol Hum Reprod 2,853-857.
(2) Tesarik, Sousa, Testart (1994) Hum Reprod 9,511-518; Tesarik, Sousa (1995) Fertil Steril 64,770-776; Sousa etal (2002) Hum Reprod
17,1800-1810.
(3) Sousa etal (2002) Hum Reprod 17,161-172.
(4) Tesarik, Sousa (1995) Fertil Steril 63,343-349.
(5) Tesarik, Nagy, Sousa, etal (2001) Reprod Biomed Online 2,160-164.
(6) Cremades, Sousa (2003) ASEBIR 8,44-45.
(7) Sousa etal (2005) Adv Mol Med 1,25-30.
Agradecimentos:
FCT (POCTI/SAU-MMO/60709/04, 60555/04, 59997/04, UMIB).
114
Actividade ovárica na cabra da raça Serrana em dois períodos distintos do ano
Simões, J.1, Almeida, J.C.1, Paula, R.1, Valentim, R.2, Azevedo, J.1, Fontes, P.1 e Mascarenhas, R.3
1 CECAV-Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro, 5000-911 Vila Real
2 Escola Superior Agrária – Instituto Politécnico de Bragança, 5301-854 Bragança, Portugal
3 INIAP, Estação Zootécnica Nacional, 2000-763 Vale de Santarém
O objectivo deste trabalho foi o estudo da actividade ovárica em cabras da raça Serrana em 2 períodos distintos de
actividade reprodutiva: de 1 de Setembro a 30 de Novembro (Período 1) e de 21 de Fevereiro a 29 de Março
(Período 2). Durante o período 1 foram utilizadas 42 fêmeas, entre 2 e 9 anos de idade, nulíparas e multíparas;
durante o período 2, foram utilizadas 23 daquelas fêmeas. Todas as fêmeas multíparas tiveram o último parto entre 6
e 12 meses antes dos ensaios. A actividade ovárica foi avaliada através do doseamento da progesterona em amostras
de plasma recolhidas duas vezes por semana. A condição corporal destes animais foi controlada e mantida constante.
No período 1, até meio do mês de Setembro, foi detectada uma ausência de corpos lúteos funcionais em 76,2 %
(32/42) das cabras, sugerindo que a maioria dos animais do rebanho se encontrava em anestro. No entanto, durante a
segunda metade de Setembro, o número de cabras com teores de progesterona elevados (>0,5 ng/ml) aumentou
rapidamente, indiciando um período de transição entre época de anestro e época reprodutiva. Foi observada, nesse
período, a presença de ciclos éstricos de curta duração em 14,3 % (6/42) dos animais. A partir de Outubro e até ao
final do ensaio todas as cabras se encontraram cíclicas. Durante o período 2, os padrões cíclicos de produção de
progesterona foram observados somente numa cabra (4,4%), encontrando-se as restantes em anestro. No entanto, em
36,4% (8/22) dos animais foram detectados corpos lúteos funcionais, por vezes com episódios esporádicos de
produção de progesterona, que se prolongaram, em alguns casos, até 3 de Março. Os resultados sugerem, que à
semelhança de outras raças em regiões de maiores latitudes, a raça Serrana apresenta períodos de anestro e de
actividade reprodutiva sazonal bem definidos. A observação de actividade ovárica irregular em alguns animais,
durante os períodos de transição, sugere a necessidade de uma caracterização profunda da intensidade de anestro,
nas nossas latitudes, e do efeito do fotoperíodo sobre o ciclo reprodutivo dos animais desta raça.
[Ovarian activity in Serrana goats during two different periods of the year]
The aim of present study was the study of ovarian activity in Serrana goats during two distinct periods: 1st
September to 30th November (Period 1) and 21st February to 29th March (Period 2). During period 1, forty-two
nulliparous and multiparous females, 2 to 9 years of age, were used; during period 2, only 23 of those females were
used. All multiparous goats had kidded 6 to 12 month before experiments. Ovarian activity was evaluated by
progesterone analysis in plasma samples collected biweekly. Body condition of all goats was monitored and
maintained stable all over the experimental period. In the period 1, no functionally corpora lutea were detected in
76,2 % (32/42) of the goat during the onset and until middle September, suggesting this is yet a period of anoestrus.
Moreover, from the middle September, the number of goats with high plasma progesterone increased quickly,
suggesting this is a transition period between anoestrous and breeding seasons. The presence of short oestrous cycles
was observed in 14,3 % (6/42) of the goats during September. From October to the end of the period 1, all goats
showed cyclic ovarian activity. During the period 2, only one goat (4,4%) showed cyclic ovarian activity. All of
other goats were observed in anoestrous. However, corpora lutea sometimes with episodically progesterone
production were present in 36,4% (8/22) of the goats, some of them until 3rd March. These results suggest the
existence of well defined seasonal anoestrous and breeding seasons during the year. However, the observation of
irregular ovarian activity in some animals, during transition periods, suggests the necessity of a deep investigation
about the intensity of anoestrus in our latitude and, consequently the photoperiodic effect on the reproductive cycle
of these goats.
115
Efeito das doses de eCG e de PGF2
inseminação artificial
α
usadas na sincronização do estro sobre a eficiência da
Mascarenhas, R. e Barbas, J.P.
Estação Zootécnica Nacional – INIAP, 2005-048 VALE DE SANTARÉM
Nos caprinos, a indução e sincronização do estro é normalmente associada à inseminação artificial (IA), permitindo
que esta seja praticada em momentos pré-fixados. A eficiência da IA está dependente do grau de sincronização
obtido com o tratamento. A associação do tratamento progestagénico de 11 dias (esponjas de 45 mg de FGA,
Intervet®, Holanda), com a eCG e o cloprostenol, no 9º dia de tratamento, permite uma boa indução e sincronização
do estro para IA. Porém, as doses destas hormonas podem variar em função do tipo e do estado fisiológico dos
animais (lactação, produção de leite).
Neste trabalho foram avaliadas a fertilidade e a prolificidade de 756 cabras, tratadas com doses de eCG
(Intergonan®, Holanda) de 300, 400 e 500 UI e doses de cloprostenol (Estrumate®, Essex Animal Health,
Alemanha) de 50, 100 e 150 g. Cada cabra foi inseminada uma só vez, por via cervical, 42 – 45 horas após o fim
do tratamento progestagénico (200 milhões de espermatozóides totais). O sémen, recolhido com vagina artificial e
diluído em meio à base de leite de vaca desnatado (Colas) foi conservado por refrigeração a +4ºC., durante um
máximo de 6 horas.
Foi observado um efeito significativo da dose de PGF2α sobre a fertilidade, que foi mais elevada com 50 µg (53,7
%) do que com 100 µg ou 150 µg (44,5 e 22,8 %, respectivamente; p<0,001). As diferenças entre as doses de 100 µg
e 150 µg não foram significativas. A prolificidade apenas apresentou variações significativas (p<0,05) com as doses
de 50 e 100 µg de PGF2α (195,4 e 164,9, respectivamente).
A fertilidade média foi de 49,8 %, sendo ligeiramente mais elevada com a dose de 400 UI de eCG (51,9 %) do que
com as de 300 (50,9 %) e 500 UI (48,1 %), não sendo as diferenças significativas. Com a dose de 300 UI de eCG, a
prolificidade obtida apresenta um valor semelhante ao da prolificidade natural (164,3 %). O aumento da dose de
eCG provoca um aumento da prolificidade: 189,0 % com 400 UI e 193,3 % com 500 UI, embora as diferenças não
sejam significativas.
Dos resultados obtidos poderá concluir-se que as doses de 50 µg de PGF2α e de 400 UI de eCG parecem as mais
adequadas nos protocolos de indução e sincronização do estro para a inseminação artificial de cabras de raças
autóctones.
[Effect of eCG and PGF2α doses used in the synchronization of oestrus on the efficiency of artificial
insemination in goats]
In goats, induction and synchronization of oestrus are normally associated with the artificial insemination (AI),
allowing that to be practised at pre-fixed timing. The efficiency of AI is dependent of the degree of synchronization
after the treatment.
The association of the 11 days progestagen treatment (45 mg FGA sponges, Intervet®, Holland), with eCG and
cloprostenol, administered in the 9th day, produces a good induction and synchronization of oestrus for AI.
However, the doses of these hormones can vary in function of the type and the physiological state of animals
(lactation, milk production).
In this work, the fertility and the prolificacy of 756 inseminated goats, treated with 300, 400 and 500 UI of eCG
(Intergonan®, Holland) and 50, 100 and 150 µg of cloprostenol (Estrumate®, Animal Essex Health, Germany) were
evaluated. Each goat was inseminated once, by cervical route, 42 - 45 hours after the end of the progestagen
treatment (200 million total spermatozoa per AI). Semen was collected with artificial vagina, diluted with skimmed
milk based extender (Colas) and refrigerated at +4ºC. Semen was used during a maximum period of 6 hours.
A significant effect of the dose of PGF2α on fertility was observed. Fertility was higher with 50 µg (53.7 %) than
with 100 or 150 µg (44.5 and 22.8 %, respectively; p<0.001). The differences between doses of 100 and 150 µg
were not significant. The prolificacy only presented significant variations (p<0.05) with the doses of 50 and 100 µg
of PGF2 α (195.4 and 164.9, respectively).
The average fertility was 49.8 %, being higher with the dose of 400 UI of eCG (51.9 %) than with the doses of 300
(50.9 %) or 500 UI (48.1 %), but with no significant differences.
With the dose of 300 UI of eCG, the observed prolificacy presents a similar value to the natural prolificacy (164.3
%) of these goats. Increasing the dose of eCG results in an increased prolificacy: 189.0 % prolificacy with 400 UI
and 193.3 % with 500 UI (differences not significant).
These results show that the doses of 50 µg of PGF2 α and the 400 UI of eCG are most suitable in protocols to induce
and synchronize oestrus for artificial insemination of local goats.
116
Actividade mioeléctrica cervical durante o estro, em ovelhas submetidas à sincronização com
progestagénios e ecg
Cavaco-Gonçalves, S.1, Marques, C.C.1, Horta, A.E.M.1, Figueroa, J.P.2
1 Departamento de Reprodução Animal, Estação Zootécnica Nacional-INIAP, 2005-048 Vale de Santarém, Portugal;
2 Department of Obstetrics and Gynecology, Wake Forest University School of Medicine, Winston-Salem, NC 27157-1066, USA
E-Mail : [email protected]
A IA na ovelha é limitada pela anatomia do cérvix, que impede a passagem do cateter de inseminação até ao útero,
limitando a deposição do sémen ao cérvix. Durante o período péri-ovulatório verifica-se um aumento da motilidade
cervical a qual, de acordo com vários autores, desempenhará um importante papel no transporte espermático até ao
útero. Este trabalho teve como objectivo caracterizar a actividade mioeléctrica cervical (EMG) na ovelha, durante o
período péri-ovulatório, após a sincronização do estro com progestagénio e eCG, um protocolo de rotina utilizado
em ovelhas alvo de IA. Para a quantificação da EMG foi utilizado um sistema modular computorizado em 5 ovelhas,
previamente sujeitas a uma cirurgia para implantação de dois eléctrodos monopolares com agulha na camada
muscular do cérvix. Cada ovelha foi submetida a um tratamento de sincronização de estro, pela aplicação de
esponjas vaginais de FGA durante 12 dias e a administração de 500 UI de eCG no momento de remoção da esponja.
Quarenta e quatro horas após a remoção da esponja iniciou-se o registo da EMG, durante 19 horas. O número e
duração dos picos de actividade foram identificados em cada período de 1 hora. Quanto à duração foram
identificados 2 tipos de picos: com duração inferior a 200 s e com duração entre 300 e 500 s. Estes dois tipos de
picos tiveram um comportamento semelhante ao longo do período de registo, se bem que não em sincronia. Nos
picos de duração menor de 200 s, a actividade aumentou 48-50 h após a remoção da esponja, sendo a actividade
máxima observada entre as 51 e as 53 h. Nos picos de duração 300-500 s, a actividade máxima foi observada 48-50
h após a remoção da esponja, mantendo-se a actividade até às 51-53 h. O período de motilidade cervical aumentada
observado nas ovelhas sincronizadas com progestagénio-eCG coincide com o período de aumento observado nos
animais em estro natural, sugerindo que os protocolos de sincronização não têm qualquer efeito na motilidade
cervical no período péri-ovulatório. O aumento da motilidade cervical observado durante o período de cobrição / IA
sugere que esta terá um importante papel no mecanismo de transporte espermático. Tendo em atenção a
sensibilidade do cérvix a várias drogas, a manipulação experimental da motilidade cervical poderá ser estudada para
facilitar o transporte espermático e consequentemente aumentar a fertilidade após a IA cervical.
[Cervical electrical activity during oestrus in progestagen-ecg treated ewes]
One of the major limitations of AI in sheep is the anatomy of the cervix which impairs the AI device of reaching the
uterus, confining semen deposition to the cervix. During periovulatory period an increase in cervical motility is
observed which, according to various authors, plays an important role in sperm transport to the uterus.
The aim of this investigation was to characterize the pattern of cervical myoelectrical activity (EMG) in the sheep,
during the periovulatory period, after synchronization of oestrus with progestagen and eCG, a routine treatment in
ewes used in AI programmes. EMG was measured with a computerised modular system in five ewes previously
fitted with a pair of monopolar Teflon needle electrodes in the muscle layers of the cervix. Each ewe was submitted
to oestrus synchronization treatment with intravaginal progestagen sponge during 12 days, and the administration of
500 IU of eCG at the withdrawal of sponge. EMG was recorded in each animal during 19 h, starting 44 h after
withdrawal of sponge. The number and duration of events was determined hourly during the experiment. Two
distinct event durations were identified: one lasting less than 200 s and another lasting between 300 and 500 s. The
two types of events analysed (less than 200 s and lasting between 300 and 500 s) had a similar pattern during the
period of observation although they were not in synchrony. For events lasting less than 200 s, activity increased
between 48-50 h after sponge withdrawal, with the peak of activity being observed between 51 and 53 h. For events
of 300-500 s duration the peak of activity was observed between 48 and 50 h after sponge withdrawal and activity
was maintained until 51-53 hours. The increase in cervical motility observed in progestagen-eCG treated ewes is in
keeping with the increase in cervical activity observed by others in natural cycling animals, and suggests that
exogenous hormones used in synchronization protocols had no deleterious action on cervical motility during
periovulatory period. The enhanced activity of cervical muscle layer found around the time of mating and/or AI
suggests it may play an important role as a regulatory mechanism of sperm transport. Taking advantage of the
cervical responsiveness to various drugs, experimental modulation of cervical activity could be used to facilitate
cervical sperm transport and consequent improve fertility after cervical AI.
117
Utilização de sémen sexado em programas de ovulação múltipla e transferência embrionária com
novilhas Frísias Holstein
Barcelos, T. e Chagas e Silva, J.
Divisão de Selecção e Reprodução Animal (DGV), Venda Nova, 2704-507 Amadora, Portugal
Embora alguns ensaios tenham registado taxas de gestação razoáveis em novilhas inseminadas com sémen sexado durante
cios não estimulados, os resultados em fêmeas superovuladas não são consistentes por haver poucos dados sobre a
matéria. Os objectivos deste trabalho foram: a) determinar a taxa de fertilização e a qualidade embrionária em novilhas
superovuladas e inseminadas com sémen sexado para a obtenção de fêmeas (SS) e com sémen não sexado (SNS), de um
mesmo touro; b) determinar a taxa de gestação após transferência para novilhas virgens, de embriões frescos de qualidade
1, obtidos com SS ou SNS, e o sexo das crias. Novilhas Frísias de 12 a 14 meses (n=11), superovuladas por duas vezes
com eCG (2000 UI, via IM), foram inseminadas 12h e 24h após os primeiros sinais do cio superovulatório, com SS6,6x106spz (n=11) e com SNS-14,4x106spz (n=11). As dadoras foram divididas aleatoriamente, em 4 grupos: SSECU
(n=6) inseminação à entrada do corpo do útero com SS; SSICP (n=5) inseminação bilateral e intra-cornual profunda com
SS; SNSECU (n=5) inseminação à entrada do corpo do útero com SNS; e SNSICP (n=6) inseminação bilateral e intracornual profunda com SNS. O recolhido aos 7-7,5 dias após o início do cio foi avaliado seguindo as recomendações da
IETS. Os embriões de qualidade 1 foram transferidos para novilhas virgens (14 a 16 meses) receptoras de embriões
obtidos com SS (Grupo TSS, n=23) ou receptoras de embriões obtidos com SNS (Grupo TSNS, n=33). Não houve
diferenças em: resposta superovulatória entre o 1º e o 2º tratamento; número de corpos lúteos; número de folículos
anovulatórios; total recolhido e eficiência da recolha entre os SSECU e SSICP ou entre os SNSECU e SNSICP; número
médio de embriões recolhidos; embriões viáveis; embriões de qualidade 1; embriões degenerados entre os SSECU e
SSICP, nem entre os SNSECU e SNSICP. Registou-se diferença significativa para o total de oócitos entre os grupos
SSECU e SSICP, embora não entre os SNSECU e SNSICP. Após o diagnóstico ecográfico de gestação aos 28 dias, a
percentagem de fêmeas gestantes foi 47,8% para o grupo TSS e 75,8% para o grupo TSNS. Aos 42 dias, esse valor
manteve-se para o grupo TSS, mas baixou no grupo TSNS (72,7%). A percentagem de fêmeas nascidas no grupo TSS foi
90%, enquanto no grupo TSNS esse valor foi apenas 57,9%. Estes resultados sugerem que a inseminação ICP com sémen
SS afecta a taxa de fertilização, pois a uma população espermática diminuída poderão estar associadas lesões do
endométrio durante a IA. Nos grupos SNSECU e SNSICP, a presença de uma população espermática normal poderá
mascarar este efeito traumático. A diferença entre a percentagem de gestações, aos 28 dias e aos 42 dias, entre os grupos
TSS e TSNS sugere que, embora de qualidade 1, os embriões obtidos com SS poderão revelar um comprometimento da
sua competência para o desenvolvimento, relativamente aos embriões SNS, como sequela do processo de sexagem. Por
último, a percentagem de crias do sexo feminino obtida, revelou que o SS é eficiente na pré-determinação do sexo
desejado, quando utilizado durante o cio superovulatório de novilhas da raça Frísia Holstein.
[Superovulation and embryo transfer in Holstein Friesian virgin heifers using x-sorted sperm]
Although a few studies have obtained reasonable pregnancy rates in single-ovulating heifers inseminated with sexed
sperm, it is not clear if x-sorted sperm can be successfully used in superovulated young dairy females. The objectives of
this trial were: a) to determine the fertilization rate and embryo quality in dairy heifers, superovulated and inseminated
with frozen-thawed x-sorted semen to obtain females (SS) or unsorted sperm (SNS), from the same bull; b) to evaluate the
pregnancy rate after ET to virgin dairy heifers, of fresh grade 1 embryos obtained with SS or SNS sperm, and to determine
the offspring sex ratio. Nulliparous Holstein heifers (n=11; 12 to14 mo) were superovulated twice with eCG (2000 IU;
IM). Following detection of SOV estrus, they were inseminated at 12h and 24h from the onset, with SS-6,6x106 spz
(n=11) and with SNS-14,4x106 spz (n=11). Donor heifers were randonmly divided in four groups: SSECU (n=6) uterine
body AI with SS; SSICP (n=5) bilateral deep uterine horn AI with SS; SNSECU (n=5) uterine body AI with SNS;
SNSICP (n=6) bilateral deep uterine horn AI with SNS. Embryos/ova collected 7-7.5 d after SOV estrus were evaluated
according to the IETS guidelines. Fresh grade 1 embryos were transferred to virgin heifers (14 to 16 mo) recipients of
embryos obtained from SS (Group TSS, n=23) or recipients of embryos obtained from SNS (Group TSNS, n=33). There
were no differences on: 1st and 2nd SOV treatment; corpora lutea number; anovulatory follicles number; embryos/ova
collected or collection efficiency between SSECU and SSICP groups or between SNSECU and SNSICP groups; mean
number of embryos, viable embryos, grade 1 embryos; degenerate embryos between SSECU and SSICP groups, neither
between SNSECU and SNSICP groups. The number of unfertilized ova was significantly higher in the SSECU group than
in SSICP group but not between SNSECU group and SNSICP group. After 28 day pregnancy diagnosis, the percentage of
pregnant recipients was 47,8% for the TSS group and 75,8% for the TSNS group. At day 42 the percentage of pregnancy
remained the same at TSS group, but it was lower in the TSNS group (72,7%). The percentage of female calves in the TSS
group was 90%, compared to 57,9% in the TSNS group. These data suggest that ICP AI appears to affect fertilization rate,
thus a low sperm population and traumatic effects of ICP AI may be associated. The presence of a normal sperm
population in SNS groups may mask the traumatic effects of ICP AI. Day 28 and day 42 pregnancy rates differences
between TSS and TSNS groups suggest that embryos obtained from SS, although grade 1, appears to have lower
development competence, than embryos obtained form SNS, as results of sperm damage during the flow cytometric sperm
sorting. At last, the percentage of females calves obtained revealed that SS is efficient in sex predetermination when used
in superovulated Holstein Friesian heifers.
118
Efeito de ácidos gordos polinsaturados da série n-3 (ácido eicosapentaénoico) ou n-6 (ácido
araquidónico) no desenvolvimento embrionário bovino in vitro.
Pereira, R.M., Baptista, M.C., Vasques, M.I., Horta, A.E.M., Marques, C.C.
Estação Zootécnica Nacional, 2005-048 Vale de Santarém, Portugal. E-mail: [email protected]
Os lípidos são imprescindíveis para a estrutura, metabolismo e actividade celular dos embriões antes da
implantação. No entanto, a inclusão de ácidos gordos nos meios de cultura de embriões, para além da sua presença
acidental como constituintes não identificados do soro ou albumina, tem sido negligenciada. O objectivo deste
trabalho foi determinar o efeito de dois ácidos gordos polinsaturados, o ácido araquidónico (C20:4n-6) e o
eicosapentaenoico (C20:5n-3), no desenvolvimento de embriões bovinos produzidos in vitro. Oócitos recolhidos de
ovários provenientes do matadouro foram maturados e fertilizados in vitro (FIV=D0) e os presumíveis zigotos
transferidos para monocamadas de células da granulosa. Os embriões foram refrescados durante 12 dias com
TCM199+10% soro suplementado com diferentes doses (0, 1, 10, 100 µM) de C20:4n-6 na experiência 1 e de
C20:5n-3 na experiência 2 (8 sessões cada experiência). Foi também incorporado um anti-oxidante, o glutatião
peroxidase (GSH, 100 µM), no meio de cultura de forma a reduzir a formação de peróxidos. Os dados referentes às
taxas de produção (clivagem, embriões D7-8 e eclodidos) e qualidade dos embriões foram analisados pelos testes do
qui-quadrado e de Mann-Whitney. A suplementação dos meios de cultura de embriões com C20:4n-6 aumentou
significativamente a taxa de clivagem e a qualidade dos embriões, apenas na dose mais elevada (testemunha v.s. 100
µM, P=0,04 e P=0,01, respectivamente), não interferindo nas taxas de embriões D7-8 ou eclodidos. Na experiência
2, a suplementação com C20:5n-3 não aumentou a taxa de clivagem quando comparada com a testemunha. No
entanto, esta taxa foi superior na dose de 10 µM do que na de 1 µM (P=0,04). Pelo contrário, a presença de 1 µM de
C20:5n-3 induziu uma taxa de embriões D7-8 maior do que a de 10 µM (P=0.001) ou 100 µM (P=0.004). A taxa de
eclosão e a qualidade dos embriões, aumentaram apenas na dose de 1 µM de C20:5n-3 (testemunha v.s. 1 µM,
P=0,005 e P=0,001, respectivamente; qualidade 1 µM v.s. 100 µM, P=0,02).
Resultados em trabalhos anteriores identificaram um efeito negativo do C20:4n-6 no crescimento e eclosão dos
embriões. Este efeito não se verificou na presença do anti-oxidante. Os presentes resultados demonstram que a
suplementação dos meios de cultura com C20:4n-6, na dose de 100 µM, ou de C20:5n-3, na dose de 1 µM,
melhoram a qualidade dos embriões produzidos. Recomenda-se a futura incorporação destes ácidos gordos
polinsaturados, nas doses referidas, com 100 µM de GSH nos meios de cultura de embriões.
[Effect of n-3 (eicosapentaenoic acid) or n-6 (arachidonic acid) polyunsaturated fatty acids on in
vitro bovine embryo development]
Fatty acid and lipids are crucial contributors to the structural, functional and metabolic integrity of preimplantation
mammalian embryos. Despite this, fatty acids have been largely ignored and neglected as constituents of culture
media, with any contributions they do make, beneficial or otherwise, seldom identified and usually due to their
accidental presence as undefined constituents of albumin or serum. The objective of present study was to determine
the effect of two different polyunsaturated fatty acids, arachidonic (C20:4n-6) and eicosapentaenoic (C20:5n-3)
acids, on in vitro bovine embryo development. Following standard in vitro maturation and fertilization (IVF=D0) of
abattoir oocytes, presumptive zygotes were transferred to a co-culture granulosa cells system. Different doses (0, 1,
10, 100 µM) of C20:4n-6 or C20:5n-3 were added to conventional embryo culture media (TCM 199 + 10% serum)
and tested in two experiments (8 sessions each), respectively. An antioxidant (100 µM GSH) was also incorporated
to reduce the formation of lipid peroxides. Embryo co-culture proceeded for 12 days. Data from embryo production
rates (cleavage, D7-8 and hatched embryos) and quality (Grade 1= very good … Grade 4= bad) were analysed using
Chi-Square and Mann-Whitney U tests. In experiment 1, the presence of 100 µM dose of C20:4n-6 significantly
increased cleavage rate (P=0.04) and D8 embryo quality (P=0.01) when compared with control. No effect was
detected on cleavage, D7-8 and hatched embryo rates or embryo quality with other doses of C20:4n-6. In
experiment 2, C20:5n-3 supplementation did not increase cleavage rate compared to control. Nevertheless when a
10 µM dose was added to culture media results were better than with 1 µM of C20:5n-3 (P=0.04). On the contrary, 1
µM of C20:5n-3 induced better D7-8 embryo rates than 10 µM (P=0.001) or 100 µM (P=0.004). Hatched embryo
rate and D7-8 embryo quality were significantly improved only when 1 µM of C20:5n-3 were incorporated in
embryo culture media (control v.s. 1 µM, P=0.005 and P<0.003, respectively; quality 1 µM v.s. 100 µM, P=0.02).
The previously identified negative effect of C20:4n-6 on embryo growth and hatching was overcome probably by
the antioxidant action. Present results show that bovine embryo culture in the presence of C20:4n-6 in a 100 µM
dose or of C20:5n-3 in a 1 µM dose, improves quality. Future incorporation of these polyunsaturated fatty acids in
the referred conditions with 100 µM GSH in embryo culture media is recommended.
119
Taxa de recolha de Complexos de Cumulus-Oócitos (COCs) e fase de maturação nuclear de oócitos
de cadela em diferentes estados reprodutivos
Lopes, G.1 e Rocha, A.1,2
1 ICBAS - Univ Porto, 4099-003 Porto
2 CECA - Porto
O processo de maturação oocitária na cadela é único entre os mamíferos. A ovulação ocorre quando o oócito ainda
se encontra em Vesicula Germinal (GV), completando-se a maturação nuclear no oviducto. Contudo, foi descrita
alguma incidência de maturação intra-folicular na cadela (1). Com o nosso trabalho, pretendemos contribuir para o
conhecimento da incidência de maturação nuclear intra-folicular de oócitos de cadelas em diferentes estados
reprodutivos. Adicionalmente, determinamos o número total de COCs recolhidos, bem como o número de COCs de
Grau 1 (G1- diametro >100µm, ooplasma escuro, homogéneo e com 2 ou mais camadas de células de cumulus)
obtidos. Ovários recolhidos de 42 cadelas após ovariohisterectomia foram finamente seccionados com um bisturi,
para a obtenção dos COCs. A determinação da fase do ciclo éstrico foi feita pela observação da morfologia ovárica
(presença de foliculos ou corpos lúteos), e uterina (grau de desenvolvimento do endométrio)(1). As cadelas foram
divididas em 5 grupos de acordo com o estado reprodutivo: Anestro, Fase Folicular, Diestro, Prenha e Patologias
Uterinas. Apenas oócitos de G1 foram corados com Hoechst® e posteriormente observados ao microscópio de
fluorescência para a determinação do estado de maturação nuclear. O número médio de COCs recolhidos por cadela
foi de 133,1±53,9 (intervalo 9-440). Um maior número de COCs (p<0,005) foi recolhido em cadelas com idade
entre 1-5 anos (171,2±117,0), comparativamente com cadelas com mais idosas (95,3±99,0). Existe uma elevada
correlação na taxa de oócitos recolhidos entre os dois ovários da mesma cadela (r=0,89;p<0,001). A percentagem de
oócitos de G1 recolhidos foi de 43% na Fase Folicular, 39% em Prenhas, 35% em Patologias Uterinas e 25% em
Anestro. No total de 358 oócitos de G1 examinados imediatamente após a recolha, 255(71%) encontravam-se em
estado de GV, 27(8%) em Rotura da Vesicula Germinal-Diacinese, e apenas 3 oócitos (1%) estavam em Metaphase
I. Nos restantes 63 oócitos (18%) não foi possível identificar uma fase de maturação nuclear. Assim, concluimos que
em cadelas na fase Folicular e Prenhas se obtem maior número de oócitos e que cadelas com Patologias Uterinas
podem ser utilizadas para recolha de oócitos. Quanto à incidência de maturação em oócitos não cultivados, assim
como aqueles que contem material nuclear não identificável, é necessário prosseguir a investigação por forma a
esclarecer se eles representam estados transitórios de maturação nuclear ou, alternativamente, são apoptoticos.
(1)Hewitt DA & England GC(1998). Incidence of oocyte nuclear maturation within the ovarian follicle of the bitch.
Vet Rec, 143(21):590-591.
[Cumulus-oocyte-complexes (COC) recovery rates and oocyte nuclear maturation stage in bitches
at different reproductive stages]
Oocyte maturation in the bitch is unique among mammals, with oocytes ovulating at the germinal vesicle (GV) stage
and undergoing maturation within the oviduct. However, some incidence of oocyte nuclear maturation within the
ovarian follicle of the bitch has been reported (1). The present study was conducted to further investigate the
incidence of nuclear maturation of oocytes within the ovarian follicle in bitches at various reproductive stages.
Additionally, the number of total recovered COCs, as well as the rate of Grade 1 (G1)COCs (darkly pigmented
ooplasm, completely surrounded by two or more layers of cumulus cells) recovered from individual bitches, was
recorded. Ovaries were obtained from 42 bitches after ovariohysterectomy and COCs were recovered by mincing
the ovaries with a scalpel. Ovaries were also examined for the presence of follicles and corpora lutea and uterine
endometrial development was assessed. Morphological criteria were used to identify the different stages of the
oestrus cycle (1). Donor bitches were divided into 5 groups: Anoestrus, Follicular Stage (proestrus/estrus), Diestrus,
Pregnant and Uterine Pathologies. Only G1 oocytes were used for the assessment of nuclear morphology. Oocytes
were stained with Hoechst® and examined by fluorescence microscopy. Mean number of COCs recovered per bitch
was 133.1±53.9 (range 9-440). A higher (p<0.005) number of COCs was recovered from 1-5 years old bitches
(171.2±117.0), compared to older animals (95.3±99.0). There was a high correlation (r=0.89;p<0.001) for oocyte
recovery rate between the two ovaries. The percentage of G1 oocytes recovered was 43% in the Follicular Stage,
39% in Pregnant and 35% in Uterine Pathologies, while in Anoestrus only 25% G1 oocytes were recovered. Of 358
G1 oocytes examined immediately after collection, 255 (71%) were in GV stage, 27(8%) were in Germinal Vesicle
Breakdown/Diakinesis(GVBD-DK) stage, while only 3 oocytes (1%) had developed to Metaphase I. In the
remaining 63 oocytes (18%) identification of nuclear developmental stage was not possible. It is concluded that
bitches in the Follicular and Pregnat stages are the best oocyte donors and bitches with uterine pathologies can still
be useful oocyte donors. Further investigation is needed to clarify if oocytes that present meiotic resumption at
collection, as well as the ones containing non-identifiable nuclear material, reflect a transitory stage in nuclear
maturation or, alternatively, are apoptotic.
(1)Hewitt DA & England GC(1998). Incidence of oocyte nuclear maturation within the ovarian follicle of the bitch.
Vet Rec, 143(21):590-591.
120
Implementação de um método simples e preciso para sexagem de embriões bovinos
Carvalhais, I., Pimenta, J., Marques, C.C., Baptista, M.C., Vasques, I., Horta, A.E.M., Santos, I.C., Marques, M.R.,
Santos Silva, M.F., Pereira, R.M.
Estação Zootécnica Nacional, 2005-048 Vale de Santarém, Portugal. E-mail: [email protected]
O desenvolvimento de métodos simples e precisos para a sexagem de embriões pré-implantatórios é importante para
a optimização do maneio reprodutivo bovino em programas de selecção e melhoramento. O objectivo deste trabalho
foi implementar um método de sexagem de embriões bovinos por reacção em cadeia da polimerase (PCR) multiplex
e avaliar a distribuição de machos e fêmeas em função da qualidade e idade dos embriões produzidos. Oócitos
bovinos aspirados de ovários recolhidos no matadouro foram maturados e fertilizados in vitro (FIV = D0) para a
produção de embriões. Ao 7º e 8º dia de cultura (TCM199 + 10% soro + células da granulosa), os embriões foram
micromanipulados e recolhida uma biópsia para identificação do sexo. No PCR em Pit-stop foram utilizados dois
pares de iniciadores: o primeiro par, adicionado apenas ao 7º ciclo, reconhece o DNA satélite bovino 1.715 (216 pb),
sendo amplificado nas fêmeas e nos machos. O 2º par amplifica um fragmento específico do cromossoma Y (174
pb) apenas presente nos machos. A eficiência na determinação do sexo foi inicialmente testada com DNA genómico
extraído a partir de sangue de bovinos de sexo conhecido e optimizadas as concentrações de DNA, dos iniciadores e
de MgCl2 e as temperaturas de emparelhamento a utilizar na reacção. A precisão do método foi avaliada por
comparação do sexo diagnosticado em biópsias e respectivo embrião (n=14) e em duas biópsias (n=20) do mesmo
embrião. Esta precisão foi de 100 e 100%, respectivamente. A eficiência do método para a sexagem dos embriões
(n=47), avaliada pelo número de embriões com sexo identificado em relação ao número de embriões biopsiados, foi
de 93,6%, podendo o sexo dos embriões ser determinado em 5 horas. A taxa de clivagem (embriões clivados/
oócitos inseminados) foi de 73,8±1,8% (média±EP) e de embriões D7-8 (embriões D7-8/ embriões clivados) foi de
23,8±1,7%, não havendo diferenças significativas no sexo dos embriões (♀: 41%, ♂: 59%).
O método implementado é simples, preciso, rápido e económico, podendo ser utilizado para a sexagem de embriões
bovinos a transferir para vacas receptoras em fresco ou após congelação.
[A simple and precise method for bovine embryo sexing]
Simple and precise methods for embryo sexing are important for the management and genetic improvement of cattle
production systems. A multiplex polymerase chain reaction (PCR)-based method for sex determination of bovine
embryo biopsies was implemented. Sex ratio of in vitro produced embryos was also determined. Abattoir derived
oocytes were matured and fertilized in vitro (IVF day = D0) for embryo production in a co-culture system (TCM199
+ 10% serum + granulosa cells). Day 7/8 embryos were biopsied for sex determination. The method utilizes two
different sets of primers in the pit-stop PCR. The first pair, added only in the 7th cycle, recognizes the bovine
specific satellite sequence (216 bp) that is amplified in both females and males. In addition, another pair of primers
recognizes bovine Y chromosome-specific sequences (174 bp) that are amplified in males only. Accuracy of the sex
determination was initially verified with genomic DNA obtained from bovine blood of known gender. DNA,
primers and MgCl2 concentrations and annealing temperatures were also tested. Altogether, 47 blastocysts were
used for sex determination. Accuracy of assays determined by comparing results from biopsies with those of
embryos (n=14) and from two biopsies (n=20) of the same embryo was 100 and 100% respectively. Embryo sexing
efficiency calculated as the number of embryos with identified sex per biopsied embryos was 93.6%. The sexing of
a large series of embryos can be accomplished in 5 hours. Embryo production rates were 73.8±1.8% (mean±EP) and
23.8±1.7% for cleavage and D7-8 embryo respectively, with an absence of significant effect on sex ratio of
blastocysts (♀: 41%, ♂: 59%).
Results demonstrate that the implemented technique is an economic, rapid and highly reliable method for sexing
bovine embryos prior to fresh or post-thawed transfer into recipient cows.
121
Buiatria
Um surto de estomatite papular bovina
Dammert, Carsten
Médico Veterinário em regime liberal
O objectivo desta apresentação é dar a conhecer a minha experiência pessoal do ponto de vista da prática desta
doença de carácter esporádico, causada por um Parapoxvirus e que muitas vezes passa despercebida.
Aparece nos vitelos, segundo a literatura com duas semanas de vida, neste caso foi a partir dos dez dias de idade e
manifesta-se com lesões de tipo papular no nariz e na cavidade oral.
São descritas as diferentes tentativas de diagnóstico, até chegar a conclusiva microscopia electrónica.
Finalmente são referidas as terapias, bem como as medidas higiénicas implementadas para controlar a doença.
[An outbreak of papular bovine stomatitis]
The objective of this presentation is to relate my personal experience and views from the practice point of view, of
this disease of sporadic character caused by a Parapoxvirus, this disease is many times not even noticed in the
animal.
It appears in calves, according to the literature, when they are two weeks old, in this case it began after the first 10
days of life, and its main signs were lesions, papular kind in the nose and oral cavity.
The different tentative diagnostics are described until achieving a conclusive electronic microscopic analysis.
Finally, the different used therapies are mentioned; also mention are the hygiene methodologies used to control the
disease.
122
Causas de aborto em bovinos leiteiros
Canada, Nuno
Instituto de Ciências Biomédicas de Abel Salazar, Universidade do Porto
Nos últimos 10 anos o sector leiteiro Português sofreu uma profunda reestruturação devido à introdução de
parâmetros mais restritivos de qualidade higio-sanitária do leite, a um aumento do custo dos factores de produção
não acompanhado pelo aumento do preço do leite, à problemática da Encefalopatia Espongiforme Bovina, e por fim,
à implementação do sistema de quotas leiteiras. Este conjunto de factores implicou um decréscimo na margem de
lucro dos produtores de leite que se viram forçados a aumentar a dimensão das explorações leiteiras e a maximizar
os recursos com o objectivo de tornar as explorações economicamente viáveis. Neste contexto, em que a
maximização das performances produtivas é determinante para a sobrevivência dos bovinicultores, é fundamental
controlar todos os factores que possam influenciar a produção. Assim, a gestão dos factores que possam influenciar
os parâmetros reprodutivos, como seja o controlo e/ou erradicação das doenças com impacto reprodutivo é hoje uma
prioridade dos Médicos Veterinários buiatras.
O IBR e o BVD são, das doenças com impacto reprodutivo, as que tem apresentado uma prevalência mais elevada
nos efectivos leiteiros de Portugal. A neosporose, doença emergente que tem vindo a assumir uma importância
crescente no domínio da patologia reprodutiva dos bovinos em todo o mundo, incluindo Portugal, tornou-se
também, na última década, num grave problema para a bovinicultura devido à sua elevada prevalência, grande
impacto económico nos efectivos afectados e controlo extremamente difícil.
Apesar de o BVD, o IBR e a neosporose serem as doenças com impacto reprodutivo mais prevalentes no país, na
investigação de focos de abortos em bovinos, devem ser pesquisados outros agentes que possam ser responsáveis,
por si só ou em co-infecção com os agentes referidos, por perdas importantes. As causas de aborto não infecciosas
devem também ser consideradas nos diagnósticos diferenciais.
Para além dos prejuízos atribuídos directamente aos distúrbios reprodutivos induzidos por estas doenças, temos
como custos indirectos: a assistência Médico-Veterinária para estabelecimento de diagnóstico e acompanhamento
dos focos de doença; custos laboratoriais; aumento da taxa de refugo; custos de reposição dos animais refugados;
abrandamento do progresso genético do efectivo e diminuição da produção de leite.
[Causes of abortion in dairy cattle]
Over the last 10 years, the dairy production in Portugal has gone through a profound modification caused by many
factors, such as changes of milk quality parameters, increasing production costs, the problematic of the Bovine
Spongiform Encephalopathy as well as the implementation of quotas. These factors have contributed to a decrease
in the profits of the dairy farmers that were forced to augment the size of the farms and rethink all the working
strategy in order to increase their profits. Thus, a better control of the main factors that influence production became
a priority for dairy farmers. Therefore, the control and/or the eradication of diseases that induce reproductive losses
are one of the most important fields of work for the veterinarians working in Buiatrics. Among them, IBR and BVD
are the most prevalent ones in Portugal. Neosporosis, an emergent protozoal disease that in the last decade was
considered a major cause of abortion in cattle all over the world, is a major problem in Portugal in the dairy sector
due to a high prevalence, important economic losses in the affected farms and an extremely difficult control.
Despite BVD, IBR and neosporosis being the most prevalent reproductive diseases in the country, the investigation
of abortion outbreaks in cattle should also consider other possible primary or in co-infection etiological agents and
non infectious causes of abortion.
Economic losses induced by those diseases are due to reproductive wastage (direct losses) and indirect losses such
as veterinary assistance, laboratorial costs, an increase of culling rate, decrease of genetic progression and decrease
of milk production.
123
Nutrição e maneio alimentar no período de transição em vacas leiteiras
Gaspar, Nuno
Silva & Dias SA
O período de transição em vacas leiteiras compreeende as últimas três semanas de gestação e as três primeiras
semanas pós-parto e é a fase mais sensível do seu ciclo produtivo, durante a qual ocorre a maior parte das patologias
observadas na moderna exploração leiteira. Dela depende em grande medida o sucesso da lactação e da reprodução.
A acelerada transformação genética ocorrida nos efectivos nacionais, a diversidade de sistemas de exploração,
alimentação e condições de maneio, determinam diferentes abordagens e práticas. Procuramos neste trabalho
apresentar algumas considerações sobre este tema, descrevendo o quadro de transformações fisiológicas que
ocorrem nesta altura, as práticas e técnicas recomendadas para controlar distúrbios metabólicos nesta fase e projectar
a lactação no máximo potencial produtivo do animal. A partir da avaliação das variações da Capacidade de Ingestão
exploraremos as principais inter-relações entre os vários quadros fisiopatológicos mais frequentes. Focaremos
atenção em alterações do Metabolismo do Cálcio, Balanço Energético Negativo, Depressão Imunitária e Alterações
Mecânicas do Aparelho Digestivo.
[Nutrition and feeding management on transition period of dairy cows]
Transition period of dairy cows is usually understood as last three weeks of gestation and first three weeks postpartum. It is the most sensitive time of its production cicle, during which occurs the most frequent pathologies
observed on modern dairy farm. Success of all lactation and reproduction depends directly of a well managed
transition period. Great genetic change, large variety of dairy systems, feeding technology and management
conditions make different aproaches and practice techiques. We look to present some considerations about this
theme, describing the phisiologic changes that happen at this time and some feeding and management
recomendations to control metabolic pathology and achieve maximum production and reproduction level. Begining
on evaluation of Dry Mater Intake variations we try to show main inter-relationships between the most frequent
phisiopathologic occurrencies, focusing attention on Calcium Metabolism, Negative Energy Balance, Immune
depression and Mechanic Troubles of Digestive System.
124
Análise dos pontos críticos na exploração de leite
Cannas da Silva, J.1 e Vieira, Ana2
1 Clínica Privada. Prof. Dr. Med. Vet. Dip. ECBHM. AVC EUVG, Coimbra, Portugal.
2 Médica Veterinária - IDFQC
E-mail: [email protected]
A crescente preocupação e intervenção do consumidor europeu no sector alimentar implicam que, a curto prazo, o
conceito de rastreabilidade – from stable to table – se torne uma realidade, com a inclusão da produção primária
como primeiro elo da cadeia alimentar. Cada exploração leiteira é um caso único e um sistema vivo, sempre sujeito
à introdução de novos perigos. Assim, um sistema como o HACCP (Hazard Analysis Critical Control Points)
embora complexo na sua implementação na exploração, por ser um método sistemático, baseado em princípios
científicos e apresentar características pró-activas e dinâmicas, é o que melhor serve os objectivos da segurança
alimentar e dos produtores. A determinação dos Pontos Críticos de Controlo (PCC’s) para cada perigo identificado
dentro da exploração leiteira é parte integrante do desenvolvimento do Sistema HACCP. Para proceder à
determinação dos PCC’s, a equipa HACCP deverá ser conhecedora da realidade da exploração na qual o sistema se
desenvolve, ao mesmo tempo que deverá apresentar um profundo conhecimento e experiência, em Medicina da
Produção e Maneio, pois de contrário as tentativas de implementação estão condenadas ao insucesso. É necessário
ter flexibilidade, capacidade organizativa e conhecer todas as etapas do processo, do sector de produção de leite.
Todos os PCC’s deverão ser identificados no processo de produção, atendendo às regras e à árvore de decisões. É
fundamental a identificação correcta dos PCC’s ao logo do processo de produção, uma vez que demasiados PCC’s
tornam a implementação do sistema HACCP e o próprio processo de produção demasiado complexos. Perante este
objectivo fica demonstrada a importância da implementação conjunta dos Programas “ Pré-requesitos ”. A
implementação da metodologia de trabalho HACCP na exploração leiteira pode servir diferentes objectivos. Ao
mesmo tempo que se assegura que a contaminação do leite por perigos microbiológicos, físicos e químicos é
minimizada ou mesmo eliminada, contribui para aumentar a segurança do leite, servindo assim os objectivos da
segurança alimentar, indo ao encontro dos objectivos dos consumidores europeus e das próprias centrais leiteiras
que ficam com uma matéria-prima de melhor qualidade. Por outro lado, diminui a incidência de uma série de
patologias nas explorações, o que contribui para uma melhoria da saúde e bem-estar animal o que por sua vez vai ter
repercussões na economia da exploração. Os princípios de segurança alimentar que estão cada vez mais a ser
exigidos, apresentam inúmeras normas que acabam por ajudar os produtores a melhorar as suas explorações
devendo der encarados desta forma e não como um obstáculo. O que se exige aos produtores do século XXI é que
produzam mais e melhor, tomando uma posição de maior responsabilidade na cadeia alimentar. Ao Médico
Veterinário compete transformar-se na base deste processo.
[Critical control points analysis in dairy farms]
European consumers and is concern with food is food wider than its nutritional aspect. With the creation of the European
Program of Food Safety the concept of traceability – from stable to table – is already a reality with the inclusion of the
first level of primary production on the food chain. One dairy farm is a unique in one live system, always under the risk of
introduction of new hazard. Therefore a system like HACCP (Hazard Analysis Critical Control Points), although complex
in its implementation on the farm because of its proactive and dynamic and systematic characteristics, based on scientific
principles is the one which best serves the objectives of food safety and of the farmers. The determination of the Critical
Control Points (CCP’s) for itch identified risk inside the dairy farm and it is a relevant part of the development of the
System HACCP. To detected and identify the CCP’s, the HACCP team should know the reality of the farm where the
system in developing, and should also have in other hand deep and large experience in Production Medicine and
Management, otherwise all the attempts to implementation of the system remain unsuccessful. It is need to have
flexibility, organizing capacity and know all the steps of the production process of the dairy production sector. All the
CCP’s should be identified during the production process, taken in attention all the rules and the decision three. It is
fundamental the identify correction off the CCP’s already during the production process, because to much CCP’s will
make the implementation of the HACCP system and the production process very complex and difficult to handle with.
With this objective it is clarified the importance to implement together the “Prerequisite programs”. The implementation
of the HACCP working methodology at the dairy farm could serve several objectives. At the same time that it will ensure
that milk contamination for microbiologic, physic or chemical risks will be minimize or eliminated, it will contribute to
increase the milk safety, serving the objectives of food safety, and it will go directly to the concern and objectives of the
European consumer, as well the milk factories which become a better quality raw material. Other issue is the decrease of
incidence of a lot of pathologies on the farm, which contributes to a better heath and animal welfare status. In consequence
the incidence of several pathologies in the farms will be decrease, the welfare and heath will be increased which has good
consequences at the farm economics. The principles of food safety, that are more and more under pressure and claims,
have a lot of rules and normative, that in the end will contribute to help the farmers to improve the farm facilities and they
should be seen not as a obstacle but good measures to improve the dairy farm. What we need from the XXI century
farmers is that they produce more and better, assuming more responsibilities at the food chain. The Veterinarian should
take is place in this process and he should be able to be the basis of the all process.
125
A utilização de meios de diagnóstico “ao lado da vaca” (cow-side tests)
Stilwell, George, Lima, M.S.
A clínica de bovinos tem poucas possibilidades de utilizar os meios de diagnóstico complementares sofisticados,
dispendiosos e pouco portáteis que surgem com frequência noutras espécies. Isto não quer dizer que não existam
testes rápidos que, apesar das suas limitações, podem ser extremamente úteis para a confirmação de suspeitas
adquiridas durante o exame físico. Normalmente agrupam-se estes testes simples sob a designação de “cow-side
tests” (Testes ao lado da vaca). Na actividade ambulatória de clínica de bovinos da FMV são usados alguns desses
testes, servindo dois propósitos: o clínico e o pedagógico.
Nesta palestra propomos apresentar alguns dos mais frequentemente utilizados, usando casos clínicos concretos
como modelos exemplificativos.
Fitas de teste de urina (Combur ®) – muito usados em medicina humana são por vezes menosprezados em clínica de
bovinos. Apesar de poder fornecer pistas importantes, deve ser avaliada com cuidado devido ao facto de não ser um
teste muito específico. Informações como pH, glicosúria, cetonúria e proteinúria podem ser adjuvantes úteis ao
diagnóstico de certas afecções.
i-Stat – apesar de se poder considerar um meio auxiliar dispendioso (na compra do aparelho e não tanto nos kits),
achamos útil a sua referencia pois pode ser de extrema importância, como por exemplo, na escolha da melhor
fluidoterapia, na avaliação de certas perturbações metabólicas, na elaboração do prognóstico, etc…
Aspiração por agulha fina – um teste rápido, barato e pouco invasivo para confirmação de disfunções hepáticas e
renais. A necessidade de um microscópio óptico não deve ser considerada uma desvantagem já que hoje em dia este
estará disponível em qualquer laboratório ou clínica.
Testes rápidos de medição de IgG no colostro, sangue ou plasma – em menos de 20 minutos permite não só avaliar o
maneio do colostro numa dada exploração, como identificar precocemente os animais mais susceptíveis e por isso
instituir cedo medidas profiláticas. Pode ainda ser útil na selecção do melhor colostro a administrar a vitelas
valiosas.
Testes rápidos de identificação de agentes patogénicos – serão apresentados casos clínicos em que a utilização deste
tipo de teste permitiu tomada de decisões importantes em tempo adequado. É o caso de kits para a detecção de
agentes causadores de diarreia neo-natal ou ainda vírus sincicial bovino.
Medição do pH do rumen – a acidose ruminal sub-clínica é reconhecidamente uma das doenças que maiores
prejuízos pode causar, sem ser detectada, numa exploração de leite moderna. Identificar os animais afectados ou
monitorizar o estado de uma manada pode ser um passo essencial na gestão do efectivo.
[The use of cow-side tests]
The use of expensive, sophisticated and large devices for complementary diagnosis is very rare in field cattle
practice. This doesn’t mean that cattle practitioners should depend only on physical examination to reach a
diagnosis. Cow-side test, albeit their limitations, are a rapid, inexpensive and easy tool that can be very helpful in
confirming a suspicion aroused after clinical examination. In our ambulatory service for the FMV, we have been
using some of these tests with two purposes: clinical and teaching. We propose to present some of the clinical cases
in which these tests proved to be helpful.
Urine test strips – these are commonly used in human medicine but are frequently ignored by the cattle practitioner.
The interpretation of the results should be caution because it’s not a very specific test. We use it to get information
on pH, glucose, protein and ketone bodies. These are extremely useful for the diagnosis and prognosis of some
metabolic diseases.
i-Stat – although it can be considered an expensive side-test (the machine but not the kits), we consider it in this list
because it a very useful tool in many situations. We use it to conduct a more eficient fluidotherapy, in the evaluation
of metabolic diseases, etc…
Thin needle aspiration – it’s a cheap, quick and easy test to run that will give precious information on liver and
kidney lesions. The need for a microscope shouldn’t be view as a set-back because these are available, nowadays, in
almost any lab or clinic.
Quick tests for IgG in colostrum, blood or plasma – in less than 20 minutes we can identify calves that are more
susceptible to diseases and apply adequate prophylactic measures sooner. We will present data related to a study that
confirms the interest of these tests. Colostrum quality can also be evaluated with these test.
- Quick tests for identification of infeccious agents – for neo-natal diarrhoea and viral (BRSV) pneumonia. These
allow us to take management measures in time and show the farmer what causes it’s problems.
- Rumen pH measuring – sub-acute ruminal acidosis is the cause of important losses and a predisposing factor for
many serious diseases. Identifying the sick animal or knowing the ruminal pH status of the herd is essential for
taking sound management decisions in the modern dairy farm.
126
A clinica de campo em bovinos de carne em extensivo
Mira, José
Patologias mais comuns da raça brava de lide
Fragoso, Luis
Luso – Pecus, Ldª, Clinica Veterinária, Rua da Fábrica Loja 2, Porto Alto - Samora Correia
Agrupamento de Defesa Sanitária do Baixo Tejo, Estr. Nac.10 (ao Camarão), Vila Franca de Xira
Nascido em terras banhadas pelas águas do Oceano Índico e pelo rio dos Bons-Sinais, foi lá que aprendi, entre os
relatos e participações na captura de animais selvagens, as manadas de gado vacum da família agricultora e os
contos de meu pai, ribatejano e aprendiz de matador de touros e contador das façanhas do meu aficcionado bisavô, a
admirar a raça brava de lide, adornando-a até de um certo misticismo que prevalece até hoje.
Desde esse tempo de meninice, bem longe do solar desta raça, que o comportamento e a aptidão destes bovinos me
suscitaram interesse e vontade de os conhecer. Quis o passar dos anos que a oportunidade de trabalhar com esta raça
se cruzasse comigo.
Ao longo desse tempo, fui aprendendo a adaptar a estes animais, os conhecimentos veterinários adquiridos nos
estudos para a licenciatura e na formação profissional contínua, e a perceber que aceitando as suas especificidades e
o seu maneio, é gratificante ser-se veterinário nas “ganadarias “ e fazer aplicar as melhores técnicas veterinárias a
estes bovinos.
É do desenrolar deste trabalho profissional ao longo de dezasseis anos e do contacto permanente com os criadores,
campinos e animais desta raça que descrevo aspectos mais importantes da clínica, sanidade e cirurgia desta raça
brava de lide, apresentando os principais casos clínicos e cirúrgicos entretanto ocorridos, bem como as patologias
mais comuns encontradas nestes animais.
[The most common pathologies in Portuguese Fighting Bull Breed]
I was born in the land bathed by the waters of the Indic Ocean and those of the Bons-Sinais River. There, I learned
to admire the Portuguese Fighting Bull breed, which I have wrapped in a certain mysticism, which prevails till
today. My learning was made possible by some reports and participations in the capture of wild animals, by contact
with the cattle herds of my farming family and by listening to my father’s stories about the deeds of my great
grandfather, who was an “aficcionado”.
Since my childhood, and in spite of being far from the birthplace of this bovine breed, I have been interested in the
behaviour and skills of these bovines, and willing to know them. Later on, it seems that fate wanted me to have the
opportunity to work with this breed.
As the years went by, I have learned to adapt to these animals the veterinarian knowledge acquired during the
university years, which made me a vet, and also due to the continuous professional upgrading. I have also learned to
understand and accept their special features and it is gratifying to be a vet in the “ganadarias” and have the best
veterinarian techniques applied to these bovines.
What I bring you here today is the presentation of the most important clinic, sanitary and chirurgical cases, which
are the result of sixteen years of professional work in permanent contact with the owners, “campinos” and these
particular bovines, which are the main subject of this work, together with the list of the most common diseases
affecting this breed in Ribatejo.
127
Animais de Companhia
The current status of veterinary behavioral medicine
Beaver, Bonnie
Texas A & M University, College Station, Texas
For over a century, animal behavior has changed from recognizing that animals actually have behavior to being able
to work on specific behaviors. Pioneers from Gilbert White in 1789, to Charles Darwin began the study of behavior.
George Romanes, in his boon Animal Intelligence, permitted the idea that animal behavior was worthy of study.
E.L. Thorndike promoted the systematic and quantitative approach to the field. After the recognition of Lorenz,
Tinbergen, and von Frisch with the Nobel Prize in 1973, the field of animal behavior really took off.
Over the last 25 years, veterinarians have recognized that behavioral medicine is an integral part of our profession
and that if we are not vigilent about this obligation to our patients, we will not only cause the death of behaviorally
undesired animals, but we will surrender parts of our profession to those lay individuals who are less qualified.
Exciting things are happening as research uncovers some of the causes of these problem behaviors and results in
new drugs that can be used to treat them.
128
Engenharia de tecidos e regeneração do periodonto – novos desafios para a Medicina Veterinária
Viegas, Carlos A.A.
Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro, Ap. 1013, 5000-911 Vila Real
Um novo paradigma para a regeneração periodontal baseado na biologia celular e molecular
Graças aos estudos efectuados para compreender melhor as patologias à escala celular e molecular, e às
investigações clínicas, foi possível melhorar os tratamentos actuais para deter o avanço da periodontite e avançar
nos conhecimentos sobre a regeneração dos tecidos afectados.
Actualmente aceita-se que o caminho a seguir na investigação da regeneração passa forçosamente pela aplicação de
conceitos das áreas da biologia (celular, molecular), da embriologia e da engenharia de tecidos. Assim com o
transplante de biomateriais que contêm células seleccionadas de primeira qualidade junto com uma mistura
apropriada de factores reguladores (estimulam o crescimento e especialização das células e da matriz), podemos
vislumbrar uma nova possibilidade terapêutica.
A bioengenharia de tecidos é um campo emergente da investigação biomédica aplicada que tem como objectivo o
desenvolvimento de técnicas para o fabrico de novos tecidos que possam substituir os tecidos lesados, tendo em
conta os princípios da biologia celular, da embriologia e da ciência dos biomateriais.
Para produzir um tecido por bioengenharia necessitamos de: um número suficiente de células precursoras
estimuláveis, níveis adequados e sequenciados de sinais reguladores e de um adequado veículo tridimensional.
Avanços recentes na biologia dos factores de crescimento e dos polímeros biodegradáveis permitiram o êxito da
bioengenharia da cartilagem, do osso e dos tecidos relacionados, considerando-se estruturas mais complexas como o
periodonto desafios com desenvolvimento futuro.
O veículo que deve agir consistentemente com os princípios da regeneração tecidular guiada deverá ter propriedades
que permitam manter uma cultura celular in vivo (culturas celulares primárias ou de células geneticamente
modificadas), a adsorção dos reguladores e a sua libertação controlada e a neovascularização.
Deve também estar isento de vectores de doenças transmissíveis, ser imunologicamente inerte e não deve induzir
respostas inflamatórias exuberantes. Deve ainda ser biocompatível com o tecido a regenerar ou biodegradável, sendo
gradualmente substituído por tecido regenerado.
Nesta palestra e após as considerações teóricas teremos ainda a oportunidade de referir algumas técnicas de
regeneração periodontal de fácil execução com aplicabilidade à clínica de animais de companhia.
[Tissue engineering and periodontal regeneration – new challenges to the Veterinary Medicine]
A new paradigm for periodontal regeneration based on molecular and cell biology
As the causative and pathogenetic processes of the inflammatory periodontal diseases are better understood, new
vistas in management of these problems will evolve and now we have possibility to reverse some anatomic changes
due to the disease process.
We contend that the way forward in the field of periodontal regeneration is through the application of current
knowledge in the fields of molecular and cell biology, developmental biology and tissue engineering principles as
applied to tissue regeneration. Through a combination of transplanted biomaterials containing an appropriate mix of
regulatory factors to allow growth and specialization of the cells and matrix, we envision a new vista for periodontal
regeneration becoming possible.
Tissue engineering is the emerging field of science aimed at developing techniques for the fabrication of new tissues
to replace damaged ones and is based on principles of cell biology, developmental biology and biomaterials science.
The main requirements for producing an engineered tissue are the appropriate levels and sequencing of regulatory
signals, the presence and numbers of responsive progenitor cells and an appropriate extracellular matrix or carrier
construct. Recent advances in growth factors biology and biodegradable polymer constructs have set the stage for
successful tissue engineering of cartilage, bone and related tissues of which the periodontium could be considered a
prime candidate for such procedures.
The engineered material used as a scaffold must act consistently with the principles of guided tissue regeneration
and must have engineering issues related to maintaining an in vivo cell culture, and biological properties
compatibles with cell recruitment, permission of neovascularization and delivery of the requisite morphogenetic,
regulatory and growth factors for tissue regeneration.
The engineered tissues should be either biocompatible with the tissues to be regenerated or biodegradable, allowing
for gradual replacement with regenerated tissue.
