ROTA-ADENOVIRUS TIRA CASSETE LATEX Cód: 9017

ROTA-ADENOVIRUS TIRA CASSETE LATEX
MÉTODO
Teste imunocromatográfico.
FINALIDADE
O Rota-Adenovírus Tira Cassete Látex é um teste rápido, simples e altamente sensível
para a detecção simultânea e diferenciada do Rotavírus e Adenovírus em amostras de
fezes humanas.
Somente para o diagnóstico de uso in vitro.
Exclusivamente para uso profissional.
FUNDAMENTO
O Rota-Adenovírus Tira Cassete Látex é um teste rápido e simples para detectar a
presença de Rotavírus e/ou Adenovírus em amostras de fezes humanas.
Na superfície da membrana de nitrocelulose que constitui o teste existem três áreas
reagentes: a Linha Controle “C” de coloração VERDE, a Linha Teste “T” de coloração
ROSA/VERMELHA correspondente a detecção do rotavírus e outra Linha Teste “T” de
coloração AZUL correspondente a detecção do adenovírus. Estas linhas não são visíveis
na janela de resultados antes da aplicação da amostra. A Linha Controle “C” serve como
controle interno do procedimento. Esta linha deve sempre aparecer indicando assim que o
procedimento foi realizado corretamente e que os reagentes estão funcionando de
maneira adequada. As Linhas Testes “T” somente serão visíveis quando houver na
amostra testada a presença do Rotavírus e/ou Adenovírus.
O dispositivo de teste contém uma membrana ou fita marcada com antígenos anti-RotaAdenovírus. O Rota-Adenovírus quando presente na amostra liga-se ao conjugado de
ouro coloidal que constitui o teste e move-se ao longo da membrana cromatográfica até a
região da Linha Teste “T”, originando uma linha visível.
SIGNIFICADO CLÍNICO
O Rotavírus é um vírus da família Reoviridae que causa diarréia grave freqüentemente
acompanhada de febre e vômitos. É hoje considerado um dos mais importantes agentes
causadores de gastroenterites e de óbitos em crianças menores de cinco anos em todo
mundo.
A maioria das crianças se infecta nos primeiros anos de vida, porém os casos mais graves
ocorrem principalmente em crianças até os dois anos de idade. A doença também pode
ser observada em adultos. A gastroenterite rotaviral pode resultar em mortalidade para
populações de risco como crianças, idosos e pacientes imunocomprometidos.
Crianças prematuras, de baixo nível sócio-econômico ou com deficiência imunológica
estão sujeitas à manifestação da doença de maior gravidade. Em adultos infectados a
doença tende a ser bastante moderada. Os Rotavírus são também responsáveis por
ocasionar surtos em escolas (pré-escolas), berçários, creches e hospitais.
A diarréia por Rotavírus apresenta curto período de incubação (24 a 48 horas) com início
abrupto, vômitos em mais de 50% dos casos, febre alta e diarréia profusa, podendo
evoluir com desidratação.
A detecção do Rotavírus nas fezes permite diagnóstico etiológico precoce e o isolamento
do paciente devido à alta incidência de infecções nosocomiais nas crianças da mesma
enfermaria.
Os Adenovírus entéricos (AEn) sorotipos 40 e 41, têm sido relatados como o segundo
enteropatogêneo viral mais comumente detectados em crianças. A gastroenterite causada
por AEn apresenta uma evolução prolongada, com duração de 5-12 dias, compreendendo
diarréia, vômito e desidratação.
O Rotavírus é eliminado em grande quantidade pelas fezes do doente, sendo a
transmissão pela via fecal-oral ou provavelmente por secreções respiratórias (contato com
secreções de pessoas infectadas). A água e os alimentos contaminados também podem
ser fontes de transmissão do Rotavírus.
A vacina que previne a doença diarréica causada faz parte do Calendário Nacional de
Vacinação e é oferecida para as crianças menores de seis meses de idade.