Clearly these materials should not promote immunologically or overexuberant inflammatory responses and should
be free from transmittable disease.
During this conference and after the theoretical considerations we will refer some easy periodontal regenerative
procedures for application in small animal patients.
129
Catarata iatrogénica por administração de glucocorticóides num canídeo
Delgado, E., Lourenço, A.M., Peleteiro, C., Sales-Luís, J. e Duarte Correia, J.H.
Departamento de Clínica, CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária, Avenida da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa, Portugal
Objectivo: Descrever a apresentação clínica, diagnóstico e tratamento dum caso de catarata iatrogénica devido à
administração de glucocorticóides num canídeo.
Quadro Clínico: Um canídeo de raça pinscher de 9 anos apresentou-se à consulta de oftalmologia no Hospital Escolar da
FMV. Apresentava blefarite bilateral e simétrica nos cantos nasais. Exibia esclerose senil do cristalino, normal para a
idade. Não apresentava sinais de uveíte nem outras alterações. Foi referido para a consulta de dermatologia devido a lesões
cutâneas associadas. Aí, observou-se a existência de eritema cutâneo generalizado, lesões crostosas na zona peribucal,
periocular e região caudal das coxas e úlceras na mucosa do prepúcio que causavam disúria. Realizou-se uma biópsia
cutânea que confirmou a suspeita de penfigo foliáceo. Prescreveu-se prednisolona oral na dose de 2 mg/Kg/dia. Um mês
após a apresentação inicial, verificou-se um agravamento das lesões, pelo que a medicação foi alterada para prednisolona 1
mg/Kg/dia, azatioprina 1,5 mg/Kg/dia e misoprostol. A dificuldade em alcançar a remissão, principalmente das lesões
prepuciais, obrigou à manutenção desta terapêutica durante 4 meses, associada a pomada com Tacrolimus nas lesões
prepuciais. Cinco meses depois, o animal apresentava remissão total das lesões cutâneas, pelo que se procedeu ao
desmame da prednisolona durante um período de três semanas. Reduziu-se a dose de azatioprina para 1 mg/Kg/dia e
depois em dias alternados. Nesta fase o exame oftalmológico bilateral era normal, tendo as lesões palpebrais cicatrizado. O
animal exibia alterações nos parâmetros bioquímicos hepáticos compatíveis com hiperadrenocorticismo iatrogénico. Um
mês após a interrupção da corticoterapia o animal apresentou-se à consulta por cegueira de progressão rápida ao longo das
duas semanas anteriores. Apresentava reflexo de ameaça negativo bilateral, apesar dos reflexos pupilares directo e
consensual serem normais. Exibia cataratas bilaterais hipermaturas totais, com aumento da densidade das linhas de sutura
do cristalino, que impossibilitavam a visualização do fundo ocular. Não apresentava sinais de uveíte. Nesta fase a
medicação imunossupressora consistia em azatioprina 1 mg/Kg de três em três dias.
Discussão: Tanto quanto sabemos, este é o primeiro caso documentado de catarata iatrogénica devido à administração de
glucocorticóides em canídeo. Encontra-se comprovado a ocorrência de cataratas súbitas devido à administração de
glucocorticóides no Homem, mas aparentemente é uma situação rara (Smeeth et al., 2003). O facto do animal possuir uma
doença imunomediada poderia justificar a presença de uveíte e cataratas secundárias, mas seria um processo lento. O cão
nunca apresentou sinais de uveíte nos frequentes exames oftalmológicos e estas cataratas progrediram muito rapidamente.
A hipótese de serem cataratas diabéticas foi rejeitada porque a glicémia se manteve normal durante todo o tratamento e as
cataratas eram muito duras.
[Iatrogenic cataracts due to glucocorticoid administration in a dog]
Purpose: To report the clinical presentation, diagnosis and treatment in a case of iatrogenic cataracts due to glucocorticoid
administration in a dog.
Clinical Presentation: A 9 year old pinscher dog was presented to the Teaching Hospital of the Faculty of Veterinary
Medicine, because of bilateral blepharitis. Ophthalmologic examination revealed bilateral and symmetrical cantal nasal
blepharitis. He presented bilateral nuclear sclerosis, part of a normal ageing process, and no signs of uveitis. Physical
examination detected lesions at the mucocutaneous junctions, on the lips and prepuce. The dog was referred to
Dermatology for suspicion of immune-mediated disease. He showed cutaneous erythema, alopecia and dysuria due to the
prepucial lesions. CBC profile, biochemistry and urinalysis were normal. Skin biopsy confirmed the diagnosis of
pemphigus foliaceus. Oral prednisolone at 2 mg/Kg/sid was then prescribed. Having shown no signs of improvement a
month later, the medication was changed to oral prednisolone 1 mg/Kg/sid, azatioprine 1,5 mg/Kg/sid and misoprostol.
Clinical remission was difficult to obtain, thus medication was maintained for a 4 months period. A Tacrolimus ointment
was prescribed for topical application on the prepucial lesions.
Five months after the initial presentation all the cutaneous lesions had healed and prednisolone dosage was tapered over a
three weeks period. Azathioprine was reduced to 1 mg/Kg/sid and later to every other day. At this stage the
ophthalmological exam was within normal limits, palpebral lesions having completely healed. However, the animal
showed physical and hematological signs of iatrogenic hyperadrenocorticism.
One month after having stopped glucocorticoids the dog presented blindness. According to the owner, the condition had
progressed very rapidly, over a two weeks period. At that time the medication consisted only of azatioprine 1 mg/Kg/sid
every 3 days. He showed no menace reflex bilaterally, although pupillary light reflexes were normal. He had bilateral
hipermature total cataracts, with increased density of the lens suture lines. The ocular fundus was impossible to visualize,
but there were no signs of uveitis.
Discussion: To our knowledge this is the first documented case of iatrogenic cataract due to glucocorticoid administration
in a dog. There has been a report of sudden cataracts due to glucocorticoid administration in human medicine but
apparently it is very rare (Smeeth et al., 2003). The immune disease could have caused uveitis and later cataracts could
appear as a complication, but this would be a slow progression disease process. This dog never showed any signs of
uveitis and these cataracts progressed very rapidly. Regarding the hypothesis of being diabetic cataracts, it was rejected
because glycemia remained normal throughout the treatment and these cataracts were very hard.
130
Dois casos de atrofia espinhal em canídeos de raça cocker spaniel pertencentes á mesma familia
nuclear
Carreira, L.M., Ferreira, A., Vicente, G., Gamboa, O., Sousa, J.
CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária de Lisboa - FMV
A atrofia espinhal é uma doença muscular hereditária, autossómica dominante degenerativa do neurónio motor que
se traduz por uma fraqueza e atrofia muscular progressiva, medianamente rápida e que se desenvolve no sentido
proximal-distal. Trata-se de uma doença similar em fisiopatologia e apresentação clínica a variadas formas da
doença do neurónio motor humana, em que o calibre do axónio distal está reduzido nos neurónios motores,
conduzindo a uma degeneração e morte selectiva destes últimos.
Apresentou-se à consulta no hospital da FMV de Lisboa um canídeo, sexo feminino, 3 anos de idade, raça cocker
spaniel, com 14,20 Kg/P.V.; e uma anammese de perda de força nos membros pélvicos e torácicos, parésia
progressiva, prostração e atrofia muscular generalizada. A doente apresentava uma evolução clínica com um período
de cerca de 1,5 mês e ao longo deste tempo havia experimentado uma terapêutica instituída pelo seu clínico
assistente, á base de prednisolona conseguindo melhorias discretas apenas na primeira semana.
Ao exame clínico a doente apresentava atrofia muscular generalizada, paralisia, mas mantinha-se em alerta. Sinais
vitais normais. Efectuaram-se exames complementares compreendendo radiografias á coluna cervical e torácica
(sem qualquer alteração), hemograma e bioquímica sérica, que revelaram uma anemia ligeira e regenerativa, e um
aumento da enzima CK. Suspeitando-se de um problema degenerativo, foi aconselhada a realização de biópsia
neuromuscular a qual permitiu estabelecer o diagnostico histopatológico, de um caso de Atrofia Espinhal. O facto de
não existir nenhuma resposta terapêutica para esta entidade clinica levou á realização da eutanásia da doente. Ao
final de 8 meses surgiu á consulta no hospital pela mão dos mesmos proprietários da doente referida anteriormente
um canídeo do sexo masculino, com 21 meses de idade, raça cocker spaniel, com 17,35 Kg/P.V.; e uma ananmese
de perda progressiva de força nos membros pélvicos e torácicos, prostração e atrofia muscular principalmente nos
membros pélvicos. O quadro clínico tinha uma evolução de cerca de 20 dias. Este indivíduo tinha como grau de
parentesco á doente avaliada –filho. Foi então sugerida a realização de exames básicos de sangue com hemograma e
bioquímicas séricas que revelaram para a presença de hipoglobulinémia, aumento da CK e da ALP. Optou-se por
realizar biópsia neuromuscular e enviar para exame histopatológico. O resultado permitiu estabelecer um
diagnóstico de Atrofia Espinhal. À semelhança do ocorrido com a mãe, foi também realizada a eutanásia.
O recurso a meios complementares como hemograma, bioquímicas séricas ou até mesmo a electromiografia parece
fornecer dados interessantes, contudo é a histopatologia que permite estabelecer um diagnostico definitivo da
doença. Pensa-se que a unidade motora falha devido a uma deficiência existente na transmissão ocorrida ao nível da
sinapse neuromuscular, a qual precede a degenerescência do nervo e do músculo características desta doença.
[Two cases of spinal atrophy in cocker spaniel breed belong to same family]
Spinal atrophy is a hereditary autossomal dominant degenerative disorder of motor neurons, features rapidly progressive
weakness and atrophy that affects muscles in an apparent proximal-to-distal gradient. This disease is similar in pathology
and clinical presentation to various forms of human motor neuron disease, presenting reduction in distal axonal calibre of
lower motor neurons, primarily experimented in large axons. It was presented at the hospital of the FMV of Lisbon a dog,
female, 3 years of age, breed cocker spaniel, with 14,20 Kg/P.V.; with an anamnesis of loss of force in thoracic and pelvic
members, gradual paresis, prostration and generalized muscular atrophy. Patient presented this clinical evolution for a
period 45 days, and across this one she was submitted to a therapeutical instituted by its clinical assistant using
prednisolone; responding with a discrete improvements only in the first week. At clinical examination patient presented
generalized muscular atrophy, paralysis, but still she remained in alert. Vital signals were normal. She was submitted to
complementary exams using cervical and thoracic spine radiographs (without any alteration), hemogram and serum
biochemistries, that revealed a discrete and regenerative anaemia, and an increase of enzyme CK. Suspecting from a
degenerative problem, it recommended the realization of a neuromuscular biopsy, which permit to establish the
hystopthological diagnostic of a case of Spinal Atrophy. The non therapeutical response for this clinical entity conduced to
the euthanasia of patient. Eight months after this consultation, it was presented to hospital by the hand of the same
proprietors of the previous patient a dog, male, with 21 months of age, breed cocker spaniel, with 17,35 Kg/P.V.; with an
anamnesis of gradual loss of force in thoracic and pelvic members, prostration and muscular atrophy mainly at pelvic
members. The clinical condition had an evolution of about 20 days. This individual was soon from the previous patient. As
his mother, he was submitted to a neurological and complementary exams of blood with hemogram and seric
biochemistries, presenting hypoglobulinemia, hypochloremia, and abnormally high creatine kinase and liver alkaline
phosphatase activities. It was carrie out neuromuscular biopsy and sent for hystophatological examination. The result
allowed establishing a diagnosis of Spinal Atrophy. As it happened with his mother, also the euthanasia was performed.
The use of complementary exams as hemogram, seric biochemistries or even though the electromyography seems to give
interesting results, however it is the hystophatology that allows to establish one definitive diagnosis of the illness. Motor
unit failure is due to failure of neuromuscular synaptic transmission that precedes nerve or muscle degeneration,
characterizing this hereditary disease.
131
Dois casos de hermafroditismo bilateral em Basset Hound
Mateus, L.1, Carreira, M.1, Silva, J.F.1, Silva, R.1, Adega, F.2, Guedes-Pinto, H.2 e Chaves, R.2
2 Centro de Genética e Biotecnologia da UTAD CGB-UTAD, Quinta de Prados, 5000- 911 Vila Real
O hermafroditismo caracteriza-se pela presença de estruturas testiculares e ováricas no mesmo indivíduo. No cão,
tem sido referido em várias raças, entre as quais o Basset Hound (1).
O presente estudo refere-se a dois indivíduos de sexo fenotípico feminino, apresentando hipertrofia do clitóris. Um
deles, (animal A) com dois anos, foi ovario-histerctomizado dois meses após o cio. O outro (animal B) tinha sete
meses, nunca tendo sido visto em cio e foi também submetido a ovario-histerectomia.
Em ambos os casos, observou-se um útero bem diferenciado, situando-se as gónadas perto das extremidades craniais
dos cornos uterinos. O animal A apresentava corpos lúteos em regressão numa gónada.
Nos dois animais, o exame microscópico das gónadas revelou a presença de estruturas testiculares e ováricas,
correspondendo estas gónadas a ovotestis.
No animal A, as estruturas ováricas incluiam corpos lúteos em regressão e folículos ováricos em vários estadios de
desenvolvimento. Alguns folículos apresentavam uma granulosa hipoplásica e um outro encerrava dois oócitos. A
maior parte das gónadas era ocupada por tubos seminíferos hipoplásicos constituídos apenas por células de Sertoli.
Entre eles, notavam-se células de Leydig. Numa das gónadas, notava-se um epidídimo rudimentar. A estrutura do
útero era normal, com endométrio em involução.
No animal B, as estruturas ováricas eram muito rudimentares; contudo, numa das gónadas, notava-se uma glândula
intersticial evidente. As estruturas testiculares eram semelhantes às do animal A. Anexo a cada gónada, notava-se
um epidídimo rudimentar. O útero apresentava o endométrio com escassas glândulas (impúbere), notando-se na
lâmina própria extensas hemorragias, que por vezes se exteriorizavam no lúmen uterino.
A análise citogenética preliminar por bandeamento clássico G revelou, em ambos os animais, cariótipos padrão XX.
Actualmente, estão a ser realizadas experiências de Hibridação in situ Fluorescente com sondas específicas para os
cromossomas X e Y, de modo a se detectarem pequenos rearranjos cromossómicos que envolvam os cromossomas
sexuais.
(1) Hubler, H. et al. (1999). Theriogenology, 51: 1391-1403.
[Two cases of bilateral hermaphroditism in the Basset Hound breed]
Hermaphroditism is defined by the simultaneous occurrence of testicular and ovarian structures in the same
individual. In the dog, it was reported in several breeds, namely the Basset Hound (1).
The present study reports two dogs with feminine fenotypical sex, with clitoridian hypertrophy. One of them (animal
A), two years-old, was ovariohysterectomized two months after the oestrus. The other one (animal B) was seven
months-old and was never seen in heat; it was submitted to ovariohysterectomy, too.
In both cases, a well differentiated uterus was observed and each gonad was placed close to the cranial extremity of
the corresponding uterine horn. In animal A, involuting corpora lutea were seen in one gonad.
In both animals, the histologic examination of each gonad revealed the presence of testicular and ovarian structures,
so those gonads are ovotestes.
In animal A, ovarian structures included involuting corpora lutea and ovarian follicles in different developmental
stages. Some of them showed an hypoplastic granulosa and another one harboured two oocytes. The major
component of the gonads were hypoplastic seminiferous tubules, composed by Sertoli cells only. Leydig cells were
observed among the seminiferous tubules. One of the gonads was connected to a rudimentary epidydimis. The
uterine microscopic anatomy was normal, showing an involuting endometrium.
In animal B, ovarian structures were very rudimentary; however, an evident interstitial gland was observed in one of
the gonads. Testicular structures were similar to those of animal A. Close to each gonad a rudimentary epidydimis
was noted. In the uterus, the endometrium presented scarse glands (impuberal state) and its lamina propria showed
extensive hemorrhages, which sometimes reached the uterine lumen.
A preliminary cytogenetic analysis through classical G-banding, in both animals, revealed standard karyotypes XX.
At the present time, Fluorescent In Situ Hybridization experiments with specific probes for the X and Y
chromosomes are being conducted, in order to detect small chromosomal rearrangements that involve the sex
chromosomes.
(1) Hubler, H. et al. (1999). Theriogenology, 51: 1391-1403.
132
Feridas decorrentes de mordedura em canídeos: Relação entre infecção clínica, análise
bacteriológica e tempo de evolução
Mouro, S., Cavaco, L.M., Vilela, C.L., Niza, M.M.R.E.
CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária,. Av. Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa, Portugal
O objectivo deste estudo foi relacionar a presença de infecção clínica, em feridas decorrentes de mordedura em
canídeos, com a flora bacteriológica e o tempo de evolução. O estudo decorreu entre Outubro/04 e Junho/05 e
incluiu 38 casos de feridas não tratadas. O crítério utilizado para distinguir entre feridas infectadas e não infectadas
foi a presença de pús. As feridas foram distribuídas por 3 grupos, de acordo com o período de tempo decorido entre
a agressão e a apresentação à consulta (tempo de evolução, TE): menor que 8 horas (G1), entre 8 e 24 horas (G2), e
maior que 24 horas (G3). As amostras, recolhidas antes de qualquer tipo de manipulação, com zaragatoa estéril ou
por punção aspirativa, foram submetidas a análise bacteriológica para identificação de microrganismos aeróbios e
anaeróbios.
Do total das 38 feridas, 22 (57.9%) apresentavam-se clinicamente infectadas, 2 das quais com abcessos, e 16
(42.1%) não infectadas. Todas as amostras apresentaram crescimento de bactérias aeróbias, tendo sido obtido um
total de 100 isolados, maioritariamente Pasteurella multocida (22%) e Staphylococcus intermedius (11%).
Nas feridas infectadas, os isolados mais representados foram Pasteurella multocida (28.2%), bacilos Gram
negativos oxidase positivos (BGNOP), Staphylococci e Streptococci (17.9% cada). Foram ainda isoladas bactérias
anaeróbias estrictas (N=7) em 27.3% destas feridas. A partir de feridas não infectadas foram maioritariamente
isoladas Pasteurella multocida (31.4%), Staphylococci (20%) e BGNOP (17.1%), não tendo sido possível isolar
microrganismos anaeróbios estrictos. Na análise dos grupos estabelecidos em função do TE, verificou-se que o
número de feridas infectadas foi 0/6 (0%), 6/13 (46.2%) e 16/19 (84.2%) em G1, G2 e G3, respectivamente.
Observou-se uma associação significativa entre o TE e a presença de infecção clínica, definida pela existência de
pús (p=0.005).
Não foi possível, neste estudo, relacionar o desenvolvimento de infecção com o tipo de microrganismos presentes
nas feridas purulentas, com excepção de bactérias anaeróbias estrictas. No entanto, e uma vez que apenas foram
considerados para identificação os microrganismos que apresentavam 5 ou mais colónias idênticas, estas bactérias
poderiam estar presentes na amostra inicial. O seu isolamento a partir de feridas purulentas pode assim ser devido ao
desenvolvimento de condições de anaerobiose propiciadas pela multiplicação concomitante de bactérias aeróbias
estrictas e/ou facultativas. Os resultados do presente estudo revelaram a associação significativa (p=0.005) entre o
desenvolvimento de infecção em feridas decorrentes de mordedura entre canídeos e o período de tempo até à
apresentação e consequente intervenção médica.
[Dog bite wounds: correlation between the clinical infection, bacteriological analysis and time of
evolution]
This study aimed at relating the presence of clinical infection of dog to dog bite wounds with bacterial flora present and
the evolution time. The study was carried out between October/04 and June/05 and comprised 38 untreated dog bite
wounds. The criterion used to distinguish between infected and non-infected wounds was the presence of pus. The wounds
were distributed in 3 groups, according to the time between aggression and presentation (evolution time, ET): less then 8
hours (G1), between 8 and 24 hours (G2), and more than 24 hours (G3). Samples, collected before any manipulation of the
wound, with cotton swabs or by needle aspiration, were submitted to bacteriological analysis for identification of aerobic
and anaerobic microorganisms.
Of all 38 wounds, 22 (57.9%) were clinically infected, two of which with abscesses, and 16 (42.1%) were non-infected.
All aerobic cultures were positive. A total of 100 isolates was obtained, the most frequent being Pasteurella multocida
(22%) and Staphylococcus intermedius (11%). The most common bacteria isolated from clinically infected wounds were
Pasteurella multocida (28.2%), Gram negative oxidase-positive bacilli (GNOPB), Staphylococcus spp. and Streptococcus
spp. (17.9% each). Anaerobic cultures were positive (N=7) in 27.3% of clinically infected wounds. The most common
organisms found in non-infected wounds were Pasteurella multocida (31.4%), Staphylococci (20%) and GNOPB (17.1%).
Strict anaerobic bacteria could not be isolated from clinically non-infected wounds. The analysis of the established groups,
according to ET, showed that the number of infected wounds was 0/6 (0%), 6/13 (46.2%) and 16/19 (84.2%) in G1, G2
and G3, respectively. There was a significant correlation between TE and the presence of clinical infection, assessed by
the presence of pus (p=0.005).
It was not possible, in the present study, to show any association between the presence of clinical infection and the
genus/species of bacteria present in wounds with purulent discharge, except for strict anaerobes. However, as
microorganisms were only considered for identification when showing 5 or more similar colonies, strict anaerobes might
have been present in the initial sample. Therefore, their identification from wound with purulent discharge may derive
from the development of anaerobic conditions elicited by concomitant growth of aerobes and facultative anaerobes.
The results of this study show a significant correlation (p=0.005) between the presence of infection in dog bite wounds and
the time until presentation and treatment.
133
Sensibilização aos ácaros domésticos e de armazenamento em 112 cães atópicos de Lisboa
Lourenço, A.M.*, Peleteiro, M.C. e Duarte Correia, J.H.
CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Técnica de Lisboa, Lisboa, Portugal
* Bolseira de Doutoramento da Fundação para a Ciência e Tecnologia
A dermatite atópica (DA) é uma doença inflamatória crónica da pele, associada a uma hipersensibilidade do tipo I
face a alergénios de origem ambiental. A prevalência desta doença no cão é elevada, cerca de 10 a 20% da
população canina, sobretudo em raças predispostas. Actualmente parece existir aumento da prevalência dos
fenómenos alérgicos no cão, à semelhança do que se passa com os humanos. O paralelismo não é surpreendente; a
partilha do estilo de vida dos donos trouxe-os para dentro de casa, sujeitando-os à chamada ”poluição interna”. O
objectivo do trabalho consistiu entre outros, em conhecer as sensibilizações dos nossos cães atópicos para os ácaros
domésticos Dermatophagoides pteronyssinus e Dermatophagoides farinae assim como para os chamados de
armazenamento Acarus siro e Tyrophagus putrescentiae, todos eles existentes no interior das nossas habitações.
Foi realizada a selecção de cães suspeitos de dermatite atópica, através de dados anamnésicos e clínicos, de acordo
com os critérios revistos de Willemse e de Prélaud, e após exclusão de outros diagnósticos diferenciais. Nestes
pacientes procedeu-se à realização das provas intradérmicas de acordo com técnica padrão, sob sedação com
medetomidina na dose de 20µg/kg e respeitando os tempos de privação farmacológica. Foram utilizadas
concentrações de 0.002W/V para o grupo dos Dermatophagoides e de 1000 PNU para o Acarus siro e Tyrophagus
putrescentiae, de acordo com as recomendações dos fabricantes e outros autores.
Até ao momento foram sujeitos a provas cutâneas (intradérmicas) 112 cães com suspeita de atopia. A maioria dos
animais apresentaram múltiplas sensibilizações face aos 41 alergénios testados, embora o grupo dos ácaros, e em
particular o Dermatophagoides farinae (67/112), sejam os alergénios mais frequentemente implicados. Quanto aos
restantes ácaros testados obtiveram-se os seguintes resultados: Dermatophagoides farinae (34/112), Acarus siro
(49/112) e Tyrophagus putrescentiae (47/112). Todos os animais com sensibilização a ácaros vivem dentro de casa
com excepção de um animal que provavelmente se sensibilizou a através da ração, guardada no interior da
habitação. Estes alergénios são de carácter perene e estão presentes mesmo nas casas mais limpas, embora a limpeza
sirva obviamente para reduzir as suas populações. Um estudo recente (Swinnen e Vroom, 2004) avaliou a resposta
de um grupo de cães alérgicos a ácaros da casa à utilização regular de um acaricida (Benzoato de benzilo), tendo
obtido óptimos resultados. Depois do tratamento, 29 dos 60 animais (48%) não apresentavam lesões ou prurido.
[Sensitization to house dust and storage mites in 112 atopic dogs of Lisbon]
Atopic dermatitis (AD) is a chronic inflammatory skin disease, associated to Type I Hypersensitivity to
environmental allergens. The prevalence of AD in the dog is high, around 10 to 20% of canine population,
especially in predisposed breeds. Nowadays, the prevalence of allergy in dogs seems to be increasing, in the same
trend of human allergic disease. This is not surprising, as the sharing of owners’ lifestyle brought dogs indoors,
exposing them to the so-called “indoor pollution”. The purpose of this study was the assessment of sensitization of
atopic dogs of the Lisbon área to house dust mites, Dermatophagoides pteronyssinus and Dermatophagoides
farinae, and storage mites, Acarus siro and Tyrophagus putrescentiae, all existing inside our homes.
The selection of dogs with atopic dermatitis was done by clinical history and physical examination criteria,
according to Willemse and Prélaud, after exclusion of other differentials. Intradermal skin tests (IST) were
performed by the standard technique, under sedation with medetomidine at 20µg/kg, respecting drug withdrawal
periods. Allergen concentrations of 0.002W/V were used for the Dermatophagoides group and of 1000 PNU for
Acarus siro and Tyrophagus putrescentiae, according to manufacturer’s recommendations and those of the
literature.
Up to now, 112 dogs with AD were tested. The majority of patients showed multiple reactions towards 41 allergens
used for IST, although the mites group, especially Dermatophagoides farinae (67/112), are the allergens most
frequently involved in sensitization. As for the other mites tested, reactions were the following: Dermatophagoides
farinae (34/112), Acarus siro (49/112) e Tyrophagus putrescentiae (47/112). All animals reacting to mites by IST
live indoors, except for one of the dogs. The latter was sensitized probably through the food, stored inside the house.
These mites live permanently in the cleanest of houses, although cleaning obviously reduces their populations. In a
recent study, Swinnen and Vroom (2004) evaluated the response of a group of dogs allergic to house mites to the
regular application of a miticidal drug (Benzyl Benzoate), with excellent results. After environmental treatment, 29
of the 60 animals (48%) did not show lesions or pruritus.
134
Antibioresistência em Pseudomonas aeruginosa isoladas de animais de companhia com otite externa
Cruz, F., Costa, M., Baptista, B., Pomba, C., Duarte-Correia, J.H.
CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária., Avenida da Universidade Técnica, Pólo Universitário da Ajuda, 1300-477 Lisboa
A otite externa (OE) é uma patologia muito comum nos animais de companhia, tendo diferentes causas etiológicas.
Este trabalho descreve as resistências das estirpes de Pseudomonas aeruginosa isoladas de OE em canídeos e
felinos, incluindo Beta-lactâmicos com espectro específico para as Pseudomonas, que não foram incluídos em
estudos anteriores.
Foram avaliadas 89 P. aeruginosa das 431 estirpes isoladas entre 1999 e Junho de 2005 de animais de companhia
com OE. Esta foi confirmada pela observação de citologias coradas pelo método de Gram. As estirpes P. aeruginosa
correspondiam a 21% do total dos agentes etiológicos determinados, sendo 2 de felideo (2%) e 87 de canídeo (98%).
O antibiograma foi realizado pelo método de difusão em disco de acordo com as normas NCCLS M31-A2. Foram
testados os seguintes antibióticos: Cefotaxima(CTX), Ceftazidima (CAZ), Piperacilina (PRL), Aztreoname (ATM),
Imipeneme (IMP), Ticarcilina (TIC), Enrofloxacina (ENR); Norfloxacina (NOR), Marbofloxacina (MAR);
Orbifloxacina (OBX); Ciprofloxacina (CIP); Levofloxacina (LEV); Ofloxacina (OFX); Tetraciclina (TE),
Gentamicina (CN); Netilmicina (NET); Tobramicina (TOB) e Amikacina (AK).
Detectaram-se resistências preocupantes nos diferentes grupos de antibacterianos. Das estirpes testadas, 44%
mostraram-se resistentes à CTX e 31% à TIC. No que se refere aos Beta-lactâmicos com acção
antipseudomonaceae, apenas 5% das estirpes foram resistentes à CAZ, 3% à PRL, 8% ao ATM e 12% ao IMP. Em
relação às Fluoroquinolonas testadas, foram observadas frequências de resistência muito elevadas, nomeadamente
60% à ENR e 79% à OBX, e de 17% para a CIP, 21 % para a NOR, 22% para a MAR e 30 % para a LEV e OFX.
Para os Aminoglicosídeos, detectaram-se valores de resistência extremamente elevados para a CN (68%), e de 29,
14 e 28 % para a NET, TOB e AK respectivamente. Como era de esperar, 97% das estirpes testadas foram
resistentes à TE. No que se refere às Fluoroquinolonas, verificou-se um aumento acentuado na frequência das
resistências em comparação um estudo prévio realizado no nosso laboratório, nomeadamente à ENR. Também foi
observada uma elevada frequência de resistências à CTX, Beta-lactâmico de terceira geração, e estirpes resistentes
aos Beta-lactâmicos com acção antipseudomonaceae. Esta situação torna-se preocupante, na medida em que foram
detectadas várias estirpes multiresistentes, o que conduz a uma utilização com maior frequência dos antibacterianos
de acção sistémica de último recurso, para controlar infecções localizadas. Embora não associada a padrões de
resistência predominantes, esta realidade reforça a importância da análise bacteriológica e teste de sensibilidade a
antibacterianos na prática clínica.
[Antibacterial resistance in Pseudomonas aeruginosa isolated from otitis externa in companion
animals]
Otitis externa (OE) is a very common condition in companion animals, associated to several etiological factors. The
present study reports antibacterial resistance observed in P. aeruginosa isolated from OE in dogs and cats, including
Beta-Lactams with spectrum targeting Pseudomonas, which were not included in previous reports.
Eighty nine isolates of P. aeruginosa, from the 431 bacterial isolates of OE in companion animals between 1999 and
June 2005 were studied. OE was confirmed by the evaluation of external ear canal citology smears, subjected to
Gram stain. P. aeruginosa isolates represented 21% of the bacterial agents isolated, 2 from cats (2%) and 87 from
dogs (98%). Sensitivity testing was performed by the disc difusion according to NCCLS M31-A2 guidelines, using
the antimicrobials: Cefotaxime (CTX), Ceftazidime (CAZ), Piperacillin (PRL), Aztreoname (ATM), Imipenem
(IMP), Ticarcillin (TIC), Enrofloxacin (ENR); Norfloxacin (NOR), Marbofloxacin (MAR); Orbifloxacin (OBX);
Ciprofloxacin (CIP); Levofloxacin (LEV); Ofloxacin (OFX); Tetracycline (TE), Gentamycin (CN); Netilmycin
(NET); Tobramycin (TOB) and Amikacin (AK).
Concerning levels of resistance were noticed for the different groups of antimicrobials: 44% of the isolates were
resistant towards CTX and 31% towards TIC. In the case of Beta-Lactams with antipseudomonaceae activity, only
5% of the isolates showed resistance to CAZ, 3% to PRL, 8% to ATM and 12% to IMP. A high level of resistance
towards Fluoroquinolone group was detected, namely 60% towards ENR and 79% towards OBX. Resistance was
lower towards CIP (17%), NOR (21 %), MAR (22%) and LEV and OFX (30 % each). In the Aminoglycoside
group, resistance levels were highest for CN (68%), and of 29, 14 and 28 % for NET, TOB and AK, respectively. As
expected, 97% of the isolates were resistant to TE. Relatively to Fluoroquinolones, a substantial increase in the level
of resistance was observed, in comparison to a previous study reported by us, namely towards ENR. A high level of
resistance was also detected towards CTX, a third generation cephalosporin, as well as isolates with resistance
towards Beta-Lactams with antipseudomonaceae activity. This situation is concerning, because several isolates
showed multiresistance, which leads to the increased use of last resource antimicrobials with systemic activity to
control localized infections as OE. Although not associated with predominant resistance patterns, this fact reinforces
the importance of bacteriological and antibacterial sensitivity testing in clinical practice.
135
Reconstrução cirúrgica do nervo periférico no modelo animal
Luís, A.L.1,2, Rodrigues, J.1,2,9, Lobato, J.V.1,2,7, Cortez, P.P.1,2, Pinto, M.V.1, Geuna, S.5, Amado, S.3, Veloso, A.3,
Armada-da-Silva, A.P.A.S.3, Ferreira, A.6, Lopes, M.A.4, Varejão, A.S.P.8, Santos, J.D.4, Maurício, A.C.1,2
1 Centro de Estudos de Ciência Animal (CECA) / Instituto de Ciências e Tecnologias Agrárias e Agro-Alimentares (ICETA), Universidade do
Porto, Portugal. 2 Departamento de Clínicas Veterinárias, Instituto de Ciências Biomédicas Abel Salazar (ICBAS), Universidade do Porto,
Portugal. 3 Faculdade de Motricidade Humana (FMH), Universidade Técnica de Lisboa (UTL), Portugal. 4 Faculdade de Engenharia da
Universidade do Porto (FEUP), Portugal. 5 Departamento de Ciências Clínicas e Biológicas, Universidade de Turim, Itália. 6 Faculdade de
Medicina Veterinária (FMV), Universidade Técnica de Lisboa (UTL), Portugal. 7 Centro Hospitalar Vila Nova de Gaia (CHVNG), Portugal. 8
Departamento de Ciências Veterinárias, CETAV, Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro (UTAD), Portugal. 9 Departamento de Cirurgia
Estética e Reconstrutiva, Hospital Geral S. João, Portugal.
Trabalhos experimentais têm vindo a sublinhar a importância da utilização de tubos–guia nas reparações de nervos
onde a sutura topo-a-topo não é possível. O presente estudo visa comparar a eficácia de 2 tipos de tubos-guia
reabsorvíveis (copolímero de PLGA e copoliéster Poli (DL-lactido-ε-caprolactona, de nome Neurolac®) utilizados
na reparação de uma solução de continuidade de 10 mm do nervo ciático através da avaliação funcional e
morfológica. Foi desenvolvido um sistema celular a partir da linha celular N1E-115 de rato, com a capacidade de
produzir localmente factores neurotróficos para melhorar a reparação nervosa. Os animais foram eutanasiados ao
fim de 20 semanas para avaliação morfológica. As funções motora e nociceptiva foram monitorizadas durante esse
período, através do reflexo postural de extensão e da latência do reflexo flexor. A [Ca2+]i das células N1E-115 foi
determinada antes da sua utilização in vivo, utilizando a sonda fluorescente FURA - 2AM. A [Ca2+]i nas células
N1E-115 não diferenciadas foi 37.6 ± 3.9 nM (N = 24) e aumentou para 50.8 ± 3.5 nM e 145.8 ± 9.4 nM após 48 e
72 horas de diferenciação na presença de 1.5% de DMSO. Após 20 semanas, o défice motor era de 0.37 ± 0.07 no
grupo de sutura topo-a-topo e de 0.28 ± 0.10 no grupo em que foi utilizada a membrana de colagénio com o sistema
celular diferenciado (p<0.05). O défice motor foi superior nos grupos onde se recorreu à utilização dos tubos-guia
(0.48 ± 0.06 e de 0.55 ± 0.03, nos tubos de Neurolac® e PLGA 90:10). A função nociceptiva foi acentuadamente
recuperada durante o período de 20 semanas em todos os grupos experimentais, mas o grau de recuperação foi
menor no grupo onde se utilizou os tubos-guia Neurolac® (p<0.05) e superior nos grupos onde se realizou a sutura
topo-a-topo, independentemente da utilização do sistema celular diferenciado. A análise morfológica revelou
diferenças no padrão das fibras nervosas regeneradas relativamente aos diferentes grupos experimentais o que
explica os diferentes graus de recuperação da função nociceptiva. Em conclusão, ambos os tubos-guia são
extremamente eficazes para orientar os axónios durante o processo regenerativo. As células N1E-115 devem ser
sujeitas a 48 horas de diferenciação antes da sua utilização in vivo. Nessa altura apresentam prolongamentos
citoplasmáticos e não sofrem mitoses. No entanto ainda não iniciaram o processo de morte celular, uma vez que a
sua concentração intracelular de Ca2+ é semelhante à das células N1E-115 não diferenciadas.
[Surgical reconstruction of peripheral nerve in rat model]
Experimental work has emphasized the importance of tubulization for peripheral nerve repair whenever nerve
defects cannot be bridged without tension. Among the advantages that entubulation repair offers over autographs, is
the possibility of manipulating the internal milieu of the nerve regeneration tube. The aim of the present study was
to compare the effectiveness of 2 types of bioabsorbable tube-guides (PLGA copolymer and Poly (DL-lactide-εcaprolactone) copolyester, named Neurolac®) for the reconstruction of a peripheral nerve 10 mm- gap by assessing
morphology and functional recovery. In addition, this study was carried out to obtain growth factors-producing cells
from a non-differentiated perpetual N1E-115 cell line for their future use as a cellular aid to nerve repair. In one of
the groups, was performed a classic end-to-end suture and in another, the suture was covered by a collagen
membrane coated with 48 hours- differentiated N1E-115 cells. Motor deficit and nociceptive function were
evaluated by measuring extensor postural thrust and withdrawal reflex latency. N1E-115 cells were differentiated in
the presence 1.5% DMSO and the [Ca2+]i was measured using the Fura-2 AM ester, before its in vivo testing. The
[Ca2+]i of non-differentiated N1E-115 cells was 37.6 ± 3.9 nM (N = 24), and increased to 50.8 ± 3.5 nM (N = 15)
and 145.8 ± 9.4 nM (N = 15) after 48 and 72 hours of differentiation. After 20 weeks of recovery, motor deficit was
0.37 ± 0.07 in the end-to-end group and 0.28 ± 0.10 in the group with the cellular system (p>0.05). It was higher in
animals operated with tube-guides (0.48 ± 0.06 and 0.55 ± 0.03 in Neurolac® and PLGA groups). The kind of
guidance nerve conduit had no effect on motor deficit recovery. Nociception greatly recovered during the 20 weeks
period in all animals but the rate of recovery was slower in the Neurolac® group (p<0.05) and faster in the end-toend groups independently of the addition of N1E-115 cells. Morphological analysis revealed differences in the
pattern of nerve fibers regeneration between the different experimental groups which may explain the different rates
in recovery of nociception.
Both biodegradable PLGA copolymer and Neurolac® tube-guides are an efficacious mean in helping the growth of
axons that do not impede the nerve regeneration. N1E-115 cells that undergo neuronal differentiation for 48 hours
are best qualified to cover the interior of tubular nerve guides, improving the recovery rate in terms of motor and
sensory functions.
136
Aquacultura
Produção de moluscos bivalves em Portugal – uma perspectiva sanitária do sector
Ruano, Francisco
Departamento de Aquicultura - Instituto de Investigação das Pescas e do Mar – INIAP/IPIMAR- Av. De Brasília 1449-006 Lisboa.
A produção de moluscos bivalves tem sido uma componente importante no sector pesqueiro português desde tempos
antigos. Os dados disponíveis mostram que a ostra plana Ostrea edulis, foi a espécie mais importante (em valor e em
volume) até 1900, substituída pela ostra portuguesa Crassostra angulata, até à 1970 e mais recentemente pela
amêijoa boa Ruditapes decussatus. A pesca de diversas espécies de bivalves faz-se através de uma frota multiespecífica a operar ao longo da nossa costa. Outra parte da produção provém do marisqueiro e da cultura em
estuários, lagoas e rias, que representa uma componente sócio económica importante do sector.
A amêijoa é tradicionalmente cultivada em parques ou viveiros, concessionados na zona inter – mareal, preparados
de forma a receberem os juvenis e criá-los até ao seu tamanho comercial. A utilização de mesas, sobrelevadas dos
fundos, é uma técnica recente e cada vez mais usada em ostricultura. O mexilhão e a ostra cultivam-se recorrendo a
técnicas de suspensão – jangadas ou «long lines», colocadas na coluna de água, em zonas profundas de estuários,
lagoas ou ao largo. O marisqueiro em bancos naturais continua a ser uma actividade importante, não só de apanha de
bivalves já com o tamanho comercial mas sobretudo de semente que é depois usada nos diversos sistemas de
cultura. Os bivalves são espécies sésseis que colonizam diferentes estratos bentónicos do ecossistema aquático, onde
grande parte dos componentes transportados pela coluna de água, matéria orgânica por exemplo, acaba por
sedimentar e mais tarde mineralizar. Possuindo características fisiológicas peculiares quer respiratórias quer
alimentares, os bivalves reflectem a qualidade do meio de suporte. Num banco natural de ostra, num viveiro de
amêijoa ou numa jangada de mexilhão e em cada maré, milhares de metros cúbicos de água e material em
suspensão, são bombeados e filtrados através das suas câmaras branquiais. Tal implica que os vários componentes,
naturais ou exógenos, da massa de água e sedimento, incluindo agentes patogénicos, passem pelo interior do destes
organismo, que os concentram, sendo por isso excelentes bio – indicadores da qualidade do meio aquático de
suporte.
As qualidades sápida e alimentar dos bivalves, faz deles um produto comercialmente muito importante e por outro
lado, obriga a que sejam consumidos ligeiramente cozinhados ou crus para que aquelas características sejam
preservadas e assimiladas pelo consumidor
Por tudo isto, o estudo e o controlo das condições higiosanitárias de produção, de comercialização e de consumo são
hoje de uma grande importância para as autoridades sanitárias de saúde pública e animal, nacionais e mundiais.
[Bivalves molluscs production in Portugal – a sanitary perspective of the sector]
The harvesting of Bivalves molluscs has been an important component of Portugal’s fisheries since ancient times.
The available data of production shows that the flat oyster, Ostrea edulis, was the main specie (in value and
tonnage) until 1900, replaced in importance by the Portuguese oyster, Crassostrea angulata, until the 70 decade of
the last century and more recently by European clam Ruditapes decussatus. Besides the harvesting of several
bivalves species made by a multipurpose fleet of boats along our coast, most of them have been gathered and
cultured in estuaries, lagoons and rias, representing an important component (namely in value) of the whole shellfish
production. The most important and traditional cultivation techniques for clams are intertidal bottom parks,
«viveiros», prepared to receive and grow up the seed until the commercial size. The use of trays and pouches
became more and more popular to oyster culture in subtidal and intertidal areas. The suspended techniques – rafts or
long lines – in the off shore are the most used in mussels and oysters culture. However the traditional exploitation of
natural beds is an important gathering activity, which puts in market commercial size bivalves but specially most of
the seed used in the cultivation facilities. Most of bivalves live on the different benthonic layers of the aquatic
ecosystem, where several components of the water column – organic material for example – finish being sedimented
and than became mineralized. Besides that this organisms, because his peculiar physiological characteristics on
feeding and breathing processes, are very exposed to the aquatic environment quality. Thousand of cubic meters of
water and sediments are pumped and filtered through their branchial chambers every tide in a sea bed of oysters,
clams or mussels. This fact implies the transfer of almost all the components of the aquatic environment into the
bivalve organism, including pathogens.
The delicate flavour and the very important edible qualities of this aquatic organisms, implies that they are usually
eaten raw or lightly cocked in order that all their components should be well preserved and assimilated by the
consumer.
All together these facts make them a very valuable commercial species as well as important bio-indicators of the
aquatic environmental quality. Also because the study and the control of their hygienic and sanitary components,
during the production process and before entering in the commercial circuit, are a great concern for the public health
and veterinary authorities in every countries.
137
Maneio em aquacultura – as estratégias do sucesso
Calheiros, José
Quinta do Salmão C.P.Lda, Praça Luís de Camões, 15, 4490-441 Póvoa de Varzim
O consumo mundial de peixe triplicou e o consumo per capita aumentou 1,7 vezes entre 1961 e 2001. Durante este
período as capturas mundiais apenas cresceram significativamente graças à aquicultura. Estes números reflectem a
grande importância deste ramo da produção animal que, embora sendo o de mais recente desenvolvimento, será o
que apresenta o maior potencial de crescimento, não só em termos mundiais mas também a nível nacional já que as
condições naturais existem, há recursos humanos qualificados e instituições científicas com trabalho e investigação
de prestígio nesta área.
Para as unidades aquícolas os desafios da última década têm sido o da modernidade e o da prevenção zoosanitária.
Em termos de tecnologias e equipamentos de produção deu-se um salto muito grande com uma elevada mecanização
e automação de procedimentos conseguindo-se grandes aumentos de produtividade e uma grande redução dos custos
de produção.
A questão da prevenção zoosanitária tem implicado, por parte da indústria e todos os sectores a ela ligados, uma
atenção e um forte investimento assumindo-se como o elemento limitativo da produção. De facto, devido a factores
de diversas ordens, desde a pressão das técnicas de produção até alterações climatéricas, os piscicultores começaram
a ser confrontados com patologias de mais alta prevalência e elevada virulência levando a perdas significativas de
efectivos. A aplicação de novas formas de maneio, o controlo e redução das cargas de produção e o melhoramento
das rações (ou seja, um conjunto de acções dirigidas ao aumento do bem estar dos animais e redução do stress),
associadas ao desenvolvimento de produtos imunológicos tais como os prebiontes, probiontes, imunoestimulantes e
vacinas constituem os diferentes elementos de uma estratégia que se tem revelado de sucesso para o crescimento
sustentado desta indústria.
[Aquaculture – success strategies]
Between 1961 and 2001 fish world consumption tripled while per capita consumption increased 1.7 times. During
this same period world catches grew exclusively due to aquaculture production. These figures show the importance
of this field of the animal protein production even thought is one of the most recent. Its potential for growing is
tremendous not only in a global scale but also and particularly in Portugal. The natural conditions of the country, the
skilled labour and all the scientific institutions involved on this subject form the necessary conditions for the
success.
Fish farmer challenges during last decade have been mainly related to the strong market pressure pushing them to
the need of large investments not only in the updating of the production methods but also in sanitary prevention
policies.
Concerning the production methods there has been a very fast development of the industry presenting nowadays a
high level of mechanization and automation. This has lead to an increase of productivity and also a drastic reduction
of production costs.
Industry and all related sectors have been focusing its efforts with particular emphasis on sanitary issues. In fact, at a
certain stage this has become the limiting factor of the industry. Different factors, from production pressure to
environment changes, created the conditions that made fish farmers face severe disease outbreaks, of high virulence
and with great fish loss. Changing handling procedures, control and reduction of production densities and
considerable improvement of feed were measures used to improve animal welfare. These measures together with the
development of immunological products such as prebionts, probiontes, imonustimulants and vaccines are the main
tolls for a success strategy of the industry.
138
Perspectivas da aquacultura em Portugal
Afonso, Fernando
CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária, Lisboa
A aquacultura (ou aquicultura) contribui para a redução das capturas actuais da pesca e além disso é também um
meio de aumentar as exportações. Apesar dos aspectos positivos, a aquacultura é alvo de críticas. Estas estão
ligadas, entre outras, às repercussões ambientais provocadas pelas actividades aquícolas, à qualidade dos seus
produtos, à interferência com as espécies selvagens devido à fuga de peixes das instalações, ao bem estar dos
animais ou ainda à instabilidade dos preços nos mercados. Além disso, a concorrência internacional é intensa e as
necessidades dos consumidores, tal como as suas expectativas, vão sendo alteradas.
Assim, é necessário dar cada vez mais atenção à preservação ambiental, à prevenção de doenças, à qualidade dos
produtos aquáticos e à competividade do sector. Além disso, a investigação científica e a formação de técnicos
especializados tem uma importância vital para o desenvolvimento desta actividade. É importante conhecer os
aspectos positivos da aquacultura e as críticas de alguns sectores, a fim de poder responder, de forma apropriada, às
preocupações existentes. Tem também interesse discutir o estado actual e as perspectivas do desenvolvimento da
aquacultura em Portugal, analisando as previsões que foram feitas no passado e as que existem para as próximas
décadas.
[Aquaculture perspectives in Portugal]
Aquaculture contributes to the reduction in wild fish captures and it is one way to increase the exportations.
However, besides these positive aspects about aquaculture, there are also some negatives to take into account. These
are related to the environmental impact of this activity, specifically: (1) the quality of the products, (2) the farmed
animals that escape and could affect wild populations, (3) the animal welfare and (4) the price instability.
Furthermore, the international competition is strong and the consumer needs and their expectations are continually
changing.
Thus, it is necessary greatly consider many aspects, starting from the environmental preservation via the disease
prevention, to the quality of aquatic products and to the competition within this sector.
Scientific research and specialized technicians are also fundamental to the development of this activity. It is
important to be aware of both the positive aspects of aquaculture and the criticism made by some sectors, with the
objective to clarify the concerns that might exist. It is also interesting to discuss the present situation and the future
perspectives of the aquaculture development in Portugal, analysing the predictions that were made in the past and
those that were made for the next decades.
139
Teixeira Coelho pioneiro de bacteriologia marinha
Martins Mendes, A.
Faculdade de Medicina Veterinária (CIISA), Avenida da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa
Manuel Alfredo Teixeira Coelho em 1972 Doutorou-se em Ciências Veterinárias com a tese “Contribuição ao
Estudo da Conservação dos Penaeidae da Baía de Lourenço Marques”. Assim transformou-se em pioneiro dos
estudos de Microbiologia Marinha no País. Partindo da observação da falta de higiene existente na comercialização
do camarão – uma das maiores riquezas das águas Moçambicanas – capturado na baía da cidade de Lourenço
Marques que representava cerca de 80% do marisco pescado em Moçambique, procurou saber qual a
responsabilidade da flora bacteriana dessas águas, fortemente poluídas, na contaminação do produto consumido.
Para o efeito obteve o auxilio da Missão de Bioceanologia e Pescas de Moçambique que lhe forneceu muitos
elementos de natureza oceanográfica, principais zonas de pesca na baía, localização das “estações” por ela
escolhidos tomando em consideração os elementos conhecidos sobre as correntes dominantes e a possibilidade de
poder trabalhar a bordo dos pequenos arrastões camaroeiros que operavam na baia.
Das 6 espécies de “Penaeidae”com interesse económico existentes, escolheu o Metapenaeus monoceros por existir
durante todo o ano em quantidade apreciável. Confirmou o efeito letal da água do mar recém colhida sobre a flora
bacteriana, referido por Zobell, usando nos seus estudos “agua do mar envelhecida”. Concluiu que as cargas
bacterianas encontradas eram quase exclusivamente constituídas por “mesófilas. Determinou outras fontes de
contaminação do camarão, registando as faltas de higiene e de refrigeração existentes ao longo do percurso do
produto, desde a captura até ás “bancas do mercado”.
Nos seus trabalhos isolou os géneros: Escherichia, Shigella, Arizona, Klebsiella, Enterobacter, Proteus,
Providencia, Pseudomonas, Aeromonas, Flaviobacterium, Vibrio, Neisseria, Veillonella, Listeria, Staphylococcus,
Streptococcus, Bacillus, Inflabilis, Welchia. Clostridium, Sphaerophorus, Zuberella e Nocardia. Considerou que os
géneros Escherichia, Shigella, Enterobacter, Proteus, Vibrio, Staphylococcus e Welchia seriam os responsáveis
pelas toxi-infecções alimentares provocadas pelo consumo do camarão capturado na Baía de Lourenço Marques.
Estatisticamente os géneros Proteus e Pseudomonas foram os dominantes no momento da captura. Mostrou ainda
que existia uma relação entre o espectro dos géneros bacterianos encontrados na superfície do camarão
comercializado no Mercado e as estações do ano.
Há correlação entre a pesquisa do indol e do azoto da trimetilamina com o exame histológico do músculo do
camarão. Assim aquelas reacções foram usadas no estudo da conservação do camarão congelado.
[Teixeira Coelho pioneer of marine bacteriology]
This Paper is an homage to Doctor Manuel Alfredo Teixeira Coelho, the late colleague who was a pioneer on marine
bacteriology in Moçambique.
He studied the preservation of Penaeidae captured in Lourenço Marques (actually Maputo) and selected
Metapenaeus nonoceros as from the six commercially valuable species available it was dominating.
For plate counting of the total bacterial level the basal culture medium was a broth prepared from prawn meat in
fresh water and old sea water aa. Best results after 5 days incubation at 28º C. Mesofiles were dominating. There
was a correlation in total bacterial counts and the season, being minimal in winter and maximal in summer time.
He demonstrated that the increasing of bacterial levels on the surfaces, the bowels and muscle of the prawns from
the moment of capture up to the commercialisation was the consequence of lacking or deficient systems of
refrigeration on board the trawlers, as well as bad hygiene in the boats and markets. The simple washing of the
decks and hands of the staff involved in operation followed by desinfection using sodium hypochloride was
sufficient to reduce approximately 91,5% of bacterial levels on the surface of the prawns.
As the following genus: Escherichia, Shigella, Arizona,, Klebsiella, Enterobacter, Proteus, Providencia,
Pseudomonas, Flavobacterium. Vibrio, Bacillus, Inflabilis, Welchia, Clostribium, Sphaerophorus, Zuberela and
Nocardia, were isolated in several phases, starting in capture until fish shops, and as some of them resisted to
freezing and cooking Teixeira Coelho considers the prawns captured in the Lourenço Marques Bay as potentially
dangerous for human consumer. Genus Escherichia, Shigella, Enterobacter, Proteus, Vibrio, Staphylococcus and
Welchia are certainly, responsible for many food- poisoning cases registered after eating the crustaceous.
Indol and trimethilamine determinations associated to histological examination of the muscle are valuable to detect
prawn freshness.
140
Pesquisa de Cryptosporidium sp. em peixes de piscicultura e da costa marítima portuguesa
Pereira da Fonseca, I.M.1, Ramos, P.2, Nogueira, M.2, Duarte, A.1, Oliveira, A.C.3, Ruano, F.2, Fazendeiro, M.I.1
2 IPIMAR/INIAP, Av. de Brasília, 1449-006 Lisboa
3 INSA, Lab. Microbiologia das Águas, Av. Padre Cruz, 1649-016 Lisboa
A criptosporidiose é uma coccidiose zoonótica com grande impacto económico na produção pecuária. A dispersão
do parasita no ambiente está relacionada com as descargas de efluentes das explorações bovinas infectadas com
Cryptosporidium. Atendendo a que a produção piscícola nacional se localiza essencialmente nas zonas costeiras de
estuário que sofrem marcada influência antropogénica, os objectivos deste trabalho foram a pesquisa de oocistos de
Cryptosporidium em amostras provenientes de 244 peixes de piscicultura e da região costeira do litoral português.
Utilizaram-se 12 pregados e 5 douradas provenientes de piscicultura. O peixe proveniente da costa consistiu numa
amostra composta por 36 verdinhos, 13 bogas, 26 carapaus, 36 pescadas, 10 cavalas, 39 besugos, 18 sardas, 27
fanecas, 3 safios e 9 sardinhas. Após abertura da cavidade abdominal, procedeu-se à raspagem do epitélio do tubo
digestivo e à concentração dos oocistos pelo método de sedimentação difásica de Ritchie modificado. No sedimento
pesquisaram-se oocistos de Cryptosporidium por imunofluorescência com anticorpos monoclonais –IFAT- (Kit
EasyStain, BTF e Kit Crypto/Giardia Cel, Cellabs). A técnica de PCR com os “primers” CPHST2F: 5’ TCC TCT
gCC gTA CAg gAT CTC TTA 3’ e CPHSPT2R: 5’ TgC TgC TCT TAC CAg TAC TCT TAT CA 3’ foi utilizada
para pesquisa de DNA com vista à genotipagem dos isolados por RFLP.
Para pesquisa de oocistos em amostras de água do mar do local da captura dos peixes, utilizou-se uma amostra de
10L que se processou pelo Método 1623 da EPA.
Até ao momento, foram detectadas 17 amostras de peixes positivas por IF e 5 das quais confirmadas por PCR. A
amostra de água revelou-se negativa.
[Detection of Cryptosporidium sp. in fish from fish farm and sea coast]
Cryptosporidiosis is a zoonotic coccidiosis with a wide impact in cattle production. The dissemination of this
parasite in the environment is mainly related with the effluents from cattle farms. Considering that the national fish
production is located in the estuarine sea coast with marked anthropozoonotic influence, the objectives of this work
were the detection of Cryptosporidium oocysts in 244 fish samples from fish farms and from Portuguese sea coast
fish farms.
Twelve turbot and five guilted head seabream constituted the sample from fish farm while the one of sea coast was
composed of 36 blue whiting, 13 bogue, 26 atlantic horse mackerel, 36 european hake, 10 chub mackerel, 39
axillary seabream, 18 atlantic mackerel, 27 pouting, 3 european conger and 9 european sardine. Smears from
stomach and gut epithelium were made after the opening of abdominal cavity. Oocysts concentration was made by
modified difasic sedimentation Ritchie method. Cryptosporidium oocysts were search in the pellet by IFAT
(EasyStain Kit, BTF and Crypto/Giardia Cel Kit, Cellabs). PCR was performed with CPHST2F: 5’ TCC TCT gCC
gTA CAg gAT CTC TTA 3’ and CPHSPT2R: 5’ TgC TgC TCT TAC CAg TAC TCT TAT CA 3’ primers in order
to genotype the isolates by RFLP.
The Method 1623 EPA was used to detect Cryptosporidium oocysts in 10L samples from sea water where the fish
was captured.
Until now, 17 fish positive samples were detected by IFAT and 5 were confirmed by PCR. The water sample was
negative.
141
Ambiphrya spp. em Pregados de Cultura em Tanques de Terra
Ramos, P., Oliveira, J.M., Pereira, T.G., Branco, M.A.C. e Ruano, F.
Departamento de Aquicultura. Instituto de Investigação das Pescas e do Mar. Avenida de Brasília, 1449-006 Lisboa
A presença de ciliados do grupo Sessilina nomeadamente Ambiphrya spp. na pele e brânquias dos peixes é
considerada uma ocorrência normal, quando a água tem boa qualidade e trabalhamos com cargas animais
adequadas, não constituindo motivo de preocupação. A aquicultura marinha tradicional em Portugal faz-se
essencialmente em tanques de terra e com o objectivo de diversificar a produção aquícola, estão a decorrer ensaios
com pregado (Psetta maxima) neste sistema de produção. Durante um ensaio de crescimento com pregado foi
identificado este ciliado. Neste estudo descreve-se o quadro sintomatológico observado, as características do ciliado
e evidencia-se o facto de poder constituir um constrangimento importante à cultura desta espécie neste sistema de
produção em que a renovação da água depende das marés, o recurso ao uso de químicos é impraticável e a
abundância parasitária parece ter carácter sazonal.
[Ambiphrya spp. in turbot of culture in land tanks]
The presence of ciliates of the group Sessilina nominated Ambiphrya spp. in the skin and gills of the fish is
considered a normal occurrence, when the water has good quality and we work with adequate animal loads, not
constituting concern reason. The traditional marine aquaculture in Portugal is essentially in land tanks and with the
goal to diversify the aquaculture production they are being preformed assays with turbot (Psetta maxima) in this
system of production. During an assay of turbot growth this ciliate was identified. In this study the clinical signs are
described, the characteristics of the ciliate one and is evidenced that it can constitute an important constraint to the
culture of this species in this system of production where the renewal of the water depends on the tides, the resource
to the use of chemistries is impracticable and the parasitic abundance seems to have seasonal occurrence.
142
Antibioterapia em peixes – Bioencapsulação de flumequina em artémias adultas (Artemia salina sp.)
Gomes, J.1, Vilela, C.L.1, Bexiga, R.1,2, Nunes, G.D.3, Pereira, N.3, Cavaco, L.M.1
1 CIISA/ Faculdade de Medicina Veterinária, Pólo Universitário do Alto da Ajuda, Av. da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa, Portugal.
2 Presentemente na Faculty of Veterinary Medicine, University of Glasgow, UK
3 Oceanário de Lisboa, SA., Esplanada D. Carlos I- Doca dos Olivais; 1990-005 Lisboa, Portugal.
Medidas de controlo ambiental são essenciais para garantir o equilíbrio de peixes mantidos em cativeiro. No entanto,
pode ser necessário o recurso à antibioterapia para controlar algumas infecções bacterianas. A flumequina é
particularmente eficaz face a bactérias gram negativas, nas quais se incluem a maioria dos agentes patogénicos para
peixes. As estratégias de administração de fármacos a peixes devem ser adaptadas ao ambiente aquático e às
características particulares da espécie-alvo. Estas estratégias podem incluir a bioencapsulação em vectores vivos
integrantes da dieta habitual, especialmente útil para a antibioterapia de espécies de pequeno tamanho, em que a
administração de fármacos incorporados na ração ou no gel alimentar é impossível. A bioencapsulação pode ser
utilizada de forma empírica, imergindo artémias numa solução de flumequina em água, durante algumas horas, o
que não permite calcular a concentração atingida nas artémias. Este trabalho visou normalizar o método de
bioencapsulação de flumequina em vectores vivos para fins terapêuticos, em artémias adultas vivas, dada a
utilização frequente deste crustáceo para alimentação de peixes tropicais.
Ensaios preliminares mostraram que a bioencapsulação com uma concentração de flumequina de 358 µg/mL, por
imersão de formas adultas de Artemia salina durante 24h numa solução de água marinha à temperatura ambiente,
era adequada, não causando mortalidade nas artémias. As artémias assim fortificadas foram rapidamente lavadas em
água marinha estéril, escorridas, pesadas, trituradas, suspendidas em Mueller-Hinton Broth e autoclavadas. A
suspensão resultante foi utilizada num ensaio microbiológico baseado na determinação da CMI (Concentração
mínima inibitória) para quantificação do seu teor em flumequina, utilizando como estirpe de controlo Escherichia
coli ATCC 25922. Foram determinados os valores de CMI de flumequina em solução e presente na suspensão de
artémias, em idênticas condições, tendo-se verificado que as artémias fortificadas apresentavam uma concentração
de flumequina de 256,55 mg/g (± 71.22).
A dose terapêutica preconizada de 10 mg/kg pv seria assim atingida pela ingestão de 7.8 artémias por grama de
peixe. Assumindo o valor de 25 g como peso médio dos peixes, e pressupondo que a sua capacidade de ingestão é
de cerca de 4% pv/dia, é viável a utilização de artémias fortificadas, sendo necessária a ingestão de cerca de 1.037g
de artémias por peixe.
Os resultados obtidos sugerem que a administração de doses terapêuticas de flumequina pode ser efectuada
utilizando artémias fortificadas. A influência de variáveis individuais ou ambientais deverá ser investigada em
estudos futuros.
[Fish antibiotherapy - Bioencapsulation of Flumequine using Adult Brine Shrimp (Artemia salina
sp.)]
Environmental control measures are essential to ensure the balance of fish specimens kept in captivity. However,
antibiotherapy may be required to control some bacterial infections. Flumequine is shows a good activity against
Gram negative bacteria, which comprise the majority of fish pathogens. Drug delivery strategies must be adapted to
the aquatic environment and to the specific characteristics of the target species. These strategies may include
bioencapsulation into living vectors that are part of fish diet, particularly useful for small-sized species in which
drug administration incorporated in feed or gel is not feasible. Bioencapsulation may be performed empirically by
immersion of Artemia in a flumequine water solution during some hours, which does not allow the determination of
its concentration in artemia. This procedure does not allow to accurately determine the dosis ingested by fish.
The present work aimed at standardizing the bioencapsulation method of flumequine in live vectors, for therapeutic
purposes, in adult live artemia. This crustacean is frequently used in tropical fish feed.
Preliminary assays showed that bioencapsulation of a flumequine concentration of 358 µg/mL by immersion of
adult Artemia salina in a sea-water solution, for 24 h at room temperature was adequate, without causing mortality
in artemia. Artemia submitted to the bioencapsulation process were briefly washed in sterile sea water, blotted,
weighted, crushed, suspended in Mueller Hinton Broth and autoclaved. The resulting suspension was used in a
microbiological assay based on MIC determination, for quantification of the flumequine content, using as control
strain Escherichia coli ATCC 25922. MIC values were determined in flumequine solution and in the artemia
suspension, under the same conditions. Fortified artemia were shown to bear a flumequine concentration of 256.55
mg/g (± 71,22).
The therapeutic dosis of 10 mg/Kg BW, would then be achieved by the consumption of 7.8 artemia per gram of fish.
Assuming the value of 25 g as average weight of fish and given a consumption of about 4% BW/day, the use of
fortified artemia is feasible, requiring the ingestion of about 1.037 g of artemia per fish.
Data from the present study suggest that the administration of flumequine therapeutic doses may be performed by
fortified artemia. The influence of individual or environmental variables must be further investigated.
143
Estudo de eficácia da depuração do mexilhão (Mytilus spp.) utilizando uma depuradora
experimental
Monteiro, L.1, Niza Ribeiro, J.2
1 Serviço de Inspecção Sanitária Lota da Figueira da Foz,
2 Segalab, S.A. ICBAS-UP
Neste trabalho, pretendeu-se avaliar a eficácia da depuração de mexilhões (Mytilus spp.) capturados na Ria de
Aveiro e estabelecer um período de tempo mínimo para a depuração, uma vez que a lei actualmente em vigor é
omissa neste ponto, ficando ao critério dos proprietários dos centros depuradores esta decisão. A definição do tempo
mínimo de depuração é crítica para a salvaguarda da eficácia do processo e como critério de inspecção.
Levou-se a cabo uma série de 11 ensaios experimentais para determinar o tempo de depuração necessário para
reduzir, a níveis aceitáveis, a contaminação de mexilhões capturados no Canal de Ílhavo, classificado como zona C.
Para isso utilizaram-se mexilhões contaminados naturalmente, recolhidos entre os meses da Primavera e o Outono.
Em cada ensaio criaram-se e seguiram-se dois lotes que foram analisados para pesquisa de coliformes fecais em 100
g (CF100), de 12 em 12 horas até perfazerem um período máximo de 60 horas. A eficácia do processo de depuração
foi estudada num tanque experimental fornecido pela firma Fernando Ribeiro, Lda. e trabalhou-se em condições
controladas de depuração (temperatura média da água: 18,9ºC; pH médio: 7,6; salinidade média: 30‰; percentagem
de saturação média: 81,6). Avaliou-se a importância da temperatura da água de depuração na eficácia da remoção de
microrganismos, expressa em CF100, depurando alguns lotes a temperaturas acima de 19ºC.
Constatou-se, com 95% de confiança, que a depuração nas condições experimentais utilizadas permite obter
mexilhões com um nível de contaminação inferior a 300 CF100 em 48 horas. Após depuração às 48 horas, os
resultados obtidos variaram entre 132 e 23 CF100, com uma média de 78 CF100. Estes resultados foram obtidos a
partir de lotes de mexilhões recolhidos durante vários meses, incluindo os de verão e retratam de forma aceitável a
variabilidade existente ao longo do ano, das condições de apanha da Ria. Verificou-se, com p<0,05, que quando a
temperatura da água de depuração é superior a 19ºC a eficácia é reduzida de forma significativa, às 48 horas.
Agradecimentos: Dr. Sobral (CRIPC)
[Mussel depuration efficacy study using an experimental tank]
In this work, we pretend to evaluate depuration efficacy of mussels (Mytilus spp.) harvested at Ria de Aveiro and
establish a minimum period of depuration, since law actually in force is omitted in this point, depending depuration
centres owners this decision. The definition of a minimum time of depuration is critical for safeguard efficacy of the
process and also as inspection criteria.
We made series of 11 experimental assays to determine necessary depuration time to reduce, to acceptable levels,
the contamination of mussels harvested at Canal de Ílhavo, classified C zone. For that goal, used naturally
contamined mussels, harvested between Spring and Autumn months. In each assay, generate and follow up 2
batches that had been analysed for search of faecal coliforms/100 g (CF100), with 12 hours intervals, until a period of
60 hours has completed. The depuration process efficacy was study in an experimental tank of the firm “Fernando
Ribeiro” and worked in controlled conditions of depuration (mean water temperature: 18,9ºC; mean pH: 7,6; mean
salinity: 30‰; mean saturation percentage: 81,6). We evaluate the importance of the depuration water temperature
in the efficacy of microrganisms removal, expressed in FC100, purifying some batches at temperatures upper 19ºC.
Established with 95% of confidence that depuration in the experimental conditions verified at the “Ria de Aveiro”
obtains mussels under 300 CF100 at 48 hours. After depuration at 48 hours, results range between 132 and 23 CF100,
with 78 CF100 mean. These results were obtained from batches capture during various months, including summer
and represent the variability existing during all year and conditions of capture at the Ria de Aveiro.
Concluded, with P-value < 0,05, when depuration water temperatures were higher than 19ºC, exists a significant
difference on the removal percentage being lower, at 48 hours.
Thanks to Dr. Sobral (CRIPC)
144
Avaliação das potencialidades do óleo de girassol como fonte lipídica alternativa na dieta de
pregado Psetta maxima
Correia, A.R.N.M.P.1., Pereira, T.G.1., Ramos, P.1, Bandarra, N.M.2 e Magalhães, S.2
1 Departamento de Aquicultura, Instituto Nacional de Investigação Agrária e das Pescas. Av Brasília, 1449-006 Lisboa
2 Departamento de Inovação e Valorização Tecnológica dos Produtos da Pescas, Instituto Nacional de Investigação Agrária e das Pescas. Av
Brasília, 1449-006 Lisboa
A produção de aquacultura teve um incremento elevado nas últimas décadas. Isso acarretou um aumento da procura
de matérias-primas de origem animal usadas na elaboração das dietas compostas. Por outro lado, devido à
diminuição das capturas de pesca, há a necessidade de procurar alternativas económicas para os óleos de peixe e
avaliar as suas potencialidades como fontes lipídicas.
Neste trabalho, foi avaliada a utilização do óleo de girassol como substituto do óleo de fígado de bacalhau na dieta
do pregado, nos seguintes parâmetros: - crescimento, - composição corporal, - perfil em ácidos gordos no músculo e
estudo do tecido hepático. Foram formuladas duas dietas isoproteicas (55%) e isolipídicas (20%), utilizando o óleo
de fígado de bacalhau e o óleo de girassol, respectivamente, que foram testadas em triplicado por 6 grupos de 30
juvenis de pregado durante 9 semanas. O peso médio final do grupo alimentado com a dieta com óleo de fígado de
bacalhau foi superior ao do grupo da dieta com óleo de girassol, sem diferenças significativas. O crescimento entre
os diferentes grupos experimentais, a composição corporal final e o índice de conversão alimentar não apresentaram
diferenças entre si. O teor em gordura do fígado do grupo da dieta com óleo de girassol apresentou um valor
superior (18,99%) em relação ao do grupo da dieta com óleo de fígado de bacalhau (15,92%). O índice visceral do
grupo da dieta com óleo de girassol foi significativamente mais elevado do que o da dieta com óleo de fígado de
bacalhau. A composição em ácidos gordos do músculo reflectiu na generalidade a composição em ácidos gordos da
dieta. Com a incorporação de óleo de girassol houve uma diminuição dos níveis de 20:5 ω3 (EPA) e de 22:6 ω3
(DHA), com um aumento do ácido linoleico (18:2 ω3). No exame histopatológico realizado em amostras de fígado
de pregados provenientes de lotes alimentados com dietas distintas não foram observadas alterações no tecido
hepático.
Do ponto de vista económico, este ensaio apresentou dados prometedores uma vez que não houve alterações na
performance zootécnica do pregado nem se observaram alterações hepáticas, contudo, na perspectiva do
consumidor, uma vez que a inclusão de óleo de girassol na dieta resultou numa redução significativa dos HUFA’
ω3, novos ensaio deverão ser realizados de forma a avaliar o perfil dos ácidos gordos altamente insaturados.
[Potential of sunflower oil as alternative lipid source in diet for turbot Psetta maxima]
Aquaculture production had a high growth in last decades. This fact increased the demand of raw materials of
animal origin to be used in the fish feed formulation. Due to the decrease of fishery captures, it is necessary to find
alternatives to fish oils and evaluate their possibilities as lipidic sources.
This study evaluated the utilisation of sunflower oil as a substitute of cod liver oil in diet for turbot, to parameters: growth; - whole-body composition; - fatty acid profile in muscle and hepatic tissue study.
Two diets were formulated to be isonitrogenous (55%) and isolipidic (20%), using cod liver oil and sunflower oil,
respectively. The diets were tested in 2 x 3 groups of 30 turbot juveniles, during 9 weeks. The final weight of the
fish fed cod liver oil in the diet was higher than the group of fish fed with sunflower oil, but no significant
differences. The growth of different groups, the final whole-body composition and feed conversion ratio were not
significantly different among treatments. The lipid content of liver of fish of diet with sunflower oil (18,99%) was
higher than the other group (15,92%). The visceral index was significantly higher for the turbot fed diet with
sunflower oil. The muscle fatty acids profile reflected the fatty acids composition of the diet. The incorporation of
sunflower oil decreased the contents of 20: 5ω3 (EPA) and 22: 6ω3 (DHA) with an increase of linoleic acid content
(18: 2ω6). In the histopathological exam on liver samples of turbot fed with different diets, it was not observed
changes in the hepatic tissue.
In the economical viewpoint, this work showed an encouraging results at as there are no changes in zootechnic
performance of turbot nor hepatic changes, however in the consumer viewpoint, the incorporation of sunflower oil
in diet resulted on a significant decrease of HUFÁ s ω3. New studies must be carried through in order to evaluate
fatty acids profile highly insaturated.
145
146
POSTERS
147
Poster 1
Análise dos factores envolventes à infecção leptospírica na população do distrito de Leiria
Anastácio, S.F.1, Navarro, M.F., Rodrigues, J.A.2
1 Departamento de Medicina Veterinária, Escola Universitária Vasco da Gama, Quinta de S. Jorge de Milréu, Estrada da Conraria; 3040-714
Castelo Viegas – Coimbra. Tel. 239.444.444. E-mail: [email protected]; [email protected]
2 Departamento de Ciências Veterinárias, CECAV - Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro, Apartado 202, 5001-911 Vila Real,
T259.350.460, E-mail: [email protected]
A leptospirose humana tem sido relatada em Portugal desde 1926. Vários trabalhos foram desenvolvidos no sentido
de caracterizar epidemiologicamente a infecção, nomeadamente a análise das estirpes circulantes nas populações e a
determinação das fontes de infecção.
Uma análise descritiva aos casos de leptospirose humana divulgados pelo sistema DDO permitiu-nos detectar na
Região Centro, e em particular no distrito de Leiria, uma taxa de incidência cumulativa superior às restantes regiões
de Portugal Continental. O nosso trabalho teve como objectivo analisar as circunstâncias envolventes à infecção
leptospírica na população do Distrito de Leiria; uma vez que só conhecendo com detalhe as condições de infecção,
as actividades desenvolvidas, os hábitos e os comportamentos da população, é possível uma actuação objectiva, na
implementação um programa de controlo eficiente. Efectuámos assim um estudo observacional com carácter
retrospectivo através da aplicação de um questionário de auto-preenchimento.
Verificámos que apesar de a leptospirose assumir um carácter endémico no nosso país, não podemos deixar de
referir a ocorrência ocasional da doença na forma de surtos epidémicos ou clusters relacionados com fontes de
infecção comuns, num curto espaço de tempo. No Distrito de Leiria, foi possível verificar que o sexo masculino
parece estar mais predisposto para a infecção, não só pelo desempenho de actividades profissionais de risco em
idades activas, como também por comportamentos de risco que parecem ser mais frequentes neste sexo. Contudo,
parece haver uma associação da leptospirose com indivíduos, de ambos os sexos, de idade avançada que
desenvolvem actividades de risco estritamente ligadas ao meio rural, nomeadamente a agricultura, pecuária e a
jardinagem. A residência em meio rural parece constituir um factor de risco importante, parecendo existir uma
relação com outros factores de risco como actividades desenvolvidas, ter animais e contactar com os seus
excrementos, frequência de recolha dos resíduos sólidos e local de deposição dos resíduos sólidos.
Verificámos ainda que as pessoas parecem estar pouco sensibilizadas para problemas de saúde pública,
nomeadamente a ocorrência de infecções zoonóticas associadas ao contacto com animais, e para a ocorrência de
campanhas de desratização por parte dos Municípios e Autoridades de Saúde.
148
Poster 2
Isolamento de Leptospira em primatas de pequeno porte em Portugal
Rocha, T.1, Monteiro, M.1, Baptista, R.1, Lapão, N.2 e Sogorb, A.2
1 Laboratório Nacional de Investigação Veterinária, Estrada de Benfica, 701, 1549-011 Lisboa
2 Jardim Zoológico de Lisboa, Estrada de Benfica, 158-160, 1549-004 Lisboa
A leptospirose aguda, naturalmente adquirida, em primatas não humanos, é pouco comum e raras são as descrições
que têm sido feitos sobre a ocorrência da doença nestes animais, quer na natureza quer em cativeiro. Em relação aos
animais em cativeiro, a maioria dos trabalhos apenas incide sobre observações clínicas e/ou sorológicas com a
detecção de anticorpos anti-Leptospira.
A leptospirose em condições de cativeiro tem-se tornado, contudo, uma preocupação importante, uma vez que a
maioria dos zoos e centros de investigação apresentam condições que facilitam a exposição a roedores e outras
espécies selvagens.
Esta comunicação constitui a primeira referência sobre a ocorrência de leptospirose em primatas não humanos em
Portugal.
Clinicamente a doença foi observada em dois grupos diferentes de pequenos primatas do Zoo de Lisboa,
pertencentes às espécies Saguinus midas (subspécie niger) e Pithecia pithecia, com sintomas de leptospirose aguda
tais como prostração, anorexia e icterícia, seguidos de morte, nos dois grupos.
A necrópsia revelou coloração ictérica, mais evidente no tecido subcutâneo, hemorragias multifocais no pulmão e
hemorragias dispersas nos músculos e outros órgãos (pâncreas, bexiga).
Foram colhidos órgãos para exames histopatológico e bacteriológico para pesquisa de Leptospira.
O exame histopatológico confirmou a existência das hemorragias, particularmente extensas no pulmão e
localizando-se sobretudo nos alvéolos pulmonares. Havia imagens discretas de hepatite com presença de pigmentos
biliares nos ductos biliares intralobulares.
O exame microscópico de cortes de rim destes animais, submetidos a uma impregnação pela prata segundo o
método de Levaditi, revelaram a presença de estruturas com morfologia idêntica à das leptospiras.
Foram isoladas leptospiras pertencentes ao sorogrupo Icterohaemorrhagiae a partir das duas espécies, Saguinus
midas e Pithecia pithecia. Estes são os primeiros isolados de Leptospira obtidos em primatas não-humanos em
Portugal e em geral referidos nestas espécies de macacos.
Os casos de leptospirose presentemente descritos confirmam a previamente referida susceptibilidade dos primatas à
infecção por Leptospira, particularmente do sorogrupo Icterohaemorrhagiae, salientando a importância destes
animais como um potencial risco para a transmissão da doença a outros animais e aos humanos.
[Isolation of Leptospira from non-human small primates in Portugal]
Naturally acquired acute leptospirosis in monkeys is uncommon and few studies have been conducted on the
occurrence of this disease in non-human primates in nature. With captive animals, there are also very few reports,
mostly concerning to clinical observations and the detection of anti-Leptospira antibodies.
Leptospirosis in captive conditions has however become a major concern, since most zoos and research centres
present conditions that facilitate exposure to rodents and other wildlife.
This communication is the first report on the occurrence of leptospirosis in non-human primates in Portugal.
Clinical disease was observed in two different groups of small primates from the Lisbon Zoo, belonging to the
species Saguinus midas (subspecies niger) and Pithecia pithecia, with symptoms of acute leptospirosis like
prostration, anorexia and jaundice, leading to death, in the two groups.
The autopsy revealed jaundice, particularly evident in the subcutaneous tissue, multi-focal haemorrhages in the lung
and dispersed haemorrhages in the muscles and other organs.
Organs were collected at autopsy for histopathological examinations and for bacteriological culturing for the
isolation of leptospires.
The histopathologic examinations confirmed the existence of haemorrhages, particularly extensive in the lungs and
located mainly in the alveolar spaces. The liver presented mild hepatitis with presence of biliary pigments in the
intralobular bile ducts.
The microscopic examination of kidneys sections from these animals stained by silver impregnation according to
Levaditi’s method revealed the presence of structures morphologically identical to leptospires.
Leptospires belonging to the Icterohaemorrhagiae serogroup were isolated from both Saguinus midas and Pithecia
pithecia. These are the first Leptospira isolates obtained from non-human primates in Portugal and in general
referred in these species of monkeys.
The presently described cases of leptospirosis confirm the previously reported susceptibility of monkeys to
leptospiral infection, particularly of the Icterohaemorrhagiae serogroup, and stresses the importance of these animals
as a potential hazard for the transmission of the disease to other animals and to humans.
149
Poster 3
Brucella melitensis: estudo bacteriológico/serológico em material proveniente de pequenos
ruminantes abatidos no âmbito do Plano de Erradicação nos anos de 2001 a 2004
Cardoso, R.A., Inácio, A.C., Travassos Dias, M.I.
A Brucella melitensis é a principal responsável pela brucelose dos pequenos ruminantes em Portugal e nos países
mediterrânicos. A infecção humana causada por esta espécie, é também mais virulenta e mais frequente que a
ocasionada por Brucella abortus.
No âmbito do Plano de Erradicação da Brucelose dos Pequenos Ruminantes, deram entrada no LNIV, no período
compreendido entre 2001 e 2004, amostras de órgãos correspondentes a 1249 animais (1076 ovinos e 173 caprinos),
bem como as respectivas amostras de sangue colhidas no momento do abate. Os animais eram originários de
algumas regiões do País, principalmente da Beira Interior.
Aos vários órgãos recebidos (linfonodos, fígado, baço, útero e glândula mamária) de cada animal, foi efectuado o
exame bacteriológico convencional. As amostras de soro, foram submetidas às provas serológicas Rosa de Bengala
(RB) e Fixação do Complemento (FC). A metodologia seguida foi a descrita por Alton et al. (1988).
Foi isolada B. melitensis biovar 3 em órgãos de 295 animais, B. melitensis biovar 1 em órgãos de 2 animais e B.
melitensis biovar 2 em órgãos de apenas um animal. A frequência de isolamento verificada nos órgãos foi : 76,2 %
nos linfonodos, 64,3 % no baço, 53,4 % na glândula mamária, 47,2 % no fígado e 43,5 % no útero.
Efectuou-se um estudo comparativo das provas serológicas RB e FC nos 295 animais onde se isolou Brucella.
Constatou-se que houve 285 (%) animais positivos na prova RB e 269 (%) na prova FC, indicando uma maior
sensibilidade para a prova RB. Dos 269 animais com serologia positiva na prova FC, 86% tiveram um título igual ou
superior a 106 UIFC/ml. Registaram-se 5 animais com serologia negativa em ambas as provas.
[Brucella melitensis: bacteriological/serological study of tissues and blood sera from small
ruminants in the scope of eradication plane (2001/2004)]
Brucella melitensis is the main responsible for small ruminants brucellosis in Portugal and mediterranian countries.
The infection caused by this species in men is more virulent and more frequent than that caused by Brucella abortus.
In the scope of small ruminants Eradication Plan, LNIV received, between 2001 and 2004, 1249 animals (1076
sheep and 173 goats) tissues that came from some Portugal regions, mainly Beira Interior, as well as respective
blood serum samples.
It was performed classical typing in each animal tissue (linphonodes, liver, spleen, udder and uterus) and Rose
Bengal test and complement fixation test to each serum sample. The followed methodology was as described by
Alton, et al.(1988)
Brucella melitensis biovar 3 was isolated in tissues of 295 animals, Brucella melitensis biovar 1 in tissues of 2
animals and Brucella melitensis biovar 2 in only one animal. Percentage of isolation in tissues was: linphonodes –
76,2 %, spleen – 64,3 %, udder – 53,4 %, liver – 47,2 % and uterus – 43,5 %.
A comparative study between RBT and CFT was performed in 295 animals with positive isolation of Brucella
melitensis. From this study 285 animals were found RBT positive and 269 CFT positive indicating a higher
sensitivity for RBT. From 269 CFT positive animals, 86 % had a titre equal or above 106 UIFC/ml. There were 5
animals with negative results in both RBT and CFT.
150
Poster 4
A paratuberculose ovina na região de Trás-os-Montes e Alto Douro: perspectiva dos médicos
veterinários
Coelho, A.C.1, Pinto, M.L.1, Silva, S.1, Coelho, A.3, Rodrigues, J.1,2
1 Departamento de Ciências Veterinárias, Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro, Apartado 202, 5001-911 Vila Real Codex,
2 CECAV Portugal. E-mail: [email protected]
3 Direcção Regional de Agricultura de Trás-os-Montes, Rua da República 133, 5370-347 Mirandela, Portugal
A avaliação da opinião, e a percepção dos profissionais que trabalham em campo sobre a paratuberculose, são
factores fundamentais para a delineação de estratégias que visem a prevenção e o controlo da doença. O presente
estudo foi realizado com o objectivo de averiguar a importância da paratuberculose na perspectiva dos médicos
veterinários que exercem actividade clínica em ovinos. Foi aplicado um inquérito a 28 médicos veterinários que
praticavam clínica de campo na região de Trás-os-Montes e Alto Douro. Os dados recolhidos foram processados nos
programas informáticos SPSS® e Microsoft Excel para a versão Windows XP. Para a análise estatística recorreu-se a
medidas de frequência absoluta e proporção, e ao método de Qui-quadrado (χ2). Um nível de probabilidade (p)
<0,05 foi considerado estatisticamente significativo. Dos 28 médicos veterinários, 32,1% tiveram suspeita de
paratuberculose nos seus rebanhos, enquanto que para 67,9% tal nunca sucedeu. Quando se perguntou aos clínicos
se no diagnóstico diferencial das doenças do aparelho gastrointestinal incluíam por norma o diagnóstico da
paratuberculose, a grande maioria (82,1%) respondeu negativamente. As razões apontadas foram diversas: 34,7%
não a consideravam uma doença comum; 8,7% não tinham meios de diagnóstico que permitissem fazer; 17,4%
ignoravam a existência da doença na área; 4,4% afirmaram que não existia a doença na área; 4,4% nunca pensaram
nessa possibilidade. A grande maioria não considerava a paratuberculose uma doença preocupante (82,1%). Oitenta
por cento dos que se preocupavam, consideravam que a doença causava perdas económicas, e apenas um inquirido
(20%) se preocupava pelo carácter fatal da paratuberculose, que se traduziria por sua vez no aumento do
desemprego entre os profissionais da região. Dos respondentes que não consideravam a doença preocupante, 13,1%
justificaram que a prevalência desta doença na região era baixa; 30,4% achavam que se os ovinos tinham pouca
importância económica a doença não era alarmante. Verificou-se uma associação estatisticamente significativa entre
a execução de diagnóstico diferencial com outras doenças gastrointestinais, e o facto de se considerar a
paratuberculose como uma doença preocupante, assim como entre a suspeita da presença nos rebanhos, e o alerta
pela sua presença na região, conforme se comprova com valores de p=0,007 e p=0,022, respectivamente. Os
resultados obtidos indicam uma baixa motivação à ocorrência da doença, ao contrário do que se verifica em outros
estudos, comprovando a necessidade urgente de alertar a classe médico-veterinária para o problema, sendo para tal
necessário incutir nos clínicos maior atenção para esta entidade nosológica das espécies pecuárias.
[Ovine paratuberculosis in Trás-os-Montes e Alto Douro region: a veterinarian overview]
The veterinarians’ opinion and overview of ovine paratuberculosis are fundamental factors for the delineation of
strategies which aim the prevention and control of the disease. The purpose of this study was to determine the
importance of paratuberculosis for the veterinarians involved with ovine clinical practice in the Trás-os-Montes e
Alto Douro region. For this, 28 veterinarians were surveyed with a questionnaire.
Statistical analysis was performed using SPSS® software for Windows. Categorical data were analysed using
percentages and Chi-square (χ2).statistics, with a probability of (p) <0.05 as statistically significant.
Of the 28 veterinarians surveyed, 32.1% had cases suspected of paratuberculosis in their flocks, while for 67.9%
such never happened. When veterinarians were asked if they included the diagnosis of paratuberculosis in the
differential diagnosis of the gastrointestinal diseases the majority (82.1%) answered negatively. The reasons that
justified this fact were several: 34.7% didn't consider it a common disease; 8.7% didn't have diagnosis means to
confirm it; 17.4% ignored the existence of the disease in the work area; 4.4% claimed that the disease didn't exist in
the area; 4.4% never thought about that possibility. A large majority of veterinarians (82.1%) didn't consider the
paratuberculosis a concerning disease. Eighty percent of the ones that did care considered that the disease caused
economic losses in the area, although with few damages, and just one of the inquired (20%) was concerned because
paratuberculosis is fatal, a fact that would translate in unemployment among the veterinarians of the area. Of the
respondents that didn't consider that the disease is of concern, 13.1% justified that the prevalence of this disease in
the area was low; 30.4% thought that as sheep had little economic importance the disease was not important. In this
study statistically significant difference was found among the execution of differential diagnosis with other
gastrointestinal diseases, and considering the paratuberculosis as a concerning disease, as well as among the
suspicion of the paratuberculose presence in the flocks, and the concern for the presence of the disease in the area
(p=0.007 values and p=0.022, respectively). The obtained results indicate a low sensibility to the disease, unlike
what happened in other studies. These results point out the urgent necessity to alert veterinarians for the problem of
paratuberculosis.
151
Poster 5
Epidemiologia da paratuberculose em explorações de pequenos ruminantes na Região da Grande
Lisboa
Mendes, S.1,2, Boinas, F.2, Albuquerque, T.1, Afonso, A.1 e Amado, A.1
1 LNIV, E. Benfica 701, 1549-011 Lisboa
2 FMV-UTL, A. Alam. Univ. Técnica, 1300-477 Lisboa
A paratuberculose é uma doença dos ruminantes que pode causar graves prejuízos económicos em explorações
pecuárias. No período de Maio de 2002 a Setembro de 2005 foi implementado o Projecto AGRO 137 com o
objectivo de fazer um estudo epidemiologico da paratuberculose em explorações de pequenos ruminantes, nos
concelhos de Lisboa, Amadora, Oeiras, Cascais e Sintra e, nomeadamente, estudar a prevalência da doença,
caracterizar os factores de risco para a sua transmissão e avaliar as medidas a utilizar para o respectivo controlo.
Foram seleccionadas as 66 explorações com o efectivo de 5.370 pequenos ruminantes, com uma média de 81,4
animais por exploração e representando 24,6% das explorações, e 56,2% dos animais existentes na Região. A
amostragem serológica inicial foi de 10% dos animais, tendo-se efectuado, nas explorações com animais
seropositivos, o rastreio a todo o efectivo e avaliada epidemiologicamente a situação em cada caso. Existiam
animais seropositivos em 18 explorações, o que representava 27 % das explorações amostradas, tendo sido a taxa
mais elevada em explorações com caprinos (50%) e em efectivos de aptidão leiteira (44%). Foram seleccionados
alguns animais seropositivos para isolamento do Mycobacterium avium subespécie paratuberculosis e para estudo
anátomo e histopatológico, tendo revelado uma boa concordância de resultados.
As explorações com animais seropositivos foram avaliadas para determinação dos factores de risco para a
paratuberculose e estudada a possibilidade de implementação de medidas de controlo, baseadas em métodos
sanitários.
[Epidemiology of paratuberculosis in small ruminants herds on the Region of Great Lisbon ]
Paratuberculosis is a disease of ruminants that can cause important economic losses in herds. During the period May
2002 to September 2005 the Project AGRO 137 was implemented with the objective of making an epidemiological
study in small ruminant herds in the Region including the counties of Lisboa, Amadora, Oeiras, Cascais e Sintra and
aiming, namely, to study the prevalence of the disease, characterize the risk factors for its transmission and evaluate
the measures for disease control. For the study were selected 66 herds with a stock of 5,370 sheep and goats, with an
average of 81.4 animals per herd and representing 24,6% of the herds and 56,2% of the animals in the Region. The
initial serological sampling was of 10% of the animals and, in the herds with seropositive animals, 100% of the herd
was surveyed and its epidemiological evaluation was made. There were 18 herds with seropositive animals,
representing 27% of the sampled herds, with a significantly higher rate of infection in caprine herds (50%) and in
milk producing herds (44%). Some seropositive animals were selected for isolation of Mycobacterium avium
subspecies paratuberculosis and for anatomo and histopathological studies, which showed a good agreement of
results.
The herds with seropositive animals were evaluated to determine the risk factors for paratuberculosis and for the
possibility of implementing control measures based on sanitary methods.
152
Poster 6
Evolução da infecção por Besnoitia besnoiti entre 2003 e 2005 numa exploração de bovinos de carne
no Alentejo
Cortes, H.1, Reis, Y.2, Waap, H.2, Vaz, Y.3, Nunes, T.3, Vidal, R.4, Ferreira, M.L.3, Pereira da Fonseca, I.3,
Fazendeiro, I.3, Caeiro, V.1, Leitão, A.2
1 Laboratório de Parasitologia. Núcleo da Mitra, Universidade de Évora, Ap. 94, 7002-554 Évora
2 Instituto de Investigação Científica Tropical, CVZ, CIISA, Av. da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa.
3 Faculdade de Medicina Veterinária, CIISA, Universidade Técnica de Lisboa, Av. da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa.
4 Faculdade de Farmácia, Laboratório de Engenharia Genética, Universidade de Lisboa.
A besnoitose bovina é uma doença parasitária provocada pelo Apicomplexa Besnoitia besnoiti, cujas manifestações
clínicas se confundem com as de outras afecções, sendo claramente sub-diagnosticada. A fase aguda é
habitualmente de curta duração com manifestações principalmente de caracter respiratório, ocorrendo por vezes
aborto. Na fase crónica, entre outras manifestações, surgem graves lesões cutâneas e esterilidade dos machos.
O processo de transmissão deste protozoário entre os bovinos é mal conhecido e o seu hospedeiro definitivo, embora
se postule a sua existência, nunca foi identificado. Atribui-se um papel importante aos insectos hematófagos,
enquanto vectores, na transmissão.
A doença foi identificada pela primeira vez em Portugal por Franco e Borges em finais do século XIX, é de novo
referida por Leitão em 1949 e por Malta e Silva em 1984. Desde então o número de casos clínicos diagnosticados
tem aumentado. Em África, em populações endémicas, a taxa de morbilidade é superior a 80% e a de mortalidade de
cerca de 10%. Na Europa não existe qualquer estudo sobre este aspecto.
Neste trabalho acompanhou-se a evolução da infecção por Besnoitia besnoiti numa exploração de bovinos de carne
no Alentejo com cerca de 300 animais, onde o primeiro caso clinico de besnoitiose, confirmado laboratorialmente,
ocorreu em Setembro de 2002. Procedeu-se à pesquisa de anticorpos anti-B. besnoiti por imunofluorescência
indirecta, utilizando lâminas sensibilizadas com taquizoítos propagados in vitro de isolado autóctone de B. besnoiti,
em amostras de soro de todos os animais presentes na exploração em dois momentos separados no tempo: Outubro
de 2003 e Abril de 2005. A primeira colheita de amostras revelou que 36% dos animais na população tinham tido
contacto com o agente e, na colheita seguinte, registou-se um aumento desta percentagem (70%). Considerando
apenas os animais que se encontravam na exploração nos dois momentos de colheita estes valores foram 40% e 67%
respectivamente. Os resultados observados sugerem que a infecção por B. besnoiti numa população de bovinos, após
introdução do agente, evolui rapidamente para valores próximos dos descritos para África ao sul do Saara e que não
podem deixar de se repercutir pesadamente na produção animal. A proporção de animais positivos entre os nascidos
após a primeira colheita é particularmente elevada (82%) todavia o seu significado deverá ser avaliado em trabalhos
futuros.
[Progression of Besnoitia besnoiti infection in a beef cattle unit in Alentejo from 2003 to 2005]
Bovine besnoitiosis is a parasitic disease, caused by the Apicomplexa Besnoitia besnoiti that shows clinical
manifestations common to other diseases, which leads to sub-diagnosis. The acute stage of the disease is short
lasting and, mainly, presents respiratory disorders. In this stage abortion may occur. In the chronic stage, among
other clinical signs, severe skin lesions and male infertility are patent.
The transmission of this parasite among bovine is not clearly understood and its definitive host, although its
existence has been postulated, was never identified. Biting flies are assumed to play an important role in
transmission.
Franco and Borges identified the disease in Portugal for the first time in the late XIX century, and its occurrence was
reported in 1949 by Leitão and, in 1984, by Malta and Silva. Since this last report, the number of clinical cases has
increased. In Africa, endemic populations present morbidity rates above 80% and mortality rates of about 10%. In
Europe this matter was never addressed.
In the present work, B. besnoiti infection was followed in a beef cattle unit of about 300 animals, where the first
clinical case of besnoitiosis, with laboratorial confirmation, occurred in September 2002. In October 2003 and in
April 2005 serum samples from all the animals were collected and tested for the presence of anti-B. besnoiti specific
antibodies by indirect immunofluorescence using slides sensitised with in vitro propagated B. besnoiti tachyzoites
from a Portuguese isolate. At the first sampling 36% of the animals revealed previous contact with the parasite, and
at the second sampling an increase of this proportion was observed (70%). Considering exclusively the animals that
were at the unit at both sampling occasions the values observed were of 40% and 67% respectively. Our results
suggest that the infection by B. besnoiti in a beef cattle unit, after the parasite introduction, rapidly reaches values
close to those described in Sub-Saharan Africa, which necessarily has a high impact in animal production. The
proportion of positive animals among those borne after the first sampling time is particularly high (82%). However,
its meaning has to be evaluated in future work.
153
Poster 7
Nemátodes gastrintestinais em asininos estabulados na FMV/UTL*
Madeira de Carvalho, L.M., Gomes, L., Santos, C., Rosário, M.A., Bernardes, N., Soares, M.J., Fazendeiro, I.
CIISA/FMV, Avenida da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa, Portugal, [email protected].
Os asininos (Equus asinus) são equídeos pouco estudados no nosso País, embora sejam cada vez mais utilizados como
animais de companhia, na terapia ocupacional (asinoterapia), em actividades eco-turísticas e inclusive como modelos para
o ensino Médico-Veterinário. Na Faculdade de Medicina Veterinária de Lisboa (FMV) os asininos residentes (2-3
animais/ano) estão sujeitos a vários tipos de esforços e manipulação durante as aulas, pelo que o seu estado sanitário,
nomeadamente em relação às parasitoses, deve ser avaliado regularmente.
Estes equídeos foram examinados de 2001 a 2005 para avaliação mensal do seu nível de parasitismo, com especial
incidência para as parasitoses gastrintestinais. Esta monitorização foi baseada na utilização de métodos coprológicos
qualitativos (métodos de flutuação com solução saturada de açúcar), quantitativos (método de McMaster para
determinação do nível de OPG) e coproculturas para obtenção de larvas infectantes e estudo da variação sazonal das
populações de estrongilídeos. Em Outubro de 2004 procedeu-se a uma desparasitação com ivermectina (Eqvalan® Pasta
Oral) e a sua eficácia foi avaliada até Maio de 2005 através do Teste de Redução de Contagem de Ovos Fecais (TRCOF) e
do Período de Reaparecimento de Ovos (PRO) até atingir níveis de OPG ≥ 200.
No período de 2001-05 foram estabulados no total 8 asininos (média de 3 animais/ano), os quais apresentaram uma
prevalência de 100% para o parasitismo por Strongylidae e Trichostrongylus axei. Nestes E. asinus foram ainda
assinalados animais positivos para Triodontophorus spp. (N=1), para Parascaris equorum (N=1) e também para oocistos
de Eimeria sp. (N=1). A determinação do OPG de estrongilídeos permitiu verificar que nos dois primeiros anos do estudo
os níveis foram baixos, da ordem de 200 OPG. Todavia, fruto da renovação do grupo de asininos e introdução de animais
novos o nível médio mensal de OPG subiu para cerca de 3000 a partir de 2003 e para valores superiores a 4000 OPG em
2004. O cálculo do nível médio de ovos/g permitiu calcular os valores mensais e permitiu verificar que os asininos
estabulados apresentaram dois picos de eliminação de ovos, um na Primavera (em Maio) e outro no fim do Verão (em
Setembro). Enquanto o primeiro pico pode ser explicado pela saída de larvas de ciatostomíneos após hipobiose
Outono/Invernal, o segundo pode ser consequência do seu retorno à pastagem durante os meses de Julho ou Agosto. A
desparasitação estratégica realizada com ivermectina em Outubro de 2004 teve uma eficácia de 100% na eliminação de
nemátodes gastrintestinais. O PRO foi de 8 meses, pois o nível médio de OPG permaneceu inferior a 200 ovos/g após o
seu reaparecimento em Março, até Maio de 2005. Como conclusões realçamos a importância dos estrongilídeos intestinais
e de Trichostrongylus axei neste grupo de asininos, a existência de dois picos sazonais de eliminação de ovos destes
nemátodes na Primavera e no fim do Verão. A desparasitação estratégica com ivermectina no Outono revelou uma eficácia
muito boa no seu controlo durante cerca de 8 meses.
[Gastrintestinal nematodes of stabled donkeys at the FVM/TUL]
Donkeys (Equus asinus) are equids seldom studied in our country, although they are used more often as pets, in
occupational therapy (asinotherapy), for eco-turistic activities and as models for Veterinary Medicine teaching. In the
Faculty of Veterinary Medicine of Lisbon (FVM), the donkey resident population (2-3 animals/year) are under several
types of physical efforts and manipulation during classes, reason why their health status, namely concerning parasitic
diseases, must be regularly evaluated.
These donkeys were examined from 2001 to 2005, for monthly evaluation of their parasitic level, namely regarding
gastrointestinal parasites. This study was based in qualitative coprological methods (flotation with sugar saturated
solution), quantitative (McMaster chamber for Eggs/g counts, EPG) and faecal cultures (L3 count and identification),
aiming the evaluation of strongyle seasonal variation. In October 2004 they were dewormed with ivermectin (Eqvalan®
Oral Paste) and its efficacy was evaluated till May 2005 through the Faecal Egg Count Reduction Test (FECRT) and the
Egg Reappearance Period (ERP) for values ≥ 200 EPG.
During 2001-05, eight donkeys were stabled (average 3 animals/year), with a prevalence of 100% for Strongylidae and
Trichostrongylus axei. E. asinus showed parasitism too with Triodontophorus spp. (N=1), Parascaris equorum (N=1) and
Eimeria sp. oocysts (N=1). Strongyle EPG counts were low for the first two years of study, around 200 eggs/g. However,
due to the turnover of this group of donkeys and the introduction of new animals, the average EPG per month rose until
3000 in 2003 and 4000 in 2004. The analysis of average EPG level per month for these stabled donkeys showed two peaks
of egg shedding, one in Spring (May) and the other at the end of Summer (September). While the first shift can be
explained by the maturation of cyathostomin larval stages in the lumen after Autumn/Winter hypobiosis, the second one
may be consequence of Summer grazing in July/August. The strategic deworming performed in October 2004 with
ivermectin showed an efficacy of 100% in removing gastrointestinal nematodes. The ERP was 8 months, since EPG levels
remained lower than 200 EPG after their reappearance in March until May 2005. As main conclusions, the importance of
intestinal strongyles and Trichostrongylus axei should be stressed in these equids, as well as the two sazonal EPG peaks,
in Spring and Summer. The strategic deworming with ivermectin in the Autumn showed very good efficay in their control
for at least 8 months.
*Financiado pelo CIISA/FMV, Projecto 8. Estrongilidose. Agradecimentos à “Merial Portugal” e à Dra. Ana Leal Barata
Moura pela cedência dos anti-parasitários usados neste ensaio.
154
Poster 8
Controle de aves! Como e porquê?
Simas, H.
Volataria, Apartado 274, 2504-912 Caldas da Rainha, Portugal
Algumas espécies de aves, podem constituir pragas por colidirem com actividades humanas. Causam ruído e
estragos em edifícios, máquinas e equipamentos. A limpeza dos dejectos de aves em centros urbanos em Inglaterra
custa por ano mais de 20 milhões de euros. Causam avultados estragos na agricultura por destruição e consumo de
culturas e conspurcando água e alimento de espécies pecuárias. Representam um risco para a navegação aérea, com
avultados prejuízos materiais e perigando vidas humanas. Mas, sobretudo, participam na disseminação de agentes
patogénicos graves para a saúde animal e humana como por exemplo Salmonela, Listeria, Cryptococcus spp,
Candida, Clamidea, vírus do Nilo, alguns agentes transmitidos por carraças, etc.
Na abordagem do problema das aves infestantes deverá ter-se em conta: 1) identificação das ameaças, 2) adequação
das acções às ameaças existentes, 3) implementação de medidas passivas, 4) implementação de medidas activas e
sua harmonização com a evolução das ameaças.
O uso de aves de presa é a principal medida activa para afastamento de aves infestantes. Esta técnica pode ser
complementada com meios alternativos: auditivos (pirotecnia, canhões, aparelhos de ultra-sons, gravações de
alarme), visuais (espantalhos, bandeiras, espelhos, luzes, modelos de predadores), gestão do habitat (infra-estruturas,
água, uso do solo e vegetação). Estes métodos deverão ser usados criteriosamente para manter o seu efeito dissuasor.
O seu uso continuado causa habituação acabando por perderem totalmente o seu efeito. Devem ser, portanto, usados
em conjunto com as aves de presa para que quando usados isoladamente mantenham eficácia.
A nossa actividade tem sido desenvolvida em locais onde pelas suas características e elevado número de aves
infestantes resulta prejuízo para as actividades humanas. Temos usado como técnica base aves de presa, adestradas
para o efeito, conjugando experiências nas áreas da falcoaria, agricultura, ornitologia e etologia. Desde 1999 temos
trabalhado em aterros sanitários (Lipor, Valorsul, Amarsul, Tratolixo, Resioeste, Suldouro, Resulima, Valorminho,
Citrup, Ersuc), na defesa de culturas (Companhia das Lezírias, Hectare, Horticilha) e no afastamento de pombos em
edifícios e áreas habitacionais (Pousada de Arraiolos, Hotel Albatroz, Centro Formação Profissional de Beja, etc.).
O uso de aves de presa, para além de ser a mais actual, é a que melhor eficácia e menor impacte negativo ambiental
apresenta. A máxima eficácia verifica-se quando a equipagem actua durante todo o período diurno. Em períodos de
tempo mais reduzidos (p.e. 8 horas diárias) verifica-se forte diminuição de aves particularmente quando a
equipagem está presente.
[Bird control! How and why?]
Some bird species may represent plagues conflicting with human activities. They can cause noise, damages in
buildings, machinery and equipment. The cleaning of the bird’s droppings in urban centres in England costs more
than 20 million euros per year. They can cause damage in agriculture by destruction and consumption of cultures,
spoiling water and food of breeding species. Represent a risk for aerial navigation, causing material damages and
placing human life in danger. But, above all, they participate in the dissemination of serious human and animal
pathogenic agents such as Salmonela, Listeria, Cryptococcus spp, Candida, Clamidea, West Nile virus, some tick
transmitted agents, etc.
When dealing with infesting birds, the following should be taken into consideration: 1) identification of the
menaces, 2) adequate actions to be taken to the existing menaces, 3) implementation of passive measures, 4)
implementation of active measures and there harmonization with the evolution of the menace.
The use of birds of prey is the main method for removal of infesting birds from a perimeter. This method can go
together with other methods: acoustic (pyrotechnics, canyons, ultra-sound devices, alarm recordings), visual
(scarecrows, flags, mirrors, lights, predator models) and habitat management (infra structures, water, use of the soil
and vegetation). These methods should be used parsimoniously to maintain their dissuasive effect. Their continuous
use is habit forming, ending with total loss of effect.
Our activity has been developed in areas where the characteristics of the perimeter and the high number of birds
result in a serious damage to human activities. The main technique that we have used for this purpose is specifically
trained birds of prey putting together expertise on falconry, agriculture, ornithology and ethology. Since 1999 we
have working in embankments (Lipor, Valorsul, Amarsul, Tratolixo, Resioeste, Suldouro, Amarsul, Resulima,
Valorminho, Citrup, Ersuc), in the protection agriculture (Companhia das Lezírias, Hectare, Horticilha) and in the
removal of pigeons from buildings and housing areas (Pousada de Arraiolos, Hotel Albatroz, Centro Formação
Profissional de Beja, etc.).
The use of birds of prey revealed to be the most efficient technique at removing infesting birds and it represents the
least negative environmental impact. The maximum efficacy is observed when the team works during the whole day
light period. In shorter periods of time (8 daily hours) a strong decrease in the number of birds can be observed,
particularly when the team is present.
155
Poster 9
Primeiro diagnóstico de Aethina tumida na Europa
Valério, M.J.1 e Cruz e Silva, M.P.1,2
1 Laboratório Nacional de Investigação Veterinária, Estrada de Benfica 701, 1549-011 Lisboa, Portugal.
2 Direcção Regional de Pecuária, Av. Do Mar e das Comunidades Madeirenses,23. 2º, 9000-054 Funchal, Portugal.
As A.A. descrevem a primeira observação de larvas de Aethina tumida (Murray), em abelhas Apis mellifera
ligustica, na Europa.
As larvas de Aethina tumida foram observadas sobre o “candy” que preenchia parte das gaiolas, onde foram
transportadas as rainhas, importadas do Texas, Estados Unidos da América.
Após diagnóstico à lupa estereoscópica constatou-se que as larvas apresentavam características morfológicas que
nos fizeram reporta-las à espécie Aethina tumida.
Introdução: Originário das regiões tropicais e subtropicais situadas ao sul do Shara, o Aethina tumida, classe Inseta,
ordem Coleoptera, família Nitidulidae, foi identificado pela primeira vez em 1867 por Murray e descrito como
parasita da abelha Apis mellifera capensis em 1940, por A.E. Lundie na África do Sul.
O Aethina tumida também conhecido pelo ”pequeno escaravelho da colmeia” é um parasita que realiza parte do seu
ciclo biológico na colmeia. Os escaravelhos reproduzem-se no Verão e podem viver até vários meses. As fêmeas
fecundadas depositam os ovos em massas irregulares dentro das colmeias os quais passam posteriormente a larvas,
ninfas e adultos.
Material e Métodos: Observaram-se no Serviço de Patologia Apícola 122 “gaiolas” provenientes do Texas. Estas
continham as “amas”, que foram sujeitas ao diagnóstico laboratorial no que respeita à Aethina tumida e ao
Tropilaelaps clareae, tal como o consignado na decisão comunitária 2003/881/CE.
A presença de Aethina tumida foi confirmada após observação de alguns exemplares à lupa estereoscópica. O
diagnóstico por nós realizado foi confirmado pelo Musée de Histoire Naturel de Paris.
Resultados: Após uma cuidadosa observação individual das “ gaiolas”, detectaram-se em duas delas larvas de
Aethina tumida, duas vivas e duas mortas, sobre o “candy” que tinha servido de alimento às “amas” durante o
transporte.
As larvas vivas apresentavam uma coloração branca amarelada e um comprimento respectivamente de 6 e 8 mm e
uma largura de 2,5 e 3 mm.
Conclusão: O primeiro diagnóstico da Aethinose na Europa conduziu a alteração da Decisão Comunitária
2003/881/CE de 11 de Dezembro, no que respeita a limitação de exportação de países infectados.
[First diagnosis of Aethina tumida in Europe]
The authors report the first diagnostic of Aethina tumida (Murray) larvae in honeybees Apis mellifera ligustica in
Europe. The larvae of Aethina tumida were observed on “candy” which fulfiled the boxes where the queen where
transported from Texas, U.S.A.
Introduction: Originating from tropical and subtropical region of South Shara, Aethina tumida (Class Insecta, Order
Coleoptera, Family Nitidulidae) was identified for the first time in 1867 by Murray and described by A.E. Lundie in
South Africa as a bee parasite of Apis mellifera capensis in 1940.
Aethina tumida is known as “the small beehive beetle“ and a part of its cycle is inside the hive.
The beetle reproduces during Summer and it can survive for some months. The fertilize female setlle the eggs as
irregular mass inside the hive. The eggs develop some time later in larvae, nympha and adults.
Matherials and Methods: In the Bees Pathology Service one observed 122 “cages” with the accompaning bees from
Texas. According to 2003/88/ CE the accompaning bees was observed to search Aethina tumida and Tropilaelaps
clareae. The presence os some A. tumida specimen was confirmed after microscopic observation. The diagnostic
was confirmed by the Musée de Histoire Naturel de Paris.
Results: After the study of all the cages, we observed in two cages larvae of Aethina tumida (two alives and two
deads). The alive larvae were white yellowish with a lengh of 6 and 8 mm and 2.5 and 3 mm of width.
Conclusion: The first diagnostic of Aethina tumida in Europe changed the Comunitary Decision 2003/881/CE, in
respect of the limitation of exportation of infected countries.
156
Poster 10
Parasitismo em canídeos da cidade de Vila Franca de Xira – dados preliminares*
Morgado, M.1, Crespo, M.V.1, Rosa, F.2
A inexistência de campanhas de divulgação e sensibilização para a recolha dos dejectos caninos na cidade de Vila
Franca de Xira, bem como a falta de medidas preventivas que visem minimizar os riscos de contaminação ambiental
e de Saúde Pública, conduziram a um estudo semelhante aos que foram realizados noutras áreas do Ribatejo e Oeste,
com o objectivo de determinar a contaminação parasitária em amostras de fezes de canídeos encontradas nos jardins
e vias públicas daquela cidade.
Durante o período compreendido entre Outubro de 2004 e Maio de 2005, efectuaram-se colheitas de fezes de
canídeos, nos locais acima mencionados, em duas áreas da cidade de Vila Franca de Xira, uma central e outra
periférica, integrando três zonas de colheita cada. As amostras foram sujeitas a exames coprológicos, pelos métodos
qualitativo (Willis) e quantitativo (McMaster).
De um total de 288 amostras, 43 (14,93%) apresentaram formas de eliminação parasitária com a seguinte
distribuição por áreas de estudo: área central (144 amostras, 30 positivas – 20,83%); área periférica (144 amostras,
13 positivas – 9,03%). Foram identificados ovos de espécies das famílias DIPYLIDIIDAE,
ANCYLOSTOMATIDAE, ASCARIDIDAE, TRICHURIDAE, EIMERIIDAE e SARCOCYSTIDAE.
Nas 43 amostras positivas verificou-se que a maior prevalência observada correspondeu à família
ANCYLOSTOMATIDAE (65,12%) e a menor à família DIPYLIDIIDAE (2,33%). Os géneros Toxocara, Trichuris,
Isospora e Sarcocystis apresentaram valores de 16,28%, 34,88%, 11,63% e 4,65% respectivamente.
Prevaleceram as infecções simples, salientando-se a área central que apresentou maior número de infecções triplas,
logo com maior gravidade na contaminação ambiental.
Os resultados obtidos apontam desde já para a necessidade de se implementarem medidas que visem minimizar a
contaminação parasitária.
* Estágio no âmbito do Curso de Produção Animal da Escola Superior Agrária de Santarém, conducente ao grau de
licenciado e Integrado no Projecto “Contaminação parasitária por fezes de canídeos de zonas urbanas e rurais do
Ribatejo e Oeste” da Escola Superior Agrária de Santarém (Sector de Produção Animal).
[Dog parasitism in the city of Vila Franca de Xira – preliminary data]
The absence of informative campaigns to encourage people to clean-up dog faeces from soil and on pavement by
dog owners, as well as prophylactic measures to prevent environmental contamination by parasites passing in faeces
and avoid their transmission to people, determined the study of the environmental pollution by dog contaminated
faeces in public areas of Vila Franca de Xira (VFX), which is similar to others that have already been done in
several urban areas of the Ribatejo and Oeste Region.
From October 2004 to May 2005, dog faeces samples were collected in two urban areas of VFX, one central and
other peripherical, each with three specific zones. Qualitative (Willis) and quantitative (McMaster) methods were
performed.
Out of 288 faeces samples, 43 (14,93%) were positive for parasite eggs with the following distribution by studied
areas: central area (144 samples, 30 positive – 20,83%); peripherical area (144 samples, 13 positive – 9,03%). Eggs
from species of the families DIPYLIDIIDAE, ANCYLOSTOMATIDAE, ASCARIDIDAE, TRICHURIDAE, and
oocysts from EIMERIIDAE and SARCOCYSTIDAE were identified.
In the 43 positive samples the great majority of parasite eggs were related to the family ANCYLOSTOMATIDAE
(65,12%) and the smallest belonged to the family DIPYLIDIIDAE (2,33%). The genera Toxocara, Trichuris,
Isospora and Sarcocystis showed values of 16,28%, 34,88%, 11,63% and 4,65%, respectively.
Simple infections were predominant in both urban areas, although triple infections were higher in the central one,
which contribute to a more severe environmental contamination.
These results pointed out for the need of setting prophylactic measures to minimize the parasitological
contamination by dog faeces.
157
Poster 11
Parasitismo em canídeos da vila de Coruche – dados preliminares*
Rosa, F.1, Crespo, M.V.2, Ferreirinha, D.2, Morgado, M.2
1 Instituto de Investigação Científica Tropical/Zoologia, Rua da Junqueira, 14, 1349-007 LISBOA
Com o objectivo de determinar a contaminação parasitária ambiental por fezes de canídeos encontradas nos jardins e
vias públicas da vila de Coruche, realizaram-se colheitas de fezes de canídeos nas zonas central e periférica, entre
Janeiro e Julho 2005. As amostras foram sujeitas a exames coprológicos, pelos métodos qualitativo (Willis) e
quantitativo (McMaster).
De um total de 192 amostras, 38 (19,79%) apresentaram formas de eliminação parasitária com a seguinte
distribuição por áreas de estudo: zonas central (26,04%) e periférica (13,54%). Foram identificados ovos de espécies
das famílias DIPYLIDIIDAE, ANCYLOSTOMATIDAE, ASCARIDIDAE e TRICHURIDAE.
Nas amostras positivas a maior prevalência observada correspondeu à família ANCYLOSTOMATIDAE (81,58%) e
a menor à família DIPYLIDIIDAE (2,63%). Os géneros Toxocara e Trichuris, apresentaram valores de 10,52% e
31,58%, respectivamente.
Prevaleceram as infecções simples, independentemente da área de estudo.
Até ao momento, o tipo de parasitismo evidenciado foi semelhante ao registado noutros estudos, embora a
diversidade parasitária e as prevalências sejam inferiores. No entanto, dado que o trabalho ainda se encontra em fase
inicial, os resultados não permitem ilações sobre a dinâmica da infecção.
* Integrado no Projecto “Contaminação parasitária por fezes de canídeos de zonas urbanas e rurais do Ribatejo e
Oeste” da Escola Superior Agrária de Santarém (Sector de Produção Animal).
[Parasitism in dogs from Coruche – preliminary data]
In order to determine the environment contamination by parasites passing in dog faeces in gardens and streets of
Coruche, a sampling of dog faeces were performed on central and peripherical areas of this small town, between
January and July 2005.
Qualitative (Willis) and quantitative (McMaster) methods were performed on faeces samples.
Out of 192 faeces samples, 38 (19,79%) were positive for parasite eggs with the following distribution by studied
areas: central (26,04%) and peripherical area (13,54%). Eggs from species of the families DIPYLIDIIDAE,
ANCYLOSTOMATIDAE, ASCARIDIDAE and TRICHURIDAE were identified.
In the positive samples the higher prevalence was related to the family ANCYLOSTOMATIDAE (81,58%) and the
smaller belonged to the family DIPYLIDIIDAE (2,63%). The genera Toxocara and Trichuris evidenced values of
10,52% and 31,58%, respectively.
Simple infections were predominant in both areas.
Up till now, the type of parasitism evidenced was quite similar to what was observed in other studies, although
parasites diversity and prevalence were lower. However, as this study has just begun, the results obtained still do not
allow taking definitive conclusions on the infection dynamics.
158
Poster 12
Estudo das principais doenças em gatos errantes na zona da Grande Lisboa
Pereira da Fonseca, I.M., Duarte, A., Almeida, V., Madeira de Carvalho, L.M., Meireles, J., Fazendeiro, M.I., e Vaz,
Y.
CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária, Pólo Universitário do Alto da Ajuda, Rua Prof. Cid dos Santos - 1300-477 Lisboa, Portugal
Os gatos errantes podem ter um papel importante na transmissão de vários agentes causadores de graves patologias,
pelo seu contacto directo e indirecto com a população de gatos domésticos e com o Homem.
Este estudo tem como objectivo principal o diagnóstico das várias doenças infecciosas e parasitárias que afectam
esta população, de forma a contribuir para um melhor conhecimento do seu papel na saúde animal e na saúde
pública. Foram recolhidas amostras biológicas de gatos capturados no âmbitos de programas de captura,
esterilização e retorno à origem (CER), promovidos pela Associação Protectora do Gato – CATUS, com a
colaboração de 9 clínicas veterinárias e autarquias de 6 concelhos da área da grande Lisboa. As amostras de sangue,
fezes, produto de raspagem cutânea, zaragatoa auricular e ectoparasitas de 231 gatos foram colhidas entre
Novembro 2003 e Junho 2005, juntamente com dados relativos aos animais. A amostra apresentou 68% de fêmeas, e
82% tinha idade superior a 1 ano.
São descritas as técnicas analíticas utilizadas e discutidos os resultados obtidos. Dos 184 esfregaços de sangue
observados 62,5% apresentavam formas parasitárias compatíveis com Micoplasma (Haemobartonella) felis. Duas
amostras evidenciaram Citauxzoon felis. Na pesquisa de anticorpos anti-toxoplasma (n=198) foram detectadas 48
(24,2%) amostras positivas, nas seguintes diluições: 1:40, 3 amostras; 1:80, 33 amostras; 1:160, 9 amostras;
>=1:320, 3 amostras. Na pesquisa de anticorpos anti-leishmania em 178 gatos, apenas um animal foi positivo.