Teste simples
Detecção precisa
Interpretação fácil
Resultados instantâneos
Cód: 9017
O kit é estável, quando conservado nas condições recomendadas, até a data de validade
impressa na embalagem e no rótulo do produto.
O fabricante garante a qualidade do produto, enquanto este for conservado nas condições
estabelecidas e na sua embalagem original.
Não congelar o kit, pois pode ocasionar mau funcionamento.
O tampão diluente pode formar um precipitado branco leitoso quando armazenado em
baixas temperaturas. Para dissolver o precipitado, aquecê-lo entre as mãos.
MATERIAIS NECESSÁRIOS E NÃO FORNECIDOS
Recipiente para coleta da amostra biológica
Tubo de ensaio
Micropipeta
Cronômetro
COLETA DA AMOSTRA BIOLÓGICA
Seguir os procedimentos padrões clínicos para a coleta de amostra de fezes.
Somente amostras de fezes humanas podem ser utilizadas neste ensaio.
1) Utilizar um recipiente limpo, seco, de boca larga e que contenha tampa.
2) Colher fezes tomando cuidado para não contaminar a amostra com a urina ou com a
água do vaso sanitário. Usando uma pazinha, colher uma porção de fezes suficiente para
preencher pelo menos a metade do recipiente. Caso observe presença de muco ou
sangue, colha também uma porção neste local das fezes, estes achados são muito
importantes para a análise.
3) Tampar bem o frasco e identificar com seu nome completo.
As amostras que não forem testadas imediatamente poderão ser armazenadas por até 3
dias sob uma temperatura entre 2 e 8°C ou por até 6 meses sob uma temperatura de 20°C. Amostras refrigeradas ou congeladas devem ser trazidas a temperatura ambiente.
Recomenda-se deixar sob temperatura ambiente por cerca de 20 a 30 minutos antes da
execução do ensaio.
PROCEDIMENTO
Ler o procedimento por inteiro e cuidadosamente antes de iniciar o teste. Manter a
amostra à temperatura ambiente, entre 15 e 30°C antes do teste.
Tira reagente
1) Em um tubo de ensaio limpo e seco, adicionar 1,5mL (ou 30 gotas) do tampão de
extração (tampão diluente).
2) Utilizando uma pazinha plástica ou um swab, adicionar ao tubo aproximadamente 3050mg de amostra e diluí-la no tampão. Se utilizar um swab submergir a base de algodão
completamente dentro do tampão e pressionar a haste contra a parede do tubo. Caso as
fezes estejam líquidas, colher 100µL de amostra com o auxílio de uma micropipeta.
3) Realizar agitação vigorosa manual ou em Vórtex por 15 segundos.
4) Aguardar decantação (3 minutos) ou centrifugar por 1 minutos a 700rpm.
5) Com auxílio de uma micropipeta transferir 500µL do sobrenadante para outro tubo de
ensaio.
6) Remover a tira reagente da embalagem de alumínio e introduzi-la dentro do tubo de
ensaio, com a precaução de que o nível do líquido não supere a linha indicada pelas
setas. Aguardar.
6) Interpretar o resultado do teste entre 5 e 10 minutos. Não interpretar o resultado do
teste após 10 minutos.
PROPRIEDADES
IDENTIFICAÇÃO E CONSERVAÇÃO
Tira reagente e/ou dispositivo cassete selados em embalagem de alumínio com
dessecante. O teste é sensível a umidade e ao calor. Conservar sob temperatura entre 15
e 30°C. Não se recomenda armazenar em refrigerador.
A data de validade encontra-se impressa na embalagem e no rótulo do produto.
CUIDADOS ESPECIAIS
Somente para o diagnóstico de uso in vitro.
Não fumar, comer ou beber nas áreas onde as amostras são manuseadas.
Utilizar luvas descartáveis quando manusear as amostras e lavar as mãos após o teste.