Nos exames coprológicos realizados em 74 animais, apenas em 16 foram encontrados parasitas, nomeadamente
Toxocara cati (8 amostras), Isospora felis (5 amostras), Uncinaria stenocephala (2 amostras) e Ancylostoma
tubaeforme, Dipylidium caninum e Toxascaris leonina (1 amostra cada). Apenas em 2 animais surgiram mais do que
um parasita. A análise das zaragatoas rectais de 102 animais resultou apenas em 4 resultados positivos a T.cati e I.
felis. Em 180 zaragatoas auriculares encontraram-se Otodectes cynotis em 3 e Sarcoptes scabiae em 1 animais. Das
30 amostras de pêlos ou produto de raspagem cutânea evidenciou-se Cheyletiella yasguri numa amostra e Felicola
subrostrata em outra. Os resultados da identificação de ectoparasitas foram pulgas das espécies Ctenocephalides
felis, C.canis e ixodídeos dos géneros Rhipicephalus (R. sanguineus) e Ixodes.
Na pesquisa de vírus foram detectadas 10,4% de amostras positivas em 222 testadas para o FIV; 7,7% para o FeLV
(em 221 amostras) e 7,1% para o FeCoV (em 127 amostras testadas).
Isolaram-se fungos dermatófitos em 41,5% das 65 amostras analisadas: Microsporum canis em 10 amostras,
Trichophyton mentagrophytes em 9 amostras e T.verrucosum em 8 amostras.
[Study of the main diseases in stray and feral cats in the metropolitan area of Lisbon]
The stray and feral cat populations may have an important role on the transmission of several pathogenic agents, due
to its contact with domestic cats and Humans.
The main objective of this study is the diagnosis of several infectious and parasitic diseases which affect these
populations, in order to contribute to the knowledge of their potential role for the animal and public health.
Biologic samples were collected from cats captured for the sterilising (spaying/neutering) programme promoted by
CATUS (Cat Protection Association), with the collaboration of 9 veterinary clinics and municipal services of 6
counties in the metropolitan area of Lisbon - Portugal. Samples of blood, faeces, hair, skin, ectoparasites and
auricular and rectal swabs were collected from 231 cats from November 2003 to June 2005, along with data related
to the animals. The sample had 68% of females and 82% were over 1 year old.
The analytical techniques are described and results discussed. From the 184 blood smears, 62,5% had parasitic
forms compatible with Mycoplasma (Haemobartonella) felis. Two samples showed Citauxzoon felis. AntiToxoplasma antibody search in 198 samples detected 48 (24,2%) positive results in the following dilutions: 1:40, 3
samples; 1:80, 33 samples; 1:160, 9 samples; >=1:320, 3 samples. The anti-Leishmania antibodies determination in
178 cats obtained only 1 positive result.
Coprology in 74 animals resulted in 16 positives: Toxocara cati (8 samples), Isospora felis (5 samples), Uncinaria
stenocephala (2 samples) and Ancylostoma tubaeforme, Dipylidium caninum and Toxascaris leonina (1 sample
each). Only 2 animals had more than one parasite. The rectal swabs of 102 cats resulted in only 4 positives to T.cati
and I.felis. In 180 auricular swabs Otodectes cynotis were found in 3 and Sarcoptes scabiae in 1. From the 30
samples of hair and skin Cheyletiella yasguri was found in 1 and Felicola subrostrata in another. The external
parasites collected were fleas from the species Ctenocephalides felis and C.canis and ticks of the genus
Rhipicephalus (R.sanguineus) and Ixodes.
The 222 samples tested (immunoblot) for FIV antibodies, resulted in 10,4% positive results; 7,7% were positive to
FeLV antigen (in 221 samples tested by ELISA) and 7,1% to the FeCoV RNA (in 127 samples tested by RT-PCR).
Dermatophyt fungus were isolated from 41,5% of the 65 samples analysed: Microsporum canis in 10 samples,
Trichophyton mentagrophytes in 9 samples and T.verrucosum in 8 samples.
159
Poster 13
Medicina veterinária em aquários públicos
Pereira, N.
Oceanário de Lisboa, Esplanada D. Carlos I, 1990-005, Lisboa.
Com a construção de novos aquários públicos a nível nacional e internacional surgiu a necessidade e a oportunidade
da intervenção veterinária no âmbito da medicina de peixes e invertebrados.
A intervenção do médico veterinário (MV) poderá incidir sobre um espectro amplo de espécies de vertebrados como
peixes, aves e mamíferos marinhos, e invertebrados, como cnidários (corais, anémonas, medusas, etc), crustáceos e
cefalópodes. Será consoante os casos uma abordagem de grupo e ou individual.
Para além das componentes mais tradicionais como a medicina terapêutica e a profilaxia médico-sanitária, onde
participará na elaboração e execução de protocolos de quarentena e de rastreio sanitário da colecção animal, o MV
deverá estar preparado para actuar em outras áreas essenciais.
A formação técnica dos aquaristas, a elaboração de protocolos de maneio e nutricionais, a higiene e segurança dos
alimentos, a captura e transporte dos animais, a qualidade da água e do ar, o bem estar animal, a educação ambiental
e outras são áreas que poderão beneficiar da intervenção veterinária.
Assim o MV deverá ter uma cultura de actuação interdisciplinar e compreender que só com uma estreita
colaboração com técnicos como biólogos, nutricionistas, engenheiros e outros poderá aportar algo de válido a um
campo tão vasto e complexo como este.
Como as áreas de intervenção têm uma forte componente de inovação o MV deverá introduzir novas técnicas quer
nas área clínicas, cirúrgicas e profilácticas quer nas outras vertentes da sua intervenção. O MV deverá contribuir
para a disseminação dos conhecimentos adquiridos nestas áreas através da publicação de artigos em revistas
científicas.
Ao nível do ensino da medicina veterinária há um vazio no que respeita à medicina de animais não domésticos. Será
importante a incorporação destas matérias nos currículos das faculdades de medicina veterinária nomeadamente no
âmbito dos animais de zoos e aquários.
Nesta apresentação parte destas afirmações serão ilustradas com exemplos da actuação veterinária no Oceanário de
Lisboa.
[Veterinary intervention in public aquariums]
With construction of new public aquariums appeared the necessity and the opportunity of veterinary medicine
intervention in the area of captive fish and invertebrates. The veterinarian (V) must intervene, either in an individual
or a group approach, on a variety of vertebrates species such as fish, aquatic birds and marine mammals, and of
invertebrates such as cnidarids (corals, anemones, jellyfishes, etc), crustaceans and cephalopods.
Besides more traditional veterinarian tasks such as therapeutic and prophylactic medicine (where he will be involved
in clinical aspects and in elaboration and execution of quarantine and health survey protocols) the V will have to be
prepared to act in other essential areas.
Technical formation of aquarists, collaboration in husbandry and nutritional protocols development, hygiene and
food safety, animal capture and transport, water and air quality, animal welfare, environmental education and other
areas will benefit from veterinary intervention. This should be integrated in an interdisciplinary net with others
technicians as biologists, nutritionists, engineers and others, in order to achieve a valid outcome in a vast and
complex field such as this.
As innovation plays a major role in this field the V should introduce new techniques in clinical, surgical,
prophylactic and other areas. This input should be shared with the scientific community.
There is a void in veterinary medicine education regarding non-domestic animal medicine. The inclusion of these
subjects in the curricula of veterinary faculties will be important for improvement of veterinarian involvement in
zoos and public aquariums. The aforementioned will be illustrated by several examples of veterinary intervention in
the Oceanário de Lisboa.
160
Poster 14
A contribuição da Veterinária na Medicina da Conservação, perspectivas em Portugal
Pereira, N.1,2, Melo, P.3
1 Grupo Lobo. Faculdade de Ciências de Lisboa. Bloco C2, 3º piso. Departamento de Biologia Animal, 1749-016, Lisboa
2 Oceanário de Lisboa, Esplanada D. Carlos I, 1990-005, Lisboa
3 Vetnatura, Oeiras, Portugal
A Medicina da Conservação é uma área de estudo emergente, multidisciplinar, que estuda as relações entre a Saúde
Humana, Animal e a dos Ecossistemas.
Segundo Tabor, 2002, Medicina da Conservação é uma ciência interdisciplinar que estuda as múltiplas interacções
entre agentes patogénicos e doenças, por um lado, e entre espécies e ecossistemas, por outro, com o objectivo de
atingir a saúde ecológica. Há mais de setenta anos que foi reconhecido o papel das doenças na conservação da vida
selvagem. Um conjunto de problemas, como a transmissão de enfermidades entre espécies domésticas e silvestres,
emergências de zoonoses e episódios de mortalidade massiva de animais bravios, contribuíram para a
consciencialização da importância crescente das doenças. O comportamento e a ecologia das espécies bravias
podem sofrer sérias alterações afectando a sua biodiversidade e a saúde ambiental.
Frequentemente o papel do médico veterinário em projectos de conservação restringe-se à contenção e à intervenção
clínica em casos pontuais. Todavia a integração das ciências veterinárias inerente ao conceito da, Medicina da
Conservação permite alargar este papel às seguintes áreas: monitorização (redes de epidemovigilância) e controlo da
saúde animal (optimização e adequação dos métodos de diagnóstico e terapêuticos à espécies alvo); intervenção no
controlo de doenças zoonóticas; formação técnica e educação ambiental; participação na elaboração e gestão de
bases de dados biológicos (banco de tecidos) e contribuição para a elaboração de politicas ambientais.
Os autores identificaram uma lacuna na formação universitária no que respeita a esta área. Assim será necessário
incentivar o ensino das matérias respeitantes á intervenção veterinária nos animais bravios sob o prisma do
paradigma da Medicina da Conservação.
Os médicos veterinários também deverão sensibilizar as outras classes profissionais intervenientes neste campo
(biologos, médicos, economistas, sociologos, antropólogos, políticos e outros) para uma colaboração estreita e uma
maior inter-relação dos seus conhecimentos técnicos.
Em Portugal há várias áreas de intervenção onde a abordagem interdisciplinar da Medicina da Conservação deverá
ser reforçada e alargada. Nestas áreas incluem-se, entre outras: doenças víricas como por exemplo a gripe aviária e
as arboviroses; bacterioses como a leptospirose, ehrlichioses, rickettsioses, bartoneloses, borreliose, tularémia,
micobactérioses; doenças parasitárias, tomando como exemplo a triquinelose, a leishmaniose, a malária aviária; e
por fim a ecotoxicologia.
[Veterinary contribution in Conservation Medicine, perspectives in Portugal]
Conservation Medicine is an emergent multidisciplinary area of study focusing in the relations between the Human,
Animal and Ecosystems Health. According to Tabor, 2002, CM is an interdisciplinary science that studies the
multiple interactions between pathogenic agents and illnesses, on the other hand, and between species and
ecosystems, for another one, to reach the ecological health. The role of illnesses in conservation of the wildlife was
recognized more than seventy years ago. A set of problems, as the transmission of diseases between domestic and
wild species, emergencies of zoonosis and episodes of massive mortality of wild animals, contributed for the
awareness of the increasing importance of wildlife diseases occurrence. Behaviour and ecology of wild species can
undergo serious changes, which can cause a severe impact in biodiversity and in the ecosystem health.
Frequently the role of veterinarians in conservation projects is confined to restrain techniques and to clinical
intervention. However integration of veterinarians sciences inherent to the concept of Conservation Medicine,
allows to widen this role to the following areas: monitoring (surveillance networks) and control of the animal health
(optimisation and adequacy of therapeutics and diagnosis associated with wild species); intervention in the control
of zoonotics diseases; technical and environment education; participation in elaboration and management of
biological databases (tissues bank) and contribution for the elaboration of ambient policy’s.
The authors had identified a lack in college formation regarding this area. Thus it will be necessary to stimulate
education of veterinary medicine intervention in the wild animals under the scope of Conservation Medicine
paradigm.
Veterinarians should also contribute for the technical collaboration enhancement between professionals acting in
this area like biologists, human health specialists, economists, sociologists, anthropologists, politicians and others.
In Portugal there are several areas of intervention where the Conservation Medicine interdisciplinary approach
should be emphasized and extended. We indicate as examples the following areas: viral diseases like Avian
influenza and Arbovirusis; bacterial diseases like Ehrlichiosis, Rickettsiosis, Bartonelosis, Borreliosis, Tularémia
and Mycobacterium species related diseases; parasitical diseases like Trichinellosis, Leishmaniasis and Avian
Malaria; and ecotoxicology.
161
Poster 15
Detecção de Enterococos por Hibridação In Situ Fluorescente
Oliveira, M.1, Costa, P.2 e Bernardo, F.1
1 CIISA/Laboratório de Inspecção Sanitária, Polo Universitário da Ajuda, 1300-477 Lisboa
2 Instituto de Ciências Biomédicas de Abel Salazar, Largo Professor Abel Salazar, 2, 4099-003 Porto
Os enterococos patogénicos são bactérias gram-positivas responsáveis por endocardites, bacterémia, infecções do
tracto urinário, do sistema nervoso, abdominais e pélvicas, que podem ser transmitidas ao Homem através dos
alimentos. O leite, o queijo, os ovos e as carnes são algumas das fontes destes microrganismos e a sua entrada na
cadeia alimentar deve-se à aplicação de processamentos inadequados e/ou à falta de condições de higiene na
preparação dos alimentos.
Os alimentos suspeitos são analisados através de técnicas bacteriológicas de detecção e quantificação selectivas,
cujos resultados podem demorar até 7 dias. Uma vez que estas técnicas são inadequadas para a caracterização
atempada da segurança microbiológica dos produtos alimentares, desenvolveu-se um protocolo para a detecção
rápida de Enterococcus spp. baseado em Hibridação In Situ Fluorescente.
O protocolo recorreu à aplicação simultânea de duas sondas fluorescentes específicas dirigidas para o 16S rRNA:
EFAEC, descrita por Jansen et al. (2000) e EFAECI, desenvolvida através dos programas de alinhamento de
genomas bacterianos, ClustalW e NCBI BLAST. A especificidade das sondas foi estabelecida através da hibridação
com 68 estirpes de referência, correspondentes a 17 géneros bacterianos, e a 116 enterococos isolados a partir de
amostras clínicas, ambientais e alimentares.
O protocolo FISH apresentou uma especificidade de 100%, uma vez que todas as estirpes de enterococos
apresentaram um sinal de hibridação positivo com a mistura de sondas, não se tendo observado a ocorrência de
hibridação cruzada com nenhuma das outras estirpes testadas.
Estes resultados demonstram que esta técnica constitui um excelente método para a detecção rápida de Enterococcus
spp., podendo ser aplicada à análise directa de alimentos para consumo humano e animal.
[Detection of enterococci by Fluorescent In Situ Hybridization]
Pathogenic enterococci, gram-positive bacteria responsible for endocarditis, bacteraemia, urinary tract, nervous
system, abdominal and pelvic infections, can be transmitted to humans through food products. Food sources include
milk, cheese, eggs and meat products and the entrance into the food chain is due to underprocessing and/or poor and
unsanitary food preparation.
Suspect food is examined microbiologically by selective detection and enumeration techniques, which can take up to
7 days. Since these bacteriological techniques are inadequate for the timely characterization of the microbiological
safety of the food products, a protocol based on the Fluorescent In Situ Hybridization technique has been developed
for the rapid detection of Enterococcus spp..
The protocol was based on the simultaneously application of two specific 16S rRNA fluorescent probes: EFAEC,
established by Jansen et al. (2000) and EFAECI, developed through bacterial genome alignment softwares,
ClustalW and NCBI BLAST. The specificity of the probes was established through the hybridization with 68
reference strains, corresponding to 17 bacterial genus, and 116 enterococci isolated from clinical, environmental and
food samples.
The FISH protocol revealed a specificity of 100%, since all enterococci strains showed a positive hybridization
signal with the probe mixture and no cross-hybridization was observed with the other strains tested.
These results show that this technique is an excellent method for the rapid detection of Enterococcus spp., which can
be applied to the direct analysis of food and feed samples.
162
Poster 16
Ocorrência de Salmonella em linfonodos mandibulares de suínos abatidos para consumo. Um risco
para a contaminação de carcaças.
Vieira-Pinto, M.M. e Martins, C.
Dept Ciências Veterinárias. Lab. T.P.A. e Inspecção Sanitária. Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro. CECAV. Apartado 1013. 5001911 Vila Real. Portugal. [email protected]
O porco representa um importante veículo de Salmonella para o homem (Wegner et al., 1994, Baggesen et al., 1996,
Berends et al., 1998 e Blaha, 2001), podendo actuar como um portador assintomático transportando este
microrganismo em diversos tecidos tais como, o tracto digestivo e o tecido linfático associado, especialmente as
amígdalas e os linfonodos mandibulares e mesentéricos (Mogstad, 1995 e Jung, 2001). A entrada de porcos
positivos a Salmonella no matadouro, constitui um risco potencial como fonte de contaminação das carcaças e como
um factor de introdução de Salmonella no circuito alimentar.
A presença de Salmonella nos linfonodos mandibulares representa um risco para os consumidores uma vez que,
quando acompanhada por uma aparência normal dos mesmos, estes podem permanecer na carcaça após o abate
(Wood et al., 1989; Castagna et al., 2004). Por outro lado, os linfonodos mandibulares são alvo de incisões
obrigatórias no decurso da inspecção sanitária, podendo originar contaminações cruzadas através de faca o inspector
(Vieira-Pinto and Martins, 2003).
Este estudo constituiu na análise da ocorrência de Salmonella em linfonodos mandibulares de porcos abatidos para
consumo. Para o efeito, foram analisadas 101 carcaças de suínos na linha de abate de um matadouro, tendo-se
recolhido, para análise, 10 g de linfonodos mandibulares em cada uma. No laboratório (4 horas após a colheita), as
amostras foram submersas em água a ferver durante 10 segundos para descontaminar a superfície (Moo et al., 1980;
Jung et al., 2001). Posteriormente, as amostras foram diluídas em Água Peptonada Tamponada (APT Merk® –
1.07228) (1:10), homogeneizadas num Stomacher (90 segundos) e submetidas ao método de cultura convencional de
acordo com a Norma ISO 6579:2002. As colónias suspeitas de Salmonella foram confirmadas por testes
bioquímicos (reacção de oxidase, Triple Sugar Iron Agar (Oxoid®– CM277), Caldo Ureia (Merk® – 1.08483), meio
de descarboxilação de L-Lysine (Oxoid® – CM308S) e por aglutinação serológica com anti soro Poli A-I & Vi
(Difco® - 222641).
O estudo revelou a presença de Salmonella em 13 linfonodos mandibulares (12.9%) que apresentavam uma
aparência normal. Este resultado permite-nos enfatizar a importância que os linfonodos mandibulares podem
assumir como veículo de Salmonella na cadeia alimentar do homem. Com o objectivo de reduzir a contaminação de
Salmonella através destes linfonodos os autores recomendam que estes sejam removidos da carcaça após a
inspecção sanitária e sugerem que as incisões obrigatórias no decurso desta inspecção sejam feitas o mais breve e
higienicamente possível.
[Occurrence of Salmonella in mandibular lymph nodes of slaughtered pigs. A risk for carcass
contamination]
The importance of pork as a source of human salmonellosis has been shown in a number of investigations. Swine can act
as a healthy carrier of Salmonella in several tissues, such us the digestive tract and the corresponding lymphatic tissue,
mainly the tonsils and mesenteric and mandibular lymph nodes. The entry of these Salmonella-positive pigs into the
abattoirs plays a crucial role as a source of contamination of carcasses and as an important point of introduction of
Salmonella into the food chain. The presence of Salmonella in the mandibular lymph nodes can constitute a risk to the
consumer since, when with normal appearance, can remain in the head carcass after slaughter and because they are
routinely incised during sanitary meat inspection, leading to cross- contamination through inspector’s knife.
The objective of this work was the study of Salmonella occurrence in mandibular lymph nodes of slaughtered pigs pork to
define the importance that this tissue can assume as a vehicle of Salmonella. To reach this purpose, 101 animals were
sampled at one abattoir, and 10g of the mandibular lymph nodes were collected from each pork. At the laboratory (4 hours
after samples collection), the samples were submerged in boiling water for 10 seconds in order to decontaminate the
surface. After that, samples were diluted in Buffered Peptone Water (BPW Merk® – 1.07228) (1:10) and homogenised in
a Stomacher (90 seconds). All the samples were analysed by standard culture methods according to ISO norm 6579:2002
applied to the Salmonella detection in food and animal feeding stuffs. Colonies of presumptive Salmonella were
confirmed by biochemical tests (Oxidase reaction, Triple Sugar Iron Agar (Oxoid®– CM277), Urea broth (Merk® –
1.08483), L-Lysine descarboxylation medium (Oxoid® – CM308S) and serological agglutination with Poli A-I & Vi
antiserum (Difco® - 222641).
This study revealed the presence of Salmonella in 13 mandibular lymph nodes (12.9%) which were consistently normal in
appearance. These results emphasise the importance that lymph nodes can assume as a vehicle of Salmonella into the
human food chain. In order to achieve a better control of Salmonella contamination through the mandibular lymph nodes,
the authors suggests its extraction from the head carcass after slaughter. In addition, the compulsory incisions during meat
inspection must be performed as briefly and hygienically as possible.
163
Poster 17
Efeito do ph final e do tipo de embalagem no comportamento de salmonella spp. Inoculada em
carne de bovino de raça maronesa armazenada a 4ºC e 9ºC
Saraiva, C., Jardim, C., Fontes, M.C., Patarata, L., Esteves, A. e Martins, C.
UTAD, Centro de Estudos em Ciência Animal e Veterinária (CECAV), 5000-911 Vila Real, Portugal
As doenças veiculadas por alimentos continuam a constituir um assunto de grande importância na cadeia alimentar,
sendo Salmonella spp. um dos agentes mais importantes envolvidos em surtos de toxinfecções alimentares,
nomeadamente associado a carnes (CDC, 2003).
A utilização de condições especiais de embalagem- sob vácuo ou em atmosfera modificada (MAP) – visando ora
incrementar a vida útil da carne, ora por motivos de carácter tecnológico ou organoléptico, pode ter consequências
ao nível do desenvolvimento de alguns microrganismos patogénicos, eventualmente presentes na carne.
Considerando a possibilidade de contaminação da carne por Salmonella spp., a utilização da embalagem, assim
como outros factores nomeadamente o pH final, podem modificar o risco associado com a presença deste
microrganismo. O risco do agente patogénico alcançar níveis perigosos está ainda relacionado com a utilização de
temperaturas abusivas de armazenamento (Garcia de Fernando, 1995).
O objectivo deste trabalho consistiu em avaliar a influência do tipo de embalagem, pH final e temperatura de
armazenamento no comportamento de Salmonella spp. inoculada em carne de bovino.
M. Longissimus thoracis et lumborum de bovino de raça Maronesa com pH final elevado (≥6.2, n=4) e normal
(<5.8, n=4) foi retirado da carcaça 24 horas post mortem (dia 1 p.m.), seccionado, inoculado com uma suspensão de
Salmonella spp. (ca 2,0 log cfu/g), embalado (aerobiose; vácuo e MAPs -O2/CO2/N2- 70/20/10, 50/40/10,
30/60/10), armazenado a 4ºC e 9ºC e examinado nos dias 1, 3, 7, 10, 14 p.m..
Observou-se que a utilização de temperatura abusiva teve uma influência significativa no comportamento de
Salmonella spp. No dia 3 p.m., o número de patogénios era similar nas amostras armazenadas a 4ºC, e durante todo
o período de armazenamento, no entanto naquelas armazenadas a temperatura abusiva (9ºC), com pH final elevado
apresentaram um considerável aumento nas contagens. Estas diferenças detectadas a 9ºC mostraram-se mais
evidentes ao longo do armazenamento (7, 10 e 14 dias p.m.).
O efeito da embalagem não foi observado no mais curto período de armazenamento (dia 3 p.m.). Após o dia 7 p.m.,
este efeito tornou-se significativo, particularmente em carne com pH final elevado. Nestas amostras, a principal
diferença foi observada entre aquelas armazenadas em aerobiose ou vácuo e aquelas com a maior concentração de
CO2 (MAP 30/60/10).
Este trabalho foi financiado pelo programa AGRO (165).
[Effect of Ultimate pH and Packaging on the Behavior of Salmonella spp. inoculated on Beef of
Maronesa Breed at 4ºC and 9ºC]
Foodborne diseases are still a very important issue in the food chain. Salmonella spp. continues to be one of the
most important agents involved in food poisoning outbreaks, namely associated to meat (CDC, 2003)
The use of special conditions of packaging - under vacuum or modified atmosphere – aiming the increase of shelflife or for sensory/technological reasons, might have consequences on the behavior of pathogens eventually present
in meat. Considering the possibility of contamination of beef with Salmonella spp., the use of packaging might
modify the risk. Other problem that should be considered is its ultimate pH that can also modify the risk associated
to the presence of Salmonella spp. Additionally, it is established that the risk of achieve dangerous numbers of the
pathogen is related to the abuse of storage temperature (Garcia de Fernando, 1995)
The aim of this work was to evaluate the influence of meat packaging, ultimate pH and storage temperature on the
behavior of Salmonella spp. inoculated on beef.
Beef with high (≥6.2, n=4) and normal (<5.8, n=4) ultimate pH were cut, inoculated with a suspension of
Salmonella spp (ca 2,0 log cfu/g), packaged (air; vacuum; and MAP -O2/CO2/N2- 70/20/10, 50/40/10, 30/60/10),
stored at 4ºC and 9ºC and examined at days 0, 3, 7, 10, 14.
It was observed that the abuse of temperature had a significative influence on the behaviour of the Salmonella spp.
At day 3, the numbers of the pathogen were similar in samples stored at 4ºC, during all of the storage period, but,
when it was stored in an abusive temperature (9ºC), meat with high ultimate pH presented a considerable higher
counting. These differences detected at 9ºC became more evident after longer periods of storage (7, 10 and 14 days).
The effect of package was not observed in the shortest period of storage (day 3). At day 7 that effect revealed to be
significative, particularly in meat with high ultimate pH. In these samples, the main difference observed was
between those packaged under air or vacuum and those packaged under the highest CO2 MAP (30/60/10).
This work was financially supported by AGRO Program (165)CDC (2003). Center of Diseases Control. Preliminary
foodNet data on the incidence of foodborne illnesses - Selected sites, United States, 2002. MMWR; 52:340-3.
García-de-Fernando, G.D., Nychas, G.J.E., Peck, M. W., Ordóñez, J.A. (1995). Growth/ Survival of psychrotrophic
pathogens on meat packaged under modified atmospheres. International Journal of Food Microbiology, 28: 221231.
164
Poster 18
Salmonella spp. em carnes picadas e preparados de carne. Avaliação de critérios de aceitabilidade
dos lotes
Gomes, C.1, Alves, P.1, Barahona, J.1, Pereira, F.1, Sousa, A.1, Silva, M.2, Simões, E.3
1 Laboratório Nacional de Investigação Veterinária, Estrada de Benfica, 701,1549-011,Lisboa
2 Universidade Lusófona de Humanidades e Tecnologias, Av. do Campo Grande, 376,1749-024, Lisboa
3 FMV-UTL, R. Prof. Cid dos Santos, 1300-477 Lisboa
Os perigos microbiológicos associados aos géneros alimentícios constituem a principal causa de doenças transmitidas
pelos alimentos, nos seres humanos.
Os alimentos de origem animal e particularmente a carne de mamíferos, aves, ovos e o leite crú são potenciais veículos de
microrganismos patogénicos, constituindo um risco evidente quando consumidos crús ou mal cozinhados, sendo a
Salmonella spp. um dos agentes patogénicos mais frequentemente identificados com surtos de doença de origem alimentar
associados ao consumo de produtos cárneos, em especial, às carnes picadas.
A nível da União Europeia pretende-se aumentar a Segurança e Qualidade Microbiológica dos alimentos, sendo um dos
objectivos fundamentais da Legislação Alimentar Comunitária assegurar um elevado nível de protecção da Saúde Pública.
Deste modo foram estabelecidas normas gerais e procedimentos de higiene e controlo em todas as fases do processo de
produção, competindo aos operadores do sector alimentar instalar sistemas, que permitam garantir a segurança dos
géneros alimentícios e às autoridades competentes a verificação desses sistemas de segurança, de acordo com a legislação.
Assim, no momento do consumo, os géneros alimentícios não deverão conter nem microrganismos nem as suas toxinas
e/ou metabolitos em quantidades que representem um risco inaceitável para a saúde humana, tendo os operadores das
empresas do sector alimentar o dever de retirar do mercado os alimentos não seguros.
A fim de contribuir para a protecção dos consumidores e evitar interpretações divergentes, torna-se necessário em
determinados casos, estabelecer critérios específicos de segurança harmonizados, referentes à aceitabilidade dos géneros
alimentícios, designadamente no que se refere à presença de determinados microrganismos patogénicos.
Relativamente à presença de Salmonella spp. em carnes picadas e preparados de carne, foram sujeitos a discussão dois
tipos de critérios de segurança: aceitabilidade dos lotes para n=5 e c=0; aceitabilidade dos lotes para n=5 e c=1.
Nesse âmbito, foram avaliadas 58 amostras de carne picada, enviadas ao Laboratório Nacional de Investigação Veterinária
para avaliação da sua qualidade microbiológica, no que respeita à aplicabilidade destes dois tipos de critérios. Verificou-se
que a aceitabilidade dos lotes seria de 86.2%, quando n=5 e c=1(13.8% dos lotes analisados requeriam acção correctiva) e
de 77.6% quando n=5 e c=0 (22.4% dos lotes analisados requeriam acção correctiva) o que indica um aumento dos lotes
rejeitados quando se aplica um critério mais exigente.
No entanto a utilização do critério de aceitabilidade c=1 parece não indicar um risco elevado para a saúde pública se estes
produtos forem sujeitos a tratamento térmico e ficar bem claro na rotulagem a indicação para serem cozinhados antes do
consumo. Este critério foi proposto por vários países para inclusão no novo Regulamento dos critérios microbiológicos
(SANCO 4198/2001, em fase de aprovação final).
[Salmonella spp. in minced meat and meat preparation. Evaluation of criteria for batch
acceptability]
Microbiological hazards in foodstuffs form a major source of foodborne diseases, in humans.
Foodstuffs of animal origin and particularly meat, poultry, eggs and raw milk are potencial vehicles of pathogenic
microorganisms and pose a risk for public health if not properly cooked or when consumed raw.
Salmonella spp. is one of the pathogenic agents more frequently identified with foodborne outbreaks, consequent to meat
products consumption, particulary, minced meat.
Within EU, Member States are intent to increase the safety of foodstuffs and their microbiological quality and an high level of
protection for human health is one of the fundamental objective of European Food Law.
Thus, general principles were established and requirements of hygiene and control at all stages in the food chain production.
Food business operators have an obligation to implement procedures to ensure food safety and the monitorization of those
procedures by the competent authorities, according to food law requirements.
Therefore, foodstuffs must not contain microorganisms, their toxins and/or metabolites in such quantities that may constitute an
unacceptable risk for human health and food business operators have an obligation to withdraw unsafe foods from the market.
In order to contribute to the protection of public health and to prevent differing interpretations, it’s appropriate to establish
harmonised safety criteria on the acceptability of food, in particular, in what regards the presence of certain pathogenic
microorganisms.
Concerning the requirements for Salmonella spp. in minced meat and meat preparations, it was submitted to discussion to kinds
of safety criteria: acceptability of a batch, when n=5 and c=0; acceptability of a batch, when n=5 and c=1.
In this scope, 58 minced meat samples, sent to Laboratório Nacional de Investigação Veterinária for the evaluation of their
microbiological quality, were evaluated in what refers to the applicability of these two criteria. It was verified that the
acceptability of the samples was at 86.2%, when n=5 and c=1(13.8% of the samples required corrective action) and 77.6%, when
n=5 and c=0 (22.4% of the samples required corrective action) what points to an increase of rejections when more demanding
criteria are applied. Nevertheless, the application of acceptability criteria c=1 does not seem to point to a high risk to public
health if those products are submitted to thermal treatment and clearly labeled as needing to be cooked before being consumed.
The criteria was proposed by several Countries for inclusion in the Commission Regulation of microbiological croteria for
foodstuffs (SANCO 4198/2001, in phase of final approval).
165
Poster 19
Risco relativo da Escherichia coli Verotoxinogénica (VTEC) em carne de bovinos e ovinos
doméstica e importada na Suìça
Pires, S.M.1, Breidenbach, E.2
1 CIISA - FMV, Av. da Universidade Técnica 1300-447 Lisboa; [email protected]
2 Swiss Federal Veterinary Office, CH-3003 Bern.
A Escherichia coli Verotoxinogénica (VTEC) é reconhecida como um patogénio de origem alimentar de
significativa importância. A infecção pela VTEC pode causar uma ampla variedade de sintomas, desde diarreia
simples a colite hemorrágica, síndrome hemolítico hemorrágico e morte. A VTEC é isolada principalmente em
ruminantes. A prevalência da VTEC em bovinos e pequenos ruminates na Suíça e outros países pelo Mundo é
conhecida. A Suíça importa carne de bovinos (9%) e ovinos (48%), e existem diferenças significativas entre a
prevalência do agente nos diferentes países exportadores. O objectivo deste estudo foi estimar o risco representado
pela carne fresca doméstica e importada, assim como estimar o risco relativo entre a carne com as duas origens. O
risco foi estimado com base na prevalência da VTEC nas fezes de ruminantes e pequenos ruminantes nos diferentes
países, e na severidade dos isolados. A avaliação do risco foi baseada nas normas estabelecidas pelo Codex
Alimentarius.
A incidência de infecção pela VTEC em humanos na Suíça em 2004 foi de 0.5 casos clínicos por 100,000
habitantes. Apesar de o número de casos reportados ser considerado subestimado, o valor é, quando comparado com
outros países, baixo. Contudo, a prevalência da VTEC em bovinos e ovinos é significativamente elevada no país, e a
atenção para a possível contaminação dos produtos alimentares não deve ser descurada.
Considerando o risco representado pela carne fresca com origem nacional como o nível apropriado de protecção –
risco aceitável -, foi estimado que nenhum país exporta carne de bovino ou ovino como um risco mais elevado para
o consumidor Suíço. Contudo, para a carne de bovino com origem no Brasil e de ovino importada da Austrália foi
estimado um risco significativo.
[Relative risk of Verocitotoxinogenic Escherichia coli (VTEC) in imported and domestic fresh
meat]
Shigatotoxin-producing Escherichia coli (STEC) is recognized as a food-borne pathogen of major importance.
Infection by STEC is known to cause a wide range of symptoms, from uncomplicated diarrhoea to haemorrhagic
colitis, haemolytic uraemic syndrome and death. STEC has primarily been isolated from ruminants. Data for
prevalence of STEC in both cattle and sheep in Switzerland and other countries is available. Switzerland imports
beef (9% of the consumed meat) and mouton/lamb (48%), and there are marked differences in the prevalence level
of STEC between countries. The aim of the risk assessment was to estimate the risk represented by domestic and
imported fresh meat, as well as to estimate the relative risk between domestic meat and meat from the exporting
countries. The risk estimation was based on the prevalence of STEC in animal faeces and the severity of the isolated
strains.
The human incidence of STEC infection in Switzerland in 2004 was 0.5 per 100,000 inhabitants. Even though the
number of reported cases are expected to be underestimated, the value is, compared to other countries throughout
the world, low. Nevertheless, the prevalence of STEC in both cattle and sheep is significantly high in Switzerland,
and attention should be given for possible food contamination with the agent.
Considering the risk represented by domestic meat as the acceptable level of protection, no country exports fresh
meat to Switzerland with a higher risk for the Swiss consumer. However, a relevant risk for beef imported from
Brazil and mouton imported from Australia was estimated.
166
Poster 20
Qualidade microbiológica de carne de caça de ruminantes selvagens
Correia, H.1 e Veloso, G.2
1 Direcção Regional de Agricultura da Beira Interior, Castelo Branco
2 FMV, Universidade Técnica de Lisboa, CIISA, R. Prof. Cid dos Santos, 1300-477 – Lisboa. E-mail [email protected]
As espécies de ruminantes selvagens autorizadas para consumo humano e que fazem parte da caça selvagem maior
são o muflão (Ovis ammon musimon), o gamo (Dama dama) o veado (Cervus elaphus) e o corso (Capreolus
capreolus). O nosso estudo foi realizado numa empresa portuguesa que se dedica não só à actividade cinegética
como também à recolha, desmancha, preparação e comercialização de carne de caça. O abate e a evisceração dos
animais de caça foram efectuados em condições muito diferentes das dos animais de talho, em que a evisceração foi
realizada muitas horas depois do animal ser abatido e no local onde ocorreu a caçada, ou seja, sem nenhumas
condições de higiene. A esfola e a desmancha foram feitas vários dias após a evisceração, numa sala de desmancha
oficialmente aprovada. Pretendemos avaliar a qualidade microbiológica da carne de ruminantes selvagens, para o
que se procedeu à colheita de amostras após a evisceração, a esfola e a desmancha. Um total de 200 amostras,
obtidas partir de 25 animais, foram submetidas a análise microbiológica para determinação dos teores totais de
microrganismos aeróbios a 30 ºC e de Escherichia coli e ainda para pesquisa de esporos de clostrídeos sulfitoredutores. Foram utilizadas zaragatoas de gaze para a colheita de amostras de superficie - interior da cavidade
abdominal (n=50), exterior da carcaça (n=25), da pá (n=25), da perna (n=25) e do vão das costelas (n=25) – numa
área de 100 cm2. O músculo adjacente à zona de penetração do projéctil (n=50) foi colhido com o auxílio de tesoura
e pinça. Os mais elevados teores médios de microrganismos aeróbios totais foram obtidos na pá (5,93 log10 ufc/cm2),
na perna (5,77 log10 ufc/cm2) e no vão das costelas (5,60 log10 ufc/cm2) após a desmancha. Os mais elevados teores
médios de E. coli foram obtidos na superficie externa da carcaça após a esfola (1,13 log10 ufc/100 cm2) e na perna
após a desmancha (0,27 log10 ufc/100 cm2). Os esporos de clostrídeos sulfito-redutores foram mais frequentes no
músculo adjacente à zona de penetração do projéctil após a esfola (36%) e após a evisceração (32%). Os resultados
sugerem a ocorrência de contaminações cruzadas quer durante a esfola quer durante a desmancha.
[Microbiological quality of wild ruminants meat]
Wild ruminant species authorized for human consumption and that belong to the major wild hunting group are Ovis
ammon musimon, Dama dama, Cervus elaphus and Capreolus capreolu). Our study was carried out in a portuguese
hunting enterprise that also is responsible for the harvesting, cutting, preparation and trading of hunting meat.
Slaughter and evisceration of hunting animals were done in conditions quite different from that of domestic animals,
in which evisceration was done several hours after killing the animals and where the hunting took place, without any
hygienic conditions. Skinning and cutting were done several days after evisceration, in a cutting plant officially
approved. The aim of our work was to evaluate the microbiologic quality of wild ruminants meat, for which the
samples were taken after evisceration, after skinning and after cutting. A total of 200 wild ruminant samples,
collected from 25 animals, were sequentially analysed for aerobic plate counts, Escherichia coli enumeration and
presence of sulphite-reducing clostridia. After evisceration, gauze swabs were taken from the inner abdominal
surface (N=25) and excision of the muscle area wounded by the bullet was performed (N=25). After skinning, gauze
swabs were taken from the inner abdominal surface (N= 25) and from the external carcass surface (N=25) and
excision of the muscle area wounded by the bullet (N=25) was performed. After cutting, gauze swabs were collected
from the shoulder surface (N=25), from the ham surface (N=25) and from the rib surface (N=25). The area sampled
was 100 cm2 for the gauze swabs. Muscle samples were collected with tweezers and scissors. The aerobic plate
counts were found to be highest in the shoulder surface (5,93 log10 ufc/cm2), in the ham surface (5,77 log10
ufc/cm2) and in the rib surface (5,60 log10 ufc/cm2) after cutting. The E. coli counts showed the highest values in
the external carcass surface (1,13 log10 ufc/100 cm2) after skinning and in the ham surface (0,27 log10 ufc/100
cm2) after cutting. Spores of sulphite-reducing clostridia were more frequent in the muscle area wounded by the
bullet (36%) after skinning and after evisceration (32%) These results suggest the occurrence of cross-contamination
during skinning and cutting.
167
Poster 21
Micoflora dos alimentos compostos para suínos (Portugal,1995/2004)
Gouveia, M.F.1, Guerra, M.M.2, Martins, H.M.3 e Bernardo, F.M.2
1 Eurocereal – Comercialização de Produtos Agro-Pecuários S.A. – Estrada da Avessada, 2665-290 Malveira – Portugal
2 CIISA – Fac.de Medicina Veterinária, Pólo Universitário da Ajuda – Rua Professor Cid dos Santos, 1300-147 Lisboa – Portugal.
3 Laboratório Nacional de Investigação Veterinária – Serviço de Micologia – Estrada de Benfica, 701, 1549-011 Lisboa – Portugal.
As características nutricionais e sanitárias dos alimentos compostos para suínos são factores decisivos para a
rentabilidade de explorações. O desenvolvimento de fungos nas matérias vegetais que são incorporadas nas rações
têm diversas consequências. As principais são: a perda de nutrientes, a alteração organoléptica e finalmente a
produção potencial de substâncias indesejáveis, capazes de causar efeitos adversos na saúde dos animais que
ingerem as rações fabricadas com matérias primas contaminadas. O objectivo deste trabalho é divulgar os resultados
que têm sido obtidos ao longo dos últimos nove anos (1995-2004) nos exames micológicos de rações para suínos,
distribuídas em Portugal. Foram analisadas duzentos e sessenta e uma amostras de alimentos compostos (261),
aplicando métodos de análise micológica convencionais de contagem e identificação de fungos. Das rações
analisadas 90,5% exibiram contaminações fúngicas cujo o teor médio se cifrou em 4,2 log10 ufc/g. O género fúngico
que foi detectado com maior frequência foi Aspergillus (A.flavus, A.candidus, A.fumigatus, A.glacus, A.niger e
A.terreus) (93,2%). As espécies potencialmente toxígenas mais relevantes foram Fusarium spp, Penicillium spp e
Aspergillus grupo flavus, que foram detectadas em praticamente todas as amostras positivas. Os resultados permitem
constatar que as cargas fúngicas das rações parecem ter oscilações cíclicas, tendo-se registado um pico em 19971998, períodos em que os teores micológicos das rações foram significativamente mais elevados.
[Mycoflora characterisation of swine feed (Portugal, 1995/2004)]
The safety of swine feed are critical factors for farms productivity. Moulds development on feed-in stuffs used for
feed production have different consequences. Most relevant are: nutritional losses, sensorial modifications and
potential production of “non desirable substances” capable to cause adverse effects on the health of animal that
ingest those contaminated feed. The aim of this study is to present the results obtained during the last nine years
(1995/2004), on mycological test of 261 feed samples for swine, distributed in Portugal. Samples were submitted to
conventional mycological examination for quantification and identification of those fungi. Ninety percent of the
samples were contaminated with fungi with mean levels of 4.2 log10 cfu/g. The most frequently detected genera was
Aspergillus Aspergillus (A.flavus, A.candidus, A.fumigatus, A.glacus, A.niger e A.terreus) (93.2%). The most
relevant potential toxigenic species were Fusarium spp, Penicillium spp and Aspergillus grupo flavus, practically
detected in all the positive samples. These results prove that mould contamination of swine feed seems to have
cyclic variations, being registered a significant high level in 1977-1998.
168
Poster 22
Ocorrência de Fusarium verticilloides em alimentos compostos para galinhas poedeiras
Gouveia, M.F.1, Guerra, M.M.2, Martins, H.M.3 e Bernardo, F.M.2
1 Eurocereal – Comercialização de Produtos Agro-Pecuários S.A. – Estrada da Avessada, 2665-290 Malveira.
2 CIISA – Faculdade de Medicina Veterinária, Pólo Universitário da Ajuda – Rua Professor Cid dos Santos, 1300-147 Lisboa.
3 Laboratório Nacional de Investigação Veterinária – Serviço de Micologia – Estrada de Benfica, 701, 1549-011 Lisboa.
Os bolores do género Fusarium estão associados a múltiplos problemas fitosanitários em vegetais. As sementes de
cereais utilizadas como matérias primas para o fabrico de alimentos compostos para animais, estão frequentemente
colonizadas por aqueles fungos, como consequência da sua instalação nas respectivas plantas durante a sua fase do
desenvolvimento vegetativo. Ao colonizarem os cereais, alguns bolores do género Fusarium produzem uma série de
micotoxinas que têm repercussões muito negativas sobre a saúde dos animais que ingerem as respectivas rações.
Entre essas micotoxinas destacam-se: Tricotecenas (deoxinivalenol, diacetoxiscirpenol, Toxina T2), Zearalenona,
Fumonisinas, Moniliformina. Estas micotoxinas têm efeitos adversos sobre as espécies animais de produção,
especialmente as aves, suínos, vacas leiteiras e coelhos: imunosupressão, estados inflamatórios e lesionais do tracto
digestivo, hiperestrogenismo, leucoencefomalácia, edemas pulmonares, cardiotoxicidade e efeitos teratogénicos.
Fusarium verticilloides tem sido associado à produção de todos estas micotoxinas. Neste estudo apresentam-se os
resultados de ocorrência de Fusarium verticilloides em vinte e cinco (25) amostras de rações para poedeiras. As
amostras foram colhidas de diferentes lotes e submetidas a exame micológico convencional, para contagem e
identificação de Fusarium verticilloides. Constatou-se que todas as amostras estavam contaminadas com Fusarium
verticilloides em teores que variaram entre 4,2 log10 ufc/g e 5,1 log10 ufc/g. Face à elevada frequência com que este
agente se detectou em rações para aves e atendendo ao potencial toxinogénico destes bolores, deve ser dada especial
atenção a este problema, não só os operadores económicos como também as autoridades sanitárias competentes.
[Fusarium verticilloides occurrence in feed for laying hens]
Some moulds of the Fusarium genera are responsible for phytosanitary problems in several vegetables. Cereal seeds
used for feed production, are frequently colonised with those fungi, in the sequence of its infection during the
development of the crops. As consequence of this infections, some Fusaria produce many mycotoxins which have
negative repercussions on the heath of animals that ingest feed containing contaminated cereals. Among these
mycotoxins, trichothecenes (deoxinivalenol, diacetoxiscirpenol, Toxin T2), Zearalenone, Fumonisins,
Moniliformine are the most relevant. Those mycotoxins have many adverse effects on livestock, specially poultry,
swine, cattle and rabbits: immunosuppression, inflamatory lesions, and injuries in the digestive system,
hyperostrogenism, leucoencephalomaciae, pulmonar oedema, cardiotoxicity and teratogenic effects. Fusarium
verticilloides has been associated with the production of all these mycotoxins. In this study, the results of the
occurrence of Fusarium verticilloides in 25 samples of laying hens feed are presented. The samples were collected
from different batches, and tested with a conventional mycological examination for enumeration an identification of
Fusarium verticilloides. All samples revealed to be contaminated with Fusarium verticilloides with levels ranging
from 4,2 log10 ufc/g to 5,1 log10 ufc/g. Attending to the high frequency that this mould was found in the feed
samples, and considering it’s toxigenic potential, a special attention must be addressed to this problems, not only by
the economic operators but also by official sanitary authorities.
169
Poster 23
Controlo oficial dos alimentos compostos para animais: estudo comparativo entre os teores
declarados e os obtidos
Moura, S., Pinto, A., Santos, M., Barbosa, J., Cruz, C.
Laboratório Nacional de Investigação Veterinária, Estrada de Benfica 701 1549-011 LISBOA
As determinações analíticas realizadas no âmbito dos Planos Nacionais de Controlo da Alimentação Animal bem
como em resposta às solicitações de produtores para autocontrole, é da responsabilidade do Serviço de Química
Alimentar e Toxicologia do Laboratório Nacional de Investigação Veterinária.
Os Planos Nacionais de Controlo têm como principal finalidade a verificação do cumprimento da legislação em
vigor nesta matéria, assegurar a qualidade e salubridade dos alimentos compostos para animais, manter a saúde
animal, salvaguardar a saúde pública e assegurar uma concorrência leal entre os produtores. Neste contexto, as
matrizes analisadas são, entre outras, alimentos compostos para bovinos, frangos, suínos, coelhos, peixes, ovinos,
caprinos e equídeos, farinhas de origem animal, misturas minerais e águas.
As determinações realizadas incluem a pesquisa e quantificação de aditivos, micro elementos, metais pesados,
pesquisa de proteínas animais transformadas (PAT’s), pesquisa de substâncias proibidas e composição centesimal.
Estas determinações baseiam-se em metodologias normalizadas e/ou procedimentos internos.
O Regulamento da comercialização de alimentos compostos para animais aprovado pelo Decreto-lei n.º 350/90, de 6
de Novembro, prevê que sejam admitidas tolerâncias em caso de desvio entre o resultado do controlo oficial e os
teores declarados nos rótulos. Estas tolerâncias estão definidas na Portaria 1105/90 de 6 de Novembro, no caso da
composição centesimal, e na Portaria 1460/2002 de 13 de Novembro, no caso dos aditivos dos grupos dos
antibióticos e coccidiostáticos.
Pela observação directa dos resultados obtidos com os valores declarados nos rótulos, tanto na composição
centesimal como para aditivos, verifica-se que cerca de 20% das amostras se encontram fora do intervalo de
tolerância. Relativamente às substâncias proibidas, em 660 amostras analisadas, apenas uma revelou conter
clembuterol.
O objectivo deste trabalho é apresentar um sumário das actividades analíticas realizadas no primeiro semestre de
2005.
[Official Control in feedingstuffs: comparative study between analytical results and the ones
declared in the label]
The food chemistry and toxicology laboratory of the Laboratório Nacional de Investigação Veterinária is responsible
for the analytical determinations included in the national plans of animal feedingstuffs control as well as private
solicitations for auto control.
The main objective of the national plans of animal feedingstuffs control is to verify if results are within legislation
applied to the sector, assure the quality and security of animal feedingstuffs, keep animal and public health and
maintain a fair competition between producers. The feeds analyzed are, among others, cattle, poultry, pig, rabbit,
fish, sheep, caprine and equine feeds as well as animal origin flour, premixtures and water.
The analytical determinations include additive, micro elements, heavy metals screening and quantification,
processed animal proteins screening (PAP’s), screening of banned substances and centesimal composition. These
are based on standard protocols and/or internal procedures.
The commercialization of feeding stuffs regulation approved in 6th of November by Decreto-Lei nº350/90, foresees
an acceptable difference between the analytical results obtained and the ones declared on the labels. The Portaria
nº1105/90 of 6th November for centesimal composition and Portaria nº1460/2002 of 13th November for antibiotic
and coccidiostatics additives, establish these ranges.
When comparing the results declared in the labels with the analytical ones for additive and centesimal composition
determinations, it was observed that about 20% of the samples are out of the acceptable range. In 660 analysed
samples for banned substances, only one was positive for clembuterol.
The goal of this work is to present a summary of the analytical determinations done at the first semester of 2005.
170
Poster 24
Hábitos dos Consumidores Portugueses: Avaliação da estabilidade microbiológica do chouriço
tradicional
Fraqueza, M.J.1, Elias, M.2, Ferreira, M.C.1, Barreto, A.S.1
1 Faculdade de Medicina Veterinária. CIISA. Universidade Técnica de Lisboa. Av. da Universidade Técnica. Polo Universitário. Alto da
Ajuda.1300-477 Lisboa. Portugal. e-mail:[email protected]
2 Universidade de Évora, Área Departamental de Ciências Agrárias, Apartado 94, 7002-554 Évora.
O consumidor actual exige que a segurança de um alimento esteja garantida desde a produção até ao consumo,
exigência que se aplica aos produtos tradicionais como é o caso do chouriço de carne. Nesta perspectiva, pretendeuse avaliar a estabilidade microbiológica do chouriço tradicional do Alentejo, mantido em condições idênticas
àquelas utilizadas pelos consumidores. Numa primeira fase, e no âmbito do projecto TRADISAUSAGE, realizou-se
um inquérito a consumidores de chouriço tradicional, cobrindo várias regiões do país. Concluiu-se que, uma vez em
casa, o produto é, geralmente, envolvido em película plástica (32% no Norte, 46% no Sul) e mantido no frigorífico
(78% no Norte, 90% no Sul), durante 3-7 dias (23% no Norte, 46% no Sul). Iniciado o consumo, o produto continua
no frigorífico, envolvido em película, mais 3-7 dias (97% no Norte, 90% no Sul). Com o objectivo de estudar a
evolução do estado higiosanitário, adquiriram-se amostras de quatro lotes de fabrico, em venda directa em duas
unidades de fabrico de chouriço tradicional Alentejano. Cada chouriço de um lote (constituído por 21 unidades) foi
envolvido com película plástica de polivinilo, constituindo-se dois sub-lotes, um armazenado em frigorífico a 7ºC,
30 dias, e o outro mantido à temperatura ambiente (18±1ºC), 15 dias. A tempos pré-determinados foram realizadas
análises microbiológicas e físico-químicas (aw, pH, polifosfatos, nitritos e cloretos). As amostras a 7ºC foram
analisadas aos 0, 7, 15, 21 e 30 dias, e as mantidas à temperatura ambiente aos 0, 7 e 15 dias.
O chouriço apresentou-se estável, em ambas as condições de armazenamento, com valores de aw e pH, de 0,892 e
5,4, respectivamente. Os fungos, com contagens iniciais de 1,1 log ufc/g, apresentaram crescimento acentuado nos
primeiros 7 dias, aumentando significativamente (p<0,01) para 3,9 log ufc/g. As contagens de Pseudomonas spp.
aumentaram significativamente (p<0,05) de 1,6 log ufc/g para 2,1-2,7 log ufc/g, dos 0 para os 15 dias. A população
de Enterobactereaceae e de Enterococcus permaneceu estável; em relação à flora tecnológica, registou-se um
aumento significativo de Staphylococcus/Kocuria durante a primeira semana, não se verificando crescimento das
bactérias do ácido láctico durante todo o período de armazenamento.
A flora potencialmente patogénica não foi detectada no chouriço, durante o armazenamento a 7ºC ou à temperatura
ambiente. A flora tecnológica e a de deterioração não pareceram afectadas pelas condições de armazenamento
estudadas. No entanto, em ambas as temperaturas após aproximadamente 10 dias, o chouriço mostrava abundante
crescimento de bolores o que constituiu, organolepticamente, factor de rejeição.
[Portuguese consumers habits: Microbiological stability of traditional chouriço]
The consumer demand foodstuff safety ensured from production till the moment of consumption. This demand
applies also to the traditional Portuguese sausage “chouriço”. According to results from a survey to consumers, from
North to South of Portugal (on the context of the project TRADISAUSAGE), they use to store at home the
traditional chouriço after purchasing, wrapped in plastic film (32% North; 42% South) in the fridge (78% North;
90% South) during 3-7 days (23% North; 46%-South). When the product is started on, the consumers maintain the
sausages at fridge (97% North; 90% South) with the plastic film during more 3-7 days. Reproducing the main
consumer habits for storage traditional sausages, experiments have been developed to evaluate the stability of these
sausages.
Chouriço sausages (4 different lots) have been shopped directly in two workshops, on different days. Each sampling
lot of chouriços (21 units) were wrapped with plastic film (polyvinyl retail wrap) and separated in two sub-lots: 1)
kept on fridge (7ºC) during 30 days, 2) at room temperature 18±1ºC during 15 days. Microbiological and physicochemical (phosphates, nitrites, %NaCl, pH and aw) analysis were performed on sausages stored on fridge (7ºC) at 0,
7, 15, 21, 30 days and on the sausages at room temperature at 0, 7 and 15 days.
The chouriço was stable regarding the its aw and pH parameters, respectively 0.892 and 5.4. Yeast and Moulds with
a initial count of 1.1 log ufc/g had a higher rate of growth during the first seven days of storage, their counts
increased significantly (p<0,01) to 3.9 log ufc/g. Also the Pseudomonas spp counts have increased significantly
(p<0.05) from 1.6 log ufc/g to 2.1-2.7 log ufc/g, from the 0 day to the 15th day of storage. The population of
Enterobactereaceae and Enterococcus were stable during the storage period. Concerning the technological flora,
only to the Staphylococcus/Kocuria counts was observed a significantly increase during the first week of storage;
the population of the lactic acid bacteria were not affected by the storage period. The temperature of storage, 7ºC or
room temperature, did not affect the growth of the flora studied in this experiment.
The potential pathogenic flora was not detected on the traditional sausages all over the storage period, at 7ºC or at
room temperature. The chouriço kept on abuse temperature or refrigeration (7ºC), has been spoilage by
yeast/moulds, being this group responsible by sensorial quality changes (appearance) of the product and their
rejection approximately after ten days of storage.
171
Poster 25
Novas perspectivas na tecnologia de produção dos Maranhos
Salavessa, J.J. e Barreto, A.S.
CIISA – Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Técnica de Lisboa. R. Prof. Cid dos Santos, 1300-477 Lisboa
Pretendeu-se desenvolver a tecnologia de produção dos Maranhos contrariando a sua rápida deterioração,
disponibilizando o produto já cozinhado com validade alargada. Avaliou-se a acção combinada dos aditivos, nitrito
de sódio (E250), ácido ascórbico (E300), sorbato de potássio (E202) e metabissulfito de sódio (E223) em Maranhos
cozidos, embalados a vácuo e armazenados a 4ºC. Prepararam-se dois lotes de produto. L1 da forma tradicional,
adicionando 1% de NaCl, cozendo em água fervente durante 75 minutos, arrefecendo em água corrente antes de
embalar. Em L2 adicionou-se ao NaCl nitrito de sódio (1,5%) e ácido ascórbico (1,5%), o produto foi arrefecido em
solução aquosa de metabissulfito de sódio (1%) com sorbato de potássio (2,5%). Em ambos os lotes foram
recolhidas amostras aleatoriamente aos 0, 7, 14, 21 e 28 dias, a experiência repetiu-se quatro vezes. Determinaramse os valores do pH e aw, realizaram-se contagens para os microorganismos aeróbios totais a 30ºC e a 7ºC,
anaeróbios a 7ºC, Fungos, bactérias acido lácticas e Enterobacteriaceae. As características organolépticas, aspecto
geral, cor, cor ao corte, cheiro, sabor e textura foram avaliadas por um painel de 9 provadores mediante uma escala
hedónica de 5 níveis. Em L1 o pH baixou mais ao longo do tempo, de 6,31 aos 0 dias a 5,85 aos 28 dias,
significativamente diferente (p<0,01) de L2 que foi de 6,24 a 6,11. No aw não se observaram diferenças significativas
entre lotes. As contagens totais a 30ºC foram significativamente diferentes (p<0,01), ao dia 7 L1 contava 6,68 log
ufc/g e L2 2,02 log ufc/g, aos 28 dias L2 continuava com 1,89 log ufc/g. Idêntica evolução ocorreu nas contagens
totais a 7ºC e nas anaeróbias, L1 no dia 7 contava respectivamente 6,94 e 6.81 log ufc/g, L2 no dia 28 contava 1,62 e
0,65 log ufc/g. Nos bolores não se verificaram diferenças. Nas leveduras foram notadas diferenças significativas
(p<0,01), L1 apresentou sempre contagens superiores a L2, no dia O contavam-se respectivamente 1,95 log ufc/g e
0,5 log ufc/g. Em L2 não ocorreram contagens de Enterobacteriaceae, significativamente diferente de L1 (p<0,01),
com 1,56 log ufc/g no dia 0 e 7,23 log ufc/g no dia 28. Idêntico comportamento tiveram as bactérias ácido lácticas,
que em L1 cresceram de 0,99 a 7,27 log ufc/g, não crescendo em L2. O tratamento L2 associa ao alargamento do
prazo de validade do produto, a preferência significativa (p<0,01) dos provadores quanto á cor ao corte, cheiro,
sabor e textura.
[New perspectives in “Maranhos” technology of production]
The aim of the work is the development of “Maranhos” technology of production opposing to its fast deterioration,
and turning it an extended shelf life cooked meat product. The combined effect of the additives sodium nitrite
(E250), ascorbic acid (E300), potassium sorbate (E202) and sodium metabissulfite (E223) was evaluated in boiled
“Maranhos”, vacuum packed and stored at 4ºC. Two batches were prepared, L1 was prepared according to the
traditional recipe; 1% NaCl added, boiled for 75 minutes and then cooled in current water before packaging. In L2,
salt was added with sodium nitrite (1.5%) and ascorbic acid (1.5%). After boiled, the product was cooled inside a
water solution containing sodium metabisulfite (1%) and potassium sorbate (2.5%). Random samples were collected
and analysed at 0, 7, 14 and 28 days of storage and the experience repeated 4 times. Water activity (aw) and pH were
measured. Total aerobes at 30ºC and 7ºC, anaerobes at 7ºC, Fungi, lactic acid bacteria and Enterobacteriaceae
counts were made. A nine members panel, using a hedonic 5 levels scale, performed sensory evaluation. In L1 pH
dropped quickly than in L2, from 6.31 at day 0 to 5.85 at day 28, significantly different (p<0.01) from L2 that drops
from 6.24 to 6.11. No significant differences between batches were observed respecting to aw. In aerobic plate
counts at 30ºC significant differences (p<0.01) were noted, at day 7 L1 presented 6.68 log cfu/g and L2 2.02 cfu log/g
remaining 1.89 cfu log/g at day 28. Similar behaviour occurred with total counts at 7ºC and anaerobes, in day 7 L1
counted 6.94 and 6.81 log cfu/g while L2 at day 28 counted 1.62 and 0.65 log ufc/g. No differences were found in
relation to moulds. In yeasts counts significant differences (p<0.01) were noted, since the beginning L1 presented
higher counts than L2, in day 0 counts were respectively 1.95 and 0.5 log cfu/g. There was no growth of
Enterobacteriaceae in L2, significantly different (p<0.01) from L1 that increased from 1.56 at day 0 to 7.23 log cfu/g
in day 28. Same behaviour was noted in relation to lactic acid bacteria, increasing in L1 from 0.99 at day 0 to 7.27
log cfu/g at day 28 and not growing in L2. Treatment L2 extends the product shelf life and associates a significant
(p<0.01) preference on sensory analyses in relation to colour at cut, smell, flavour and texture.
172
Poster 26
Efeito inibitório do benzoato de sódio, sorbato de potássio e hidroxibenzoato de metilo em bolores
isolados de dois tipos de chouriço português
Matos, T.J.S.1,2, Jensen, B.B.1, Bernardo, F.M.A.2, Barreto, A.S.F.H.2 e Hojberg, Ø.1
1 Department of Animal Nutrition and Physiology, Danish Institute of Agricultural Sciences, Research Centre Foulum, 8830 Tjele, Denmark
2 Faculdade de Medicina Veterinária. CIISA. UTL. R. Prof. Cid dos Santos - Polo Universitário, Alto da Ajuda, 1300-477 Lisboa, Portugal
A contaminação com bolores no chouriço português embalado em atmosfera modificada pode ocorrer, provocando a
redução do prazo de validade e consideráveis perdas económicas nas indústrias de transformação. Em Portugal, à
semelhança da CE, os benzoatos, os sorbatos e os esters do ácido hidroxibenzóico, podem ser utilizados em
tratamentos de superfície aplicados nas tripas naturais do chouriço. Contudo, a resistência dos fungos a estes
conservantes, depende de vários factores tais como, o pH, o tipo e a estirpe, a concentração do conservante, os níveis
do inóculo, a composição do produto, a actividade da água, os aditivos, o tratamento físico de processamento e a
aplicação de fumo, a temperatura de conservação, a atmosfera e o período de conservação e o tipo de embalagem.
Neste contexto, foi estudado o efeito inibitório do benzoate de sódio (BS), sorbato de potássio (SP) e
hidroxibenzoato de metilo (HBM) na taxa de crescimento de bolores isolados de dois tipos de chouriço (chouriço
tipo Alentejano e tipo Ribatejano) embalados em atmosfera modificada (55% N2 / 45% CO2) após o terminus do
prazo de validade definido pela indústria produtora (120 days at 20±5ºC). A identificação dos fungos foi efectuada
através de métodos micológicos convencionais, baseados na morfologia e na caracterização fisiológica, mediante a
utilização de tabelas taxonómicas. Os ensaios preconizados para determinação dos efeitos inibitórios foram
realizados em cultura líquida (água peptonada) com pH 6.5, densidade óptica a 650 nm de 0,006 e incubação a 25ºC.
O efeito conservante inibitório foi determinado por leitura da densidade óptica, duas vezes por dia, durante 5 dias
(período de crescimento dos fungos). O HBM evidenciou um efeito inibitório superior ao BS e SP em todos os
isolados fúngicos com excepção do Aspergillus glaucus, no qual, o efeito inibitório do HBM foi semelhante ao do
SP. Na concentração de 0.05% (m/v) todos os bolores foram inibidos com o HBM à excepção do Rhizopus
stolonifer. A taxa de crescimento deste bolor só começou a decrescer na presença de concentrações de HBM
superiores a 0.1%. No que respeita ao SP e BS, o SP foi mais eficaz a inibir o crescimento fúngico
comparativamente com o BS, exceptuando-se o isolado Absidia sp, no qual, ambos apresentaram um efeito
inibitório semelhante.
[Inhibitory effect of sodium benzoate, potassium sorbate and methyl p-hydroxybenzoate on moulds
recovered from two types of Portuguese dry smoked sausages]
Mould spoilage in Portuguese chouriço packaged in modified atmosphere package may occur, reducing the shelf life
and causing substantial financial losses to manufacturing companies. In Portugal, as in the E.U., benzoates, sorbates
and the esters of p-hydroxy-benzoic acid may be used in surface treatments of dry sausages casings. However,
resistance of fungi to these preservatives depends on factors such as pH, type and strain, preservative concentration,
inoculums level, product composition, water activity, other additives, physical treatment of processing and smoke
application, storage temperature, length of storage, storage atmosphere, and type of packaging. In this contest, the
inhibitory effect of these preservatives [potassium sorbate (PS), sodium benzoate (SB) and methyl phydroxybenzoate (MHB)] was studied on the growth rate of moulds recovered from two types of Portuguese
smoked dry sausages (chouriço type Alentejano and type Ribatejano), after producer-defined shelf life period (120
days at 20±5ºC) in modified atmosphere package (55% N2 / 45% CO2). Identification of fungi was performed
according conventional mycological methods based on morphological and physiological characterisation using
taxonomic tables. Experiments of inhibitory effects were carried out on culture broth (peptone water) with pH of
6.5, optical density at 650 nm (OD650) of 0.006 and, incubation at 25ºC. Preservative inhibitory effect was
determined by OD650, twice a day, during five days (growth period). MHB showed greater inhibitory effect than SB
and PS in all fungi isolates with exception in Aspergillus glaucus, in which the inhibitory effect of MHB was similar
to PS. At 0.05% (w/v) all fungi were inhibited with MHB with exception for Rhizopus stolonifer which, only with a
concentration higher than 0.1% started to decrease the growth rate. In what concerns PS and SB, PS was more
effective to inhibit mould growth than SB, with exception in Absidia sp, in which both presented similar inhibitory
effect.
173
Poster 27
Refeições refrigeradas – avaliação da qualidade e estabelecimento da data limite de consumo
Ferreira, M.C., Fraqueza, M.J. e Barreto, A.S.
FMV-CIISA, UTL, Av. da Universidade Técnica, Pólo Universitário – Alto da Ajuda - 1300-477 Lisboa
O ritmo de vida actual, sobretudo nas grandes cidades, faz com que se recorra cada vez mais aos serviços da
restauração colectiva e do catering, nomeadamente nas escolas, hospitais e empresas. O desenvolvimento acelerado
deste tipo de serviços foi acompanhado pelo desenvolvimento da produção em larga escala de refeições refrigeradas,
as quais garantem a satisfação das exigências dos consumidores: refeições seguras e com boas características
sensoriais.
Um dos métodos utilizados na confecção de refeições para catering, é o chamado método “cook-chill”, no qual os
alimentos são confeccionados, acondicionados em embalagem adequada e rapidamente arrefecidos até 3ºC ou
menos. O produto é mantido entre 0ºC e 3ºC, até à regeneração. A data limite de consumo, da responsabilidade do
produtor, é determinada, entre outras, pelo processamento térmico utilizado e pelo tipo de embalagem, e tem que
assegurar que durante aquele período e àquela temperatura, o alimento é microbiologicamente seguro e mantém as
características sensoriais.
Algumas empresas utilizam uma variante deste método, pela qual, depois da confecção, o alimento é empratado em
couvetes que são seladas, e submetido a uma pasteurização (85ºC-95ºC), e só depois é rapidamente arrefecido.
Pretende-se, assim, uma garantia acrescida da segurança alimentar, e aumentar significativamente o tempo de vida
útil (3-4 semanas).
Neste estudo, pretendeu-se avaliar a qualidade higiénica e definir o prazo de vida útil de alguns pratos
confeccionados segundo este processo tecnológico, e que se agruparam em pratos de arroz, de carne, de bacalhau e
de peixe. Realizaram-se análises microbiológicas (Contagem de aeróbios mesófilos, enterobactérias, e fungos, por
grama; Pesquisa de Escherichia coli, Staphylococcus coagulase +, e esporos de clostrídios sulfito redutores, por
grama; Pesquisa de Salmonella em 25 gramas) e análises organolépticas baseadas numa apreciação hedónica para
quatro características – cor, sabor, cheiro e aspecto.
Os resultados obtidos revelaram produtos de boa qualidade higiénica com contagens de aeróbios mesófilos variando
entre 102 e 104 UFC/g, enquanto os indicadores de contaminação mostraram sempre valores inferiores ao limite de
detecção da técnica utilizada.
Os prazos de consumo do arroz foram estabelecidos em 3 semanas, das carnes em 4 semanas, do bacalhau em 3
semanas e dos peixes em 4 semanas. Ainda que seguros do ponto de vista microbiológico, a análise organoléptica
revelou que os pratos de peixe não foram bem aceites, sobretudo em termos de sabor e cheiro.
[Chilled meals – evaluation of quality and establishment of shelf life]
The current way of life, especially in big cities, makes it usual to use more and more catering services, namely in
school’s, hospital’s and companies. The fast development of this kind of services was followed up by the great
development in mass production of chilled meals that are able to fulfil the consumer’s demanding: safe meals with
good sensorial properties.
One of the methods used to prepare catering food is the “cook-chill”, in which the food is cooked, packed in a
proper package and quickly cooled up to 3ºC or less. It is kept between 0 and 3ºC until regeneration. Its shelf life is
of the producer’s responsibility and it is determined by the thermal processing used and the package type, and it
must ensure that during that period and at that temperature, the food is microbiologically safe and preserves its
sensorial properties.
Some companies use a variety of this method, in which after the cooking, the food is plated in a proper package
which are sealed and pasteurized (85ºC-95ºC) and just then, they are quickly chilled. With this variety of the
method, it is intended to ensure a greater food safety and to increase its shelf life (3-4 weeks).
In this study, it was intended to evaluate the hygienic quality and to establish the shelf life of some meals cooked
according to this technological process, which were divided in rice, meat, codfish and fish plates. Microbiological
analysis included Mesophylic total plate count, Enterobacteriacea, fungi, Escherichia coli, sulfite reducing
Clostridia spores, Staphylococcus coagulase + and Salmonella; organoleptic analysis was based on an hedonic
appreciation according to four characteristics: colour, flavour, smell and appearance.
The results of the study revealed products with good hygiene quality (mesophylic total plate count varying between
102 e 104 CFU/g) and the faecal contamination indicators showed always values below the method’s detection limit.
The shelf life of the rice and codfish plates was established in 3 weeks, while the meat and fish plates had a 4 weeks
shelf life. The organoleptic analysis revealed that the fish plates were not well accepted, specially in matters of
flavour and smell.
174
Poster 28
Segurança Alimentar / Porto Euro 2004
Santos, M.C.T.1, Vaz, Y.2, Niza-Ribeiro, J.3
1 Faculdade de Ciências da Nutrição e Alimentação – UP
2 Faculdade de Medicina Veterinária – UTL.
3 Instituto de Ciências Biomédicas Abel Salazar - UP.
Apesar dos enormes avanços na ciência e tecnologia alimentar, a segurança do fornecimento de alimentos é, ainda
hoje, no início do terceiro milénio, um motivo de preocupação. Decididamente a temática envolvente da segurança
alimentar continuará a ser objecto de permanente preocupação no século XXI. A realização de quaisquer eventos de
natureza lúdico-desportiva de grande dimensão, como o Euro 2004, favorece alterações ou desvios da ordem e da
organização a vários níveis entre os quais a segurança alimentar.
Realizou-se, um estudo observacional, descritivo e prospectivo, no âmbito do Euro 2004, com o objectivo de
diagnosticar e analisar as condições higio-sanitárias em 30 restaurantes da cidade do Porto.
A recolha de dados foi feita em dois momentos consecutivos no tempo: antes do Euro (fase Pré-Euro) e durante o
Euro (fase Euro), sempre através do mesmo inquiridor. Recorreu-se a um questionário de inspecção higio-sanitária,
com 160 parâmetros organizados em 13 domínios de avaliação, complementado por uma grelha de pontuação.
Os resultados mostram que 16 (53,3%) restaurantes mantiveram inalterados todos os parâmetros inspeccionados,
registando-se alterações nos outros. Na apreciação quantitativa (parâmetro a parâmetro), 10 estabelecimentos
pioraram, 4 melhoraram, os demais mantiveram. Nos 13 domínios de avaliação considerados, 5 não sofreram
qualquer tipo de alteração. Os restantes, apresentaram uma média quantitativa por domínio menor na 2ª avaliação.
Onze dos treze domínios apreciados obtiveram um valor percentual superior a 50%. Nos outros dois domínios,
“Condições do Pessoal Manipulador de Alimentos” e “Autocontrolo” o valor não atinge os 50%.
Na 1ª avaliação qualitativa, verificou-se que, 6 estabelecimentos obtiveram classificação final Não Aceitável
(20,0%), 16 Aceitável (53,4%), 4 Bom (13,3%) e 4 Muito Bom (13,3%) e na 2ª avaliação todos mantiveram a
classificação com excepção de 1 restaurante (3,3%) que passou de Bom para Aceitável.
O facto de não se terem verificado alterações na classificação final entre os dois momentos de avaliação e de, na
totalidade dos estabelecimentos, 5 dos domínios se terem conservado inalteráveis, persistindo alguns em avaliações
negativas pode ser imputável à proximidade temporal das avaliações.
Os resultados deste trabalho não permitiram evidenciar que a realização do Euro 2004 tenha sido motivo de
alteração das condições gerais de higiene dos estabelecimentos da cidade, repercutindo-se negativamente nestas.
[Food safety / Oporto Euro 2004 - hygienic and sanitary self-control in oporto restaurants during
the Euro 2004]
In spite of the huge progress in food science and technology, the safety of food supply remains a matter of concern
in the dawn of the third millennium. It is quite clear that constant attention will be given to the topic of food safety
in the 21st century. The staging of major entertaining or sports events, like the Euro 2004, is often accompanied by
changes and deviations from habits in established practices in different branches of activities, among which those
concerning food safety.
In the context of the Euro 2004, an observational, descriptive and prospective study was made on 30 restaurants in
Porto with the purpose of analysing and assessing their hygienic and sanitary conditions.
Data were collected in two consecutive moments, before the Euro 2004 and during the event, always by the same
enquirer. This was done by means of a hygienic and sanitary inspection questionnaire with 160 parameters
organized in 13 areas, coupled to an evaluation form (grid).
The results show that on 16 restaurants (53,3%) all the parameters checked remained unchanged. The quantified
evaluation (parameter by parameter) reveals that 10 out of the 14 remaining establishments performed worse and 4
performed better. Out of the 13 evaluation areas considered, 5 showed no change. On each of the other areas, the
average performance was worse on the second evaluation. On 11 out of the 13 areas, the performance was above
50%. On the two other areas, "Conditions of the personnel handling foodstuffs" and "Hygienic and sanitary selfcontrol" the performance was below 50%.
On the first qualitative evaluation 6 establishments (20%) obtained the final classification "Non Acceptable", 16
(53,3%) "Acceptable", 4 (13,3%) "Good" and 4 (13,3%) "Very good" and on the second evaluation all obtained the
same classification except one (3,3%), that stepped back from "Good" to "Acceptable".
The fact that no significant changes were observed in the final classification between the evaluations, that 5 areas in
all establishments remained unchanged, and that some underperformances were confirmed, may be attributed to the
temporal proximity of the evaluations.
The results of this work don't show evidence that the staging of Euro 2004 induced a change in the general hygiene
conditions of the establishments in the city. On the contrary, it may have had some negative repercussions on them.
175
Poster 29
Concepção e validação de um questionário padronizado e da respectiva grelha de avaliação higiosanitária, destinado a estabelecimentos de restauração
Santos, M.C.T.1, Niza-Ribeiro, J.2
1 Faculdade de Ciências da Nutrição e Alimentação - UP
2 Segalab, S.A.; Instituto de Ciências Biomédicas Abel Salazar - UP.
Um dos maiores problemas quando se promovem acções inspectivas a estabelecimentos de restauração é a dificuldade em
quantificar de forma objectiva o seu nível de desempenho higio-sanitário e de o comparar com o de outros
estabelecimentos. Outra dificuldade é a possibilidade de relacionar o resultado da inspecção com a lei em vigor. Esta
dificuldade deve-se à aplicação generalizada de diferentes critérios e métodos de inspecção. A uniformização de critérios e
métodos é pois uma necessidade. Um referencial de inspecção único, facilitaria a tarefa dos inspectores, melhoraria a
eficácia dos serviços e entidades com responsabilidades nesta área e permitiria uma melhor coordenação da sua actividade.
Seria também uma mais valia para os proprietários dos estabelecimentos e para o pessoal manipulador pela uniformidade e
consistência na comunicação dos resultados, quando as avaliações são feitas por entidades diferentes.
O objectivo deste trabalho foi conceber e validar um inquérito para avaliação do nível de desempenho higio-sanitário dos
estabelecimentos de restauração, de forma sistemática, completa e quantificada, fundamentado na lei e nos princípios
gerais de higiene. A sua finalidade é poder classificar de forma objectiva o desempenho de um estabelecimento e comparar
as classificações entre estabelecimentos avaliados por diferentes inspectores mantendo os resultados comparáveis.
Recolheu-se a legislação Portuguesa aplicável e ao documento com os Princípios Gerais de Higiene (Comissão do Codex
Alimentarius), para identificar e sistematizar, de forma exaustiva, os pontos a inquirir obrigatoriamente numa inspecção
deste tipo. Depois criou-se um inquérito, organizado em 13 domínios de avaliação, cada domínio incidindo sobre vários
parâmetros, num total de 160. Os parâmetros foram formulados sob a forma de questões, com resposta fechada de
categorização dicotómica (sim/não). Para construção da grelha de avaliação, cada parâmetro foi valorizado em quatro
níveis e, quando a resposta foi Sim atribuiu-se 1 a 3 pontos, de acordo com a importância do item para a SA, quando foi
Não atribuiu-se 0. A cada domínio, por sua vez, foi imputada uma ponderação específica atribuída em função da sua
importância para a segurança alimentar, na operação do estabelecimento. A ponderação dos domínios teve por finalidade
enfatizar aqueles em que a atitude pessoal e os procedimentos e consciência dos manipuladores são essenciais. A cotação
final foi obtida através da seguinte fórmula: Pontuação final do estabelecimento = ∑ domínio 1domínio 13 (∑ pontuação
parâmetros x ponderação domínio), expressa em percentagem. O inquérito foi testado de forma repetida em 30
estabelecimentos, provando ser simples, objectivo, vantajoso em termos de tempo necessário e de fácil tratamento.
Verificou-se que este fornece informações relevantes sobre as infra-estruturas, as instalações/equipamentos, os
procedimentos humanos e técnicos e o grau de implementação do autocontrolo de cada estabelecimento e permite a
desejável comparação do nível de desempenho hígio-sanitário dos resultados, entre os diversos estabelecimentos
avaliados.
[Conception and validation of a standardized questionnaire and of its hygienic and sanitary
evaluation grid, intended for catering establishments]
One of the major problems faced by inspection actions on catering establishments lies in the difficulty to quantify
objectively their hygienic and sanitary performance level and to make comparisons between establishments. Another
difficulty consists in relating the results of each inspection with the legislation applied and it derives from differences in
the criteria and inspection methods used. Standardized criteria and methods are therefore needed. A single inspection
pattern would facilitate the task of inspectors, improve the efficiency of the services and bodies responsible in this area,
and allow for better coordination in their activities. Standardisation and consistency in the transmission of results would
also be useful for establishment owners and handling personnel when assessments are made by different bodies. The
purpose of this work is to conceive and validate a questionnaire for the systematic, thorough and quantified assessment of
the hygienic and sanitary performance of catering establishments, based on the applied legislation and the general
principles of hygiene. It aims at objectively classifying the performance of an establishment and making comparable the
results obtained by different establishments controlled by different inspectors. The Portuguese legislation applicable was
collected and code of good practice in food hygiene from the Codex Alimentarius Commission followed, in order to
identify and thoroughly systemize the items to be inquired in such an inspection. Then, a questionnaire was conceived,
organized in 13 evaluation areas, each of them focussing on a number of parameters, in a total of 160. The parameters
were formulated on the form of questions with a closed binary (yes/no) answer. In the evaluation form each parameter was
divided in four levels, each yes–answer obtaining 1 to 3 points according to the importance of the answer to the food
safety, and each no–answer obtaining 0 points. At the same time, each area was given a specific weight, according to its
importance to food safety in the establishment's operation. The weighting of the different areas aims at highlighting those
where the attitude, behaviour and awareness of the handling personnel are decisive. The final classification was obtained
from the following formula: Final classification of the establishment = Σ area 1/area 13 (Σ parameters classifications x
area weighting) expressed in percentage. The questionnaire was tested on a number of occasions on 30 establishments and
proved to be simple, objective, less demanding in time and easy to handle; it provides relevant information on
infrastructure, facilities and equipment, human and automated procedures, and the degree of self-control implemented by
each establishment; and it allows for the desired comparability of the hygienic and sanitary performance of the
establishments assessed.
176
Poster 30
Desenvolvimento de um sistema informativo para apoio à Inspecção Sanitária em matadouros de
suínos
Tavares Santos, P.1 e Melo, M.2
1 Direcção Regional de Agricultura do Ribatejo e Oeste
2 FMV-UTL, R. Prof. Cid dos Santos, 1300-477 Lisboa
A noção de segurança alimentar “do prado ao prato” implica um sistema de Inspecção integrada, que englobe toda a
informação desde a exploração de origem até ao matadouro. Passa-se assim de um controlo limitado às lesões
patológicas dos animais abatidos para um conceito de matadouro como observatório epidemiológico do que se passa
a nível da exploração, e, com o actual desenvolvimento das tecnologias de informação e de comunicação, oferecemse novas possibilidades de recolha, tratamento, armazenamento e transmissão da informação.
Neste contexto, parece oportuno desenvolver um método de recolha, tratamento e análise de dados provenientes da
Inspecção Sanitária de suínos.
É assim proposto um Sistema Informativo para Matadouros de Suínos em Portugal, com criação de formulários para
a recolha de dados, desenho e criação de uma base de dados e criação de um programa informatizado. São ainda
enumeradas as dificuldades encontradas para a criação do sistema e os pré-requisitos necessários ao funcionamento
do mesmo.
A análise dos dados obtidos permite exemplificar a enorme quantidade de informação com relevância estatística e
epidemiológica que é possível retirar de um sistema deste tipo, assim como outras possíveis utilizações do sistema
[Completion of an information system for swine slaughterhouses that will support decision making]
The concept of food safety “from farm to fork”, implies an integrated food inspection system, involving all the
information since the farm of origin of the animal to the slaughterhouse. This system will allow changing from an
inspection control almost limited to the observation of pathological lesions of slaughtered animals to the concept and
operation of the slaughterhouse as an epidemiological observatory for the events at farm level. With the
development of new information and communication technologies, new possibilities are opened for the collection,
processing, storage and information delivery.
Due to the present situation, it seems appropriate to develop a system to collect, process and analyse data from pig
slaughterhouses. In this context a Computerised Information System for Swine Slaughterhouses in Portugal is
proposed, as well as forms for data collection.
Difficulties raised during the design and development of the system are described as well as the pre-requisites
needed to its implementation.
The outputs of the system allow us to demonstrate the huge amount of information with statistical and
epidemiological relevance, possible to be obtained from this type of system.
177
Poster 31
Valor nutricional da gordura intramuscular da carne Mertolenga-DOP
Alfaia, C.M.1, Ribeiro, V.S.1,2, Quaresma, M.G.1, Martins, S.V.1, Portugal, A.P.V.3, Fontes, C.M.G.A.1, Castro,
M.F.2, Bessa, R.J.B.3 e Prates, J.A.M.1
1 Faculdade Medicina Veterinária, CIISA, Av. Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa.
2 Faculdade Farmácia, CECF, Av. Professor Gama Pinto, 1649-003 Lisboa.
3 Estação Zootécnica Nacional, INIAP, Fonte Boa, 2000-763 Vale de Santarém.
O objectivo deste trabalho foi avaliar o valor nutricional da gordura intramuscular da carne Mertolenga com
Denominação de Origem Protegida (DOP) e comparar esta carne com a carne obtida a partir de novilhos cruzados
Alentejana×Charolais criados em sistema intensivo típico à base de concentrados. Esta caracterização, efectuada nos
músculos longissimus thoracis (LT) e semitendinosus (ST), foi baseada no colesterol total, lípidos totais, somatórios
parciais dos ácidos gordos {SFA, MUFA, TFA, PUFA, n-6 and n-3 PUFA, ácidos gordos hipocolesterolémicos (h) e
ácidos gordos hipercolesterolémicos (H)} e nos índices nutricionais relacionados com a saúde humana – razões n6/n-3, PUFA/SFA, h/H e proporção do CLA total relativamente aos ácidos gordos saturados e colesterol total
(CLA/SFA+CHR). Adicionalmente foram também avaliadas as variações sazonais, analisando amostras da carne
Mertolenga-DOP de animais abatidos no início do Outono (amostragem de Outubro) e no fim da Primavera
(amostragem de Junho). Os novilhos da raça Mertolenga foram criados em pastagem com acabamento a concentrado
nos últimos 3 ou 5 meses (sistema de produção semi-extensivo). Os novilhos foram abatidos em Outubro de 2002
(n=15; média ± erro padrão da idade e peso da carcaça foi 17±0,7 meses e 239±7 kg) e em Junho de 2003 (n=15;
24±0,7 meses e 231± 8 kg). Os novilhos cruzados Alentejana×Charolais (n=15) do sistema de produção intensivo
convencional foram mantidos confinados e alimentados com concentrado comercial, sendo posteriormente abatidos
em Outubro de 2002, com 20±0,5 meses e 388±12 kg. Interacções significativas entre o grupo experimental de
animais e o tipo de músculo foram observadas para os ácidos gordos n-3 (p<0,001), para o teor de colesterol total e
para as razões n-6/n-3 e PUFA/SFA (p<0,05). Contudo, variações sazonais entre a carne Mertolenga-DOP foram
apenas observadas para os TFA (p<0,05), cujos valores foram superiores para a carne proveniente dos novilhos
abatidos no Outono. Os lípidos totais (p<0,01), os SFA e os ácidos gordos hipercolesterolémicos (p<0,05) foram
significativamente mais elevados na carne Mertolenga-DOP comparativamente à carne obtida a partir de novilhos
cruzados. Ao contrário, a carne proveniente dos novilhos cruzados apresentou valores superiores de ácidos gordos n6 (p<0,05). O tipo de músculo teve um efeito significativo em todos os parâmetros analisados, excepto no índice
nutricional CLA/SFA+CHR (p>0,05). Numa perspectiva de nutrição humana, os resultados indicam que a carne
proveniente dos novilhos abatidos na Primavera apresenta melhor valor nutricional que a carne obtida dos animais
abatidos no Outono. Além disso, e apesar da carne proveniente dos novilhos cruzados alimentados intensivamente a
concentrado apresentarem valores mais baixos de colesterol total, que é mais desejável, a razão n-6/n-3 parece ser
mais favorável para a carne Mertolenga-DOP durante todo o ano.
Agradece-se o financiamento através dos projectos CIISA/2002/52, POCTI/CVT/2002/44750 e AGRO/2003/512.
[Nutritional value of intramuscular fat of Mertolenga-PDO beef]
The aim of this work was to evaluate the nutritional value of intramuscular fat of Mertolenga beef produced under the
Protected Designation of Origin (PDO) certification and to compare it with the meat obtained from Alentejana×Charolais
crossbred bullocks produced in a typical intensive concentrate-based system. This characterisation, assessed in
longissimus thoracis (LT) and semitendinosus (ST) muscles, was based on total cholesterol, total lipids, partial sum of
fatty acids {SFA, MUFA, TFA, PUFA, n-6 and n-3 PUFA, hypocholesterolaemic (h) and hypercholesterolaemic (H) fatty
acids} and related health indexes - n-6/n-3, PUFA/SFA, h/H ratios of fatty acids, and proportion of total CLA relative to
saturated fatty acids plus total cholesterol (CLA/SFA+CHR). In addition, seasonal changes were also assessed by
analysing meat samples of Mertolenga-PDO from animals slaughtered in early Autumn (October sampling) and late
Spring (June sampling). Mertolenga purebred bullocks were raised on pasture and finished on concentrate in the last 3 to 5
months (semi-extensive production system). Bullocks were slaughtered in October 2002 (n=15; mean ± SE of age and
carcass weight were 17±0.7 months and 239±7 kg) and in June 2003 (n=15; 24±0.7 months and 231± 8 kg).
Alentejana×Charolais crossbred bullocks (n=15) from the conventional intensive production system were maintained
confined and fed with a commercial pelleted concentrate, and slaughtered in October 2002, with 20±0.5 months and
388±12 kg. Significant interactions between the experimental group of animals and muscle type were observed for n-3
fatty acids (p<0.001), total cholesterol content, n-6/n-3 and PUFA/SFA ratios (p<0.05). However, seasonal variations
between Mertolenga-PDO beef was observed only for TFA (p<0.05), with values higher in meat from Autumnslaughtered bullocks. The total lipids (p<0.01), SFA and hypercholesterolaemic fatty acids (p<0.05) were significantly
higher in Mertolenga-PDO beef when compared with intensively produced crossbred beef. In contrast, the meat from
crossbred bullocks showed higher values of n-6 (p<0.05). Muscle type had a profound effect on all parameters analysed,
except for the nutritional ratio CLA/SFA+CHR (p>0.05). From a human nutrition perspective, the data indicate that beef
from Spring-slaughtered bullocks is of greater nutritional value than that obtained from Autumn-slaughtered animals.
Moreover, although beef from crossbred bullocks fed intensively with concentrate depicted lower values for total
cholesterol, which is more desirable, the ratio n-6/n-3 seem to be more favorable for Mertolenga-PDO throughout the year.
Financial support by projects CIISA/2002/52, POCTI/CVT/2002/44750 and AGRO/2003/512 is acknowledged.
178
Poster 32
Interferência de resíduos de antibióticos na produção de iogurte
Carrapiço, B., Rodrigues, A.L., Correia, M.I., Belas, A., Santos, A.I., Moreira, A.S., São Braz, B., Jorge Silva, A.
Na sequência dos estudos que temos vindo a desenvolver nos últimos anos, pretendeu-se com este trabalho avaliar a
interferência de resíduos de antibióticos na produção de iogurte. O não cumprimento das boas práticas de
administração dos antibióticos, nomeadamente o desrespeito pelos intervalos de segurança, têm muitas vezes como
consequência a presença de níveis de resíduos de antibióticos no leite ou em produtos lácteos seus derivados.
Os antibióticos objecto do presente estudo, foram a tetraciclina, a benzilpenicilina, a amoxicilina, a espectinomicina
e a espiramicina, alguns dos mais utilizados em terapêutica veterinária a nível nacional.
Os parâmetros que considerámos para avaliação foram o pH e a consistência.
Na primeira parte do trabalho procedemos à identificação de uma cultura de iniciação (Starter), habitualmente
utilizada para a produção industrial de iogurtes.
A identificação foi realizada com os meios de cultura Muller- Hinton leite e Muller-Hinton agar e com coloração de
Gram, tendo sido identificados dois tipos de colónias, Lactobacillus bulgaricus e Streptococcus thermophilus.
A padronização do iogurte foi realizada pelo valor de pH e pela consistência, tendo sido obtidos como valores de
referência respectivamente 4.19± 8.9*10-3 e 1.46±0.10 s.
O passo seguinte consistiu na adição ao leite de antibióticos correspondente a 0.5 do LMR, e na concentração
correspondente ao LMR de cada antibiótico.
Na análise dos resultados utilizaram-se métodos estatísticos que permitiram fazer uma avaliação do pH e da
consistência em relação ao branco.
Com estes resultados pode-se concluir que a presença de antibióticos mesmo nos valores legais de LMR e 0.5 LMR,
é susceptível de interferir nos parâmetros de qualidade avaliados, podendo determinar a necessidade de modificar o
tempo de incubação estipulado, de modo atingir o objectivo tecnológico do fabrico do iogurte.
[Antibiotic residues interference in yogurt production]
In the sequence of the methods developed in our laboratory, in the last years, this work intended to evaluate the
interference of antibiotics residues in the yogurt production. The absence of fulfillment requirements of good
practical antibiotics administration, namely the disregard of the withdrawl time, have, as consequence, the presence
of antibiotics residues in milk or in milk products.
The molecules used in the present study, were tetracycline, benzilpenicillin, amoxicillin, spectinomycin and
spiramycin, representing, in Portugal, the more frequent antibiotics used in veterinary therapeutic.
The parameters chose for yogurt evaluation were pH and consistency.
In the first part of the work we made the identification of a culture of initiation (Starter), usually used in the
industrial production of yogurts. The identification was carried out with the culture medium of Muller- Hinton milk
and Muller-Hinton agar and with Gram stained, having been identified two kinds of colonies, Lactobacillus
bulgaricus and Streptococcus thermophilus.
For the yogurt standardization the pH value (pHmeter) and the consistency (adapted texturemeter) had been
evaluated, and the obtained reference values were respectively 4.19± 8.9x10-3 and 1.46±0.10 s.
The following step consisted in spike the milk with each of the antibiotics, at LMR and half LMR value.
In the results analysis it was used a statistical approached, comparing the test groups and the blanks.
With these results we are able to conclude that the presence of antibiotics, even in the lawful values of LMR and 0.5
LMR, is open to interfere with the quality parameters evaluated in this assay, under the conditions described above.
Therefore, the time of incubation stipulated may have to be modified, in order to reach the technological objective of
the yogurt production.
179
Poster 33
Variação sazonal das vitaminas antioxidantes lipossolúveis na carne de vitela Arouquesa-DOP
Quaresma, M.A.1, Alfaia, C.M.1, Bessa, R.J.B.2 e Prates, J.A.M.1
1 Faculdade Medicina Veterinária, CIISA, Av. Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa.
2 INIAP, Estação Zootécnica Nacional, Fonte Boa, 2000-763 Vale de Santarém.
O objectivo deste estudo consistiu em avaliar a variação sazonal das principais vitaminas lipo-solúveis com
actividade anti-oxidante (α-tocoferol, γ-tocoferol e β-caroteno) na carne de vitela Arouquesa-DOP. Vitelas de raça
Arouquesa (abatidas na Primavera: n=19; 219±54 kg peso de carcaça e 8±1 meses de idade; abatidas no Outono:
n=14; 203±37 kg peso de carcaça e 8±1,5 meses de idade) foram criadas de acordo com as especificações DOP, e as
amostras de carne do acém (LT; T1-T3 músculo longissimus thoracis), da vazia (LL; L4-L6 músculo longissimus
lumborum) e do ganso redondo (ST; porção distal do músculo semitendinosus) foram recolhidas 2-3 dias após o
abate (+1ºC). As amostras foram individualmente processadas usando a picadora (3×5 s), embaladas a vacuo e
preservadas a -80ºC até ao momento da análise. Ambos os tocoferois e o beta-caroteno foram simultaneamente
quantificados por cromatografia de HPLC em fase directa, utilizando 2 detectores em série (fluorescência e detector
de espectofotometria de UV e visível por fotodiodos, aplicados em série).
A carne de vitela Arouquesa-DOP apresentava teores de α-tocoferol na Primavera (4,8±1,5 µg/g carne) inferiores
(p<0,01) aos verificados no Outono (5,8±2,4 µg/g carne). Similarmente, os teores de γ-tocoferol na carne de vitela
Arouquesa-DOP na Primavera (0,07±0,03 µg/g carne) foram inferiores (p<0,01) aos teores registados no Outono
(0,23±0,16 µg/g de carne). Contrastando com os resultados anteriores, os teores de β-caroteno na carne de vitela
Arouquesa-DOP na Primavera (0,27±0,1 µg/g de carne) foram superiores (p<0,01) aos valores registados nas vitelas
abatidas no Outono (0,12±0,06 µg/g carne). A carne das vitelas de raça Arouquesa-DOP abatidas na Primavera
apresentavam maiores teores de β-caroteno, enquanto as abatidas no Outono apresentavam maiores teores de α- e γtocoferol. As variações sazonais nos valores médios das principais vitaminas antioxidantes devem decorrer de
diferenças no estado de desenvolvimento das forragens aquando da ingestão e ainda do tipo de forragens ingerida
nas 2 épocas. Durante a Primavera o gado é mantido nas pastagens naturais das terras baixas e são suplementadas
com forragens de centeio, aveia e cevada ceifadas das pastagens das terras altas onde se desenvolvem durante a
Primavera. No final da Primavera, a Arouquesa é transferida para as terras altas onde, devido à fartura de àgua, o
gado encontra abundância de forragens de centeio, cevada e aveia que lhe permite aí permanecer durante o resto do
ano. Podemos concluir, com base nos resultados obtidos, que os teores das principais vitaminas lipo-solúveis com
acção anti-oxidante na carne de vitela Arouquesa-DOP parecem sofrer de um efeito sazonal. Contudo e apesar da
variação sazonal, os teores destas vitaminas na carne de vitela Arouquesa-DOP permanecem ao longo do ano
semelhantes aos descritos para animais criados na pastagem, parecendo que são suficientemente elevados para
prevenir a oxidação lipidica e preservar a qualidade da carne durante o período de comercialização.
Financiado pelos projectos CIISA/2002/52, AGRO/2003/512 e CIISA/2005/76.
[Seasonal variation of lipid-soluble antioxidant vitamins in Arouquesa–PDO veal]
The aim of this study was to appraise the seasonal variation of major lipid-soluble antioxidant vitamins (α-tocopherol, γtocopherol and β-carotene) in Arouquesa veal. Arouquesa calves (spring calves: n=19; 219±54 kg of carcass weight and
8±1 months of age; and autumn calves: n=14; 203±37 kg of carcass weight and 8±1.5 months of age) were raised
according to the PDO specifications. Meat samples from the ribeye (LT; T1-T3 of longissimus thoracis muscle), the loin
(LL; L4-L6 of longissimus lumborum muscle) and from the distal portion of semitendinosus muscle were collected 2-3
days after slaughter (+1ºC). All meat samples were ground using a food processor (3×5 s), vacuum packed and stored at 80ºC until analysis. The meat vitamin E homologues and β-carotene were simultaneously quantified by normal phase
HPLC, using fluorescence (tocopherols) and UV-visible photodiode array (β-carotene) detections in tandem. ArouquesaPDO veal α-tocopherol was lower (p<0.01) in spring (4.8±1.5 µg/g meat) when compared with the autumn counterpart
(5.8±2.4 µg/g meat). Similarly, Arouquesa-PDO veal γ-tocopherol was also lower (p<0.01) in the spring season
(0.07±0.03 µg/g meat) than in the autumn season (0.23±0.16 µg/g of meat). In contrast, Arouquesa-PDO veal β-carotene
contents in spring (0.27±0.1µg/g of meat) were higher (p<0.01) than those obtained from autumn Arouquesa-PDO veal
(0.12±0.06 µg/g of meat). Spring was characterized by higher meat contents of β-carotene, while autumn was
characterized by higher meat contents of major tocopherols (α and γ), all these season-related differences that are thought
to be related with differences in the forage developmental stage by the time it was grazed and type of forage pastured in
between those two seasons. During spring, cattle graze on low-land natural pasture and are supplemented with reaped, rye,
oat or barley that is by that time growing in the high lands. After spring has finished, cattle are moved from the low to the
high lands, and because of the abundance of water in the high lands, cattle find plenty of rye, barley and oat forage that
provides them enough forage during the rest of year. We can conclude that all major lipid-soluble antioxidant vitamins (αtocopherol, γ-tocopherol and β-carotene) contents in Arouquesa PDO veal seem to present a seasonal effect, although their
values throughout the year are in agreement with those found in grazing cattle, appearing to be high enough to prevent
lipid oxidation and preserve meat quality during the commercialization period.
Financial support by grants CIISA/2002/52, AGRO/2003/512 and CIISA/2005/76 are acknowledged.
180
Poster 34
Qualidade e rastreabilidade da Carne Mirandesa na óptica do produtor
Quintas, H. e Fontes, M.A.
CIISA- FMV-UTL, Av. da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa
A rastreabilidade dos bens alimentares é hoje uma exigência real, expressa em particular no Reg. CE nº178/2002. A
rastreabilidade está intimamente ligada à problemática da segurança alimentar, a qual tem vindo a assumir uma
importância crescente em países desenvolvidos, onde os consumidores exigem alimentos mais seguros e de maior
qualidade. Podemos definir rastreabilidade como a capacidade de saber a origem e seguir o rasto de um género
alimentício ao longo das diferentes fases da produção, transformação e distribuição até chegar ao consumidor.
Utilizando como estudo de caso a Carne Mirandesa, e identificando o seu circuito de distribuição, aplicaram-se,
numa primeira fase, inquéritos junto dos produtores desta carne com três objectivos: (i) identificar de que modo a
produção tem consciência da importância de aplicação da rastreabilidade; (ii) que mecanismos estão criados, ao
nível da produção, para garantir a rastreabilidade; e (iii) quais os benefícios e os custos que os produtores
identificam e avaliam em termos da implementação de um sistema de rastreabilidade. Os inquéritos foram aplicados
sob a forma de entrevista directa a 110 produtores de carne de raça Mirandesa, reflectindo a distribuição regional
destes produtores no solar da raça. Os resultados parecem indicar que os produtores têm noção da importância da
rastreabilidade, embora ainda exista uma fraca familiaridade com o conceito. Existem mecanismos já
implementados que em conjunto com o SNIRB permitem garantir a rastreabilidade da Carne Mirandesa. Os
produtores, embora reconhecendo a existência de custos e benefícios associados a este sistema, não os têm
quantificado.
[Quality and traceability of Carne Mirandesa at the producer level]
Traceability of food products is at present a requirement as expressed in Reg. EC nº 178/2002. Traceability is
directly linked to food safety. In developed countries food safety is becoming highly relevant, with consumers
demanding food products with higher quality and safety. Traceability can be defined as the capacity to know the
origin and follow the route of a food product throughout the different stages of production, industry and distribution
until it reaches the consumer. Using Carne Mirandesa as a case study, and identifying its distribution circuit, we
have applied, at a first stage, questionnaires at the producer level. This study had three main objectives: (i) to
identify in what way producers perceive the importance of traceability; (ii) to identify which mechanisms are in
place, at the producer level, to guarantee traceability; and (iii) to show what producers identify and evaluate as costs
and benefits of traceability systems. Questionnaires were implemented through direct interview to 110 beef
producers of Mirandesa breed, reflecting the regional distribution of these producers in the breed production area.
Results suggest that although producers are aware of the importance of traceability they are still quite unfamiliar
with the concept. There already are mechanisms set in place which, coupled with SNIRB, allow traceability of
Carne Mirandesa to be guaranteed. Producers, though recognising costs and benefits of traceability systems, have
not quantified them.
7
181
Poster 35
Efeitos do sexo, da idade e da escolaridade de consumidores na avaliação da tenrura da carne de
bovino e sua correspondência com a força de corte
Simões, J.A.1, Lemos, J.P.C.2
1 Depart. de Sistemas e Técnicas de Produção Animal, Estação Zootécnica Nacional (INIAP) 2005-048 Vale de Santarém
2 CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária, Av. da Universidade Técnica, Polo Universitário Alto da Ajuda, 1300-477 Lisboa, Portugal
O enorme esforço desenvolvido nas últimas décadas no estudo das características organolépticas da carne de bovino
tem sido baseado essencialmente em métodos instrumentais e na avaliação por painéis de provadores. No entanto,
não está ainda bem definida a relação entre os resultados obtidos através destes métodos e os gostos e preferências
dos consumidores. No presente trabalho pretendeu-se estudar o efeito do sexo, da idade e do nível de instrução dos
consumidores na avaliação da tenrura da carne bovino, assim como estabelecer a relação entre esta avaliação e os
resultados obtidos pela determinação da força de corte.
Utilizaram-se 32 novilhos da raça Alentejana submetidos a um regime de engorda intensiva em feed-lot, abatidos
com idades compreendidas entre os 16 e os 24 meses e peso vivo entre os 350 e 450 kg, que originaram carcaças
com pesos entre os 185 e os 295 kg. Após sete dias de maturação a 0 ºC, colheram-se em cada carcaça 6 bifes do
músculo Longissimus lumborum com 2,5 cm de espessura, um destinado à determinação da força de corte e os
restantes à avaliação da tenrura por consumidores.
Não se registaram diferenças significativas entre os sexos, entre os escalões etários (20-29, 30-39, 40-49 e 50-59
anos) e entre os níveis de escolaridade (9º ano, 12º ano e superior) na avaliação da tenrura. Uma força de corte
inferior a 5,5 kg foi considerada como necessária de modo a assegurar uma larga aceitabilidade por parte dos
consumidores.
[Effects of sex, age, and education level of consumers on beef tenderness evaluation and its
relationship with shear force]
The great effort developed in the last decades on studies of sensory characteristics of beef has been based mainly on
instrumental methods and evaluations performed by trained panellists. However, the relationship between these
results and the taste and preferences of consumers is not until now well established. The aim of this trial was to
study the effect of sex, age, and education level of consumers on beef tenderness evaluation and its relationship with
shear force.
A total of 32 young bulls of Alentejana breed were finished in feed-lot and slaughtered with 16 to 24 months of age,
with a range of 350-450 kg of live weight and 185-295 kg of carcass weight. After 7 days ageing, six steaks of 2.5
cm of thickness were taken from the Longissimus lumborum of each carcass, one for shear force evaluation and the
remaning for consumer evaluation.
Results showed no significant differences between sexes, age classes (20-29, 30-39, 40-49 and 50-59 years) or
education levels (less than high school, high school and college) for tenderness evaluation. A shear force value
lower of 5.5 kg were necessary to ensure high levels of consumers acceptability.
182
Poster 36
Manipulação e Conservação dos Alimentos – formação profissional e formação académica
Araújo, A.C.1 e Neves, E.1,2
1 ICBAS - Universidade do Porto, Largo Professor Abel Salazar,2 4099-003 Porto
2 Direcção Regional de Agricultura de Entre - Douro e Minho, Rua Dr. Francisco Duarte, 365 4700 Braga
Em Portugal, a formação profissional dos operadores que manipulam produtos alimentares é escassa apesar
das imposições legais nacionais e comunitárias.
O objectivo deste trabalho é comparar os conhecimentos sobre manipulação e conservação de alimentos de
operadores de estabelecimentos da indústria alimentar, restauração e pequeno comércio situados nos distritos do
Porto e Viana do Castelo com os de estudantes da Universidade do Porto.
Através de questionários auto aplicados foi obtida informação de 231 participantes, 79 operadores e 152 estudantes
das seguintes cursos: Engenharia das Ciências Agrárias, Ciências do Meio Aquático, Medicina e Medicina
Veterinária.
Aproximadamente metade dos estudantes (48,7%) e 33,3% dos operadores consideram o leite pasteurizado um
alimento estéril. Para 53,3% dos operadores e 34,9% dos estudantes a temperatura mais perigosa para a conservação
dos alimentos situa-se entre os 70 e os 80 ºC; para 19,2% dos operadores e 34,2% dos estudantes os alimentos
congelados devem ser armazenados a -5 ºC; 27,6% dos estudantes não sabe a que temperatura se devem conservar
estes produtos. Oitenta por cento dos operadores e 71,6% dos estudantes não refere a utilização de detergente e água
morna na higienização de superfícies de trabalho.
Estes resultados indicam a necessidade de formação profissional efectiva para os operadores, nomeadamente ao
nível das boas práticas na manipulação de alimentos, perigos microbiológicos dos alimentos e a sua relação com as
temperaturas de armazenamento, higiene pessoal e higienização de superfícies de trabalho,.
Os estudantes revelam necessidade de informação técnica e motivação, concretamente no caso destes cursos em que
o desempenho profissional se relaciona com a produção de alimentos, a segurança alimentar e a saúde pública.
[Food handling– professional training and academic knowledge]
In Portugal food hygiene training for food handlers is low although national and EU legal demands.
The aim of this study is to compare food hygiene knowledge between food handlers in food industry, restaurants
and small food businesses from Porto and Viana do Castelo and students from University of Porto.
Self-administered questionnaires obtained information from 231 participants, 79 food handlers and 152 students
from Agriculture Sciences Engineering, Aquatic Environment Sciences, Medicine and Veterinary Medicine.
Almost half of the students (48,7%) and 33,3% of the food handlers surveyed thought that pasteurised milk was
sterile. To 53,3% of the food handlers and 34,9% of the students the high-risk storage temperature to food is 7080°C; to 19,2% of the workers and 34,2% of the students freezing food storage temperature is -5 °C and 27,6% of
the students answered “Do not know”. Eighty percent of the handlers and 71,6% of the students did not thought that
detergents and warm water were important in work surfaces cleaning practice.
The study demonstrates the need of effective food hygiene training for food handlers regarding food handling good
practice, temperature role for the control of microbiological hazards, personal hygiene and cleaning practice. The
students need more technical information and motivation regarding their future work related with food production,
food safety and public health.
183
Poster 37
Diagnóstico histopatológico em fragmentos de próstata canina
Silva, J.F.
CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária, Rua Prof. Cid dos Santos, 1300-477 Lisboa
Em Patologia Humana, o exame histológico de material prostático ocupa um lugar de relevo, pois é decisivo no
estabelecimento do diagnóstico, prognóstico e tratamento das diversas entidades patológicas prostáticas.
No presente estudo, analisam-se os resultados dos exames histopatológicos de fragmentos (peças de exérese
cirúrgica e biópsias) de próstata canina efectuados no Laboratório de Anatomia Patológica da FMV-UTL durante
cerca de 2,5 anos (de 03.10.2002 a 11.05.2005). Os fragmentos foram fixados em formol a 10 %, incluídos em
parafina e os respectivos cortes foram corados pela hematoxilina de Ehrlich – eritrosina.
Foram solicitados 9 exames (6 fragmentos de exérese cirúrgica e 3 biópsias). 5 casos correspondiam a cães de raça
indeterminada e os restantes 4 a um Caniche, a um Pastor Belga, a um Boxer e a um Cão d’Água, respectivamente.
As idades dos pacientes situavam-se entre os 6 e os 11 anos (média: 8,8 anos). Os diagnósticos por entidade
patológica foram:
5 casos de hiperplasia benigna da próstata (HBP - média das idades: 8,0 anos); 6 casos de prostatite (subaguda em 2
e crónica em 4 - média das idades: 8,3 anos); 3 casos de “prostatic intraepithelial neoplasia” (PIN); 1 caso de
hiperplasia das células basais; 1 caso de carcinoma urotelial; 1 caso de tumor benigno.
Estes casos associam-se assim (entidades patológicas por animal):
a) 5 casos de HBP associada a prostatite (subaguda em 1 caso e crónica em 4); em 3 destes casos coexistiam lesões
de PIN; b) 1 caso de prostatite subaguda; c) 1 caso de carcinoma; d) 1 caso de mesenquimoma benigno;e) 1 caso
com diagnóstico inconclusivo.
Podem ser tiradas as seguintes conclusões:
1) Tal como em outros estudos, a HBP e a prostatite são as entidades patológicas mais frequentes na próstata canina.
2) Ao contrário do que sucede em Medicina Humana, o exame histopatológico da próstata canina ocupa um papel
bastante apagado, talvez em parte devido à relativa raridade do carcinoma prostático, ao contrário do que sucede no
homem. A parcimónia na solicitação de exames histopatológicos da próstata canina contribui para o pouco
conhecimento da patologia desta glândula e para a manutenção da dúvida acerca da validade do carcinoma
prostático canino como possível modelo de estudo do equivalente humano.
3) A presença da PIN em 33,3 % dos casos.
[Histopathologic diagnosis in surgically-obtained canine prostatic material]
In Human Pathology, the histologic examination of prostatic material is of great importance, because it is very
relevant in the establishment of the diagnosis, prognosis and treatment of the prostatic pathologic processes.
In the present report, we study the results of the histopathologic examinations concerning canine prostatic material
(surgically obtained pieces) performed in the Laboratory of Pathologic Anatomy of the FMV-UTL during
approximately 2,5 years (from 03.10.2002 to 11.052005). The pieces of prostatic tissue were fixed in 10 % formalin,
embedded in paraffin and the respective tissue sections were stained by the Ehrlich’s hematoxylin – erythrosin.
9 cases were retrieved (6 pieces from surgical exeresis and 3 biopsies). 5 cases belonged to mongrel dogs and the
remaining 4 to a Poodle, a Belgian Shepherd Dog, a Boxer and a Portuguese Water Dog each one. The ages of the
patients ranged from 6 to 11 years (mean: 8,8 years). The pathologic entities were the following:
5 cases of benign prostatic hyperplasia (BPH - age mean: 8,0 years); 6 cases of prostatitis (subacute in 2 and
chronic in 4 - age mean: 8,3 years); 3 cases of prostatic intraepithelial neoplasia (PIN); 1 case of basal cell
hyperplasia; 1 case of urothelial prostatic carcinoma (PCa); 1 case of benign neoplasm.
The pathologic entities occurred in patients as follows:
a) 5 cases of BPH associated to prostatitis (subacute in 1 case and chronic in 4); in 3 of those cases PIN was also
detected; b) 1 case of subacute prostatitis; c) 1 case of PCa; d) 1 case of benign mesenchymoma; e) 1 case with
inconclusive diagnosis.
The following conclusions can be drawed:
1) As stated in other studies, BPH and prostatitis are the most prevalent pathologic diseases in canine prostate.
2) Contrarily to what happens in Human Medicine, histopathologic examination of canine prostate material has a
very secondary role, perhaps in part due to the relative rarity of prostatic carcinoma, which is frequent in the man.
Parsimony in requesting histopathologic examinations of canine prostatic material contributes to the
underdevelopment of the pathologic anatomy of canine prostate, namely the unreadiness to state the possible use of
canine PCa as a model of tumorigenesis of human PCa.
3) The presence of PIN in 33,3 % of the cases.
184
Poster 38
Um caso de carcinoma basoscamoso
Vala, H. e Esteves, F.
Escola Superior Agrária de Viseu. Quinta da Algoa. Estrada de Nelas. 3500-606 Viseu
Uma lesão cutânea proveniente de um Perdigueiro macho, com 2,5 anos, removida cirurgicamente da proximidade
da articulação escápulo-humeral, do membro anterior esquerdo foi submetida ao serviço de Anatomia Patológica da
Escola Superior Agrária de Viseu. Quanto ao seu aspecto macroscópico, a lesão correspondia a uma massa ovoide,
bem circunscrita, que se eleva da superfície cutânea e que apresentava 6,5x7,5x4 cm nas suas maiores dimensões.
Ao corte, observou-se uma cavidade quística, rodeada por cápsula fibrosa e que apresentava várias formações
papiliformes que se projectavam no lumen da cavidade.
Foram realizados quatro cortes histológicos com 3 µm de espessura, os quais foram processados segundo a
técnicade diagnóstico histopatológico de rotina.
O exame microscópico revelou uma área de padrão sólido, a qual apresentou lobulação suportada por um estroma de
tecido conjuntivo. Nesta área e nas restantes, as células encontravam-se organizadas em cordões e ninhos. Em
termos de morfologia, na periferia dos ninhos e cordões, as células eram do tipo basaloide, com formato redondo ou
poliédrico, com núcleo hipercromático e escasso citoplasma, apresentando, ocasionalmente, grânulos de melanina.
No centro destas estruturas as células apresentaram diferenciação escamosa, citoplasma eosinofílico abundante,
núcleo grande, ovoide e vesicular, com um ou dois nucléolos proeminente. Estas células apresentavam
pelomorfismo moderado e, entre elas, observaram-se células disqueratóticas.
Uma particularidade observada consistiu na ausência de zona de transição entre as células do tipo basaloide e as
células do tipo espinhoso, a qual é característica do carcinoma basoscamoso, uma neoplasia considerada rara no cão,
com características quer do carcinoma de células escamosas quer do carcinoma de células basais.
Os autores julgam, por isso, tratar-se de um caso de carcinoma basoscamoso, mesmo tendo em conta que se trata de
um cão jovem e que este tipo de neoplasia nunca foi descrita em raças autóctones portuguesas.
[A case of basosquamous carcinoma]
A skin lesion from a 2,5 years male Perdigueiro, removed from the scapulo-humeral area of the left anterior limb,
was submitted to the pathology service of the Escola Superior Agrária de Viseu. Macroscopicaly, the lesion
corresponded to an ovoid and well-circunscribed mass, elevated above the skin surface, with 6,5x7,5x4cm. On cut
section, a central cystic formation with fibrous capsule and several papillary growths that project into the lumen
were observed.
Four 3 µm sections were processed for routine histopathological diagnosis.
Microscopically, the central cyst was surrounded by an area of solid pattern, with numerous lobules subdivided by
connective tissue stroma, and by areas of papillary growths.
The cells in both the papillary proliferations and solid area were arranged in nests and cords. In terms of
morphology, at the periphery of the nests or cords, cells were basaloid lyke, small, round or polyhedrical, with an
ovoid and hyperchromatic nuclei, and little cytoplasm, occasionally showing melanin granules. In the centre of these
structures, spinous differentiation was observed, with more pale and abundant cytoplasm, frequently keratinized,
and large, ovoid and vesicular nuclei, with a single or two prominent nucleolus. These cells revealed only mild
pleomorphism. Dysqueratotic cells were also commonly found. A distinct feature was the absence of a transition
zone between the basal and squamous cell types, which is very characteristic of the basosquamous carcinoma, an
uncommon canine tumor, with features of both basal cell and squamous cell carcinoma.
It is the authors’ believe that the final diagnosis in this case is in fact basosquamous carcinoma, even taking in
consideration that this was a young dog and that this kind of tumor had never been described in an autochthon dog.
185
Poster 39
Linfoma maligno multicêntrico em vitelos infectados por Theileria annulata
Branco, S.1, Orvalho, J.2, Leitão, A.2, Pereira, I.2, Malta, M.3, Mariano, I.4, Carvalho, T.2, Baptista, R.5 e Peleteiro,
M.C.2
1 Universidade de Évora-Departamento de Sanidade Animal e Vegetal. 2 Faculdade de Medicina Veterinária. Centro de Investigação
Interdisciplinar em Sanidade Animal. Lisboa. 3 Vet+.Montemor-o-Novo. 4 Coprapec. Montemor-o-Novo. 5 Laboratório Nacional de
Investigação Veterinária, Lisboa.
No presente trabalho descrevem-se 12 casos fatais de infecção aguda por Theileria annulata em vitelos com menos
de 6 meses de idade, na região do Alentejo, Sul de Portugal, que desenvolveram lesões neoplásicas, semelhantes a
linfoma maligno multicêntrico. De um modo geral, a morte ocorreu até 15 dias após o início dos sintomas, não
existindo qualquer resposta aos tratamentos instituídos. Todos os animais provinham de explorações negativas para
a Leucose Bovina. Ao exame clínico os animais apresentavam emagrecimento, anemia, exoftalmia, nódulos
cutâneos generalizados, petéquias nas mucosas bucal, conjuntiva e nasal, espelho e pavilhão auricular e
linfoadenomegália generalizada. Todos exibiam forte infestação por ixodídeos, maioritariamente do género
Hyalomma. Nos esfregaços de sangue e linfonodos realizados, identificaram-se formas parasitárias de Theileria
annulata, sendo a natureza da infecção confirmada, em um caso, por sequenciação da região hipervariável V4 do
gene do 18S rRNA. À necrópsia observaram-se, em todos os cadáveres, nódulos de 0,2 a 3 cm de diâmetro na pele,
tecido conjuntivo subcutâneo, tecido muscular esquelético e gordura intraperitoneal, de aspecto atoucinhado, com
halo hemorrágico ou totalmente hemorrágicos, superficie de corte compacta e homogénea. Em alguns cadáveres
foram observadas lesões semelhantes na língua, faringe, traqueia, timo, serosa intestinal, epíplon, coração, hipófise e
tecido retro-ocular. Observou-se também hipertrofia generalizada dos linfonodos. Histologicamente identificaram-se
células neoplásicas tipo linfoblasto, de citoplasma escasso, relação núcleo/citoplasma elevada, com alguns núcleos a
mostrarem chanfraduras, cromatina em grânulos localizados sobre a membrana nuclear, cariorrexis e índice mitótico
moderado. Ocasionalmente identificaram-se células contendo esquizontes de Theileria, os quais coram de púrpura
pelo Giemsa. Estudos imunohistoquímicos com marcadores para leucócitos, linfócitos B e T, células Natural Killer e
células mielóides foram sistematicamente negativos. O facto de se terem utilizado soros monoclonais antimarcadores humanos, com excepção do CD3, pode justificar estes resultados, uma vez que os controlos positivos
marcaram em todos os casos. Actualmente está em preparação um estudo de microscopia electrónica, com o
objectivo de contribuir para a identificação e caracterização das células observadas.
Na literatura internacional está exaustivamente descrita a capacidade de transformação neoplásica de linfócitos de
bovino pela Theileria parva. O mesmo comportamento também tem sido referido para Theileria annulata, sabendose que este protozoário induz uma multiplicação clonal de macrófagos (por vezes, linfócitos B) nos linfonodos que
drenam a região da picada da carraça e, por outro lado, as células infectadas induzem a estimulação e proliferação de
linfócitos T.