Evitar respingos ou a formação de aerossol.
Todos os derramamentos devem ser completamente limpos com hipoclorito de sódio 10%,
álcool 70% ou um desinfetante iodofórmio.
Descartar todas as amostras e materiais utilizados como se possuíssem agentes
infecciosos. Os métodos de eliminação e esterilização preferenciais são incineração e
autoclavagem por 60 minutos a 121ºC.
Não misturar amostras diferentes.
PRECAUÇÕES
Para obter resultados seguros seguir atentamente as instruções de uso.
Quando utilizar amostras resfriadas ou congeladas, deixar que estas atinjam a
temperatura ambiente antes de iniciar o procedimento, pois amostras em temperatura
baixa podem reduzir a funcionalidade do teste. Recomenda-se deixar sob temperatura
ambiente por cerca de 20 a 30 minutos antes da execução do ensaio.
Realizar o teste imediatamente após a retirá-lo da embalagem de alumínio.
Não usar o kit após a data de validade impressa na embalagem e no rótulo do produto.
Não utilizar o teste caso a embalagem esteja danificada.
Não reutilizar o teste.
ESTABILIDADE
O Rota-Adenovírus Tira Cassete Látex deve ser conservado entre 15 e 30°C.
Dispositivo cassete
1) Abrir a tampa do frasco do diluente e introduzir o bastão na amostra de fezes de modo
que fique bem coberto e impregnado de material fecal (aproximadamente 30-50mg de
amostra). Caso as fezes estejam líquidas, colher 100µL de amostra com o auxílio de uma
micropipeta.
2) Tampar o frasco e proceder uma vigorosa agitação para misturar as fezes e assegurar
uma boa dissolução da amostra.
3) Remover o dispositivo cassete da embalagem de alumínio e colocá-lo em uma
superfície lisa, seca e plana.
4) Quebrar o bico da tampa do frasco do tampão extrator para utilizá-lo como frascogotejador.
5) Adicionar 4 gotas da solução à cavidade do dispositivo cassete. Não adicionar
partículas sólidas. Aguardar.
6) Interpretar o resultado do teste entre 5 e 10 minutos. Não interpretar o resultado do
teste após 10 minutos.
DESEMPENHO DO TESTE
Ensaio 1
Para o desempenho do teste foi analisado como referência a metodologia ELISA, com
aprovação do CE. A avaliação foi realizada comparando o Rota-Adenovírus Bioeasy
versus ELISA para detecção de antígenos de rotavírus e Rota-Adenovírus Bioeasy versus
ELISA para detecção de antígeno de adenovírus.
Os resultados foram:
ROTAVÍRUS
INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS
NÃO REAGENTE: Quando aparecer somente uma linha de coloração VERDE na janela
de resultados, a Linha Controle “C” como indicada na ilustração. Esta linha deve aparecer
em todos os testes.
Rota-Adenovírus tira cassete látex Bioeasy
+
ELISA
+
12
0
2
88
Porcentagem de concordância; 100% [(12+88)/102] = 98,04%.
Sensibilidade de concordância estimada: 100% [12/ (12+2)] = 85,71%.
Especificidade de concordância estimada: 100% [88/(0+88)] = >99,9%.
ADENOVÍRUS
REAGENTE PARA ROTAVÍRUS: Quando aparecer duas linhas coloridas na janela de
resultados, a Linha Controle “C” de coloração VERDE e a Linha Teste “T” de coloração
ROSA/VERMELHA respectivamente como indicadas na ilustração.
Rota-Adenovírus tira cassete látex Bioeasy
+
ELISA
+
6
0
0
96
Porcentagem de concordância: 100%[(6+96)/102] = >99,9%.
Sensibilidade de concordância estimada: 100%[6 / (6+0)] = >99,9%.
Especificidade de concordância estimada: 100%[96 / (0+96)] = >99,9%.