[Multicentric malignant lymphoma in calves infected by Theileria annulata]
The present work describe 12 cases of acute lethal infection by Theileria annulata in calves with less than 6 months
of age, in Alentejo, south of Portugal. The calves developed neoplastic lesions, similar to multicentric malignant
lymphoma. In general, death occurred up to 15 days after the onset of the initial symptoms, and no improvement
was obtained with any of the treatments applied. All animals were derived from farms free of Bovine Leukemia
Virus. Calves were emaciated, anaemic, with exophtalmia, and presented generalized cutaneous nodules, petequiae
in the oral, conjunctival and nasal mucosae and external ear, together with enlargment of all superficial lymph
nodes. Infection with ticks was intense especially by the Hyalomma genus. In blood and lymph node smears forms
of Theileria annulata were identified, the nature of the infection having been confirmed in one case, by sequencing
the V4 hypervariable region of the gene of 18S rRNA. At necropsy all cadavers showed nodules varying between
0.2 and 3 cm in the skin, subcutaneous tissue, muscle and intraperitoneal fat, with an hemorrhagic halo or
completely hemorrhagic, with dense homogenous cut surface. Some cadavers revealed similar lesions in the tongue,
pharynx, trachea, thymus, intestinal serosa, omentum, heart, hypophysis and retro-ocular tissue. All lymph nodes
were enlarged. Histologically, nodules were formed by lymphoblastic like cells, with reduced cytoplasm, increased
nucleus/cytoplasm ratio and some nuclei showing indentations. Chromatin frequently formed large granules located
in the nuclear membrane. Cariorrectic cells and mitotic figures were common. Occasionally, cells containing
schizonts of Theileria were identified with the Giemsa stain. Indirect immunohistochemistry was applied to various
tissue sections with markers for leukocytes, B and T lymphocytes, natural killer cells and myeloid cells, showing
consistent negative results. As all sera used were monoclonal for human markers, except for CD3, which may
explain the lack of positivity, as positive controls were obtained in all cases. Presently electron microscopic studies
are being undertaken to help identify and characterize correctly these lymphoblast-like cells.
Scientific international reports describe the capability to produce neoplastic changes in lymphoid cells by Theileria
parva. The same type of behaviour is also described for Theileria annulata. In fact, this protozoan parasite induces
the clonal proliferation of macrophages (sometimes of B lymphocytes) from lymph nodes that drain the region that
was bitten by the tick. On the other hand, infected cells induce the stimulation and proliferation of T lymphocytes.
186
Poster 40
Um caso de intersexo num recém-nascido Holstein
Payan-Carreira, R.1, Pires, M.A.1, Pinto, M.L.1, Quaresma, M.1, Colaço, B.1, Lacilla, J.2
1 CECAV- UTAD; Apart. 1013, 5001-911 Vila Real, Portugal
2 Univ. Léon, Faculdad de Veterinaria, Avda. de la Facultad nº25, 2407 León, España
Um recém-nascido de raça Holstein com 24h de vida, foi trazido ao Hospital Veterinário da UTAD por apresentar
atrésia do ânus. Durante o exame físico detectaram-se outras anomalias, como a agenésia das vertebral caudais e
uma genitália externa rudimentar.
O animal foi encaminhado para a cirurgia para o restabelecimento da abertura anal, tendo-se então verificado a
agenesia do cólon e do recto, pelo que se optou pela eutanásia.
A avaliação macroscópica da genitália revelou que as gónadas se encontravam reduzidas a um esboço fibroso; os
oviductos eram aparentemente normais. O útero mostrava-se distendido por um fluído claro, cujas características
eram compatíveis com urina fetal. A vagina, longa, era constituída por uma cavidade que se continuava por uma
estrutura tubular. Terminava num promontório de tecido eréctil confinado numa discreta bolsa de pele. Um exame
mais pormenorizado do útero distendido permitiu verificar que a cervix perdera a sua conformação normal,
encontrando-se reduzida a uma estriação circular transversa, e que a vagina cranial se encontrava incluída no que
externamente aparentava ser útero. O tracto urinário encontrava-se normal, e o óstio uretral apresentava-se na
posição habitual.
Amostras dos diferentes tecidos foram fixadas em formol a 10% e processadas e coradas para a rotina de
histopatologia.
O aspecto histológico das gónadas revelou a existência de displasia, com ausência de dominância das estruturas
corticais assim como um decréscimo na distinção entre córtex e medula. As estruturas foliculares presentes eram
escassas e limitavam-se ao estádio primordial. Os oviductos apresentavam morfologia normal. Secções obtidas a
partir de diferentes segmentos do útero revelaram a ausência de epitélio uterino e de glândulas endométricas.
Também não foi possível encontrar epitélio na cervix e na vagina cranial, o que poderá estar relacionado com a
pressão exercida pela acumulação de urina fetal nestes orgãos. O vestíbulo vaginal evidenciava uma morfologia
normal. A avaliação histológica da estrutura tubular caudal revelou a existência de uma uretra em posição central,
rodeada por uma camada de tecido conjuntivo rico em vasos sanguíneos e espaços cavernosos que se assemelhava a
um corpo esponjoso. A genitália externa apresentava-se constituída por uma prega de pele no interior da qual se
encontrava uma pequena estrutura semelhante a um pénis.
[A case of a complex intersexuality in a Holstein calf]
A new born Holstein calf, aged 24 hours, was presented for examination at the Veterinary Teaching Hospital of
UTAD with complaints of atresia ani. Other morphologic abnormalities were detected at admission, such as caudal
vertebra agenesia and rudimentary external genitalia.
The animal was sent to surgery to establish the patency of the anus, but due to colon and rectum agenesia euthanasia
was performed.
On gross external examination, the excised genitalia revealed the existence of bilateral streak gonads, an apparently
normal oviducts, an enlarged uterus, filled with fluid (with characteristics compatible with fetal urine), a long
vagina, composed of a chamber and a tubular structure that continued for an undifferentiated external genitalia
consisting on a very narrow erectile structure, confined in a discrete skin fold. Careful morphologic evaluations of
the distended uterus showed that the cervix was reduced to a flat/blunt emboss. By consequence, the upper vagina
was included on the external contour of the uterus. Urinary tract development was apparently normal, and the
urethral ostium was present at the normal place.
The genitalia samples were fixed in 10% formalin and routinely processed and stained to histopathology.
The histological examination of the fibrous enlange at gonad position revealed the existence of a dysplasia. No
marked dominance of cortical structures neither the usual distinction between cortex and medulla were perceptive. A
few follicular structures were present in the primordial stage. Uterine tubes presented a normal appearance. Uterine
sections from different areas of the uterine horns and body showed the absence of the endometrial epithelium and
glands. Equally, it was not possible to evidence the epithelium of the cervix and upper vagina. That could be due to
the compression exerted by the retention of the urine in these structures. The vestibule was normal in appearance.
Histological examination of the caudal tubular structure revealed a urethra in a central position, surrounded by a
complete layer of a connective tissue rich in vessels and with cavernous spaces resembling the corpus spongiosum.
The external genitalia samples showed the existence of a skin fold confining a small penile-like structure.
187
Poster 41
Aspectos vasculares e ultraestructurais da pododerme em Bos taurus na situação de infecção por
Besnoitia besnoiti
Alexandre-Pires, G.1, Cortes, H.2, Mendes-Jorge, L.1, Correia, M.3
1 CIISA-Faculdade de Medicina Veterinária-UTL, Av. da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa
2 Laboratório de Parasitologia – Polo da Mitra- Universidade de Évora
3 Departamento de Histologia e Biologia Celular-Faculdade de Ciências Médicas-Universidade Nova-Lisboa
As doenças infecciosas do mundo selvagem acabaram por se estabelecer em muitos países principalmente devido à
disseminação transfronteiras. Os grupos de trabalho da OIE que se debruçam sobre estas doenças tem demonstrado
um forte envolvimento na colecção e análise das causas vitais para a ocorrência da disseminação das mesmas. Um
exemplo frutuoso destes trabalhos traduz-se na legislação respeitante às doenças em muitos países. No Canadá, por
exemplo, a par da lista de doenças de declaração obrigatória (aquelas que afectam animais e humanos ou que
contribuem de forma profundamente negativa no que concerne a economia do país), surge uma outra lista
denominada “doenças de notificação”, que é no seu conteúdo bastante distinta da primeira. Essa lista contempla um
elevado número de doenças, particularmente doenças exóticas, para as quais não há um programa de controlo de
erradicação eficaz. É ainda um parâmetro normativo a considerar quando da importação de animais, o que equivale
a dizer que esses animais deverão estar livres das doenças dessa listagem. No Canadá, a título de exemplo, a
besnoitiose (doença parasitária provocada pelo protozoário Besnoitia besnoiti, de elevada morbilidade e baixa
mortalidade) é uma doença da lista de notificação obrigatória (Règlement sur la santé des animaux, 21 mai 2003). Em
Portugal a besnoitiose não está contemplada na lista B das doenças de declaração obrigatórias. No entanto, sabe-se
que é da responsabilidade desta parasitose um impacto negativo na fertilidade bovina e que as lesões da pele afectam
subprodutos animais para a indústria de peles. Um outro problema não menor diz respeito ao crescimento normal da
úngula que a não se verificar prejudica amplamente a condição corporal/ produção animal.
Os autores estudaram amostras da pododerme perióplica de bovinos infectados com Besnoitia besnoiti. O padrão
vascular da úngula foi também objecto de estudo.
Métodos. Amostras da pododerme foram estudadas mediante cortes ultrafinos e microscopia electrónica de
transmissão (MET). Moldes vasculares de corrosão e microscopia electrónica de varrimento (MEV) foi realizada
sobre moldes vasculares da úngula.
Observações e comentários: A presença do padrão “papel de areia” é uma evidência na área perióplica. MET
permitiu avaliar das células reactivas que envolvem os quistos, aspectos destes últimos e da colónia de parasitas. O
padrão dos moldes de corrosão vascular não difere substancialmente dos padrões obtidos com animais não
infectados, mas a MEV demonstra uma profunda modificação dos vasos de pequeno calibre como resultado da
vasculite, o que torna inviável um crescimento normal da úngula.
[Vascular and Ultrastructural aspects of the pododermis in Bos taurus infected witn Besnoitia
besnoiti]
Infectious diseases in wildlife have become established in many countries around the world mainly through
transboundary spread. The working group on wildlife diseases of OIE has been involved in the collection and
analysis of causes vital to dissemination of wildlife diseases. An example of this fructuous work appears in the
legislation concerning diseases in many countries. In Canada, for example, besides the list of declarable diseases
(which are the ones that can affect animals and humans as well, and that are quite harmful for the country economy);
there is a second one named notification diseases which is quite different from the primer one. The latter list
considers a great range of diseases of immediate notification, being that notification of quite relevance since for the
diseases included in that list there is no eradication control programme working, mainly exotic diseases, and it is an
item that should be respected when importing animals, which mean that imported animals should be free. In Canada,
besnoitiosis (a parasitic disease caused by the protozoa Besnoitia besnoiti, of high mobility and low mortality) is a
disease of the notification list (Règlement sur la santé des animaux, 21 Mai 2003).
In Portugal besnoitiosis does not appear in list B of declarable diseases. Nevertheless, it is well known that
besnoitiosis has a negative impact in bovine fertility and that skin infection affects its use concerning leather
industries. Another important problem deals with the normal growth of the hoof, since if does not occur, is of course
very important when one speaks about body condition/ animal production. The authors studied pododermis samples
from the perioplic area of the hoof of a bovine harbouring Besnoitia besnoiti, and the vascular pattern of the hoof
was also an object of study. Methods. Ultrathin sections of pododerme were studied, transmission electron
microscopy (TEM) was performed over pododerme samples. Vascular corrosion casts and scanning electronic
microscopy over vascular moulds (SEM) of the hoof were also studied.
Observations/ remarks: The presence of “sand paper” pattern of the perioplic skin can be easily observed because of
the presence of cysts. TEM allow the evaluation of reactive cells surrounding the cyst, aspects of the latter and
parasite colonies. Vascular corrosion casts pattern is similar to normal ones but SEM revealed areas of a complete
modified vascular pattern of small vessels as a result of vasculite that results in quite improbable normal growth of
such a hoof.
188
Poster 42
“Melanosis thyroidi” em dois animais silvestres Portugueses
Silva, J.F.
CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária, Rua Prof. Cid dos Santos, 1300-477 Lisboa
A lipofuscina acumula-se no citoplasma de células de diversos tecidos durante o processo de envelhecimento. Um
dos órgãos onde se observa este fenómeno é a tiróide (“melanosis thyroidi”), nomeadamente nas espécies humana e
equina.
Refere-se os casos da deposição de lipofuscina nas células foliculares da tiróide de dois animais silvestres de
Portugal:
a) Um lobo (Canis lupus signatus), sexo masculino, com quase 14 anos, cujo cadáver foi enviado ao Laboratório de
Anatomia Patológica da FMV-UTL para necrópsia pelo “Grupo Lobo”.
b) Um texugo (Meles meles), sexo feminino, de idade avançada, cujo cadáver foi entregue ao Laboratório de
Anatomia Patológica da FMV-UTL pelo CRASPEM (Centro de Recuperação de. Animais Silvestres do. Parque
Ecológico de Monsanto). A tiróide deste animal apresentava também sinais histológicos de hiperfunção.
[“Melanosis thyroidi” in two Portuguese wild animals]
Lipofuscin accumulates within the cytoplasm of cells of several tissues during the aging process. One of the organs
which displays this phenomenon is the thyroid (“melanosis thyroidi”), namely in the humane and equine species.
The present study refers two cases of lipofuscin deposition in the thyroid follicular cells of two Portuguese wild
animals:
a) A 14 year-old male wolf (Canis lupus signatus), which body was sent to the Laboratory of Pathologic Anatomy
of FMV-UTL by “Grupo Lobo” in order to perform its necropsy.
b) An old female badger (Meles meles), which carcass was sent to the the Laboratory of Pathologic Anatomy of
FMV-UTL by CRASPEM (Centro de Recuperação de. Animais Silvestres do. Parque Ecológico de Monsanto).The
thyroid gland of this animal showed also histologic signs of hyperfunction.
189
Poster 43
Osteossarcoma osteoblástico produtivo num exemplar de Águia de Bonelli (Hieraaetus fasciatus)
Melo, P.1, Pissarra, H.2, Peleteiro, M.C.2
1 Centro de Recuperação de Animais Silvestres do Parque Florestal de Monsanto (CML)
2 CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária, Av. Da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa, Portugal
Em Janeiro de 2004, foi internado no Centro de Recuperação de Animais Silvestres do Parque Florestal de
Monsanto (CRASPFM), um exemplar de Águia de Bonelli (Hieraaetus fasciatus), proveniente do Parque Natural do
Vale do Guadiana. Tratava-se de um juvenil de primeiro ano, fêmea, que mostrava sinais de desidratação e exaustão.
Ao exame clínico detectou-se uma neoformação de consistência dura na face ventral da asa esquerda. Foram
realizados exames complementares de diagnóstico: exame radiológico, hematócrito e bioquímica sanguínea; tendo
sendo instituída terapêutica específica e de suporte de acordo com os resultados. Apesar de todos os esforços, ao fim
de 48 horas a ave faleceu, sendo o seu cadáver enviado para necrópsia para a Faculdade de Medicina Veterinária da
Universidade Técnica de Lisboa.
No exame necrópsico registou-se a presença de volumosa massa tecidular inserida na extremidade proximal do rádio
com cerca de 6 cm de diâmetro maior. O exame histopatológico permitiu identificar que a referida massa
correspondia a proliferação neoplásica mesenquimatosa de células de perfil estrelado a fusiforme apresentando por
vezes, sinais de atipia, dispostas entre finas trabéculas de matriz óssea calcificada. Consequentemente, foi emitido
diagnóstico de osteossarcoma osteoblástico produtivo.
Tanto quanto é possível aos autores avaliar, este é o primeiro relato de lesão neoplásica deste tipo num espécime de
Águia de Bonelli em vida livre.
[Osteoblastic productive osteossarcoma in a Bonelli´s Eagle (Hieraaetus fasciatus)]
In January of 2004, a Bonelli´s Eagle (Hieraaetus fasciatus), was reported to the Reabilitation Center of Wild
Animals of the Forest Park of Monsanto (CRASPFM), Lisbon, proceeding from the Natural Park of the Vale do
Guadiana. It was a one year old female that showed signs of dehydration and exhaustion. At the clinical examination
a tumour of hard consistency was detected in the ventral face of the left wing. Complementary exams were carried
out: radiology exam; PCV and blood biochemistry. Specific and support therapeutics were instituted in accordance
with the results. In spite of all the efforts, after 48 hours the bird was found dead, being the cadaver sent for
necropsy to the Faculdade de Medicina Veterinária of the Universidade Técnica de Lisboa. The necropsy
examination revealed a tumour inserted in the proximal extremity of the radio with 6 cm of diameter. Histopatology
allowed for the identification of the tumour as mesenquimatous cell neoplasia of fusiform cells, sometimes atypical,
between which fine trabeculae of calcified osseous matrix were identified. Consequently the diagnosis of
osteoblastic productive osteossarcoma was produced.
As much as it is possible to the authors to evaluate, this is the first report of neoplasic injury of this type in a free
ranging specimen of Bonelli´s Eagle.
190
Poster 44
Interacções genéticas do exão 4 do gene da K-caseína em caprinos
Delgado, F.1, Veríssimo, P.2,3, Faro, C.2,3, Pires, E.2,3, Colaço, J.4
1 Dept. Ciências Zootécnicas - Escola Superior Agrária de Coimbra, Bencanta 3040-316 COIMBRA
2 Centro de Neurociências e Biologia Celular (CNC) - Univ. Coimbra, 3020-201 COIMBRA
3 Dept. Bioquímica – Faculdade Ciências e Tecnologia - Univ. Coimbra (FCT-UC), Apartado 3126, 3001-401 COIMBRA
4 Dept. Zootecnia - Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro, Apartado 202, 5001-911 VILA REAL
Os genes das diferentes caseínas coexistem agrupados em cluster no braço q do cromossoma 6 (nos bovinos) ou 4
(humanos e outros), apresentando particularidades de organização. A genotipagem associada a estudos quantitativos
tem permitido verificar a existência de possíveis efeitos mútuos potenciadores e/ou depressores na expressão dos
diferentes genes das caseínas, bem como interacções com a própria quantidade total de caseína e de volume de leite.
A lactação de 11 cabras Serranas e 3 cruzadas de Saanen do rebanho da ESAC foi estudada o longo de 25 semanas.
O conteúdo proteico de uma amostra semanal e individual do leite da ordenha matinal foi quantificada por
espectrofotometria, e a composição caseínica quantificada por ImageQuant® após leitura de géis corados com
Comassie BBG250 resultantes de electroforese em SDS-PAGE com 3 repetições por amostra. Os mesmos animais
foram genotipados para o exão 4 da k-cas (k-cas.E4) por sequenciação em processo automatizado (Beckman
Counter-CEQ 8000®).
Os dados, e os correspondentes desvios padronizados, foram submetidos a análise longitudinal de efeitos fixos
hierarquizados (SAS) tendo permitido constatar que o genótipo influenciou a excreção de Proteína Total [PT]
k
(P<0,05), da α-cas e β-cas (P<0,001) e da k-cas (P<0,01). O alelo B -cas.E4 parece incrementar a excreção da PT, da
α-cas e da k-cas e diminuir a excreção da β-cas.
[Genetic interactions of exon 4 of K-casein gene in goats]
Genes for all caseins are located altogether in a cluster on q-arm of cromosome 6 (bovines) or 4 (humans and
others), presenting some particularities of organization. Genotyping associated to quantitative studies is allowing to
observe the existence of possible amplification / depressing mutual effects on gene expression over the all casein
genes, as well as interactions on the total amount of casein and milk excreted.
Lactation of 11 “Serranas Ribatejana” goats and 3 Saanen-crossed was studied along 25 weeks. Protein content of
individual milk sample was withdraw weekly from the morning milking was quantified spectrophotometer, and the
casein differential composition was quantified by ImageQuant® after reading gels under Comassie BBG250
coloration from SDS-PAGE electrophoresis carried out with 3 repetitions. These animals were genotyped for exon 4
of k-cas (k-cas.E4) through automatic sequencing (Beckman Counter-CEQ 8000®).
Data, and the corresponding standard deviations, were submitted to longitudinal hierarchical fixed effects analysis
(SAS) which showed that genotype influenced Total Protein [PT] (P<0,05), α-cas and β-(P<0,001) as well as k-cas
k
(P<0,01) excretion. Allele B -cas.E4 seems to increase PT, α-cas and k-cas and to decrease β-cas excretion.
191
Poster 45
Crescimento alométrico da carcaça de novilhos da raça Alentejana
Carolino, N.1, Gama, L. T.1,2, Bagulho Silva, L.3 e Espadinha, P.4
1 Estação Zootécnica Nacional, 2005-048 Vale de Santarém, Portugal.
2 Instituto Superior de Agronomia, Tapada da Ajuda, 1349-017 Lisboa.
3 CARNALENTEJANA, Estrada do Moinho de Vento, 7350 Elvas, Portugal.
4 Associação de Criadores de Bovinos da Raça Alentejana, Assumar, 7450 Monforte, Portugal.
Foram utilizados dados de abate e desmancha de 7701 novilhos da raça bovina Alentejana, provenientes de 94
explorações e abatidos entre 1995 e 2004, como produto DOP, no Matadouro Regional do Alto Alentejo. Os animais
abatidos foram desmanchados segundo o “Corte de Lisboa”, em que a carcaça é dividida em 13 peças comerciais:
lombo, vazia, alcatra, pojadouro, rabadilha, chã de fora, aba grossa, chambão, acém, pá, cachaço, aba das costelas e
peito. Este trabalho teve como objectivo estimar os coeficientes de alometria das peças comerciais da carcaça,
obtidos a partir da transformação logarítmica da equação alométrica de Huxley, Y=aXb, passando esta a log Y = log
a + b log X, em que Y é o peso de cada peça da carcaça do indivíduo, X é o peso total de carne desmanchada e b
corresponde ao coeficiente de regressão do logaritmo do peso da peça no logaritmo do peso total de carne
desmanchada ou coeficiente de alometria da respectiva peça. As estimativas dos coeficientes de regressão foram
obtidas por análise de covariância, através do PROC GLM do SAS, considerando os efeitos fixos da exploração*ano
e do mês de abate. As estimativas dos coeficientes de alometria e respectivos erros padrões foram as seguintes:
Lombo: 0.809±0.006, Vazia: 0.933±0.008, Alcatra: 0.866±0.005, Pojadouro: 0.834±0.005, Rabadilha: 0.742±
0.005, Chã Fora: 0.973±0.006, Aba Grossa: 1.004±0.009, Chambão: 0.693±0.008, Acém: 1.205±0.007, Pá:
1.037±0.006, Cachaço: 1.321±0.009, Aba Costelas: 0.993±0.010, Peito: 1.095±0.006. Verificou-se que as peças
extra (lombo e vazia) e a maioria das peças de primeira categoria (alcatra, rabadilha, chã de fora e pojadouro)
apresentam ímpetos de crescimento inferiores a 1 (0.74 a 0.93), indicando que crescem mais lentamente que o total
de carne da carcaça e que são de desenvolvimento precoce. Confirma-se a relação entre o ímpeto de crescimento da
peça e a região corporal a que a peça pertence, constatando-se que as peças dos quartos posteriores apresentam um
ímpeto de crescimento inferior ao todo (total de carne desmanchada), enquanto que as peças dos quartos anteriores
registam um ímpeto de crescimento superior ao total, isto é, são de desenvolvimento mais tardio.
[Allometric growth of carcass components in Alentejana bulls]
Slaughter and meat yield data on 7701 bulls of the Alentejana breed, from 94 farms and slaughtered between 1995
and 2004 as DOP product in the “Matadouro Regional do Alto Alentejo” slaughter plant, were analysed.
Slaughtered animals were processed according to the “Corte de Lisboa” into 13 retail cuts: “lombo, vazia, alcatra,
pojadouro, rabadilha, chã de fora, aba grossa, chambão, acém, pá, cachaço, aba das costelas and peito”. The
objective of this analysis was to estimate coefficents of allometry of commercial retail cuts, obtained following
Huxley’s allometric equation of the form Y=aXb, which after logarithmic transformation becomes log Y = log a + b
log X, where Y is the weight of each retail cut in the individual, X is total meat yield and b is the regression
coefficient of the log of the retail cut weight on the log of meat yield, also known as coefficient of allometry of the
cut. Statistical analyses for estimation of regression coefficients were conducted with PROC GLM of SAS,
considering the fixed effects of herd-year and month of slaughter. Estimated coefficients of allometry and their
standard errors were as follows: Lombo: 0.809±0.006, Vazia: 0.933±0.008, Alcatra: 0.866±0.005, Pojadouro:
0.834±0.005, Rabadilha: 0.742±0.005, Chã Fora: 0.973±0.006, Aba Grossa: 1.004±0.009, Chambão: 0.693±0.008,
Acém: 1.205±0.007, Pá: 1.037±0.006, Cachaço: 1.321±0.009, Aba Costelas: 0.993±0.010, Peito: 1.095±0.006.
These results indicate that retail cuts with higher commercial value (lombo and vazia), as well as prime cuts (alcatra,
rabadilha, chã de fora e pojadouro), have relative growth rates lower than 1.0 (0.74 to 0.93), revealing that they have
a slower growth rate and are of early development. These results further confirm the relationship existing between
the growth impetus of a given cut and the body region to which it belongs, such that cuts in the hind quarter have a
lower impetus of growth (relative to total meat yield), while cuts in the fore quarter have a higher growth impetus,
indicating that they are of late development.
192
Poster 46
Estimativas de herdabilidade para deslocamento em equinos da raça Mangalarga
Gouveia Ferreira, D.F.M.1, Mota, M.D.S.2, Almeida Prado, R.S.3 e Araújo, J.S.V.4
1 UTAD – Vila Real/Portugal,
2 Unesp – Botucatu/Brasil,
3 Aluno de Pós-Graduação Unesp – Botucatu/Brasil
4 UTAD – Vila Real/Portugal
Definida como a intensidade de relação entre os valores genéticos e fenótipos (desempenho) dos animais para cada
característica numa população, a herdabilidade é um parâmetro genético fundamental dentro do melhoramento
genético, uma vez que a sua estimativa é utilizada na predição do valor genético dos animais, e no cálculo do ganho
genético esperado nos diversos esquemas de seleção. Nesse sentido, o objetivo do presente trabalho foi estimar a
herdabilidade para a pontuação total do deslocamento em eqüinos da raça Mangalarga. As informações foram
fornecidas pela Associação Brasileira de Criadores de Cavalos da Raça Mangalarga (ABCCRM) e consideraram os
pontos para deslocamento de 9865 animais (20,8% de machos,79,2% de fêmeas), julgados entre 1983 e 1992. Os
componentes de variâncias necessários para a obtenção da herdabilidade foram estimados utilizando-se o programa
MTDFREML, incluindo os efeitos fixos do criador (1329) e grupo de contemporâneo (162 grupos formados por
animais julgados pelo mesmo técnico (31), na mesma idade (3,4 e 5 ou mais anos) e do mesmo sexo), além do efeito
aleatório do animal. A matriz de parentesco envolve 18130 animais. As variâncias genética aditiva, ambiental e
fenotípica foram respectivamente 0,32: 1,25 e 1,50, resultando em uma herdabilidade de 0,20(0,033). Este resultado
indica que a resposta a selecção fenotípica dos animais para a pontuação de deslocamento é baixa, e a inclusão de
informação de parentes colaterais e progênie poderiam ajudar na identificação dos cavalos geneticamente superiores.
193
Poster 47
Características Biométricas da Raça Ovina Bordaleira de Entre Douro e Minho
Cerqueira, J.O.L.1, Brito, A.N.V.B.V., Araújo, J.P.P., Barreto, D.I.O.L.1, Leite, J.V., Silva, N.M.M.2
1 Escola Superior Agrária de Ponte de Lima – Instituto Politécnico de Viana do Castelo, Mosteiro – Refóios, 4990-706 Ponte de Lima
2 AMIBA – Associação dos Criadores de Bovinos de Raça Barrosã e Ovinos Bordaleiros, Rua Franca nº 534, 4800-875 S.Torcato - Guimarães
O efectivo de ovinos de raça Bordaleira de Entre Douro e Minho que tem como área de distribuição o Norte de
Portugal, encontra-se inscrito no livro genealógico iniciado em 2001 e enquadra-se em duas variedades: as
bordaleiras comuns ou da várzea, que acompanham os bovinos na pastagem, habitando as zonas mais baixas e de
maior produtividade da região e as bordaleiras de monte, conhecidas na região como bravas ou galegas, que são
ovelhas de pequeno porte, pastoreadas exclusivamente em rebanhos, em zonas de montanha.
Este trabalho teve por objectivo a caracterização biométrica da Raça Ovina Bordaleira de Entre Douro e Minho, com
base no peso e na avaliação de 15 medidas morfológicas (4 referentes à altura, 4 ao comprimento, 4 à largura e 3 ao
perímetro) num total de 412 animais. As medidas morfológicas foram utilizadas para o cálculo de 8 índices de
conformação.
Procedeu-se à análise de componentes principais e analisou-se o efeito da idade nas características biométricas para
3 classes (≤ 2 anos, 3 a 7 anos e ≥ 8 anos). Estudou-se também as correlações fenotípicas entre as características
morfológicas e o peso vivo.
Como principais resultados destacam-se as diferenças significativas encontradas (p<0,001) em todas as medidas
biométricas, evidenciadas pela análise de variância, entre as fêmeas de várzea e de monte e na maioria das medidas
relativas aos machos.
Pela análise de componentes principais evidenciam-se as diferenças entre as características da variedade de várzea,
associadas a maiores dimensões morfológicas e maiores pesos vivos, em comparação com a variedade de monte, de
porte mais reduzido.
[Biometric Characteristics of the Sheep Breed “Bordaleira de Entre Douro e Minho”]
The autochthonous breed of the North of Portugal, “Bordaleira de Entre Douro e Minho” with genealogical book
since 2001 includes two varieties, namely, the Common or Valley “Bordaleira” associated with high yield pasture
for cattle and sheeps of more intensive farming systems and the Mountain “Bordaleira” associated with the
mountain low yield pastures and managed as large flocks.
Here, the biometric characteristics of the “Bordaleira” breed were studied based on morphological measurements on
each of 412 sheeps. Animal weight and morphological measurements included in this studies were then used for the
calculation of eight conformation indices.
These measurements and indices were analysed throught multivariate statistical analysis for three classes (≤ 2 years,
3 to 7 years and ≥ 8 years) and clear morphological differences between Valley and Mountain females were found,
namely, Valley sheeps were heavier longer, larger and taller compared to females of the Mountain.
194
Poster 48
Estudo biométrico da raça caprina Bravia
Candeias, G.1, Lopes, C.1, Oliveira, E.1, Carloto, A.2, Brito, N.1
1 Escola Superior Agrária de Ponte de Lima, Instituto Politécnico de Viana do Castelo
2 ANCABRA - Associação Nacional de Criadores de Cabra Bravia
A cabra Bravia é a única raça caprina portuguesa exclusivamente de aptidão carne, localizando-se o seu solar nos
Parques Nacional da Peneda Gerês e Natural do Alvão. Pela sua sobriedade, rusticidade e adaptação a meios
inóspitos, é um animal impar, fundamental para a manutenção de populações em meios rurais desfavorecidos. A sua
valorização, será determinante na sustentabilidade, desenvolvimento e equilíbrio ambiental do Norte de Portugal.
O objectivo deste estudo é a caracterização biométrica desta raça, na sua área de dispersão. Foram seleccionadas 16
explorações nos concelhos mais representativos, agrupadas em duas zonas: Gerês e Alvão/Marão.
Em cada exploração foram mensuradas, por fita biométrica, quatro fêmeas adultas, não aparentadas, resultando
numa amostragem próxima de 1% do efectivo total de fêmeas da raça. As medidas lineares analisadas foram: altura
(garupa, cernelha), comprimento (tronco, garupa, cabeça, cornos), largura (tronco, cabeça) e perímetro (torácico,
canela); determinando-se a partir de algumas destas os índices: corporal (ICORP), corporal de “vantagem” (ICR),
espessura relativa da canela (IERCA), profundidade relativa do peito (IPRP), cefálico (ICEFA) e dactilotorácico
(IDTOR). O tratamento estatístico realizou-se usando os programas Excel (Microsoft) e SPSS 11.0 for Windows.
Os resultados obtidos permitiram observar que, em ambas as zonas analisadas (Gerês e Alvão/Marão), os valores
obtidos são de, uma forma geral, inferiores aos referidas no padrão da raça, com excepção de largura da cabeça,
comprimento do tronco e comprimento da garupa (neste ultimo, só no Alvão). Por outro lado, as fêmeas
provenientes do Alvão/Marão apresentam medidas significativamente superiores às do Gerês, com excepção da
altura da garupa, largura isquiática e largura da cabeça. Relativamente aos índices, constata-se valores superiores
nos ICR e ICEFA nas fêmeas provenientes do Gerês, ao contrário do verificado para o ICORP.
Apresenta-se, pois, uma fêmea de menor corpulência, relativamente à descrita no padrão da raça (Carloto, 2001), o
que se poderá atribuir a maior número de animais da amostra, maior dispersão geográfica (apenas circunscrita, na
análise do padrão racial, à zona Alvão/Marão), bem como a uma eventual escolha dirigida na definição do padrão da
raça. Por outro lado, pelos resultados verificados nos índices poderemos concluir a existência de melhor aptidão para
áreas silvo-pastorícias nos animais do Gerês, em contrapartida do núcleo do Alvão/Marão, de superiores
características produtivas, nomeadamente a sua aptidão cárnea.
Poderemos, assim, considerar existirem dois biótipos da raça Bravia, nomeadamente sob o aspecto biométrico, que
deverão ser aprofundados em trabalhos de caracterização produtiva e genética.
Bibliografia: Carloto A. Cabra Bravia; in “Associação Nacional de Criadores de Cabra Bravia” Carloto A. de
(dir), nº 3 e 4, Vila Pouca de Aguiar. ANCABRA, 2001
[Morphologic study of “Bravia” autochthonous goat portuguese breed]
The "Bravia" is the only Portuguese autochthonous meat aptitude goat breed, with origin in the Northwest of
Portugal, more specifically in the National Parks of Peneda Gerês and Natural of Alvão mountain ecosystems. Due
to its sobriety, rusticity and adaptation to inhospitable environments, “Bravia” goat increase the productive
efficiency through maximisation of pasturing resources, promoting, therefore, productive sustainability, use of
natural resources and functional integrity, contributing, in a final analysis, for mountain populations’ maintenance.
The aim of this study is the biometric characterization of Bravia breed, in its dispersion area, through the selection
of 16 exploitations in the most representative regions, grouped in two mountain ecosystems: Gerês and
Alvão/Marão. Were measured, in each producer, and by biometric ribbon, four adult females, no related, resulting in
a total sample of 1% of the Bravia register females effective. The lineal measures analyzed were: height (rump,
withers), length (trunk, rump, head and horns), width (trunk, head) and perimeter (thoracic, shin) and were estimated
the following indexes: corporal (ICORP), corporal of "advantage" (ICR), relative shin thickness (IERCA), relative
depth of the chest (IPRP), cephalic (ICEFA) and dactilotorácico (IDTOR). Statistical analyses were estimated using
Excel (Microsoft) and SPSS 11.0 for Windows programs. Our results, in both regions (Gerês and Alvão/Marão) are,
in general, inferior to the referred in breed pattern, with exception of head width and trunk and rump length (in this
last case, only in Alvão). Was, also, observed that Alvão/Marão females present significant superior measures
comparatively to Gerês goats, with exception of rump height and head and biisquiatic width. Superior values in ICR
and ICEFA Gerês females were observed, in opposite to verified for ICORP.
This biometric study conclude to a smaller corpulence female, relative to a pattern breed description (Carloto, 2001),
which can be attribute to the largest sample number of animals, larger geographical dispersion (restricted, in the
analysis of the racial pattern, to the area Alvão/Marão), as well as an eventual elected sample in the breed pattern
definition. Was, also, evident, by indexes results, better adaptation characteristics to mountain resources in Gerês
females, in opposite to superior productive characteristic in Alvão/Marão nucleus, particularly meat aptitude. Two
biotypes of the “Bravia” goat breed, particularly in a biometric analysis, were verified and should be confirmed in
productive and genetic characterization studies.
195
Poster 49
Hematologia – valores clínicos de referência em Caprinos
Delgado, F.1, Henggeller, F.2, Curado, F.3, Colaço, A.4
2 Instituto Português de Sangue – Centro Regional de Coimbra, Pavilhão de Celas, 3000 Coimbra
3 Centro de Experimentação do Loreto – Direcção Regional de Agricultura da Beira Litoral, 3020-201 Coimbra
4 Dept. de Patologias e Clínicas Veterinárias - Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro, Apartado 202, 5001-911 Vila Real
Com o objectivo de produzir informação sobre os perfis fisiológicos e clínicos das raças nacionais, submeteram-se a
análise hematológica com recurso ao aparelho «Cell-Dyn 3500®», devidamente aferido para perfil animal, 54
amostras individuais de sangue de cabras oriundas de 6 diferentes explorações sitas na Região Centro, colhidas por
punção da veia jugular em tubos com EDTA.
Os parâmetros analisados foram os valores de HEMOGLOBINA [HGB], o HEMATÓCRITO [HCT], o VOLUME
CORPUSCULAR MÉDIO [MCV], a HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MÉDIA [MCH], a CONCENTRAÇÃO MÉDIA DA
HEMOGLOBINA CORPUSCULAR [MCHC], o DIÂMETRO DE DISTRIBUIÇÃO DOS GV [RDW], o VOLUME PLAQUETÁRIO
MÉDIO [MPV], as contagens de GLÓBULOS VERMELHOS [GV], de GLÓBULOS BRANCOS [GB], de NEUTRÓFILOS
[NEUT], de BASÓFILOS [BASO], de EOSINÓFILOS [EOSI], de MONÓCITOS [MONO] e de LINFÓCITOS [LINF], bem
como as correspondentes percentagens da Fórmula Leucocitária, respectivamente, NEUTRÓFILOS [N%], de
BASÓFILOS [B%], de EOSINÓFILOS [E%], de MONÓCITOS [M%] e de LINFÓCITOS [L%]. Não foi possível determinar
o número de Plaquetas.
Calcularam-se padrões e valores limite de normalidade recorrendo a dois procedimentos distintos descritos por JAIN
(1986) e por KANEKO et. al. (1997). Os resultados são apresentados em tabela com indicação dos valores limite.
[Hemathology – clinic reference values in goats]
Aiming information on physiological and clinical profiles of national breeds, hematological analysis using «CellDyn 3500®», properly suited to animal profile, was run on individual blood samples withdrawn from 54 goats raised
in 6 different farms located in Central Region of Portugal, through jugular punction to tubes with EDTA,.
Values for HEMOGLOBINE [HGB], o HEMATOCRIT [HCT], MEAN CORPUSCULAR VOLUME [MCV], MEAN
CORPUSCULAR HEMOGLOBINE [MCH], MEAN CORPUSCULAR HEMOGLOBINE CONCENTRATION [MCHC], o RED BLOOD
CELLS DISTRIBUTION WIDTH [RDW], MEAN PLATELET VOLUME [MPV], as well as cell counting for RED BLOOD
CELLS [GV], WHITE BLOOD CELLS [GB], NEUTROPHILS [NEUT], BASOPHILS [BASO], EOSINOPHILS [EOSI], MONOCYTES
[MONO] and LINPHFOCYTES [LINF], AND and the corresponding differential cell counting percentage, respectively,
NEUTROPHILS [N%], BASOPHILS [B%], EOSINOPHILS [E%], MONOCYTES [M%] and LINPHFOCYTES [L%] were
determined. PLATELETS failed to be counted.
Limit values and patterns for normality were calculated following two different procedures as described by JAIN
(1986) an by KANEKO et. al. (1997). The resulting values are shown in tables, and the limit values are pointed out.
196
Poster 50
O uso responsável dos animais: Qual o papel do médico veterinário?
Santos, J.S. e Olsson, I.A.S.
Instituto de Biologia Molecular e Celular – Rua do Campo Alegre, 823; 4150-180 Porto
O uso de animais em investigação tem uma história de vários séculos, mas a ideia de que uma boa ciência requere
respeito pelos animais, apenas começou a generalizar-se na última metade do século XX. Esta foi uma ideia central
no livro “The Principles of Humane Experimental Technique”, escrito pelos cientistas Russell e Burch em 1959. Foi
este livro que introduziu o Princípio dos 3 Rs:
- “Replacement, que significa a substituição de animais vivos conscientes por material não-senciente
- Reduction, que significa redução do número de animais usados para obter informação numa determinada
quantidade e precisão, e
- Refinement, que significa qualquer diminuição na incidência ou severidade dos procedimentos não humanos
aplicados naqueles animais que ainda têm de ser usados”.
Qual é o papel do veterinário na aplicação destes três princípios? O veterinário, como especialista em saúde e bemestar animal, está principalmente qualificado para trabalhar com “refinement”. Se o veterinário for director de um
biotério, será o responsável pela garantia de que os animais são mantidos e manuseados de forma a que lhes seja
induzido o mínimo de stress. No melhoramento dos sistemas de alojamento deverão ser consideradas não só as
necessidades físicas, como também as psicológicas, providenciando para isso um ambiente onde os animais poderão
desenvolver os seus padrões de comportamento normais. Quando dá assistência a projectos de investigação, o
conhecimento clínico do veterinário é essencial no controlo da dor, através do uso apropriado de analgésicos, como
também na definição de “humane endpoints” (quando os animais são eutanasiados num estadio clínico pré-definido,
para controlar o sofrimento que não pode ser prevenido ou aliviado por outros métodos). Evidentemente, o
“refinement” não se aplica apenas aos animais de laboratório, mas também pode e deve ser usado em animais de
zoos, animais de produção e animais de companhia. Actualmente, está amplamente estabelecido que o bem-estar dos
animais requere não só que não tenham fome nem sede e que não sintam dor, mas também que possam desenvolver
comportamentos considerados normais para a sua espécie. Desta forma, para conseguir utilizar todo o potencial
profissional na promoção do bem-estar animal, os veterinários necessitam de reconhecer que um bom bem-estar vai
para além da saúde clínica. Tendo isto em consideração, o veterinário pode indubitavelmente desempenhar um papel
importante na garantia de que os animais – independentemente de virem a ser animais de companhia saudáveis ou
modelos de investigação fiáveis – têm um bom bem-estar.
[The responsible use of animals: What is the role of the veterinarian?]
The use of animals in research has a history of several centuries, but the idea that good science requires respect for
animals has only gained widespread support during the last half of the 20th century. This idea was central in “The
Principles of Humane Experimental Technique”, written by scientists Russell and Burch in 1959. This book
introduced the 3 Rs’ principle:
- “Replacement, that means the substitution for conscious living higher animals of insentient material,
- Reduction, that means reduction in the number of animals used to obtain information of given amount and
precision, and
- Refinement, that means any decrease in the incidence or severity of inhumane procedures applied to those animals
which still have to be used”.
Which is the role of the veterinarian in the application of these three principles? The veterinarian as a specialist on
animal health and welfare is particularly qualified to work with refinement. As an animal facility manager, the
veterinarian will be responsible for making sure that animals are maintained and handled in a way that induces a
minimum of stress. In refining housing systems, not only physical needs but also psychological requirements should
be considered, providing an environment where animals can show their normal behaviour patterns. When giving
assistance to research projects, the veterinarian’s clinical knowledge is essential in the application of pain control
through appropriate use of analgesics, as well as in the definition of humane endpoints (where animals are
euthanized at a predefined clinical stage, to control suffering that cannot be prevented or alleviated by other means).
Of course, the application of refinement is not necessarily confined to laboratory animals, but it can and should also
be used in zoos, farms and companion animals. It is now widely agreed that animal well-being requires not only that
animals are not hungry or thirsty and do not feel pain, but also that they can develop behaviours considered normal
for their species. Therefore, to be able to use their full professional potential in promoting animal well-being,
veterinarians need to recognise that good welfare is more than clinical health. That taken into account, the
veterinarian can undoubtedly play an important role in ensuring that animals – no matter if they are to be healthy
pets or reliable models in research - have a good welfare.
197
Poster 51
A necessidade de incluir ética animal na educação em medicina veterinária
Pinto, A.A.
Department of Veterinary Medicine, University of Cambridge, Madingley Road, Cambridge CB3 0ES, UK,
O conceito do bem estar animal é ainda mal compreendido e muitas vezes confundido com o movimento dos
direitos dos animais. Bem estar animal é uma ciência que apesar de objectiva e metodológica, tem uma forte
componente ética. Infelizmente o conceito de ética é ainda desconhecido na maioria das instituiçãoes científicas de
educação superior e geralmente associado apenas com deontologia profissonal.
A étical animal é também frequentemente associada com uma única vertente, que se refere aos direitos dos animais.
É urgente clarificar estes mal entendidos e esclarecer os futuros profissionais sobre a utilidade dos conceitos de ética
animal e pensamento critico como ferramentas imprescindiveis na tomada de resoluções que se prendem com o bem
estar dos animaise os interesses económicos dos donos e dos clínicos.
Esta palestra apresenta uma visão da ética animal baseada na evolução e no estudo do comporrtamento animal e
providencia informação sobre construir um curso adequado á recente evolução dos conhecimentos cientifícos sobre
a definição de sentiente.
Questiona as fronteiras entre o que é a natureza humana e o que os faz diferente dos outros animais levando á
reflexão sobre os estatuto moral dos seres sentientes sob o domínio dos humanos.
[The need to include animal ethics in veterinary medicine courses]
The concept of animal welfare is still not well understood and frequently mixed up with animal rights movements.
Animal welfare is an objective and methodological science with a strong ethical component. Unfortunately the
concept of ethics is still completely unknown to the majority of science students. In many cases it is thought to be a
mere question of personal opinions and it is usually taught and understood as professional deontology.
In other cases, animal ethics, when taught in certain universities, is usually associated with the concept of rights. It is
therefore imperative to clarify some of these misunderstandings and show to future professionals the need for ethics
concepts as a tool in decision making where the welfare of animals is at stake when balanced with the interests of
the owner and the clinic.
This talk presents animal ethics based on evolution theory and the study of animal behaviour, and provides
information on how to design a course on animal ethics that equips the future professional to take decisions based on
the latest scientific information about sentient beings. It questions the fuzzy line that separates human nature from
other animals, and what makes us different or worthy of any special moral status in relation to other species.
198
Poster 52
Combinação anestésica de Tiletamina-Zolazepam-Medetomidina-Fentanil em ratos – estudo
preliminar
Alves, H.C.1, Olsson, A.2, Antunes, L.M.1
1 Departamento de Ciências Veterinárias, UTAD, 5000 Vila Real;
2 Instituto de Biologia Molecular e Celular, IBMC, Porto
Introdução: Os protocolos anestésicos para ratos são baseados principalmente na combinação de um ou dois fármacos. Através da
combinação com outras substâncias com efeitos sinergéticos, pode-se reduzir as doses e obter uma anestesia mais estável e
segura. Neste estudo usamos uma combinação de Tiletamina e Zolazepam (Zoletil®), associada a Medetomidina e Fentanil.
Embora o Zoletil sozinho tenha fracas propriedades antinocioceptivas, este pode aumentar estas propriedades noutros fármacos.
O objectivo deste estudo é encontrar uma combinação anestésica com bom efeito hipnótico, relaxante muscular, analgésico e
rápida recuperação.
Métodos: Foram usados 24 ratos, fêmeas, Wistar, consanguíneas (colônia original da Gulbenkian e reproduzidos no IBMC),
dividido em 6 grupos de 4 animais. Cada grupo recebeu uma dose intraperitoneal (IP) de seis combinações de Zoletil,
Medetomidina e Fentanil, respectivamente (I 5/0,15/0,05; II 5/0,15/0,1; III 10/0,1/0,01; IV 10/0,1/0,02; V- 20/0,1/0,01; VI20/0,1/0,02mg/kg). Foram monitorizadas a perda do reflexo de equilíbrio e podal, juntamente com o tempo e a qualidade da
recuperação anestésica. Os animais receberam atipamezole 20 minutos após a perda do reflexo podal, a dose foi 5 vezes superior
à dose IP de Medetomidina.
Resultados: Todos os animais atingiram o plano cirúrgico. Os tempos (média/desvio padrão em segundos) para indução,
obtenção do plano cirúrgico (OdoPC) e recuperação foram os seguintes:
Grupo
I
II
III
IV
V
VI
Indução
408/70
342/50
273/63
414/91
191/58
230/38
(OdoPC)
1353/161
641/288
676/109
1003/108
389/84
565/69
Recuperação
430/73
504/113
665/425
1206/622
2288/808
1659/644
A única morte registou-se no grupo 5. As recuperações nos grupos I e II foram excelentes, enquanto nos grupos V e VI foram
muito lentas e de má qualidade. As variações dentro dos grupos foram grandes.
Conclusão: Os grupos que receberam 20mg/kg de Zoletil alcançaram o plano anestésico mais rapidamente, no entanto
apresentaram más recuperações. O grupo V apresentou o melhor OdoPC. O OdoPC foi muito lento dentro dos outros grupos,
expressando fraca analgesia. Os grupos IV e VI (doses de fentanil mais altas), não mostraram nenhuma vantagem no OdoPC em
comparação com os grupos que receberam 0.01mg/kg de fentanil (III e V). No grupo II houve uma redução no tempo de indução.
Os grupos I e II apresentaram as melhores recuperações. A administração de Zoletil, em doses mais baixos (doses de referência 20-40mg/kg) diminui as doses anestésicas de medetomidina e fentanil (doses de referência - 0,3/0,3mg/kg). Neste estudo
preliminar a combinação mais ajustada é a de 5/0,15/0,1mg/kg de Zoletil, medetomidina e fentanil respectivamente.
[Tiletamine-Zolazepam-Medetomidine-Fentanyl anaesthesia combination in rats – a preliminary
study]
Introduction: Anaesthesia protocols for rats are mainly based on combinations of one or two drugs. By combining more drugs
with synergistic effects, it may be possible to reduce the doses of all drugs and providing more stable and safer anaesthesia. In
this study we used a combination of Tiletamine with Zolazepam (Zoletil®), associated with Medetomidine and Fentanyl.
Although Zoletil alone has no antinocioceptive properties, it may increase these proprieties of the other drugs. The objective of
this study is to find an anesthetic combination with good hypnosis, muscular relaxation, analgesia and fast recovery.
Methods: We used 24 inbred female Wistar rats (original colony obtained from Gulbenkian and reproduced in the IBMC),
divided in 6 groups of 4 animals. Each group received an intraperitoneal (IP) dose of one of six Zoletil, Medetomidine and
Fentanyl combinations, respectively (I- 5/0.15/0.05; II- 5/0.15/0.1; III- 10/0.1/0.01; IV- 10/0.1/0.02; V- 20/0.1/0.01; VI20/0.1/0.02mg/kg). The loss of righting reflex and the pedal withdrawal reflex were recorded along with the time and quality of
recovery from the anesthesia. The animals received atipamezole 20 minutes after the loss of the pedal withdrawal reflex, the dose
was 5 times superior to the medetomidine IP dose.
Results: All animals reached surgical anesthesia. The times (average/standard deviation in seconds) for induction, attainment of
surgical anaesthesia (AofSA) and recovery are the following:
Group
I
II
III
IV
V
VI
Induction
408/70
342/50
273/63
414/91
191/58
230/38
(AofSA)
1353/161
641/288
676/109
1003/108
389/84
565/69
Recovery
430/73
504/113
665/425
1206/622
2288/808
1659/644
The only death was in group 5. The recoveries in groups I and II were excellent, while in groups V and VI the recoveries were
very slow and with poor quality. Variations within groups were large.
Conclusion: The groups that received 20mg/kg of Zoletil reached the anaesthetic level faster, but presented poor recoveries,
Group V had the best AofSA. AofSA was very slow in the other groups, expressing weak analgesia. Groups IV and VI (with
higher fentanyl doses), showed no advantage for AofSA compared to the group that received 0.01mg/kg of fentanyl (III and V).
In group II there was a reduction in the time of induction. Groups I and II showed the best recoveries. The administration of
Zoletil, in lower doses (20 -40mg/kg) diminishes the doses of medetomidine and fentanyl for anaesthesia (reference doses are
0.3/0.3mg/kg). From this preliminary study the more adjusted combination is 5/0,15/0,1mg/kg of Zoletil, medetomidine and
fentanyl respectively.
199
Poster 53
Descrição de três casos de criptorquidismo em equinos de raça Quarto de Milha em Portugal
Bettencourt, E.M.1, Branco, S.M.1, Figueiredo, T.3, Lavrador, C.1 Romão, R.J.2, Fialho, L.1
1 Departamento de Sanidade Animal e Vegetal
2 Departamento de Zootecnia
3 Hospital Veterinário da Universidade de Évora, Pólo da Mitra, 7000-093 Évora, Portugal
O criptorquidismo consiste na não-descida dos testículos para o escroto, podendo ser uni ou bilateral. Cerca de 10% dos
casos são de criptorquidismo bilateral e as situações unilaterais ocorrem frequentemente do lado esquerdo. Os testículos
podem localizar-se na cavidade abdominal, no canal inguinal ou no tecido subcutâneo junto ao anel inguinal externo. As
características das lesões macro e microscópicas do(s) testículo(s) dependem da idade do cavalo e da localização do
testículo. Normalmente a observação macroscópica revela atrofia pronunciada e aumento da consistência. No exame
histopatológico observa-se hipoplasia das células da linha germinativa e, em cavalos idosos, fibrose ao nível das túnicas.
Os cavalos com criptorquidismo bilateral são estéreis mas, mantendo-se a produção de testosterona pelas células de
Leydig, o comportamento sexual masculino não é alterado, apresentando-se, por vezes, estes animais mais agressivos que
os não-criptorquídeos.
Em equinos é considerado uma situação hereditária com carácter dominante, que ocorre com prevalência elevada em
determinadas raças nomeadamente no American Quarter Horse (Quarto de Milha). Assim, mesmo os cavalos com
criptorquidismo unilateral, que ainda apresentam de sémen, não devem ser utilizados para a reprodução devendo ser
recomendada a sua castração. A castração pode ser efectuada por acesso inguinal, parainguinal, suprapúbico paramediano
ou no flanco. Recentemente tem-se desenvolvido a castração por laparoscopia com o cavalo em estação ou em decúbito.
O presente trabalho refere três casos de critptorquidismo esquerdo, em cavalos Quarto de Milha, castrados no Hospital
Veterinário da Universidade de Évora (HVUE), com 2 1/2, 3 ½ e 6 anos de idade. Os testículos ectópicos localizavam-se,
respectivamente, no anel inguinal, no tecido sub-cutâneo e na cavidade abdominal. A castração do cavalo cujo testículo se
encontrava sub-cutâneo, junto ao anel inguinal externo, realizou-se por acesso inguinal, com o cavalo sedado e em estação.
As outras duas cirurgias realizaram-se sob anestesia geral (por via inalatória) com os cavalos em decúbito dorsal sendo
ambas iniciadas por acesso inguinal. O testículo de localização abdominal, teve que ser extraído por acesso parainguinal,
dada a impossibilidade de exteriorização pelo anel inguinal. Ao exame macroscópico os testículos ectópicos encontravamse atrofiados. O testículo com localização subcutânea apresentava forma irregular e os de localização no anel inguinal e na
cavidade abdominal apresentavam, respectivamente, aumento da consistência e diminuição da mesma. Ao exame
histopatológico observou-se, em todas as amostras, hipoplasia e degenerescência testicular severa sobretudo das células da
linha germinativa, sendo que o testículo com localização abdominal apresentava ausência quase total destas células e
também alterações degenerativas das células de Sertoli.
[Description of three cases of cryptorchidism in American Quarter horse in Portugal]
The cryptorchidism refers to the retention of one (unilateral) or both (bilateral) testicles and its absence in the scrotum.
10% of the cases of cryptorchidism are bilateral and the unilateral cases are frequently observed on the left side. The
ectopic testicles can be located in the abdominal cavity, the inguinal ring or the sub-cutaneous tissue near the external
inguinal ring. The macroscopic and microscopic lesions observed in the testicles depend both from the animal’s age as
well as from the testicles’s location. More often the macroscopic examination reveals a marked atrophic testicle and a
harder consistency of it. On the hystopathological exam we observe hypoplasia of the cells of the germinative pathway
and in older horses a pronounced fibrosis in the area of the tunics. Horses with bilateral cryptorchidism suffer from
sterility, however since the Leydig cells still produce testosterone, the mating behaviour and secondary sexual
characteristics suffer no changes, horses are sometimes even more aggressive than non-cryptorchids horses.
Cryptorchidism in horses is considered a hereditary situation with dominant character and has a high prevalence in some
horse breeds like the American Quarter Horse. Concerning this fact, horses with this pathology, even if is unilateral and
even with production of semen, should not be used as stallions and its castration should be recommended. The castration
can be performed by several “traditional” approaches but presently some surgeons prefer the laparoscopic approach with
the horse standing or in dorsal recumbency.
The present work refers to three cases of left side cryptorchidism (unilateral) in American Quarter Horse that were
castrated in the Hospital Veterinário da Universidade de Évora (HVUE). The three horses were 2 1/2, 3½ and 6 years old.
The ectopic testicles were located in the inguinal ring (the 2 ½ years old horse), sub-cutaneous tissue (the 3½ years old
horse) and in the abdominal cavity (the 6 years old horse). The surgery performed for the testicle located in the
subcutaneous tissue was performed by inguinal approach with the animal standing and sedated. The other two surgeries
were both performed with general inhalant anaesthesia with the animal in dorsal recumbency. Both surgeries were initially
done by inguinal approach being the inguinal testicle well exteriorized by this approach. The intra abdominal testicle was
impossible to remove through the inguinal ring so the para inguinal approach was used to exteriorize it. In the macroscopic
examination all ectopic testicles were severely atrophic. The testicle removed from the subcutaneous tissue presented an
irregular shape and the other testicles presented changes in consistency with higher consistency for the inguinal ring
testicle and decreased consistency for the intra abdominal one. In the hystopathological examination, hypoplasia and
severe testicular degenerative changes were observed in all samples especially in the germinative cells. In intra abdominal
testicle these cells are almost absent and the Sertoli cells had marked degenerative changes.
200
Poster 54
Parasitismo num núcleo de cavalos de raça Sorraia*
Crespo, M.V.1, Rosa, F.2, Ferreirinha, D.1
O núcleo de equinos de raça Sorraia (dois garanhões e três éguas), cedido à Escola Superior Agrária de Santarém
(ESAS), pela Coudelaria Nacional, em 31 de Janeiro de 2003, tem como objectivo principal contribuir para a
preservação e divulgação desta raça nacional primitiva. No sentido de se implementar um esquema profiláctico
antiparasitário adequado aos animais recém introduzidos na ESAS, procedeu-se à pesquisa de endo e ectoparasitas
quando da sua introdução no novo biótopo, bem como à colheita de fezes quinzenais, durante o período de 16
meses, para determinar o período de reaparecimento de ovos (PRO) e os tipo, grau e evolução do parasitismo.
As amostras de fezes foram sujeitas a exames qualitativos (técnicas de Willis e de sedimentação espontânea) e
quantitativos (técnica de McMaster) e a coproculturas.
No momento da entrada identificaram-se ovos de estrongilídeos gastrintestinais (EGI) (média de 740 ovos por
grama de fezes - OPG), formas larvares de Gasterophilus intestinalis e espécimes adultos de Dermacentor
marginatus. Com base nestes resultados os animais foram desparasitados a 3 de Fevereiro de 2003 com
EQVALAN® e com ARPON®.
O PRO foi de 8 semanas nas fêmeas e de 18 nos machos. No período entre Abril e Maio daquele ano, época de
cobrições, as médias de eliminação nas fêmeas, foram acima dos 1000 OPG. Os valores máximos de eliminação
observados (3100 OPG) registaram-se numa fêmea que pariu em Abril. O poldro iniciou a eliminação de ovos de
estrongílideos e de Strongyloides sp. aos 12 e 31 dias, respectivamente.
As coproculturas realizadas, apenas evidenciaram a presença de larvas de 3.º estadio de Cyatostomum sp. e de
Trichostrongylus axei.
Depois da 2ª desparasitação (26 de Junho de 2003), verificou-se uma evolução do parasitismo idêntica à manifestada
anteriormente, no entanto, as médias de eliminação de ovos não ultrapassaram os 800 OPG (infecção média,
SOULSBY, 1986), pelo que apenas se voltou a desparasitar os animais em 12 de Março de 2004, antes do início das
cobrições.
Os resultados obtidos determinaram a implementação de um esquema de tratamento bianual. Presentemente, o
núcleo continua a ser alvo de acompanhamento mensal e o comportamento do PRO e das médias de eliminação
acima dos 1000 OPG, têm sido semelhantes ao anteriormente descrito.
* Trabalho realizado no âmbito do Diagnóstico parasitário/controlo do parasitismo aos efectivos da ESAS
(Laboratório de Parasitologia Animal – Sector de Produção Animal).
[Parasitism in a nucleus of Sorraia horse breed]
In 31st of January 2003, a small nucleus of Sorraia horse breed (two stallions and three mares) was offered by the
Coudelaria Nacional to ESAS to contribute for preservation and divulgation of this Portuguese native breed. In order
to implement a deworming program suitable to this new introduced animals, a research on endo and ectoparasites
was performed immediately after their arrival and after then fortnight faeces collection were realized during 16
months to evaluate the eggs reappearing period (ERP) and the type, degree and evolution of parasitism.
Qualitative (Willis and spontaneous sedimentation techniques) and quantitative (McMaster techniques) coprological
exams and coprocultures were performed.
In the arrival, gastrointestinal eggs (740 EPG average), Gasterophilus intestinalis larvae and Dermacentor
marginatus were identified. Based on these results on the 3rd of February 2003 the animals were dewormed with
EQVALAN® and ARPON®.
The ERP was 8 weeks in mares and 18 in stallions. Between April and May of the same year, breeding season, the
egg output average was above 1000 EPG. A mare that gave birth on April, showed the maximum values of egg
output (3100 EPG). The foal began to shed strongylids and Strongyloides sp. eggs at 12 and 31 days, respectively.
The presence of 3rd stage larvae of Cyatostomum sp. and Trichostrongylus axei were noticed in the faeces cultures.
After the 2nd deworming (26th June 2003), the behavior of helminthic egg output was similar to that one described
above, although the egg output was bellow 800 EPG (moderate infection, SOULSBY, 1986). Though, the next
deworming occurred only on 12 of March 2004, before the beginning of the breeding season.
The results suggested the implementation of a deworming program with two annual treatments. This nucleus is still
observed once a month for helminthic parasites and the same pattern of the egg output has been observed.
201
Poster 55
Um caso de hidrómetra em cabra da raça Serrana
Simões, J.1 e Mascarenhas, R.2
1 Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro, 5000-911 Vila Real
2 INIAP, Estação Zootécnica Nacional, 2000-763 Vale de Santarém
A hidrómetra ou pseudogestação é uma patologia uterina de etiologia ainda não completamente esclarecida, sendo
uma importante causa de infertilidade em algumas explorações caprinas. Não é do nosso conhecimento, qualquer
descrição da sua ocorrência em cabras da raça Serrana. Este caso foi detectado no decurso dum trabalho, com
objectivo de controlo reprodutivo e caracterização ecográfica do útero, realizado em duas explorações de cabras da
raça Serrana ecotipo Transmontano, com 40 cabras cada uma. Foram efectuados, durante um ano, exames
ecográficos periódicos para diagnóstico de gestação e de patologias uterinas. Foi diagnosticado um caso de
hidrómetra numa cabra adulta, multípara, com 40 meses de idade e com o último parto ocorrido 14 meses antes. Os
sinais ecográficos desta patologia foram caracterizados, comparativamente aos de úteros gestantes e não gestantes,
observados noutros animais da mesma raça. Adicionalmente, foram recolhidas, por punção transabdominal guiada
por ecografia, duas amostras do conteúdo do útero pseudogestante. Pelo exame microbiológico, não foi detectado
qualquer crescimento bacteriano no líquido contido nas amostras. No exame histopatológico, foram detectadas
numerosas células de descamação do endométrio e raros leucócitos. Após o diagnóstico, foi efectuada a
monitorização ecográfica da hidrómetra com uma periodicidade quinzenal, sem a instituição de qualquer tratamento,
tendo-se observado a sua remissão espontânea após 45 dias. Em conclusão, a utilização da ecografia no controlo
reprodutivo de efectivos caprinos permitiu o diagnóstico do que consideramos ser o primeiro caso de hidrómetra ou
pseudogestação em cabras da raça Serrana ecotipo transmontano. Será necessário continuar as observações em
rebanhos caprinos e a detecção de mais casos desta patologia para se avaliar a sua incidência em caprinos desta raça
e a sua importância sobre a fertilidade destes efectivos.
[Hydrometra in Serrana goats: a case]
Hydrometra or pseudopregnancy is a uterine pathological condition and an important cause of infertility of herd’s
goats. The aetiology of this condition is not well understood. At our knowledge, no cases were described in Serrana
goats, a Portuguese local breed. This case was observed during a study for reproductive management and uterus
ecocharacterization in goats. In two herds with 40 goats each, periodical ultrasonographic examinations of normal
and abnormal uterus were performed. During the ultrasound examinations, a case of hydrometra was diagnosed in a
adult (40 months of age) and multiparous goat. The last parturition had occurred 14 month before. The
ultrasonographic aspects of this affection were characterized. The echocharacterization of pregnant and not pregnant
uterus in other animals was also performed. These last events provided a differential diagnosis. Additionally, two
samples of uterine fluid were collected by transabdominal puncture assisted by ultrasonography. No bacteriological
growth was found. Several endometrial desquamation cells were observed during the histological examination. In
contrast, only a few number of leucocytes was identified. Every 15 days, ultrasonographic examinations were
performed until the hidrometra disappearance, 45 days after the first visualization. No treatment was applied. In
conclusion, the regular use of real-time ultrasound allowed, for the first time, the diagnosis of hydrometra in Serrana
goats. However, it is necessary to continue to search this pathology for evaluation of the prevalence and importance
in Serrana goats’ fertility.
202
Poster 56
Eficiência da inseminação artificial em caprinos de raças autóctones
Barbas, J.P. e Mascarenhas, R.
Estação Zootécnica Nacional – INIAP, 2005-048 Vale de Santarém
A inseminação artificial (IA) é indispensável para a implementação dos programas de selecção e melhoramento
genético, permitindo aumentar a produtividade dos nossos caprinos autóctones. Foram realizadas 753 inseminações
artificiais em cabras de três raças: Serrana (467), Charnequeira (138) e Algarvia (148). Na raça Serrana, as IAs
foram efectuadas em 15 explorações dos ecotipos Transmontano e Ribatejano, enquanto nas raças Charnequeira e
Algarvia foram realizadas em apenas uma exploração de cada raça.
Todas as inseminações foram efectuadas 42-45 horas após o fim do tratamento progestagénico (esponjas de 45 mg
FGA, durante 11 dias; ChronoGest®, Intervet, Holanda). A eCG (300 a 500 UI; Intergonan®, Intervet, Holanda) e o
cloprostenol (50 a 150 µg; Estrumate®, Essex Animal Health, Alemanha) foram administrados 48 horas antes do
fim do tratamento progestagénico.
O sémen, colhido com vagina artificial, foi diluído com meio de leite de vaca desnatado (Colas) e refrigerado a +4
ºC. A IA foi realizada por via cervical nas primeiras 6 horas após a recolha de sémen, utilizando 200 milhões de
espermatozóides totais por inseminação. As inseminações foram classificadas em cervicais, intracervicais e
intrauterinas de acordo com a profundidade da IA.
Os parâmetros reprodutivos avaliados foram a fertilidade, fecundidade e prolificidade. O valor médio da fertilidade
foi de 49,8 %, não tendo sido observadas diferenças significativas entre raças. A fecundidade (80-107%) e a
prolificidade (171-212 %) variaram significativamente entre raças (p<0,05 e p<0,01, respectivamente), sendo os
valores mais elevados observados na raça Algarvia. A profundidade da IA influenciou significativamente (p<0,05) a
fertilidade, sendo os resultados das inseminações intrauterinas (45,9 %) mais baixos do que os obtidos com as
inseminações cervicais (57,2 %) e intracervicais (54,7 %). Na raça Serrana ecotipo Ribatejano houve também um
decréscimo significativo da fecundidade (86 %) nas inseminações intrauterinas.
Foi observado um efeito individual do bode sobre a fertilidade e fecundidade, particularmente nas raças
Charnequeira e Algarvia, sugerindo uma maior aptidão de alguns machos para a utilização em IA e a necessidade de
selecção por esta aptidão.
Tanto a fertilidade como a prolificidade variaram significativamente entre explorações, o que poderá ser atribuído às
diferenças de maneio, de alimentação e de produção leiteira.
Alguns dos factores que influenciam a eficiência da inseminação artificial, como o local de inseminação e as
condições de exploração, poderão ser controlados de modo a obter uma maior taxa de sucesso desta técnica.
[Efficiency of artificial insemination in local goats ]
Artificial insemination (AI) is essential for implementation of genetic selection and improvement programs, which
allows increasing productivity of our autochthones goats. Evaluation was done in 753 AI of goats of three local
breeds: Serrana (467), Charnequeira (138) and Algarvia (148). In Serrana goats, AI was practiced in 15 different
herds of the ecotypes Transmontano and Ribatejano, while only one herd of each of the breeds Charnequeira and
Algarvia was used to inseminate.
All artificial inseminations were done 42-45 hours after the end of progestagen treatment (45 mg FGA sponges,
during 11 days; ChronoGest®, Intervet, Netherlands). Hormone treatment with eCG (300 - 500 UI; Intergonan®,
Intervet, Netherlands) and cloprostenol (50 - 150 µg; Estrumate®, Essex Animal Health, Germany) were injected 48
hours before the end of progestagen treatment.
Buck semen was collected with artificial vagina and refrigerated at +4ºC., after dilution in cow skimmed-milk based
extender (Colas). Each goat was inseminated one time, by cervical route, until 6 hours after semen collection and
using 200 million sperm cells per dose. Concerning the depth of semen deposition, inseminations were classified as
cervical, intracervical and intrauterine.
Fertility, fecundity and prolificacy were evaluated. Overall fertility was 49.8 % without any significant differences
among breeds. Fecundity (80-107 %) and prolificacy (171-212 %) presented significant variations among breeds
(p<0.05 and p<0.01, respectively), the highest values being observed in Algarvia goats. Fertility was significantly
influenced by depth of AI: the lowest values of fertility were obtained after intrauterine AI (45.9 %) as compared
with cervical (57.2 %) and intracervical AI (54.7 %). A decrease of fecundity (86 %) was observed in Serrana
Ribatejano goats inseminated by intrauterine route.
An individual male effect upon fertility and fecundity was observed, with more evidence in Charnequeira and
Algarvia goats. This suggests a greater aptitude of some males to be used in AI and the necessity of selection
according to this characteristic.
Fertility and prolificacy presented significant differences among herds, which may be explained by differences of
management, of feeding and of milk production levels.
Some of factors influencing the efficiency of AI, namely depth of insemination and herd conditions, can be
controlled in order to have a maximum success rate of this technique.
203
Poster 57
Efeito do fotoperíodo na maturação e fertilização in vitro de oócitos ovinos utilizando sémen
criopreservado
Marques, C.C., Baptista, M.C., Barbas, J.P., Pereira, R.M., Vasques, M.I. e Horta, A.E.M.
Departamento de Reprodução Animal, Estação Zootécnica Nacional, 2000-763 Vale de Santarém. E-mail:[email protected]
A técnica de fertilização in vitro (IVF) de oócitos ovinos foi implementada em Portugal não só para a produção de
embriões, mas também para avaliar a qualidade do sémen congelado em carneiros de raças autóctones. Embora os
autores realcem o efeito da sazonalidade na fertilidade do macho e a sua influência no sucesso da IVF, as variações
sazonais na fêmea não devem ser negligenciadas. A ovelha apresenta uma estação reprodutiva que se estende desde
o final do Verão até ao início do Inverno, iniciando a sua ciclicidade à medida que a luminosidade diária diminui. O
objectivo deste trabalho foi investigar o efeito do fotoperíodo, crescente e decrescente, sobre a competência para a
maturação (IVM) e fertilização in vitro de oócitos ovinos aspirados a partir de ovários recolhidos em matadouro,
durante dois anos consecutivos. A maturação realizou-se em meio de cultura TCM 199 contendo hormona folículoestimulante, hormona luteinizante, soro de ovelha em cio superovulada e antibióticos, sendo avaliada
morfologicamente pela razão entre o número de oócitos maturados e o número de oócitos seleccionados para a
maturação. O sémen de carneiros Serra da Estrela e Saloia foi recolhido por vagina artificial, refrigerado a 4ºC e
congelado em vapores de azoto. A congelação processou-se em dois períodos, no Inverno (luminosidade crescente)
e no Outono (luminosidade decrescente), tendo sido utilizado na fertilização dos oócitos maturados,
independentemente ou em correspondência com as épocas do ano consideradas. Para a fertilização, o sémen foi
descongelado e sujeito a prévia capacitação por swim up. De um total de 1633 ovários aspiraram-se 6279 oócitos,
sendo apenas 5003 (79,7%) de boa qualidade e seleccionados para a maturação. O número de oócitos de boa
qualidade aspirados por ovário foi de 3,17±0,2. Não houve diferenças significativas entre as taxas de aspiração
obtidas nos dois períodos de luminosidade considerados (p>0,05). A taxa de maturação total dos oócitos foi de
79,47 ± 9,6%, mas no período de luminosidade decrescente apresentou valores significativamente superiores aos do
período de luminosidade crescente (83,48% ± 5,67% vs. 74,61% ± 11,43%, respectivamente, p<0,05). Não se
observaram diferenças significativas entre os dois períodos anuais relativamente às taxas de clivagem (p>0,05).
Assim, embora a época de recolha dos oócitos ovinos possa influenciar a sua capacidade de maturação in vitro, os
mecanismos envolvidos na fertilização não são comprometidos por aquele factor. Sugerimos que os oócitos
recolhidos nos dois períodos anuais podem suportar os testes para avaliação da capacidade fertilizante in vitro do
sémen congelado de carneiros e posterior correlação com a fertilidade in vivo.
[Effect of photoperiod on in vitro maturation and fertilisation of sheep oocytes using cryopreserved
sperm]
In vitro techniques for the fertilisation of oocytes (IVF) recovered from abattoir sheep ovaries have been
implemented in Portugal. IVF was used not only as a tool to produce embryos but also as a test to assess in vitro
fertility of frozen ram ejaculates from native breeds. Although several authors emphasize the effect of seasonality on
ram fertility and its impact on IVF sucess, seasonal variations in the ewe must not be neglected. Ewes display an
endogenous circannual rhythm of biological activity that responds to daylength changes, starting to breed in June or
July and reaching a peak from September to November, when daylength decreases. The objective of the present
study was to investigate possible effects of increasing or decreasing daylength on in vitro sheep oocyte maturation
and fertilisation during two years. Oocytes were cultured in TCM 199 supplemented with follicle stimulatig
hormone, luteinizing hormone, superovulated estrus sheep serum and antibiotics. Maturation rate was determined by
the number of matured oocytes per oocytes selected for maturation. Ram ejaculates from Serra da Estrela and Saloia
breeds were collected by artificial vagina, refrigerated at 4ºC and frozen in liquid nitrogen. Semen, cryopreserved in
winter (increasing daylength) and autumn (decreasing daylength), was used to fertilise matured oocytes,
independently or in correspondence with daylength periods. After thawing, sperm was allowed to swim up in TALPmedium for 1 hour in a CO2 incubator at 39ºC for capacitation. From a total of 1633 ovaries, 6279 oocytes were
aspirated but only 5003 (79.7%) were selected for in vitro maturation. A rate of 3.17 good quality oocytes was
obtained per ovary. No differences between daylength periods were found for the number of good quality oocytes
collected (p>0.05). The overall oocyte maturation rate was 79.47 ± 9.6 %, a higher maturation rate being observed
during the decreasing daylength semester (83.48% ± 5.67% vs. 74.61% ± 11.43%, respectively, p<0.05). No
differences in cleavage rates between both photoperiods were found (p> 0.05). Although season of recovery of
oocytes may affect their competence to resume meiosis, cellular mechanisms involved in fertilisation are not
impaired by this factor. We suggest that oocytes matured in both day length periods maintain their ability to assess
in vitro fertilizing capacity of frozen-thawed ram semen and its correlation with in vivo fertility.
204
Poster 58
Utilização experimental de pontas de micropipeta de pequeno diâmetro em substituição da “pulled
straw” para congelar embriões de bovinos por vitrificação
Ferreira, P.1 e Rocha, A.2,3
1 ICAV. Instituto de Ciências Agrárias, Vairão, Portugal
2 Instituto de Ciências Biomédicas Abel Salazar, Universidade do Porto
3 Ceca/ICETA, Universidade do Porto
O método de congelação de embriões bovinos por vitrificação em “open pulled straw - OPS” (mini-palhetas
esticadas sob acção do calor) tem tido um sucesso considerável (1). No nosso laboratório, blastoscistos bovinos
congelados por este método tiverem menos lesões provocadas pela congelação e descongelação do que os embriões
congelados por outros métodos (2). As vantagens do método OPS são o menor diâmetro da palhinha (0.8 mm vs. 1.7
mm) e o pequeno volume de meio de congelação aspirado (1-2 µl vs. 250 µl) que permitem um aumento na rapidez
de congelação e uma redução da concentração de crioprotectores. No entanto palhinhas para congelação OPS
produzidas comercialmente vêm com grandes variações de diâmetro e esticar artesanalmente as palhinhas, é um
processo laborioso e pouco eficaz. Assim, comparamos a eficiência de congelação de embriões bovinos em pontas
plásticas (ref:701130.200 Sarstedt) de pequeno diâmetro para pipetas e em palhinhas OPS. O diâmetro interno das
pontas utilizadas é de 0.36 mm e o volume de meio de congelação aspirado com a micropipeta foi de 2 µl. Para a
experiência utilizaram-se 5 réplicas de 9 a 10 blastocistos de grau 1 produzidos in vitro, que foram aleatoriamente
distribuídos para congelação em OPS (n=49) ou em pontas plásticas de pipetas (n=48). O mesmo protocolo de
vitrificação (1) foi utilizado para ambos os grupos. Após descongelação, os embriões foram examinados através de
uma lupa, para avaliação da re-hidratação dos mesmos. Seguidamente, os blastocistos foram incubados a 39ºC numa
atmosfera com 5% de CO2 em grupos de 5 a 10, numa monocamada de células do cumulus, em meio TCM-199 com
sais de Earle e 25mM de HEPES (Sigma). O meio foi enriquecido com 10% de soro bovino fetal inactivado pelo
calor (Sigma) e a cultura foi feita em placas de Nunc de 4 poços (ref.). Os blastocistos foram examinados em
intervalos de 24 hrs, para se determinar a taxa de eclosão. Quarenta e cinco (91,8%) dos 49 embriões congelados nas
OPS re-hidrataram, contra apenas 35 de 48 (73,9%) dos embriões congelados em pontas (p<0,01). De forma
semelhante, houve uma maior (p<0,05) percentagem (75,6%) de eclosão dos embriões re-hidratados no grupo
congelado nas OPS (34 de 45) do que no grupo congelado nas pontas de pipeta (62.9% - 22/35). Em conclusão,
estes resultados sugerem que pontas de pipeta de pequeno diâmetro não são um substituto satisfatório das OPS, para
a vitrificação de blastocistos bovinos, produzidos in vitro.
Referências: Vajta G et al. (1997). Cryo Lett 18:191; Ferreira P et al. (2001). III Cong. Ibérico Rep. Anim. Livro de
Resumos:404-408.
[Experimental utilization of low diameter micropipette tips for replacement of the pulled straw, for
bovine embryo freezing by vitrification]
The open pulled straw method (OPS) has been used for vitrifying bovine embryos with great success (1). In our
laboratory, bovine blastocysts frozen by the OPS method had lower freeze/thaw injuries than blastocysts frozen by
any other method, and could not be differentiated from non-frozen, control embryos (2). The advantage of the OPS
method is brought about by the low inner diameter of the “pulled” straw (0.8 mm vs 1.7 mm in the intact straw) and
the resultant lower holding volume (1-2 µl vs 250 µl), which increases the cooling rate 10 times over vitrification in
a non-pulled straw. This rapid cooling allows for lower cryoprotectant concentrations to be used, thereby reducing
toxic injury. However, commercially produced pulled-straws are not readily available and have very variable
diameters (in some cases embryos were not aspirated into the straw due to absence of a capillary effect). On the
other hand, individual heat-assisted straw pulling is a very time consuming procedure. The possibility of using
inexpensive, readily available low diameter (white) plastic pipette tips (Ref: 70.1130.200 Sarstedt) to replace the
open pulled mini-straw for freezing bovine embryos was explored. The inner diameter of the tips is 0.36 mm and the
loading volume aspirated was 2µl. For the experiment, five replicates of 9 to 10 day-7 in vitro produced blastocysts
were randomly assigned to be frozen by vitrification in open pulled straws (49 embryos) or in plastic micropipette
tips (48 embryos). The same OPS vitrification protocol (1) was utilized for both groups. After thawing, embryos
were observed under an inverted light stereoscope for re-hydration, and subsequently cultured for an additional 72
hrs at 39ºC in 5% CO2 air, in cumulus-cells monolayers under TCM-199 medium with Earle’s salts buffered with 25
mM HEPES (Sigma), supplemented with 10% heat-inactivated fetal bovine serum (Sigma), in Nunc 4-well
multidishes. Development of oocytes to the hatched-blastocyst stage was examined every 24 hrs. Forty-five (91.8%)
out of the 49 embryos frozen in open pulled straws re-hydrated, versus 35 out of 48 (73.9%) blastocysts frozen in
micropipette tips (p<0.01). Similarly, there was a higher (p<0.05) percentage (75.6%) of re-hydrated embryos that
hatched (34/45) for the group frozen in open-pulled straws, than for the group frozen in pipette tips (62.9% - 22/35).
In conclusion, these results do not support the hypothesis that micropipette tips may be a good alternative to pulled
straws, for vitrification of in vitro produced bovine blastocysts.
References: Vajta G et al. (1997). Cryo Lett 18:191; Ferreira P et al. (2001). III Cong. Ibérico Rep. Anim. Livro de
Resumos:404-408.
205
Poster 59
Caracterização da actividade ovárica pós-parto em porcas primíparas pelo doseamento de
progesterona nas fezes
Santos e Silva, J.1, Figueiredo, F.2, Cunha, T.2, Vasques, M.I.2, Horta, A.E.M.2 e Pires da Costa, J.2
1 DRAEDM – Divisão Produção Animal, Quinta do Pinho, 4800-875, S. Torcato. Guimarães
2 Estação Zootécnica Nacional- INIAP, 2005-048 Vale de Santarém
O Objectivo deste trabalho foi avaliar o reinício da actividade ovárica pós desmame de porcas primíparas, através do
perfil de progesterona (P4) fecal por RIA, caracterizando os diferentes tipos infertilidade: anestro, falhas de
fertilização e perdas de gestação. Vinte e quatro nulíparas de dois genótipos, Bísaro (Bis) vs. LargeWhite (LW)
foram distribuídas por dois sistemas de exploração (confinado vs. ar livre), num arranjo factorial 2 X 2. O desmame
efectuou-se aos 28 dias, realizando-se a recolha de fezes de 5 em 5 dias, desde uma semana antes do desmame até
cerca 40 dias após o mesmo.
Num total de 18 primeiros ciclos, monitorizados em 18 porcas, registamos 13 (72%) primíparas cíclicas logo após o
desmame (< 13 dias) e 5 casos (28%) de porcas acíclicas até ao dia 22. Uma fêmea mostrou actividade luteínica de
curta duração antes da primeira ovulação (5,6%). A taxa gestação à primeira ovulação detectada pela P4, foi de 50%
e as falhas de gestação distribuíram-se por ciclos longos 25-30 dias (11,1%) e ciclos normais (38,9%). Um efeito da
raça entre diferentes tipos de falhas de gestação foi detectado (P <0,05) embora não tivessem sido encontradas
diferenças significativas para intervalo entre o desmame e a cobrição fecundante (IDCF), em média de 49 dias.
Entre sistemas, as primíparas do sistema confinado prolongaram significativamente (P <0,05) o IDCF (76,2 dias),
relativamente às do sistema ao ar livre (22,1 dias), não tendo sido detectadas diferenças no tempo de reinício da
função ovárica. Comparando genótipos, o início da função ovárica antes do dia 21 após o desmame foi de 89% nas
primíparas Bísaras e de 50% nas LW (P <0,08), mas 44% das Bísaras retornaram em cio (ciclo normal) contra 0%
das LW (P <0,05).
Os resultados mostram a possibilidade da utilização da P4 fecal na monitorização da função ovárica pós parto da
porca. Na exploração do sistema confinado o prolongamento de IDCF foi superior relativamente ao ar livre, mas não
foram detectadas diferenças na avaliação do reinício da actividade ovárica pela avaliação dos perfis da P4. Depois
do desmame as porcas LW entraram em ciclo mais tarde do que as Bísaras, mas estas foram menos férteis à 1ª
cobrição, o que resultou em iguais períodos de IDCF para as duas raças. Um efeito da raça nos diferentes tipos de
falha de gestação foi também detectado.
[Monitoring post-partum ovarian activity in gilts by progesterone determination in faeces]
Progesterone (P4) was determined by RIA in faeces of gilts after the first parturition in order to characterise
infertility caused by anoestrus, fertilization and gestation losses. Twenty-four primiparous gilts (Bísaro vs.
LargeWhite- LW) were randomly distributed by two exploitation systems (confined vs. open air) in a 2x2 factorial.
Piglets were weaned at 28 days post partum. Faeces were collected every 5 days starting one week before weaning
until around 40 days after.
In a total 18 first oestrous cycles, monitored in 18 gilts, 13 (72%) were found to start cycling shortly after weaning
(<13 days) and 5 (28%) were in anoestrus until day 22. One animal showed a short lasting luteal activity before the
first ovulation (5.6%). Pregnancy rate at first ovulation detected by P4 was 50% and pregnancy failures were
distributed among cycles lasting 25-30 days (11.1%) and normal cycle length (38.9%). An effect of breed among the
different types of pregnancy failures was detected (P<0.05) although no significant differences were found on the
interval weaning-conception (49 days average). Gilts in a confined system showed a significant (P<0.05) delay on
the natural service after weaning resulting in pregnancy (76.2 days) than those maintained in open air (22.1 days)
but no differences were detected to the onset of ovarian activity between systems. The onset of ovarian function
before the day 21 after weaning was observed in 89% of Bísara and 50% of LW gilts (P<0.08), but 44% Bísara gilts
returned into oestrus after service with a normal cycle length against 0% of the LW gilts (P<0.05)
Results show the possibility of using faecal P4 measurements in monitoring post-partum ovarian function of gilts.
The confined exploitation system delayed the interval from weaning to conception when compared with open air,
although no differences were detected to the onset of ovarian activity between systems by P4 measurements. LW
sows started cycling slightly later than Bísaro sows but these were less fertile at first services, resulting in equal
intervals from weaning to conception for both breeds. An effect of breed among the different types of pregnancy
failures was also detected.
206
Poster 60
Intoxicação aguda pelo feto comum [Pteridium aquilinum (l.) Kühn] em bovinos
Pinto, C.1, Peleteiro, M.C.2, Lobo, M.A.3 e Machado, J.3
1 Serviço de Desenvolvimento Agrário de São Miguel, 9504-541 Ponta Delgada
2 Departamento de Morfologia e Clínica, Faculdade de Medicina Veterinária, Pólo Universitário da Ajuda, 1300-477 Lisboa
3 Departamento de Ciências Agrárias da Universidade dos Açores, 9701-851 Terra Chã, Angra do Heroísmo
A ocorrência natural de síndromes hemorrágicas cutâneas em bovinos jovens explorados em regime de pastoreio nos
Açores, e o seu desfecho frequentemente fatal, conduziu ao estudo e caracterização clínica deste problema.
Os casos observados ocorreram em bovinos de raça Holstein-Friesian, provenientes de 22 explorações de bovinos
leiteiros. A maioria das ocorrências foi registada nos meses de Maio a Outubro. Os animais atingidos tinham idades
compreendidas entre os 4 e os 21 meses. A taxa de morbilidade foi de 19% e a taxa de mortalidade nos animais
doentes foi de 77%.
Os principais sinais clínicos observados foram hemorragias cutâneas nas áreas mais expostas aos insectos picadores
(orelhas, focinho e membros), petéquias nas mucosas, úlceras naso-labiais, melena, febre e anorexia. Os
hemogramas revelaram panleucopenia, com diminuição acentuada dos leucócitos granulócitos, linfocitose relativa,
trombocitopenia e anemia do tipo microcítico normocrómico. O exame da medula óssea mostrou rarefacção do
tecido hematopoiético, com ausência de megacariócitos e alterações nas linhagens de células eritróides. A necrópsia
e a histopatologia revelaram: alterações congestivo-hemorrágicas nas serosas; úlceras e necrose intestinal; petéquias
na mucosa abomasal e da bexiga; em alguns cadáveres registou-se a presença de fragmentos de feto comum no
conteúdo ruminal.
Nas pastagens onde ocorreram os surtos identificou-se o Pteridium aquilinum com sinais de herbivoria. A análise de
20 amostras desta infestante revelou um teor médio de 3165 µg g-1 de ptaquilósido.
A comparação com dados hematológicos de bovinos saudáveis (controlos) permitiu registar diferenças significativas
em todos os parâmetros analisados. Os dados obtidos conduziram ao diagnóstico de intoxicação aguda pelo feto
comum (IAF). As diferenças observadas nos valores de glutationa peroxidase entre os dois grupos, apontam para
que as carências em selénio possam contribuir para o aparecimento de doenças bovinas provocadas pelo feto
comum.
Considerando o elevado número de casos de hematúria enzoótica bovina (doença crónica devida à ingestão do feto
comum) reportada nos bovinos dos Açores, este trabalho realça a importância do estudo das implicações na saúde
animal das pastagens infestadas pelo feto comum.
[Acute bracken [Pteridium aquilinum (L.) Kühn] poisoning in cattle]
The aim of this study was to characterise a naturally occurring cutaneous bleeding syndrome frequently associated
with fatal outcomes of young cattle on the Azores archipelago.
All cases were observed in Holstein-Friesian cattle from 22 dairy herds. Most outbreaks occurred from May to
October. The affected animals were between 4 to 21 months old. Morbidity rate was 19%. Mortality in sick animals
was 77%.
Main clinical signs consisted of cutaneous bleeding in areas particularly exposed to insect (ears, nostrils and limbs),
petechiae in the mucosa, naso-labial ulcers, fever and anorexia. The haematological results showed panleucopenia
with pronounced neutropenia and relative lymphocitosis, thrombocytopenia and microcytic normocromic anaemia.
Bone marrow examination revealed medullary aplasia, without megakaryocytes and changes in the erythroid cell
lines. Necropsy and histopathological findings showed congestive and haemorrhagic lesions of serosae; intestinal
ulcers and necrosis; petechias in abomasal and urinary bladder mucosa and presence of bracken fragments inside the
ruminal content in some cases.
Bracken fern (Pteridium aquilinum) with signals of herbivory was identified in pastures where the outbreaks
occurred. An average of 3165 µg g-1 of ptaquiloside was determined in 20 bracken samples. Significant differences
were noted in haematological parameters between cases and control samples. All these findings lead to the diagnosis
of acute bracken poisoning.
Low levels in glutathione peroxidase in heifers from herds with acute bracken poisoning compared to controls
suggest that selenium may have a role in the genesis of cattle bracken diseases.
Considering the high numbers of cases of bovine enzootic haematuria (chronic bracken disease) reported on the
Azores Islands, this study emphasises the implications of bracken infested pastures in animal health.
207
Poster 61
Dermatofilose em bovinos de São Miguel – Açores
Aranha, P.1, Pinto, C.2, Sampaio, I.3, Peleteiro, M.C.4, Silva, E.P.5,6, Thompson, G.5,6
1 Instituto de Ciências Biomédicas de Abel Salazar (ICBAS) – Universidade do Porto, Largo Professor Abel Salazar 2, 4099-003, Portugal
2 Serviço de Desenvolvimento de Agrário de São Miguel, 9504-541 Ponta Delgada
3 Laboratório de Análises Clínicas – Teresa Sampaio – R. Dr. Bruno Tavares Carreiro, 9500- 055 Ponta Delgada
4 FMV-UTL, R. Prof Cid dos Santos, 1300-477 Lisboa
5 Departamento de Clínicas Veterinárias; Instituto de Ciências Biomédicas de Abel Salazar (ICBAS) – Universidade do Porto, Largo Professor
Abel Salazar 2, 4099-003, Portugal
6 Unidade Multidisciplinar de Investigação em Ciências Biomédicas (UMIB-ICBAS) – Universidade do Porto, Portugal
A dermatofilose é uma dermatite crostosa superficial provocada por uma bactéria actinomiceta Dermatophilus
congolensis, gram-positiva, filamentosa que induz a uma lesão exsudativa da pele com a formação de crostas. Nas
áreas de maior prevalência (regiões tropicais e subtropicais) o agente limita a produção de leite até 30 %. O maneio
nutricional deficiente incluindo as carências em oligoelementos, as parasitoses, os traumas cutâneos e a exposição
prolongada aos raios solares, associados a condições de temperatura e épocas chuvosas prolongadas são favoráveis
ao desenvolvimento de infecções por esta bactéria, podendo a região tornar-se endémica. Os valores deficientes em
cobre, zinco selénio e iodo, diminuem a capacidade bacterícida dos neutrófilos com redução da actividade dos
linfocitos T e B. Todos estes factores contribuem para a diminuição da função da barreira cutânea possibilitando a
infecção.
No período compreendido entre Outubro de 2004 a Junho de 2005 foram identificados 7 casos clínicos de
dermatofilose na Ilha de São Miguel. O presente trabalho, identifica e caracteriza alguns factores que podem ter
contribuído para a ocorrência da infecção por Dermatophilus congolensis na região em estudo. Os animais afectados
foram submetidos a anamnese, exame físico e à colheita de crostas para análise microbiológica. Exames
complementares de hematologia e o perfil bioquímico para a determinação dos níveis em oligoelementos (zinco,
cobre, selénio e iodo) foram realizados. Uma vaca severamente afectada foi submetida a biópsia da pele.
As suspeitas clínicas foram confirmadas por análise microbiológica, tendo sido observado o agente (Dermatophilus
congolensis) nas citologias, e isolado e identificação após inoculação das amostras colhidas (crostas e biopsia) em
meios de isolamento para bactérias. Os hemogramas indicaram anemias normocíticas normocrómicas, sugerindo
depressão medular e infecção. O doseamento de oligoelementos revelou valores abaixo do normal para o iodo e
tiroxina e níveis marginais de cobre, zinco e selénio (glutationa peroxidase).
Os bovinos tratados com penicilinas de longa acção e suplementados com iodeto de potássio e selenito de sódio por
via oral evidenciaram boa recuperação das lesões da pele ao fim de 3 a 4 semanas.
[Cattle dermatophilosis on São Miguel Island – Azores]
Dermatophilosis is a superficial bacterial dermatitis caused by the actinomycete Dermatophilus congolensis, a grampositive, branching, filamentous bacterium that induces an exsudative lesion of the skin with crust formation. In
regions (Tropical and Subtropical) with high prevalence of the disease, the infection may account for reducing until
30 % of the milk production.
A poor nutritional management, followed by trace element deficiencies, intestinal parasitosis, skin trauma, a long
sun exposure and prolonged rainfall can predispose to Dermatophilus congolensis infection and may lead the region
to an endemic status. Low levels of copper, zinc, selenium and iodine impair the bactericide capacity of the
neutrophilus and the function of the T and B cells. All these factors together with a weakened skin barrier allow the
zoospores to germinate in the stratum corneum to form a mycelium that proliferates within the living layers of the
epidermis.
From October of 2004 to June of 2005 we identified seven clinical cases of Dermatophilosis in cattle in the São
Miguel Island – Azores.
This study was designed to identify and characterize some of the factors that might have predisposed the infection of
cattle with Dermatophilus in this region. The affected animals were submitted to anamneses, physical examination
and crusts sampling for microbiology analysis. Complementary diagnostic tests: blood counts, biochemical profile
to determine zinc, copper, selenium and iodine, were performed. A severely affected cow was submitted to skin
biopsy.
The clinical diagnosis was confirmed by microbiology testing. Cytology of skin crusts showed the bacterium
mycelium that was subsequently isolated in bacterial isolation media. Blood counts indicated normocitic
normocromic anaemia, suggesting medullar depression and infection. The results on trace elements indicated low
levels of iodine and thyroxin, and marginal levels of copper, zinc and selenium (glutathione peroxidase).
After 3 to 4 weeks the cattle treated with long acting penicillin and supplemented with oral potassium iodine and
sodium selenite showed a clear and good recovery of the skin lesions.
208
Poster 62
Caracterização do uso da terapêutica antibiótica em 10 explorações leiteiras em Portugal
Silva, A.2, Niza Ribeiro, J.1, Madeira, H.1, Pereira, A.1, Sousa, J.1, Mota, P.1
1 SEGALAB, Gondivai, 4465 Leça do Balio, Porto – Portugal; 2 Estagiário da Licenciatura em Med.Veterinária do ICBAS, UP – SEGALAB
Introdução - O risco da utilização de antibióticos na produção animal, mais concretamente na produção de leite, tem
implicações a diferentes níveis, nomeadamente na indústria, na Saúde Pública e no aparecimento de antibioresistências.
Tendo como referência as recomendações da Organização Mundial de Saúde (OMS) e os 10 princípios “Uso Prudente de
Antibióticos” (UPA) (WVA, COMISA & INFA, 1998), a SEGALAB desenvolveu em 2001 um programa de
Autocontrolo de Resíduos de Antibióticos nas explorações leiteiras constituído por várias etapas: 1) implementação de
Programas de Prevenção de Doenças e Boas Práticas na exploração; 2) gestão de medicamentos; 3) prescrição e
administração dos tratamentos; 4) maneio de animais tratados na ordenha. O programa em curso foi implementado em 150
explorações. Uma componente do programa consiste em registar, num manual desenvolvido no âmbito do programa, todos
os tratamentos efectuados nas explorações, sendo da responsabilidade do produtor o seu preenchimento. Objectivo - O
objectivo deste trabalho é caracterizar os tratamentos efectuados e o seu registo por parte dos produtores, como forma de
identificar práticas que não se coadunam com os princípios do UPA. Materiais e métodos - Foram recolhidos 19 Manuais
de Registo de Tratamentos realizados durante a fase de lactação. A análise de 10 desses manuais permitiu-nos avaliar um
total de 1013 registos de tratamentos com antibióticos. Resultados - As mastites foram identificadas como a principal
causa de utilização de antibióticos em explorações leiteiras, representando 89% dos tratamentos efectuados. Considerando
apenas os animais tratados para mastites, cada vaca foi tratada em média 2,50 vezes. Os princípios activos usados com
maior frequência nos tratamentos por via intramamária, são amoxicilina/ ác.clavulânico/ prednisolona, cefquinoma e
cloxacilina/ampicilina; os produtos administrados por via parentérica registados maior número de vezes são: cefquinoma,
amoxicilina/ác.clavulânico e kanamicina. Os princípios activos mais usados pertencem ao grupo dos β-lactâmicos
(utilizados em 79,34% e 75,34% dos tratamentos em que são administrados antibióticos por via intramamária e
parentérica, respectivamente). Foram identificadas práticas que merecem comentários, nomeadamente: a prescrição dos
tratamentos com antibióticos é feita maioritariamente pelos produtores; os medicamentos são utilizados em doses
superiores às indicadas na bula; os registos são, frequentemente, incompletos e/ou incorrectos. Conclusões - Surgem como
evidentes alguns pontos desta abordagem ao UPA que proporcionam oportunidade de melhoria. Um deles é o reforço do
papel do médico veterinário, nomeadamente na orientação técnica da exploração. O elevado número de tratamentos
efectuados por animal demonstra a necessidade de implementar programas de Saúde animal na exploração. A necessidade
e a importância dos registos dos tratamentos feitos e a forma correcta de os fazer na exploração não foram óbvias para os
produtores de leite, demonstrando falta de informação nesta área. Mediante os resultados apresentados julgamos ser
prioritário sensibilizar e formar os produtores para a produção de leite de acordo com sistemas de autocontrolo na
exploração, que permitam a entrega do produto final produzido segundo as normas impostas e que obedeça aos critérios de
segurança exigidos.
[Characterization of the use of antibiotic therapy in 10 dairy farms in Portugal]
Introduction – The risk of using antibiotics in animal production, more specifically in milk production, has implications on
different levels, namely on the industry, Public Health and on the rise of antibiotic resistances. Having in mind the
recommendations of the World Health Organization (WHO) and the 10 principles “Prudent Use of Antibiotics” (PUA)
(WVA, COMISA & INFA, 1998), SEGALAB developed in 2001 a Self-control Program for Antibiotic Residues in dairy
farms, that consisted of several phases: 1) implementation of a Disease Prevention and Good Practices Program in the
farms; 2) medicine management; 3) treatment prescription and administration; 4) handling of treated animals in the
milking parlour. The program was implemented in 150 dairy farms. One of the program’s components was to register all
treatments administered in the farm in a manual developed for that purpose; the responsibility of filling that manual was
attributed to the farmer. Objective – The objective of this work is to characterize the administered treatments and their
register by the producers, as a means to identify practices that do not concur with the PUA principles. Materials and
methods – 19 Manuals for Treatment Register during the lactation period were collected. The analysis of 10 of those
manuals allowed us to evaluate a total of 1013 registers of treatments with antibiotics. Results – Mastitis were identified as
the main cause for using antibiotics in dairy farms, representing 89% of all effected treatments. Considering mastitis
treatments only, each cow was treated, on average, 2.50 times. The active principles for intramammary administration that
were registered more often were: amoxicillin/clavulanic acid/prednisolone, cefquinome and cloxacillin/ampicillin; the
most frequently administered products by parenteral route were: cefquinome, amoxicillin/clavulanic acid and kanamycin.
The most used active principles belong to the β-lactamic group (used in 79.34% and 75.34% of the treatments in which
antibiotics are administered by intramammary and parenteral route, repectively). Several practices were identified that
deserve a special remark, namely: treatments with antibiotics are prescribed mainly by the producers; medicines are used
in doses higher than the ones recommended by the manufacturers; the registration of treatments is frequently incorrect or
incomplete. Conclusions – Some points of this approach to the PUA offer a clear opportunity for improvement. One such
point is the reinforcement of the veterinary’s role on the technical guidance of the dairy farm. The high number of
treatments per animal clearly shows the need to implement Animal Health programs in the farms. The importance of
registering the administered treatments and the correct way of doing those registers were not clear to the producers,
showing a lack of information on this area. Given these results we think that priority should be given to sensitizing and
forming dairy farmers for milk production in accordance with self-control systems in the farm, that will allow the delivery
of a final product in compliance with the imposed norms and that will fulfil the demanded safety criteria.
209
Poster 63
Mesenquimoma benigno na próstata de um cão
Mateus, L., Sales Luis, P. e Silva, J.F.
Um cão de raça indeterminada com 11 anos de idade e 16 kg de peso, foi apresentado à consulta com sintomatologia
de hematúria no final da micção com um mês de duração, estando a tomar doxaciclina (100 mg BID), per os, há
cerca de 20 dias.
Ao toque rectal, a próstata estava localizada no bordo anterior do púbis, hipertrofiada, com ligeira assimetria dos
lobos. Notou-se um nódulo intra-prostático, no lobo direito, com cerca de 2 cm de diâmetro e localização ventrodorsal. O exame ecográfico confirmou a hipertrofia da próstata (cerca de 3,8 cm de diâmetro maior), tendo esta
contornos bem definidos e alguns quistos intra-parenquimatosos de retenção de pequenas dimensões. O nódulo já
detectado pelo toque rectal encontrava-se bem delimitado, de contornos regulares e ligeiramente hipoecogénico em
relação ao resto do parênquima prostático (2,1 cm de diâmetro). Os testículos não apresentavam alteração
ecográfica. Na avaliação pela uretrocistografia de contraste, observou-se que o trajecto e o diâmetro da uretra
prostática estavam normais, não havendo extravasão do líquido de contraste para o interior do parênquima.
Executou-se laparotomia exploratória para remoção do nódulo intra-prostático e realizou-se a castração bilateral.
Ao exame macroscópico, o nódulo era oval, firme, de superfície lisa e apresentava um pequeno pedículo de ligação
à próstata. Foi fixado em formol a 10 % para exame histopatológico. O exame microscópico mostrou que a
superfície do nódulo era revestida em alguns pontos por epitélio de transição. A periferia do nódulo era constituída
por tecido conjuntivo fibroso. O centro do nódulo era constituído por trabéculas de tecido ósseo cuja matriz não
estava calcificada. Entre elas, notavam-se espaços com sangue, alguns dos quais eram delimitados por um endotélio
bem diferenciado. Notavam-se também pequenos focos celulares sugestivos de hematopoiese extramedular.
Observava-se também um foco de tecido conjuntivo laxo. O pedículo de ligação do nódulo à próstata apresentava
dois tubuloalvéolos de epitélio atrófico e um concomitante infiltrado linfocitário.
O diagnóstico provisório considerou as possibilidades de hamartoma, coristoma e tumor mesenquimatoso benigno
apresentando várias linhagens de diferenciação (mesenquimoma benigno). O diagnóstico final foi de
mesenquimoma benigno.
Após antibioterapia (Amoxacilina + Á.Clavulânico, 250mg BID, 15 dias), o animal teve alta cirúrgica e clínica,
tendo desaparecido os sinais de hematúria.
[Prostatic benign mesenchymoma in a dog]
A 11-year-old, 16 kg intact male mongrel dog was admitted with a one month long haematuria occuring at the end
of miction. He had been treated for 15 days with doxaciclin (100 mg BID), per os.
The rectal palpation disclosed that the prostate was located above the anterior brim of the pubis. It was also
hypertrophied, slightly asymetric and an intraprostatic nodule with a diameter of 2 cm in a ventrodorsal location was
felt. Ultrasonographic examination confirmed prostatic hypertrophy (which greater diameter measured 3,8 cm); the
prostatic outline was well defined and there were some small intraparenchymatous retention cysts. The intraprostatic
nodule was well outlined, with regular contours and slightly hypoechoic (diameter: 2,1 cm). The testes did not have
any ultrasonographic alteration. Contrast urethrocystography showed that the prostatic urethra had normal profile
and diameter, and the contrast medium did not reflux into the prostatic parenchyma.
A laparotomy was performed to remove the intraprostatic nodule. Also, a bilateral orchiectomy was made.
The removed nodule was oval, firm, smooth-surfaced and had a small pedicle of attachment to the prostate. It was
fixed in 10 % formalin for histopathologic examination. At the microscopic level, the nodule surface was covered in
some areas by transitional epithelium. Dense fibrous connective tissue made up the nodule periphery, which central
part was made of bone tissue spicules with uncalcified matrix. Among the spicules, there were blood-filled spaces,
some of which possessed a well-differentiated endothelial lining. Some small cellular foci suggesting extramedular
haematopoiesis were also present, as well as a loose conective tissue focus. In the pedicle of attachment to the
prostate gland two atrophic prostatic tubuloalveoli were disclosed, together with stromal lymphocytic infiltration.
The considered hypoteses were hamartoma, choristoma and benign mesenchymal tumour displaying multiple
differentiation lines (benign mesenchymoma).The final diagnosis was benign mesenchymoma.
After a fifteen day antibiotherapy period (Amoxacilin + Clavulanic Acid, 250mg, BID), heamaturia disappeared and
the dog was released.
210
Poster 64
Carcinoma da uretra prostática num gato
Ferreira, L.1, Monteiro, M.2 e Silva, J.F.3
1 VetOlivais, Centro Médicoveterinário, Lda- R. Cidade de Nampula, 148-D, 1800-105 Lisboa
2 Laboratório Nacional de Investigação Veterinária- Estrada de Benfica, 701, 1549-011 Lisboa
3 CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária- R. Prof. Cid dos Santos (Pólo Universitário) 1300-477 Lisboa
Os tumores da próstata e da uretra prostática no gato são muito raros, pelo que a sua etiopatogenia mantém-se
desconhecida.
Descreve-se um caso de carcinoma da uretra prostática num gato, castrado, FIV+, que se mantém assintomático 14
meses depois de tratamento cirúrgico.
Em Fevereiro/Março de 2004, o animal, com 6 anos de idade, começou por evidenciar sintomas de obstrução
intestinal; após raios X e toque rectal detectou-se prostatomegália; foi submetido a prostatectomia e o pós-operatório
decorreu sem complicações, nomeadamente sem manifestações de incontinência urinária.
Macroscopicamente a próstata estava hipertrofiada, de consistência fibrosa e superfície de corte branca.
Microscopicamente o epitélio da uretra prostática apresentava focos extensos de transformação neoplásica com
invasão intraprostática. Os cordões celulares que invadiam a próstata mostravam focos de metaplasia malpighiana
(escamosa). Na periferia da próstata, notavam-se áreas de alvéolos normais. O estroma prostático apresentava
fibroplasia (desmoplasia) e intensa infiltração linfocitária.
[Carcinoma of the prostatic urethra in a cat]
Feline tumours of the prostate and prostatic urethra are very rare, so its etiopathogeny remains unknown.
A case of carcinoma of the prostatic urethra in a castrated FIV-positive cat is presently described. The animal
maintains itself asymptomatic 14 months after the surgical treatment.
In February/March 2004, the cat, which was 6 year-old, displayed symptoms of intestinal obstruction; after
radiologic examination and rectal palpation, prostatomegaly was detected and a prostatectomy was performed.
Postoperative period decurred without complications, namely with no urinary incontinence.
Macroscopically, the prostate was hypertrophied, had fibrous texture and its cut surface was white.
Histologically, prostatic urethra epithelium presented extensive foci of neoplastic transformation with intraprostatic
invasion. Neoplastic cell cords which invaded the prostate gland showed foci of malpighian (squamous) metaplasia.
In the periphery of the prostate, areas of normal alveoli were noted. Neoplastic stroma showed fibroplasia
(desmoplasia) and intense lymphocytic infiltration.
211
Poster 65
Microvascularização da 3ra pálpebra e aspectos morfofuncionais da glândula de Harder no cão
(Canis familiaris)
Alexandre-Pires, G.1, Mendes-Jorge, L.1, Correia, M.2
1 CIISA-Faculdade de Medicina Veterinária-UTL, Av. da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa
2 Faculdade de Ciências Médicas-Universidade Nova - Lisboa
O aparelho lacrimal terá tido o seu aparecimento cerca de 280-360 milhões de anos atrás, correspondendo à
evolução filogenética dos peixes crosopterígeos e à sua incursão frequente para terrenos fora de água. Nos anfíbios,
este aparelho surge já bem desenvolvido, de forma a mimetizar o meio aquático do qual evoluíram, preconizando a
inequívoca necessidade de manter a córnea húmida de forma a que esta cumpra a sua função óptica. O aparelho
lacrimal foi devidamente identificado em 1964, no sapo, localizado no canto nasal da pálpebra e denominado de
glândula de Harder. Esta glândula está, de facto, localizada, nos animais domésticos, na 3ra pálpebra. As suas
funções são múltiplas, tais como, proteger o bulbo ocular, contribuir para a porção aquosa da película lacrimal e a
sua distribuição sobre a superfície ocular, assim como a remoção de corpos estranhos da superfície anterior do olho.
É um anexo ocular bastante vulnerável durante as lutas entre os animais e as neoplasias encabeçam a lista dos
motivos que conduzem à sua extirpação cirúrgica.
Nos cães, possui uma forma triangular, sendo a sua margem livre a mais ampla. É vascularizada por ramos da artéria
malar. Sendo de tal importância morfofuncinal, os autores focalizaram a sua atenção na vascularização desta
estrutura, até hoje mal definida.
Métodos: Microscopia electrónica de varrimento sobre moldes vasculares e tecido intacto. Histologia da glândula de
Harder.
Observações: É interessante sublinhar a presença de dois padrões vasculares na 3ra pálpebra. Pode considerar-se a
existência de dois níveis segmentares de vasos. Num deles há uma evidente predominância de artérias e veias,
enquanto no outro está presente uma trama de artérias de 3ra ordem, capilares e vénulas pós-capilares. Na verdade, o
ramo da artéria malar que atinge a base da 3ra pálpebra, divide-se em ramos menos dimensionados que,
praticamente, atravessam todo o comprimento da pálpebra sem sofrerem ramificações (originam escassos vasos
colaterais, monopódicos), para apenas, na proximidade da margem palpebral livre, originarem divisões dicotómicas,
cujas anastomoses (tipo I e II) são responsáveis pelo aparecimento da trama reticular microvascular.
Considerações: Esta incomum arquitectura vascular parece resultar de uma adaptação ao facto desta pálpebra
ocupar, na sua forma passiva, um espaço reduzido, providenciando assim, uma vascularização eficiente da mesma,
levando vasos calibrosos directamente até ao topo livre da pálpebra. Aspectos da glândula de Harder, de acordo com
as suas afinidades tintoriais e secretórias, são demonstrados.
[Microvascularization of the 3rd eyelid and morphofunctional aspects of Harder’s gland in the dog
(Canis familiaris)]
The lachrymal apparatus developed about 280-360 millions of years ago, when crossopterygians fishes left water
environment and started making terrestrial incursions. In amphibians this anatomical feature was already developed
in order to mimetize the aquatic media from where they developed, an unequivocal need to maintain the cornea wet
in order to accomplish its optical function. This apparatus, located in the nasal cantus of the inner eyelid, was
properly identified in 1964 in the frog and was named Harder gland. This gland is, in fact, present in domestic
animals in the 3rd eyelid. The 3rd eyelid protects the eye; contribute to the aqueous portion of the pre-ocular film and
its distribution over the corneal surface, as well as removal of foreign material from the anterior surface of the eye. It
is rather vulnerable during fights and Clinicians often have to perform surgery for the 3rd eyelid neoplasia. In dogs
this lid has a triangular shape, being widest at its free margin. It is vascularized by branches of the malar artery.
Being of such importance as adnexa of the eye, the authors focalised their attention over its vascularization, which is
not well defined.
Methods: Scanning Electronic Microscopy over vascular corrosion casts and over intact tissue. Harder’s gland
histology.
Observations: It was quite interesting to notice the presence of 2 patterns of vascularization inside the 3rd lid. One
can say that there are 2 segmental levels of vessels. In one of them there is a predominance of arteries and veins,
while in the other one a meshwork of 3rd order arteries, capillaries and post-capillary venules are present. In fact, the
branch of the malar artery that reach the base of the 3rd eyelid divides into smaller branches that cross almost the
complete length of the lid, giving only a few collateral vessels, in a monopodical way, and only near the free margin
of the lids is possible to observe dicothomical ramifications that became rather anastomotic (anastomoses of types I/
II are present) and contribute to the microvascular meshwork.
Remarks: This uncommon angioarchitecture is probably an adaptation to the fact that in the medial cantus of the eye
this lid has a smaller space and the way of obtaining an efficient vascularization is by going straight to the top of the
lid. Aspects of the Harder gland according to dyes affinities of its cellular granules and kind of secretion produced
are also displayed.
212
Poster 66
Principais tipos de tumores mamários na população canina num estudo efectuado ao longo de um
periodo de 5 anos
Carreira, L.M.1,2, Pinho, M.S.1, Costa, A.2
1 CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária de Lisboa
2 Centro de Medicina Veterinária Anjos de Assis (CMVAA) - Barreiro
A patologia mamária, oncológica ou não; é um dos principais estímulos conducentes á avaliação diária médica e/ou
cirurgica de canídeos fêmeas. Tal facto, conduziu no ano de 2000 ao início de um estudo sobre nódulos mamários
presentes numa população de cadelas, todas avaliadas no Centro Medicina Veterinária Anjos de Assis com doença
mamária. A média das idades da população avaliada era de 7.5 anos. O recurso á análise histopatológica das massas
obtidas por mastectomia parcial ou total, permitiu caracterizar os principais tipos de nódulos encontrados em mamas
de canídeos. Os resultados primários deste estudo foram apresentados no Congresso dos 100 Anos da Sociedade
Portuguesa de Ciências Veterinárias, revelando que o principal tipo de tumor mamário encontrado na cadela seria de
natureza maligna, e do tipo Carcinoma Complexo Tubular com uma representatividade de 25%. A obtenção de
novos dados ao longo de mais 2 anos, parece ser concordante com os resultados previamente demonstrados, apesar
de agora a amostra populacional avaliada ser já de 262 cadelas considerando várias raças, e com uma média de
idades de 8,75 anos. Inicialmente divididos em neoplasias e hiperplasias, os nódulos mamários assumem os valores
de 92.37% e 7.63% para cada uma destas categorias respectivamente. Relativamente ás neoplasias, a sua divisão é
feita em 79.75 % para tumores mamários malignos e em 20.25 % para tumores mamários benignos. A classificação
histopatológica dos tumores malignos assume neste estudo de campo, uma valoração traduzida da seguinte maneira:
Carcinomas Não-Infiltrativo com 4.66 %, Carcinoma Complexo com 35.75 %, Carcinoma Simples com 31.08 % e
por fim Tipos Especiais de Carcinomas com 17.61 %. Dentro dos Carcinomas Simples os Tubulo-papilíferos de
grau I representam 56.66 %, os Tubulo-papilíferos de grau III 11.66 %, o Carcinoma Sólido com 18.33 %, e por
último o Carcinoma Anaplásico com 13.35 %. Relativamente aos Tipos Especiais de Carcinomas, eles estão
representados pelo Carcinoma das Células Escamosas e pelo Carcinoma Mucíparo, assumindo valores de 23.52 % e
76.48 % respectivamente. Á semelhança do que se passa com os tumores mamárias malignos, também os benignos
assumem uma subdivisão representada neste estudo pelo Tumor Benigno Misto, Fibroadenoma e Adenoma
Complexo com valores de 16.34 %, 42.85 % e 40.81 % respectivamente.
[A 5 years follow-up study over the main types of mammary gland tumours in canine population]
Mammary disease, oncological or not; is one of the main encouraging factor for medical and/or surgical daily
evaluation of female dogs. Such fact, leaded in the year of 2000 to the beginning of a study on mammary nodules
using a bitch population evaluated at Veterinary Medicine Center Assis Angels, with mammary illness. The average
of the ages was 7.5 years. Histopathologial analysis of masses resulted from partial or total mastectomy, allowed to
characterize the main types of nodules found in breasts of canines. The primary results of this study had been
presented at Congress of the 100 Years of the Portuguese Society of Veterinary Sciences, concluding that the main
type of mammary tumour found in the dog would have a malignant nature, and was a Complex Carcinoma Tubular
with a 25% representation. The attainment of new data throughout more 2 years seems to be concordant to the
results previously demonstrated, although now the population sample evaluated was of 262 dogs considering some
breeds, and with a average of ages of 8,75 years. Initially divided in neoplasias and hyperplasias, the mammary
nodules assume the values of 92.37% and 7.63% for each one of these categories respectively. Neoplasias, can be
divided as 79.75 % for malignant and 20.25 % for benign mammary tumours. Histopathological classification of the
malignant tumours assumes in this field study, a survey of: Non-Infiltrative carcinomas with 4.66%, Complex
Carcinoma with 35.75 %, Simple Carcinoma with 31.08 % and finally Special Types of Carcinomas with 17.61 %.
Inside of the Simple Carcinomas the Tubular-papillary of grade I represents 56,66 %, Tubular-papillary of grade III
11,66 %, Solid Carcinoma with 18.33%, and finally the Anaplastic Carcinoma with 13.35 %. Relatively to Special
Types of Carcinomas, Squamous Cells Carcinoma and Mucyparo Carcinoma, assuming values of 23.52% and 76,48
% respectively, represent them. Similarity with malignant mammary tumours, also the benign ones assume a
subdivision represented in this study by Benign Mixed Tumour, Fibroadenoma and Complex Adenoma with values
of 16.34 %, 42,85 % and 40,81 % respectively.
213
Poster 67
Dermatite periocular associada à presença de microfilarias num cão
Lourenço, A.M.*, Peleteiro, M.C. e Duarte Correia, J.H.
CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Técnica de Lisboa, Lisboa, Portugal
*Bolseira de Doutoramento da Fundação para a Ciência e Tecnologia
Objectivo: Relatar a ocorrência de um caso de filariose cutânea restrita à zona periocular num canídeo, em Portugal
Quadro Clínico: Um canídeo de raça cão de água português com 9 anos de idade, foi observado na consulta de
Dermatologia do Hospital Escolar da Faculdade de Medicina Veterinária de Lisboa, devido à existência de lesões
cutâneas bilaterais que afectavam a zona periocular. No exame dermatológico detectou-se a presença de um grande
números de crostas aderentes e de uma infecção bacteriana secundária exuberante. À excepção destas lesões, o
animal encontrava-se normal e bem disposto. Segundo os donos, as lesões persistiam há um ano e tinham sido
observadas pela primeira vez, sob a forma de úlceras, após uma estadia no Alentejo, onde era permitido ao animal
andar livre pelo campo e nadar numa barragem. O canídeo nunca saiu do país.
Iniciou-se uma antibioterapia empírica com amoxicilina e àcido clavulânico e realizou-se o despiste serológico de
leishmaniose (IFI), tendo-se obtido um resultado negativo. Procedeu-se de seguida à realização de uma biópsia
cutânea da zona afectada.
A observação microscópica das amostras colhidas revelou a existência de uma lesão inflamatória difusa na derme
superficial, excepcionalmente rica em eosinófilos. Tanto na derme superficial, como na profunda, identificaram-se
numerosas formas larvares de filarídeos, alguns dos quais sem reacção inflamatória envolvente.
Discussão:De acordo com a informação que dispomos, este é o primeiro caso relatado de filariose cutânea
exclusivamente restrita à zona periocular de um canídeo, em Portugal. As dermatites associadas a nemátodos da
família Filarioidea são raras no cão, sendo normalmente causadas por Dirofilaria immitis, embora estejam descritos
casos causados por outros filarideos como Acanthocheilonema reconditum ou Onchocerca sp.. Sugere-se que, em
Portugal, a filariose cutânea deve ser incluída no diagnóstico diferencial em casos de canídeos com manifestações de
nódulos, crostas ou edema periorbital.
[Periocular dermatitis associated with the presence of microfilariae in a dog]
Objective: Report the occurrence of cutaneous microfilariae in the periocular skin of one dog in Portugal.
Clinical Findings: A nine-year-old Portuguese water dog was examined at the Teaching Hospital of the Faculty of
Veterinary Medicine with a history of bilateral cutaneous lesions affecting the periocular zone. Dermatological
examination revealed a significant number of adherent crusts and an important secondary bacterial infection. The
animal was otherwise healthy. According to the owner, the lesions began one year before, as ulcers, after a stay at
Alentejo, where the dog was free to run in the fields and swim at a dam. The dog never left Portugal.
An amoxyciline and clavulanic acid empiric antibiotic therapy was initiated and Leishmania spp. infection was ruled
out through serology (IIF). A skin biopsy was then performed.
Histopathological examination of the collected skin fragments revealed the presence of an inflammatory lesion
throughout the superficial dermis, particularly rich in eosinophils. Numerous forms of microfilariae were detected
both in the superficial and deep dermis, some of which did not have an associated inflammatory reaction.
Discussion: To our knowledge, this is the first reported case of canine dermatitis associated with microfilariae
involving only the periocular tissues. Dermatitis associated with nematodes of the family Filarioidea in dogs are
rare and usually caused by Dirofilaria immitis, although there are reported cases caused by other filarioids like
Acanthocheilonema reconditum or Onchocerca sp.. In our opinion, cutaneous filariose should be considered a
differential diagnostic in Portuguese dogs with periocular nodules, crusts or periorbital edema.
214
Poster 68
Estudo do seguimento da evolução clínica de femeas mastectomizadas em população canina e felina
ao longo de um periodo de 5 anos
O seguimento da evolução clínica apresentada pela população de fêmeas da espécie canina e felina mastectomizadas
por presença de nódulos mamários no CMVAA, ao longo de um período de 5 anos é uma das extensões mais
ambicionada e projectada com este estudo, por forma a podermos entender de forma mais clara qual a tendência
apresentada pelas doentes oncológicas de ambas as espécies para a sua evolução clínica.
Todas as doentes avaliadas neste estudo foram sujeitas a exames pré-cirúrgicos compreendendo hemograma,
bioquímicas funcionais de fígado e rins, e radiografias de tórax nas projecções laterolaterais esquerda e direita por
forma a determinar para a ausência de sinais radiográficos sugestivos da presença de metástases pulmonares;
excluindo desta forma todas as doentes que se revelassem positivas para tal, não sendo pois intervencionadas
cirúrgicamente.
Todas as doentes foram submetidas a blocos cirúrgicos do tipo mastectomia parcial/ total, unilateral/ bilateral com
exerése de linfonodos regionais. A terapêutica instituída no regime pré e pós-cirúrgico foi constante, utilizando neste
estudo uma antibioterapia á base de Amoxicilina e Àc. Clavulânico, assim como analgésicos anti-inflamatórios do
tipo não esteróides. O período de tempo de recuperação total (com cicatrizarão completa do defeito cirúrgico
induzido) das doentes, foi variável entre 9 e 23 dias, apresentando uma média de 16 dias.
Parece existir uma diferença significativa entre as duas espécies avaliadas, no que respeita ao curso evolutivo que a
doença oncológica toma. Assim, determinou-se que a recidiva da entidade clínica oncológica é muito mais elevada
na espécie felina assumindo valores na ordem dos 28,94 %, que contrastam grandemente com os 3,05 % registados
na espécie canina. No que respeita aos locais de recidiva e metastização tumoral apresentada por estas doentes,
parece existir uma uniformidade, constatando-se a presença de novas massas ao nível da parede abdominal,
pulmões, fígado e por fim cérebro.
[A 5 years follow-up study on clinical evolution of canine and feline females submitted to
mastectomy because mammary tumours]
A follow-up study on clinical evolution/ condition presented by canine and feline female population submitted to
mastectomy because the presence of mammary tumours was carry out at CMVAA, throughout a period of time of 5
years. This goal was projected as one of the most important results of the study about canine and feline mammary
gland tumours, since it should be able to understand in a simple way, which trends are presented for mammary
oncological patients. All patients evaluated in this study were submitted to same pre-surgical complementary exams
considering an hemogram, functional biochemists of liver and kidneys, and thorax radiographs with laterolateral
projection for left and right side, in order to detect for presence or absence of suggestive radiograph signals of
pulmonary of metastasis; excluding from this study all patients with suspicious images. All canine and feline female
were submitted the same surgical techniques considering every time partial/ total mastectomy, uni/ bilateral
mastectomy with regional linfonodes remove. Instituted therapeutics used in a after-surgical regimen was constant,
using always antibiotherapy with Amoxicilin and Clavulanic, as well as analgesics of non steroid anti-inflammatory
type. Total recovery period of time (in which all patients presented a complete heal of surgical induced defect) of
patients, was variable between 9 and 23 days, presenting an average of 16 days. It seems to exist a significant
difference between the two evaluated species, respecting to clinical evolution course that the mammary oncological
disease takes. Thus, it was determined that the return of the mammary gland tumour it is raised in the feline then in
canine population, assuming values of 28,94 % and 3,05 % respectively. Nevertheless, it seems to exist uniformity
between both species, considering metastatic places, being lungs, liver, abdominal wall and brain the primary places
were disease develops again.
215
Poster 69
Principais tipos de tumores mamários na população felina num estudo efectuado ao longo de um
periodo de 5 anos
A elevada incidência de doentes que se apresentam nas consultas médica e cirúrgica com nódulos de localização
mamária, conduziram em 2000 ao início de um estudo desenvolvido numa população de felídeos fêmeas, todas
avaliadas no Centro Medicina Veterinária Anjos de Assis, com queixa principal de presença de nódulos mamários.
A média das idades da população avaliada era de 10 anos. A análise histopatológica das peças anatómicas
resultantes da exerese cirurgica mamária, permitiu caracterizar os principais tipos de nódulos encontrados nas
mamas desta espécie. Os primeiros resultados apresentados no Congresso dos 100 Anos da Sociedade Portuguesa de
Ciências Veterinárias permitiam concluir que o principal tipo de tumor de mama encontrado na gata seria do tipo
tumor maligno Carcinoma Simples Tubulo-Papilífero de grau I com um valor de 72,7 %. Passados 2 anos, os
resultados parecem assumir uma tendência modificada. A amostra populacional avaliada é agora de 197 indíviduos,
considerando várias raças (com preponderância para a Europeu Comum) e com uma média de idades de 7,63 anos
(mais baixa que nos primeiros três anos do estudo). Os nódulos de localização mamária foram inicialmente
divididos em neoplasias e hiperplasias apresentando respectivamente os valores de 91.8 % e 8.2% para cada uma
destas categorias. Relativamente ás neoplasias, a sua divisão considera dois grandes grupos - tumores mamários
malignos com 94.41% e benignos com 5.59 %. A classificação histopatológica dos tumores malignos assume neste
estudo de campo uma expressão que se traduz da seguinte forma: Carcinomas Simples com 80.10 % e Tipos
Especiais de Carcinomas com 19.90%. A subdivisão dos Carcinomas Simples nas suas diferentes apresentações
revela valores na ordem de 71.12 % para Tubulo-papilíferos de grau I, 4.06% para Tubulo-papilíferos de grau II,
16.10 % para Tubulo-papilíferos de grau III e por fim de 8.72 % para o Carcinoma Sólido. A expressão clínica dos
tumores benignos mamários nesta espécie é baixa, sendo representada apenas pelo Tumor Beningo Misto e
Fibroadenoma com representatividades na ordem dos 54.55 % e 45.45% respectivamente.
[A 5 years follow-up study over the main types of mammary gland tumours in feline population]
The raised incidence of patients with mammary nodules, that presents at medical and surgical consultations had lead
in 2000 to the beginning of a study developed in a population of female cats, all evaluated at Veterinary Medicine
Center Assis Angels, with main complaint of presence of mammary nodules. The average of the ages of evaluated
population was of 10 years. Histopathological analysis of anatomical parts resulted from mastectomy, allowed to
characterize the main types of nodules found in the breasts of this species. The first results presented at Congress of
the 100 Years of Portuguese Society of Veterinary Sciences allowed to conclude that the main type of breast tumour
found in the cats was one type malignant tumour - Simple Carcinoma Tubular-Papillary of grade I with 72,7 %. 2
years passed, the results seem to assume a modified trend. The evaluated population sample is now of 197 patients,
considering all breeds (with dominance of common european) and with a average of ages of 7,63 years (lower than
in first three years of the study). The nodules of mammary localization initially had been divided in neoplasias and
hyperplasias presenting respectively the values of 91.8 % and 8,2% for each one of these categories. Neoplasias,
considers two major groups - benign and malignant mammary tumours with 5.59 % and 94.41% respectively.
Histopathological classification of the malignant tumours assumes in this field study an expression that can be
expressed as: Simple Carcinomas with 80.10 % and Special Types of Carcinomas with 19.90%. Subdivision of the
Simple Carcinomas in its different presentations assume values as 71.12 % for Tubular-papillary of grade I, 4,06%
for Tubular-papillary of grade II, 16,10 % for Tubular-papillary of grade III and finally 8.72 % for Solid Carcinoma.
The clinical expression of the mammary benign tumours in this species is low, being represented only by Benign
Mixed Tumour and Fibroadenoma with percentual 45,45% and 54,55 % respectively.
216
Poster 70
Um caso de hernia diafragmática congénita pleuroperitoneal em felídeo
Carreira, L.M.1, Bernardino, R.1, Costa, A.1, Maurício, A.1, Máximo, R.1, Salvador, R.1
Centro de Medicina Veterinária Anjos de Assis (CMVAA) - Barreiro
A hérnia diafragmática traduz-se por uma protusão de órgãos abdominais através do diafragma, podendo ter uma
etiologia congénita (5 a 10 % dos casos) ou traumática (77 a 85 % dos casos), sendo os restantes de origem
desconhecida. Trata-se de uma patologia cuja resolução é obrigatoriamente cirúrgica.
Apresentou-se à consulta no CMVAA um felídeo, sexo feminino, 35 dias de idade, raça europeu comum, com 0,420
Kg/P.V.; com uma anammese de dispneia persistente agravada após as refeições, intolerância ao exercício e
prostração. Ao exame clínico a doente apresentava prostração, caquexia, dispneia acentuada, conjuntivite e
corrimento nasal bilateral, cianose, respiração abdominal, desidratação a 6 % e grande intolerância à manipulação
física. A auscultação do hemitorax esquerdo revelava um ruído timpânico e a presença de borborigmos, e o
hemitorax direito silêncio completo. Efectuaram-se exames complementares compreendendo radiografias torácicas e
exames de sangue. Além da presença de um pectus escavatum na região esternal caudal, avaliou-se uma
descontinuidade da silhueta diafragmática e a presença de gás no interior do tracto gastrointestinal ao nível do
hemitorax esquerdo. Foi estabelecido o diagnóstico de hérnia diafragmática.
O mau estado geral e a idade da doente, obrigaram a uma monitorização de perto por forma a conseguir estabilizá-la
previamente, tendo sido sujeita ao final de 72 horas a uma intervenção cirúrgica, que permitiu corrigir o defeito
único existente de dimensões muito reduzidas (cerca de 1 cm de diâmetro) circundado por um anel herniário com
estrutura fibrosa, havendo a necessidade de se aumentar o defeito para libertação dos órgãos herniados (fígado,
vesícula biliar, baço, estômago, pâncreas, intestino delgado e intestino grosso).
Novas radiografias pós-cirurgicas permitiram avaliar a nova área pulmonar efectiva funcional. Ao final das
primeiras 24 h, a doente já tinha comido, urinava e defecava normalmente, não apresentava mais evidência de
esforço respiratório ou mesmo cansaço.
A hérnia diafragmática congénita pleuroperitoneal, contrasta grandemente com as hérnias diafragmáticas
traumáticas em prática corrente de Medicina e Cirurgia de animais de companhia por ser raramente diagnosticada.
Na sua maioria, apresenta um defeito dorsolateral, concomitantemente ou não, com um defeito ao nível da lâmina
central tendinosa. A presença de órgãos herniados como o estômago, baço e intestino delgado, através do defeito
diafragmático, conduz à morte logo após o nascimento ou pouco tempo depois.
[A case of pleuroperitoneal diaphragmatic congenital hernia in feline]
Diaphragmatic hernia is expressed by protrusion of abdominal organs through the diaphragm, being able to have a
congenital aetiology (5 - 10 % of the cases) or traumatic (77 - 85 % of the cases), being the remains of unknown
origin. Surgical repair is imperative to resolution of this situation. It was presented to consultation at CMVAA a
feline, female, 35 days of age, European Common breed, 0,420 Kg/P.V.; presenting as anamnesis persistent
dyspnoea aggravated after meals, intolerance to exercise and prostration. At clinical examination patient presented
prostration, caquexia, accentuated dyspnoea, conjunctivitis and bilateral nasal discharge, cyanosis, abdominal
breathe, dehydration of 6 % and great intolerance to physical manipulation. Auscultation of left hemitorax disclosed
to a tympanic sounds and for the presence of intestinal sounds, and right hemitorax a complete silence.
Complementary exams were made using thorax radiographs and blood tests. A pectus escavatum in caudal sternal
region, a discontinuity of diaphragm and the presence of gas inside small bowel at left hemitorax, were revealing
with radiographs. It was established a diagnostic of diaphragmatic hernia. The bad condition of patient demanded a
close and completed monitorization with the main goal of stabilization. After 72 hours, patient went to surgical
procedures, allowing the correction of existing defect which had very reduced dimensions (about 1 cm of diameter)
surrounded by a ring with fibrosis structure. It was necessary to increase the defect to release the organs trapped
(liver, gall bladder, spleen, stomach, pancreas, small and large intestines). New radiographs after surgery were
made, allowing to evaluate the new functionary effective pulmonary area. At the end of first 24 h, patient already
had eaten, urinated and defecated normally, did not present more evidence of respiratory effort stress even tired.
Pleuroperitoneal diaphragmatic congenital hernia, greatly contrasts with the traumatic diaphragmatic hernias being
in Medicine and Surgery of small animals practice very rare. In its majority, a dorsolateral defect it is present,
concomitantly or not, with a defect at level of tendonsis central blade. Presence of trapped organs as stomach, spleen
and small and large intestines, through the diaphragmatic defect, soon leads to death after the birth or little time
later.
217
Poster 71
Diagnóstico ecográfico de retenção placentária na gata
Magalhães-Sant’Ana, M.1, Ferreira, G.2, Figueira, A.C.2, Oliveira, J.2, Vieira, A.L.2 e Vieira, M.J.2
1 Dep. Reprodução Animal, Escola Universitária Vasco da Gama, 3040-714 Castelo Viegas, Coimbra
2 Centro Veterinário Vasco da Gama, 3040-714 Castelo Viegas, Coimbra
A retenção placentária (R.P.) é uma patologia rara em cadelas e gatas e de diagnóstico extremamente difícil, não
tendo sido descrita, até hoje, uma imagem ecográfica característica. Pretende-se com este artigo encontrar um
padrão ecográfico que facilite o diagnóstico de R.P.
Foram acompanhados os casos clínicos de duas gatas de raça Persa, a Zaila e a Duqueza, de 4 e 8 anos de idade
respectivamente. A Zaila, após um parto descrito como eutócico e do qual nasceram 5 gatos saudáveis, apresentava
metrorragia puerperal severa, desidratação e prostração. A Duqueza teve um parto distócico, do qual resultaram 4
nados-mortos e encontrava-se com ligeiro corrimento vaginal sanguinolento.
Perante uma lista de diagnósticos diferenciais que incluía mumificação, retenção ou morte fetais, hiperplasia
endometrial quística, endometrite aguda, laceração uterina ou retenção placentária, ambos os animais foram
submetidos a ecografia abdominal.
A ecografia abdominal evidenciou, ao corte sagital do útero, a presença de estruturas intra-uterinas concêntricas,
distintas do endométrio, com ecogenicidade mista, e formadas por uma banda pregueada hiperecogénica a rodear
um centro também hipercogénico, separadas por tecido hipoecogénico. As duas zonas hiperecogénicas referidas são
isoecogénicas entre si. A aparência pode ser definida como se de um corte sagital de um pimento se tratasse. Na
Zaila foram identificadas quatro destas estruturas e uma na Duqueza.
À Zaila foi administrada ocitocina intramuscular, não se tendo verificado a expulsão de nenhuma placenta. Após
agravamento do quadro clínico a Zaila foi submetida a ovariohisterectomia. A Duqueza expulsou uma placenta
espontaneamente, com imediata remissão dos sinais clínicos. Ao útero da Zaila foi realizado exame histopatológico,
o que permitiu descartar a presença de outras anomalias concomitantes e confirmar a presença das cinco placentas,
correspondentes a toda a ninhada.
Provou-se assim que as estruturas visualizadas ecograficamente eram placentas retidas. A banda pregueada exterior
correspondia ao corionalantóide, a região intermédia hipoecogénica à zona de irrigação alantóica e o centro
hiperecogénico à vesícula amniótica.
A causa dos sinais clínicos em ambos os casos foi imputada à R. P. O reconhecimento ecográfico das placentas
retidas revelou-se de importância fundamental para o diagnóstico da R.P. e para diferenciação de outras patologias
do pós-parto.
[Ultrasound diagnosis of placental retention in the queen]
Placental retention (P.R.) is a rare event in small animal clinics, and its diagnosis remains a very difficult one. It was
not yet found a defined ecographic image of P.R. The purpose of this article is to find an ultrasound definition of
P.R. in order to help its diagnosis.
We followed the clinical cases of two Persian queens, Zaila and Duqueza, 4 and 8 years old respectively. Zaila, after
a labor defined as eutocic and giving birth to 5 healthy kittens, developed a bloody vaginal discharge, dehydration
and depression. After a dystocic parturition resulting in 4 still-born kittens, Duqueza presented a blood-stained
discharge. Following a list of differential diagnosis that included mummification, retention or foetal death, cystic
endometrial hyperplasia, acute endometritis, uterine laceration or placental retention, both queens where submitted
to an exploratory abdominal ultrasound examination.
The exam showed, at the sagittal cut of the uterus, the presence of intrauterine concentric structures, different from
the endometrium, composed by a hyperechoic undulating ridge separated of another central hyperechoic structure by
hypoechoic tissue. These structures could be roughly defined as sagittal cuts of a bell pepper. We were able to find
four of these structures in Zaila’s uterus and one in Duqueza’s.
Zaila was given intramuscular oxytocin but no placenta was expelled and ovariohysterectomy was made after
worsening of the clinical signs. Duqueza expelled one placenta spontaneously, with remission of the clinical signs.
Zaila’s uterus was analysed using histopathology that confirmed the presence of the placentas and discarded other
pathologies.
It was hence proven that the ultrasound observed structures were placentas. The outer undulating tissue
corresponded to the chorioallantois, the intermediate tissue to zonary allantoic blood vessels and the inner structure
to the amniotic vesicle.
In both situations, the cause for the clinical signs was pointed to P.R. The recognition of the ultrasound appearance
of P.R. was fundamental to diagnose it and to differentiate it from other post-partum pathologies.
218
Poster 72
Um caso de reacção imunológica retardada transfusional em felídeo por falta de tipagem do grupo
sanguineo
Carreira, L.M., Costa, A., Pais, I., Marcelino, E., Pereira, H.
A medicina transfusional é hoje em dia uma realidade importante na área clínica médica e cirúrgica de animais de
companhia em muitas das suas vertentes ex. cirurgia, cuidados intensivos, oncologia entre outros; exigindo um
conjunto de conhecimentos sobre sangue total, seus componentes, qualidade e gestão de bancos de sangue, como
deve funcionar um serviços transfusional e utilização segura de sangue e seus componente.
Apresentou-se à consulta no CMVAA um felídeo, sexo feminino, 3 anos de idade, raça europeu comum, com 3,650
Kg/P.V.; com necrose seca da maioria dos dígitos das mãos e pés, e cauda. A doente apresentava de base um
internamento hospitalar realizado á cerca de 18 dias por anemia hemolítica corrigida com recurso a terapêutica de
antibioterapia, corticosteróides e transfusão de sangue total.
O exame clínico revelou um mau estado geral do doente, prostração, ligeira icterícia, e necrose seca de dígitos das
mãos e pés, e cauda - provavelmente resultante de uma transfusão sanguínea cega ou seja, sem tipagem do grupo
sanguíneo, exigindo correcção cirúrgica imediata. A doente foi submetida a exames compreendendo hemograma e
bioquímicas básicas, permitindo avaliar para um hematócrito baixo de 21% (comparado com o hematócrito de 32%
apresentado nos exames efectuados no hospital nas 24 horas pós-transfusão), e valores aumentados para as enzimas
hepáticas estruturais e funcionais. A amputação de 3 dígitos na mão direita, 4 na mão esquerda, 2 no pé esquerdo e 4
no direito, assim como da cauda ao nível de Ca3-Ca4, permitiu a recuperação da qualidade de vida da doente num
período de apenas 2 dias, ao final dos quais já andava e saltava todos os obstáculos que se lhe deparava.
As complicações da terapêutica transfusional resultam de incorrecta escolha de compatibilidade de sangues entre
doentes receptores e dadores, má pratica de preparação, armazenamento e administração. Podem ser classificadas
em dois grupos distintos: imunologicamente mediadas e não imunológicas. As reacções imunológicas retardadas são
relativamente raras, e surgem na sua grande maioria entre o 2º e o 21º dia pós-transfusão, sendo mais discretas que
as reacções imunológicas mediadas agudas na sua manifestação clínica, mas que induzem limitações ao doente. A
necessidade de efectuar em urgência uma transfusão, não deve facilitar a ocorrência de estigmas posteriores que
possam traduzir-se numa futura diminuição de qualidade de vida para o doente, apenas pela falta de realização de
uma etapa básica da medicina transfusional: a serotipagem do grupo sanguíneo de dador e receptor.
[A case of delayed immunologic transfusional reactions in feline due to lack of tipification of blood
group]
Transfusional medicine is now an important reality in medical and surgical area of small animals. Various
specialities as surgery, critical care, oncology, among others; have created a need for knowledge on total blood, its
components, quality and management of blood banks, function of transfusional services and safe use of blood and
its component. A feline, female, 3 years of age, breed common european, with 3,650 Kg/P.V.;was presented at the
CMVAA, with dry necrosis of the majority of digits from hands and feet, and tail. Patient was in hospitalisation 18
days ago by a haemolytic anaemia corrected with antibiotics, corticosteroids and transfusion of total blood. Clinical
examination disclosed a bad condition of patient, prostration, jaundice, and dry necrosis of digits of the hands and
feet, and tail - probably resultant from a blind transfusion, which means, without typifying blood group. Patient was
submitted to complementary exams with hemogram and seric biochemistry, allowing to evaluate for a low PVC of
21% (comparing with a 32% PVC presented at hospitalisation time 24 hours after transfusion), and values increased
for structural and functional liver enzymes. The amputation of 3 digits in right hand, 4 in left hand, 2 and 4 in left
and right foots, as well as of tail at level of Ca3-Ca4, allowed the recovery of the quality of life of patient only in a
period of 2 days, to the end of which, it already walked and jumped all obstacles that came across her.
Complications of transfusional therapeutic can result from improper choice of compatibility of bloods between
donor and recipient, bad preparation, storage and administration. Complications can be classified in two distinct
groups: immunologicaly mediated and not immunological. Delayed immunologic transfusional reactions are rare,
and appear in its great majority between 2nd and 21st day after transfusion, being discreter than acute mediated
immunological reactions in its clinical manifestation, but inducing limitations to the patients. Urgency in
transfusion, should not facilitate posterior occurrence of stigmata which can be expressed in future by a reduction in
life quality of patient, only because a lack in a basic one-step accomplishment of the transfusional medicine: the
tipification donor and receiver blood group.
219
Poster 73
O uso do doppler na selecção de digitos a preservar vs amputar num felídeo com reacção
imunológica retardada transfusional
Carreira, L.M., Costa, A., Pais, I., Marcelino, E., Pereira, H.
O doppler contínuo de fluxo, utiliza uma sonda colocada sobre uma determinada região anatómica, permitindo
determinar a presença de sinal de fluxo sanguíneo existente nas veias e artérias. Uma das grandes vantagens do
doppler contínuo de fluxo é que o fluxo pode ser escutado de uma forma contínua, ao contrário do que se passa com
os aparelhos oscilométricos. Isto é importante pois, veias e artérias que se apresentem constritas podem ser um bom
indicador de boa pressão sanguínea mas nem sempre significam que assegurem uma boa rede vascular de profusão
dos tecidos, podendo conduzir a embustes no que respeita á tomada de decisão quanto á viabilidade cirúrgica dos
tecidos.
Apresentou-se à consulta no CMVAA um felídeo, sexo feminino, 3 anos de idade, raça europeu comum, com 3,650
Kg/P.V.; para correcção cirúrgica de uma necrose seca da maioria dos dígitos das mãos e pés, e cauda resultante de
uma reacção imunológica retardada por falta de tipagem do grupo sanguíneo da doente.
A aparência de toda a região metacarpico-digital e metatarso-digital apresentava, sugeria para a necessidade de
amputação total de todos os dígitos. O recurso ao doppler contínuo de fluxo conseguido através da utilização de um
aparelho de ultra-sons de última geração Aloka SSD 3500-Plus, permitiu avaliar quais os dígitos que poderiam ser
preservados e quais os que deveriam ser amputados por falta de irrigação sanguínea, colocando uma sonda convexa
de 7.5 mHz, directamente sobre os diferentes arcos das artérias palmar e plantar nas mãos e pés respectivamente,
permitindo ver e ouvir (ou não), o fluxo sanguíneo existente ou ausente nas diferentes áreas.
Os dígitos preservados ao doente e escolhidos com base no doppler continuo de fluxo, mostraram-se com boa
viabilidade tecidular ao final de 5 dias pós-cirurgicos, apesar da coloração negra e desidratação que a pele
inicialmente apresentava. A aparência normal dos tecidos preservados da região foi alcançada ao final de período de
tempo variável entre 16 e 21 dias.
[The use of doppler as a tool selection of digits to preserve versus amputate in a feline with delayed
immunologic transfusional reactions]
The continuous flow Doppler, uses a sounding lead placed on one specific anatomic region, allowing to detect the
signal of sanguineous flow in veins and arteries. One of the great advantages of the continuous flow Doppler is that
the flow can be listened in a continuous form, contrasting with the oscillometric devices. This is a very important
fact since, presence of constricted veins and arteries can indicate good blood pressure but a poor overall vascular net
of profusion of tissues, being able to lead to mistakes about surgical viability of tissues. It was presented at CMVAA
a feline, female, 3 years of age, bred common European, with 3,650 Kg/P.V.; for surgical repair with dry necrosis of
the majority of digits from hands and feet, and tail, resulting from a delayed immunological reaction due a lack in
blood group tipification of patient. The appearance of entire metacarpal-digital and metatarsal-digital region,
suggested a necessity of total amputation of all digits. The use of continuous doppler of flow obtained through a last
generation ultrasounds device - Aloka SSD 3500-Plus, allowed to evaluate which digits could be or not preserved
having or not blood irrigation, placing a 7.5 mHz convex probe directly over the different arcs of the arteries to
palmar and to plant in the hands and feet respectively, allowing to see and to ear (or not), the existing or absent
sanguineous flow in this areas. Digits preserved on patients were chosen on the basis of Doppler. Despite black
coloration and dehydration of tissues initially presented, spread ones by using Doppler flow shown a good viability
at the end of 5 days post-surgery. Normal appearance of preserved areas was reached to the end of period variable
between 16 and 21 days.
220
Poster 74
Fenda palatina congénita num leão marinho, Zalophus californianus, do Jardim Zoológico de
Lisboa
Sogorb, A.1, Barão da Cunha, M.1, Delgado, E.2, Borrego, S.2, Jesus, S.2 e Sales-Luís, J.2
1 Jardim Zoológico de Lisboa, Estrada de Benfica 158, 1549-004 Lisboa, Portugal
2 Departamento de Clínica, CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária, Alameda da Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa, Portugal
Princesa, uma fêmea leão marinho nascida em Junho de 2003, apresentava dificuldades de sucção. Durante a
avaliação clínica diagnosticou-se uma fenda palatina de grandes dimensões que englobava a pré-maxila, o palato
duro e o palato mole, com exposição das coanas. Recorreu-se a um plano de alimentação artificial, através de
entubação orogástrica, com uma fórmula adequada cuja concentração, quantidade e frequência de administrações
foram variando de acordo com o seu crescimento.
O animal foi submetido a três intervenções cirúrgicas. A indução e manutenção anestésica foram sempre realizadas,
respectivamente, por meio de máscara e tubo endotraqueal, mediante vaporização de oxigénio e isoflurano. Os
parâmetros vitais foram monitorizados criteriosamente com o objectivo de prevenir situações de emergência,
designadamente hipertermia e apneia fisiológica, riscos potenciais nas anestesias dos Pinípedes. Na primeira
cirurgia, a 23/10/2003, o encerramento do palato mole foi realizado recorrendo a flaps de mucosa oral e o do palato
duro com flaps bipediculados mucoperiósteos. O palato mole permaneceu encerrado, mas a fenda no palato duro
recidivou. Após a segunda cirurgia, a 13/5/2004, a fenda no palato duro recidivou novamente. Na terceira cirurgia, a
21/10/2004, utilizou-se uma rede sintética para substituir a base óssea e os tecidos moles inexistentes, cobrindo
assim o defeito. Como resultado, formou-se um quelóide na junção da rede com a mucosa oral, fixando-a. A rede
permitiu a separação física entre as cavidades oral e nasal, servindo de suporte para a migração de tecidos. Nas três
cirurgias foi suturada uma membrana biológica (BIOSIS, Cook Products) por cima do defeito para promover a
cicatrização e conferir protecção. É preferível efectuar a cirurgia no animal mais velho para permitir o crescimento,
facilitar o acesso ao palato e os tecidos serem menos friáveis, havendo menos hipóteses de deiscência das suturas. É
frequente serem necessárias várias intervenções cirúrgicas antes de se conseguir encerrar uma fenda palatina, devido
à fraca elasticidade dos tecidos (Fossum et al., 1997). Neste caso a grande extensão da fenda criou excessiva tensão
nas suturas. A consanguinidade, confirmada a posteriori, poderá ter sido um dos factores predisponentes para a
ocorrência desta malformação (Ralls et al., 1979).
A sobrevivência da Princesa deve-se às técnicas utilizadas pela equipa veterinária, à dedicação e profissionalismo
dos treinadores e ao temperamento gentil da cria. A medicina preventiva contribuiu para a inexistência de patologia
respiratória, sendo no entanto de evitar a sua reprodução. Presentemente a Princesa participa nas actividades de
rotina diária no seu grupo social e aprendeu a ingerir peixe similarmente aos seus conspecíficos.
[Congenital cleft palate in a sea lion, Zalophus californianus, from the Lisbon Zoo]
Princesa, a female Sea Lion born in June 2003, presented with difficulties in suction. During the clinical
examination a large congenital palatine cleft was diagnosed. There was a complete absence of the pre-maxilla, hard
palate and soft palate, exposing the coanas. It was decided to initiate hand-rearing with an adequate formula through
orogastric tube feeding. The composition, amount and frequency of administration of the diet varied according to the
age of the animal.
The animal underwent three surgical procedures. In all of them anesthetic induction was made with a mask
vaporizing oxygen and isoflurane. Endotracheal intubation was performed and maintenance was done with a
mixture of oxygen and isoflurane. Vital parameters were continuously monitored to prevent hipertermia and
physiological apnea, potencial risks of a Pinipeds’ anesthesia. In the first surgery, on 23/10/2003, the repair of the
soft palate was done with flaps of oral mucosa and the hard palate was repaired with mucoperiosteal bipedicle flaps.
The soft palate was successfully repaired, but the hard palate defect relapsed. After the second surgery, on
13/5/2004, the hard palate defect relapsed again. In the third procedure, on 21/10/2004, a synthetic mesh was
inserted in an incision between the hard palate and the mucoperiosteum, covering the entire defect. A cheloid
formed around the border of the mesh, which kept it in place. It allowed a physical separation between the oral and
nasal cavities. In the three procedures a biological membrane (BIOSIS, Cook Products) was sutured over the entire
defect to promote healing and confer protection. We waited for some time between the surgical procedures because
it is better to perform surgery in the older animal to allow growth, easier access to the palate and tissues are less
friable and hold sutures better. Yet, multiple procedures may be necessary before the entire cleft is permanently
reconstructed (Fossum et al., 1997). This defect was very large and the sutures were under a lot of tension. The
consanguinity later confirmed might be a predisposing factor for the occurrence of this congenital abnormality
(Ralls et al., 1979). This Sea Lion survival relied on the expertise of the technicians, devotion and professionalism
of her keepers and her gentle nature, which allowed tube feeding. Due to the surgeries outcome, she could learn to
eat fish and she participates of the daily activities of the other sea lions. Preventive medicine allowed for the
inexistence of superior respiratory tract infections and her reproduction will be avoided.
221
Poster 75
Casos de malária em pinguins Spheniscus demersus do Jardim Zoológico de Lisboa
Rebêlo, E.1, Baptista, R.1, Afonso, A.1, Monteiro, M.1, Lapão, N.2, Sogorb, A.2, Carvalho, P.1, Mendonça, P.1
1 Laboratório Nacional de Investigação Veterinária
2 Jardim Zoológico de Lisboa
Os autores referem sobre a Malária em alguns dos pinguins do Jardim Zoológico de Lisboa enviados ao Laboratório
Nacional de Investigação Veterinária para a realização do diagnóstico post-mortem.
Os animais doentes apresentam tendência para o isolamento e clinicamente revelam dificuldade na deglutição e
anorexia durante um a dois dias antes da morte.
Efectuada a necrópsia, os autores descrevem as lesões macroscópicas e microscópicas observadas no pulmão, fígado
e baço.
Na análise parasitológica a infecção caracteriza-se pela observação microscópica de formas evolutivas de agentes
parasitários da família Plasmodiidae e do género Plasmodium em esfregaços de coração, pulmão, baço, fígado, rim e
cérebro corados por Giemsa. A leitura dos esfregaços observados permite referir àcerca de um predomínio de
esquizontes extraeritrocíticos, da presença de alguns trofozoítos e de raros gametócitos.
O controle da Malária realiza-se com tratamentos profilácticos administrando aos animais Resorchina (250
mg/animal) e Primaquina (15 mg /animal) uma vez por semana. A terapêutica instituída aos pinguins doentes são a
Sulfadoxina (500 mg/animal) e a Pirimetamina (25 mg /animal) cinco tomas efectuadas a cada dois dias.
O tratamento anti-malária é estabelecido sempre que os testes de PCR realizados pelo Instituto de Higiene e
Medicina Tropical revelem animais positivos, ou no caso de haver morte causada por Plasmodium.
[Cases of malaria in Spheniscus demersus penguins in the Zoo Garden of Lisbon]
The authors refer about Malaria in a few penguins from the Zoo Garden of Lisbon that were sent to the Laboratório
Nacional de Investigação Veterinária for post-mortem diagnosis.
Sick animals have aptness to isolate. Clinically they present difficulty to swallow and anorexia during one or two
days before death.
After necropsy the authors describe macroscopic and microscopic lesions in the lung, liver and spleen.
In the parasitological analysis the infection is characterised by the microscopic observation of evolutive forms of
parasites belonging to the family Plasmodiidae and genus Plasmodium in heart, lung, spleen, liver, kidney and brain
films stained by Giemsa. On the films we can observe the predominance of exoerythrocytic schizonts and the
presence of few trofozoites and rare gametocytes.
The malaria control is realised by prophylactic treatment with Resorcin (250 mg/animal) and Primaquine (15
mg/animal) once a week. Curative treatment is made with Sulfadoxine (500 mg/animal) and Pyrimethamine (25
mg/animal) in five divided doses daily, twice a week.
Anti-malaria treatment is established when PCR tests performed by the Instituto de Higiene e Medicina Tropical
reveal positive animals or in confirmed case of death caused by Plasmodium.
222
Poster 76
Oftalmologia em peixes
Oliveira, R.1, Pereira, N.2
1 Rua Palmira Bastos, Nº 18 – 11º Dto 2685-225 Portela LRS
2 Oceanário de Lisboa, Esplanada D. Carlos I, 1990-005, Lisboa.
Com o aparecimento de novos aquários públicos e com o desenvolvimento da industria de peixes ornamentais surgiu
a necessidade da intervenção veterinária nestas áreas, nomeadamente no âmbito da medicina de peixes,
onde patologia ocular é um aspecto preponderante.
Assim o exame oftalmológico é relevante para o diagnóstico quer da patologia ocular primária quer da secundária a
doenças sistémicas.
Os autores revêem as peculiaridades anatómicas e fisiológicas oculares e descrevem a metodologia usada no exame
oftalmológico em peixes.
As lesões mais frequentes são as queratites, ulceras de córnea, uveite, cataratas, retinopatias, exoftalmia e
acumulação de gás intraocular.
O tratamento apesar de condicionado pelo facto do paciente estar emerso em água epela necessidade na maioria dos
casos de anestesia geral, pode se efectuado atempadamente, resolver grande parte das situações.
Os autores relatam vários casos clínicos ocorridos no Oceanário de Lisboa, como tratamento médico e cirúrgico de
queratites e úlceras da córnea, o tratamento médico da exoftalmia uni ou bilateral, cirurgias como a enucleação,
ablação de pseudo brânquia (hemipseudobranquiectomia) para resolução de acumulação de gás intraocular e
colocação de prótese ocular experimental.
[Ophthalmology in fish]
With the emergence of new public aquariums and expansion of the ornamental fish industry appeared the need of
veterinarian involvement in areas like fish medicine, where eye diseases are a relevant aspect.
Ophthalmologic examination is essential for the diagnosis both of primary ocular diseases and of eye pathology
secondary to systemic illnesses. The authors review fish eye anatomy and physiological peculiarities and describe
the methodology used in the ophthalmologic examination.
The most frequent diseases are keratitis, corneal ulcers, uveitis, cataracts, retinopathy, exophthalmos and intraocular
gas accumulation
Treatment although conditioned by the fact that the patient is immersed and by the need to perform general
anaesthesia in the majority of the cases, if done in an early stage of the disease can solve most of the situations.
The authors describe some clinical cases occurred in the Oceanário de Lisboa, like medical and surgical treatment of
keratitis, corneal ulcers, and exophthalmia uni or bilateral, surgical procedures like eye enucleation, pseudobranch
removal (hemipseudobranchectomy) for resolution of intraocular gas accumulation and placement of an
experimental ocular prosthesis.
223
Poster 77
Doenças dos peixes: perspectiva económica e impacto na Saúde Pública
Ramos, P.
Departamento de Aquicultura. Instituto de Investigação das Pescas e do Mar. (IPIMAR/INIAP)
Nos últimos vinte anos, a produção aquícola nos países mediterrânicos expandiu-se rapidamente mercê do
desenvolvimento e coordenação de conhecimentos nas áreas da nutrição, maneio, patologia, tecnologia de produção,
nas diferentes fases do ciclo produtivo, bem como a comercialização, tendo por objectivo último, a produção de um
maior número de indivíduos no mais curto intervalo de tempo e a sua colocação no mercado a preços mais
competitivos. Neste contexto, as doenças dos peixes podem representar um factor limitativo na produção piscícola.
Os parasitas, os vírus e as bactérias são responsáveis por muitas doenças que do ponto de vista económico, reduzem
a eficácia da produção quer por provocarem mortalidades “per si” quer por serem responsáveis por rejeições
elevadas na inspecção do pescado e a consequente remoção do circuito da comercialização. A agravar a situação,
acrescentam-se os gastos com a implementação de tratamentos e a mão-de-obra empregue na viabilização dos
mesmos.
Do ponto de vista da Saúde Pública, alguns grupos de parasitas e bactérias podem constituir preocupação pois são
agentes de zoonoses e merecem especial atenção, sobretudo no que diz respeito à implementação de medidas de
controlo prévias à comercialização e que visam a redução/eliminação por exemplo de parasitas mas, sobretudo,
através da divulgação de informação junto do consumidor.
[Fish diseases: economical perspective and impact in Public Health]
Aquaculture production in the Mediterranean countries has rapidly expanded over the last twenty years in order of
the development and coordination of knowledge in the areas of the nutrition, health management, pathology,
production technology, in different phases of the productive cycle, as well as the commercialization, having for last
objective, the production of a bigger number of individuals in the shortest time putting them in market of the most
competitive prices. In this context, fish diseases can represent a limiting factor in fish production.
In this work, parasites, viruses and bacteria are presented as responsible for many diseases that of the economic
point of view, reduce the effectiveness of the production either provoking mortalities for itself or for being
responsible for rejections at inspection of the fished one and the consequent removal of the commercialization
circuit. To aggravate the situation, we must add the expenses with the implementation of treatments and labour.
From the Public Health point of view, some groups of parasites and bacteria can constitute concern because that are
agents of zoonoses and deserve special attention, over all in what concerns to the implementation of previous
measures of control to the commercialization and that they aim the reduction/elimination of parasites for example
but, over all, through the spreading of information to the consumer.
224
Poster 78
Lesões provocadas por bacilos álcool-ácido resistentes em peixes
Freitas, S.G.1, Cruz e Silva, P.2 e Afonso, F.3
1 Direcção Geral de Veterinária, Lisboa
2 Laboratório Nacional de Investigação Veterinária, Lisboa
3 CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária, Lisboa
Os autores descrevem lesões provocadas por bacilos álcool-ácido-resistentes em diversas espécies de peixes de
aquário (Astronotus ocellatus; Apagon imberbis; Cichlasoma spp; Gasteropelecus levis; Pterophyllum scalare;
Thorichthys meeki).
A fixação dos órgãos foi feita em formol a 10% com tampão fosfato. Fizeram-se as inclusões em parafina e os cortes
com 5 micra de espessura foram corados com Haemalumen de Mayer – Eosina de Putt, Ziehl-Neelson, Van Gieson
e McManus.
Alguns exemplares apresentavam-se emaciados, com exoftalmia, lesões de ascite e alterações de pigmentação. Nos
óscares (Astronotus ocellatus) observaram-se formações nodulares esbranquiçadas nas brânquias e barbatanas. Em
casos esporádicos evidenciavam-se úlceras congestivo-hemorrágicas localizadas principalmente na cabeça. As
lesões a nível dos órgãos manifestavam-se por hipertrofia e áreas dispersas de coloração acinzentada.
As lesões descritas são características de micobacteriose ou tuberculose. Esta doença nos peixes é difícil de
identificar, em virtude da falta de especificidade dos sintomas e da dificuldade de isolamento do agente.
Agradecimento: Teresa Ferreira Albuquerque, Investigadora Auxiliar, Responsável pelo diagnóstico das doenças
bacterinas, LNIV.
[Lesions induced by acid-alcohol resistant bacillus in fishes]
The authors describe lesions caused by acid-alcohol resistant bacillus in different species of aquarium fishes
(Astronotus ocellatus; Apagon imberbis; Cichlasoma spp; Gasteropelecus levis; Pterophyllum scalare; Thorichthys
meeki).
with 5 µm were stained with Mayer Haemalumen - Putt Eosine, Ziehl-Neelson, Van Gieson and McManus.
Some specimens were emaciated, with exoftalmia, ascitis and color changes. In the oscar cichlid (Astronotus
ocellatus) withish nodules were observed on the gills and fins. In some cases ulcers were present on the head. The
organs showed hypertrophy and greyish areas.
The lesions are related to mycobacteriosis or tuberculosis. This disease in fishes is difficult to identify, due to the
lake of specificity of the symptoms of the disease and the difficulty to isolate the agent.
Acknowledgements: Teresa Ferreira Albuquerque, LNIV
225
Poster 79
Infecção por formas larvares de céstodes da Ordem Tetraphyllidea em Delphinus delphi
Gomes, J.C.1, Waap, H.1, Silva, A.E.2, Monteiro, M.1, Bastos, J.G.1, Rebêlo, E.1
1 Laboratório Nacional de Investigação Veterinária, Estrada de Benfica, 701, 1549-011 Lisboa
2 Câmara Municipal de Peniche, Largo do Município, 2524-909 Peniche
A ocorrência de arrojamentos de cetáceos na costa portuguesa é frequente.
Na necrópsia dum dos três golfinhos (Delphinus delphi) encontrados mortos na costa de Peniche, foram observados
e colhidos cisticercos de céstodes pertencentes à Ordem Tetraphyllidea, provenientes da gordura subcutânea e zona
retroperitoneal.
Os cisticercos de Monorigma grimaldii encontrados na zona retroperitoneal ocupavam estruturas mais organizadas
que os de Phyllobothrium delphini, presentes na gordura subcutânea.
O ciclo biológico e a sistemática destes parasitas ainda não são totalmente conhecidos. As formas larvares foram
descritas em várias espécies de cetáceos e pinípedes. É referida a hipótese das formas adultas, ainda não
identificadas, poderem parasitar várias espécies de tubarões.
Pretende-se, com este trabalho, contribuir para um conhecimento mais detalhado das parasitoses dos cetáceos.
[Infection from cestodes of the Order Tetraphyllidea in Delphinus delphi]
The occurrence of stranded cetaceans is frequent on the Portuguese coast.
During the necropsy of a common dolphin (Delphinus delphi), found dead on the coast of Peniche, cysticerci from
the Order Tetraphyllidea were collected from the blubber and retroperitoneal area.
The Monorigma grimaldii cysticerci found in the retroperitoneal area occupied more organized structures than the
Phyllobothrium delphini from the blubber.
The biologic cycle and systematics of these parasites are not completely known. These larvae were reported in
several species of cetacean and pinniped hosts. The adults, not yet identified, could be parasites of sharks.
With this work, we pretend to contribute for a better knowledge of cetacean parasites.
226
Poster 80
Estudos de caracterização e tratamento de uma parasitose provocada por ciliados pertencentes à
subclasse SCUTICOCIATIA em pregado de aquacultura
Costa, A.R.1, Barandela, T.1, Ramos, M.F.2 e Rodrigues, P.1
1 Instituto de Ciências Biomédias de Abel Salazar, Largo Prof. Abel Salazar, 2, 4099-003 Porto
2 CIIMAR – Centro Interdisciplinar de Investigação Marinha e Ambiental, Rua dos Bragas 289, 4050-123 Porto
INTRODUÇÃO: Os ciliados pertencentes à ordem SCUTICOCIATIDA são parasitas oportunistas de vida livre,
responsáveis por um aumento de infecções sistémicas em várias espécies de peixes de aquacultura marinha, em
particular de peixes chatos, onde provocam altas taxas de mortalidade, sempre que o hospedeiro se encontre imunodeprimido.
OBJECTIVOS: Com este estudo pretendeu-se identificar o ciliado responsável pelas perdas observadas em uma
aquacultura de pregado (Scothphalmus maximus).
Pretendeu-se ainda verificar o efeito dos tratamentos realizados com o intuito de controlar o seu desenvolvimento.
MATERIAL E MÉTODOS: Para a identificação do parasita recorreu-se a técnicas de microscopia óptica e
electrónica, tendo-se efectuado raspagens do muco do tegumento e barbatanas e recolha de tecidos lesionados. Para
microscopia óptica os tecidos foram fixados em formol-tamponado e em gluteraldeído-ósmio para microscopia
electrónica. Os parasitas “em toto” e os cortes histológicos foram observado e fotografados num fotomicroscópio
ZEISS-AXIOSTAR equipado com câmara digital SONY DSC-S75. A microscopia electrónica de varrimento foi
observada e fotografada no microscópio (JEOL JSM6301F) do CEMUP – Centro de Materiais da Universidade do
Porto. As tentativas de controlo do parasita foram feitas à base de banhos de formol a uma concentração de 200ppm
durante 1 hora, aquando do aparecimento da sintomatologia externa por eles provocada.
RESULTADOS: Verificou-se que o parasita isolado provoca graves lesões hemorrágicas, hiperplásicas ou
ulcerativas no tegumento e base das barbatanas, facilmente observáveis num exame macroscópico. Observamos
ainda que as epizootias estavam frequentemente associadas a infecções bacterianas
Os tratamentos efectuados com formol são eficazes na eliminação dos parasitas que se encontram no exterior dos
hospedeiros, não tendo qualquer acção sobre os que já se encontram no seu interior. Assim, será importante evitar o
surgimento desta parasitose em aquacultura, já que uma vez instalada a sua erradicação só é possível com a
eutanásia de todo o efectivo e posterior desinfecção das instalações.
Dentro da ordem SCUTICOCIATIDA as famílias mais importantes são URONEMATIDAE e PHILASTERIDAE,
que se diferenciam pelo extremo anterior do corpo e pelo aparelho bocal.
De acordo com estas características, os nossos estudos indicam que o ciliado isolado pertence à família
PHILASTERIDAE.
[Characterization and treatment of a parasite infection caused by a ciliate belonging to the order
SCUTICOCIATIDA in cultured turbot]
Introduction: The ciliates belonging to the order SCUTICOCIATIDA are free-living opportunistic parasites, causing
an increase in systemic infections in various fish species used in marine aquaculture, in particular flatfish, in which
the parasitic infection results in high mortality rates especially in immuno-compromised individuals.
OBJECTIVS: With this study, we aimed to identify the ciliate responsible for losses observed in a fish farm of
turbot (Scothphalmus maximus). In addition, we aimed to evaluate the efficacy the treatments carried out to control
infection development.
Material and methods: In order to identify the parasite, mucous was collected from skin and fins and tissue was
sampled from the affected area and analysed with optic and electronic microscope techniques. For optic microscopy,
the tissues were fixed in buffered formaldehyde and for electronic microscopy in glutaraldehyde. The parasites “in
toto” and the histological sections were observed and photographed in a photomicroscope ZEISS-AXIOSTAR
equipped with a digital camera SONY DSC-S75. The scanning microscopy was observed and photographed in the
microscope (JEOL JSM6301F) at CEMUP – Centro de Materiais da Universidade do Porto.
In order to control the parasitic infection, as soon as visible external signs of infection were detected, the turbot was
analysed and if the presence of parasite confirmed treated with 1-h formaldehyde baths at a concentration of
200ppm.
Results: We verified that the isolated parasite provoke serious hemorrhagic lesions, hyperplasic or ulcerative, in the
skin and base of the fins, easily visible macroscopicically. We furthermore observed that parasitic infections were
frequently associated with bacterial infections. The formaldehyde treatment was found to be effective in eliminating
external parasites, but had no effect on the parasites that had already reached the interior of the host. Therefore, it
would be important to avoid the appearance of these parasite infections in aquaculture, since once established they
can only be irradiated by euthanasing the entire stock and disinfecting the facilities.
Within the order SCUTICOCIATIDA, the most important families are URONEMATIDAE and PHILASTERIDAE,
which differ in the anterior part of the body anatomy and bucal apparatus. According to these characteristics, our
studies indicate that the isolated ciliate belongs to the family PHILASTERIDAE.
227
Poster 81
“Blooms” de Cyanobacteria e Dinophyceae associados a mortalidades de peixe em águas
portuguesas
Ramos, P. e Oliveira, M.R.
Instituto de Investigação das Pescas e do Mar. Avenida de Brasília. 1449-006 Lisboa
Os “blooms” de fitoplâncton desenvolvem-se no meio natural e em pisciculturas, resultantes de processos de
enriquecimento em nutrientes. A sua importância pode ser abordada em duas vertentes: numa perspectiva
económica em que se realçam as pesadas mortalidades que causam na ictiofauna e numa perspectiva da saúde
pública, quando as mortalidades ocorrem no meio natural, e o peixe em decomposição não é removido, podendo
constituir uma fonte de poluição. Por outro lado, esta situação poderá, também, levar à interdição da pesca e do
consumo de peixe no ecossistema afectado.
Os “blooms” de fitoplâncton podem causar fortes reduções do oxigénio dissolvido na água, levando à morte dos
peixes por anóxia. Outro aspecto lesivo é a produção de hepatotoxinas e neurotoxinas, como é o caso de espécies de
Cyanobacteria e Dinophyceae. Há ainda a considerar as lesões provocadas pela acção mecânica de espécies
algológicas dotadas de estruturas espinhosas, de que é exemplo Ceratium hirundinella (Dinophyceae).
O trabalho que se apresenta constitui uma compilação dos estudos desenvolvidos nesta área, nos Laboratórios de
Patologia e Fitoplâncton do IPIMAR, desde 1974 até à presente data.
Os peixes observados foram colhidos no meio natural e em pisciculturas onde se observaram mortalidades. Nos
exemplares em estudo fez-se o exame anátomo-patológico e esfregaços a fresco da pele e brânquias. Os esfregaços a
fresco foram observados ao microscópio óptico e estudadas as alterações teciduais observadas nos peixes. No local,
procedeu-se, ainda, à colheita de amostras de água para estudo do fitoplâncton, tendo sido identificadas as espécies
de Cyanobacteria e Dinophyceae e realizada a sua quantificação pelo método de Utermohl. Os resultados obtidos
são apresentados em tabelas (local de ocorrência/espécie de alga) e fotografias das algas identificadas e das lesões
provocadas por acção das mesmas.
Para concluir, realça-se o facto de Portugal ter características edafo-climáticas que propiciam a ocorrência destes
“blooms”, quer no meio natural, quer em pisciculturas. Contudo, é importante realçar que a piscicultura em Portugal
se faz em monocultura, principalmente de dourada, em regime semi-intensivo, e a policultura em regime extensivo,
isto é, dependendo das marés para a renovação da água nos tanques, pelo que é importante a monitorização desta, a
fim de atenuar/prevenir o impacto negativo destes “blooms”.
[Cyanobacteria and Dinophyceae blooms related whith fish-kills in Portuguese inland and
estuarine waters]
Cyanobacteria blooms have been detected since 1974 in Portuguese rivers, reservoirs and small lakes. More
recently, they begin to occur also in fish farms located in some estuaries.
These blooms are a nuisance to water quality and fish, giving rise to fish-kills related with anoxia conditions and/or
production of toxins by those algae. They contribute to an economical loss in commercial fishing, are a danger to
public health and reflect the eutrophication status of the ecosystem.
In order to know the blooms specific composition and the effects of the toxic algae on fish, phytoplankton and fish
pathological studies have been carried out in IPIMAR, from 1974 to 2004. Identification of algae was performed on
living and preserved (acetic Lugol) material. Counts were done according to Utermohl (1958) and Lund et al.
(1958). Examination of fish fresh material was undertaken using gill and body surface smears.
This work presents the results concerning the spatio-temporal distribution of Cyanobacteria blooms, their dominant
species and the lesions observed in the fish gills, which are a major site for uptake of toxic compounds. The
occurrence of Dinophyceae proliferations (mainly Ceratium hirundinella) are also reported, as well as the
mechanical damages observed in the gill lamellae of fish.
228
Poster 82
Efeito da exposição à temperatura ambiente, do mexilhão (Mytilus spp.) antes da depuração
1 Serviço de Inspecção Sanitária Lota da Figueira da Foz
Neste trabalho, pretendeu-se avaliar o efeito da exposição a temperatura ambiente, sobre a contaminação inicial de
mexilhões (Mytilus spp.) capturados na Ria de Aveiro, simulando condições de ausência de refrigeração que
ocorrem durante o período que medeia entre a captura e a depuração. Trata-se de géneros alimentícios com potencial
de manuseamento abusivo durante a distribuição, facilmente perecíveis, não processados termicamente, em que o
controlo do binómio tempo e temperatura é crítico para a salvaguarda da salubridade.
Pretendeu-se determinar o impacto da temperatura ambiente não controlada, sobre o nível de contaminação de
diferentes lotes de mexilhão capturados numa zona C (Canal de Ílhavo), quantificando esse efeito por estimativa do
tempo de geração.
Fizeram-se ensaios com 11 lotes de mexilhões, em que se repetiu o seguinte protocolo: formaram-se, em cada
ensaio, 2 sublotes tendo o cuidado de proceder à sua homogeneização. Um lote foi imediatamente submetido a
depuração, designado lote não exposto e, o outro foi exposto 12 horas à temperatura ambiente (média dos 11
ensaios: 23,5ºC) antes da depuração. Ambos os lotes foram analisados para pesquisa de coliformes fecais em 100 g
(CF100), no momento da admissão à depuradora. Com os resultados de contaminação dos sublotes não expostos e
expostos estimou-se o tempo de geração, definido como o tempo necessário para uma duplicação da contaminação
(CF100) nas condições de temperatura ambiente existentes.
O valor máximo para os não expostos foi 16.000 CF100 e para os expostos 12 horas, 24.000 CF100. O percentil 75
para os lotes não expostos foi de 7.450 e para os expostos 10.100 CF100. Calculou-se que, o tempo de geração dos
CF presentes nas amostras, à temperatura ambiente seria superior ou igual a 4,26 horas em 90% dos lotes. Com base
neste tempo de geração, estimou-se que não devem mediar mais do que 8 horas e 30 minutos de exposição à
temperatura ambiente entre a captura e o início da depuração. Acima deste tempo o valor da contaminação
aproxima-se bastante daquele que interdita a captura e, às 12h45m, excede-o.
Neste estudo de natureza observacional, as limitações são de tal natureza que a extrapolação dos resultados deve ser
feita com reserva e cautela. Os autores entendem, no entanto, ser de utilidade reproduzir os resultados obtidos
porque clarificam a necessidade de haver instruções oficiais com limites críticos de tempo e temperatura para o
circuito de apanha, tratamento, distribuição e comercialização de bivalves vivos, baseadas em estudos
experimentais, se necessário.
Agradecimentos: Dr. Sobral (CRIPC)
[Mussel (Mytilus spp.) exposition to environment temperature before depuration]
In this work, we pretend to evaluate the effect of environment temperature, above mussels initial contamination
(Mytilus spp.) harvested at Ria de Aveiro, simulating refrigeration absence conditions that occurs during time
between capture and depuration. It is a question of foodstuffs with abusive potential handling during distribution,
easily perishable, without thermal processing, making control of correlated variable time and temperature critical for
safeguard food.
We pretend to determine not controlled room temperature impact, above contamination level of different mussels
batches harvested at C zone (Canal de Ílhavo), quantifying that effect by generation time estimate.
They were made assays with 11 mussels batches, repeating the forward protocol: formed, in which assay, 2 subbatches with careful homogenization. One batch was immediately submitted to depuration, designated not exposed
batch and, another exposed 12 hours to environment temperature (11 assays mean: 23,5ºC) before depuration. Both
batches had been analysed for faecal coliforms/100 g (FC100), in the admission moment to centre depuration. With
contamination results of sub-batches not exposed and exposed estimate generation time, defined has the necessary
time for contamination doubling (CF100) at room temperature conditions existent.
The maximum value for not exposed was of 16000 FC100 and for the exposed 12 hours, 24000 FC100. The 75th
percentile for the not exposed was of 7450 and for the exposed 10100 FC100. Estimate that, generation time of the
FC present in the samples, to the environment temperature will be superior or equal a 4,26 hours in 90% of the
batches. Considering the estimated generation time, it was extrapolate that shouldn’t surpass 8 hours and 30 minutes
of exposition at room temperature between harvest and depuration beginning. Over this time, contamination value
approaches the one that prohibits the capture and in 12 hours and 45 minutes, exceeds it.
In this observational study, limitations are of such a nature that results extrapolation must be done with restriction
and careful. However, the authors believe in the usefulness of reproduce obtained results, because clarify the
requisite of be real an official instruction with time and temperature critical limits for the capture, treatment,
distribution and commercialization circuit of alive mollusc shellfish, based in experimental studies, if necessary.
Thanks to Dr. Sobral
229
Poster 83
Viabilidade de mexilhões após depuração num tanque experimental
1 Serviço de Inspecção Sanitária Lota da Figueira da Foz
A defesa da saúde pública é primordial na cadeia de produção e comercialização de moluscos bivalves vivos para o
consumo humano. De acordo com o Decreto-Lei nº 293/98, de 18 de Setembro, se são capturados em zonas com o
estatuto sanitário B ou C e se os agentes económicos optarem pela comercialização de moluscos bivalves vivos, o
seu destino deve ser a transposição ou a depuração e posterior entrega num centro expedidor. No momento da
compra devem encontrar-se vivos. Entre produtores e intermediários verifica-se por vezes, resistência à realização
da depuração, alegando elevada mortalidade durante este processo. No entanto, se o sistema de depuração estiver
bem concebido e as operações no tanque respeitarem as principais exigências fisiológicas, o número de animais
mortos deverá ser desprezível.
Levou-se a cabo um estudo experimental com mexilhões (Mytilus spp.), para avaliar o efeito sobre a sua viabilidade,
do processo de depuração e também o efeito da temperatura de conservação após depuração, simulando dois
cenários de conservação distintos. Utilizou-se uma depuradora experimental da firma Fernando Ribeiro, Lda. e
trabalhou-se em condições controladas de depuração (temperatura média da água: 18,9ºC; pH médio: 7,6; salinidade
média: 30‰; percentagem de saturação média: 81,6). Depuraram-se 11 lotes de mexilhões durante 60 horas e
inspeccionaram-se de 12 em 12 horas para retirar e registar o número dos animais mortos. Após a depuração, cada
lote foi dividido em 2 sublotes e manteve-se um à temperatura ambiente (em média 17,7ºC) e outro a temperatura de
refrigeração (em média 5,4ºC). Efectuou-se o registo diário dos animais mortos até todos os mexilhões terem
morrido.
Constatou-se que apenas 19 dos 8196 mexilhões morreram no processo de depuração, o que representa uma
mortalidade de 2,3‰. Quanto à viabilidade após depuração, o cálculo da curva de sobrevivência permitiu verificar
que 50% dos mexilhões acondicionados à temperatura ambiente morreram entre o 7º e o 8º dia ao passo que, para os
acondicionados à temperatura de refrigeração, 50% mantiveram-se vivos depois do 15º dia.
O estudo permitiu concluir que a depuração não afecta a viabilidade dos bivalves e que a conservação a
temperaturas de refrigeração duplica a probabilidade de sobrevivência, aumentando a sua viabilidade e o tempo de
comercialização. Os autores consideram que é fundamental a divulgação aos agentes económicos envolvidos na
apanha e distribuição destes produtos das vantagens da depuração e da conservação da cadeia de frio, aduzindo
argumentos

Livro de Resumos - Faculdade de Medicina Veterinária

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