Ensaio 2
Uma segunda análise foi realizada pela metodologia ELISA com aprovação japonesa,
para detecção de cada um dos antígenos como no caso anterior, para enriquecer os
resultados obtidos.
Os resultados foram:
ROTAVÍRUS
REAGENTE PARA ADENOVÍRUS: Quando aparecer duas linhas coloridas na janela de
resultados, a Linha Controle “C” de coloração VERDE e a Linha Teste “T” de coloração
AZUL respectivamente como indicadas na ilustração.
Rota-Adenovírus tira cassete látex Bioeasy
+
ELISA
+
80
01
26
307
Porcentagem de concordância: 100%[(80+307)/414] = 93,5%.
Sensibilidade de concordância estimada: 100%[80 / (80+1)] = 98,8%.
Especificidade de concordância estimada: 100%[307 / (333)] = 92,2%
ADENOVÍRUS
REAGENTE PARA ROTA-ADENOVÍRUS: Quando aparecer três linhas coloridas na
janela de resultados, a linha Controle “C” de coloração VERDE, a linha Teste “T” de
coloração ROSA/VERMELHA correspondente a detecção do Rotavírus, e a outra linha
Teste “T” de coloração AZUL, correspondente a detecção do Adenovírus, respectivamente
como indicadas na ilustração.
Rota-Adenovírus tira cassete látex Bioeasy
+
+
40
01
13
360
Porcentagem de concordância: 100%[(40+360)/414] = 96,6%.
Sesibilidade de concordância estimada: 100%[40 / (40+1)] = 97,6%.
Especificidade de concordância estimada: 100%[360 / (360+13)]= 96,5%
ELISA
APRESENTAÇÃO DO KIT
1) Tira teste e/ou dispositivo cassete – 1 x 1
2) Tampão diluente – 1 x 30mL
3) Instruções de uso – 1
Nº. de testes: 1, 5, 20, 25, 50 e 25.000 respectivamente.
NOTA: A intensidade da cor das Linhas Controle “C” e Teste “T” podem ser diferentes, ou
seja, a Linha Controle “C” poderá ser mais forte que a Linha Teste “T” ou vice-versa.
Considerar o resultado REAGENTE em qualquer situação.
INVÁLIDO: Quando nenhuma linha aparecer ou quando a Linha Controle “C” não
aparecer na janela de resultados dentro de 15 a 10 minutos. O teste deve ser considerado
INVÁLIDO. Repetir o teste com um novo dispositivo e com uma nova amostra.
LIMITAÇÕES
1) A maioria dos resultados INVÁLIDOS ocorrem devido ao volume insuficiente de
amostra e/ou falhas durante a execução das técnicas de procedimento. Repita o teste
utilizando uma nova amostra e um novo dispositivo de teste.
2) Um resultado NÃO REAGENTE pode ocorrer se a quantidade de Rota-Adenovírus
presente na amostra estiver abaixo do limite de detecção do ensaio ou os antígenos que
são detectados não estiverem presentes durante o estágio da doença em que a amostra
for coletada.
3) Um resultado de teste NÃO REAGENTE não exclui a possibilidade de uma infecção por
Rota-Adenovírus.
4) A presença do Rota-Adenovírus deverá significar REAGENTE para infecção. Como em
todos os testes de diagnósticos, os resultados devem ser considerados juntamente com
outras informações clínicas disponíveis.
LIMITE DE DETECÇÃO
Após realização de análises em diferentes lotes e condições, estabeleceu-se a
sensibilidade típica de 31ng/ml para rotavírus e 31ng/ml para adenovírus, visto que o teste
também foi capaz de detectar quantidades de 8ng/ml para rotavírus e 4ng/ml para o
adenovírus em 10 minutos.
.
SERVIÇO DE ATENDIMENTO AO CLIENTE
Para esclarecimentos de dúvidas do cliente quanto ao produto:
Telefax: + 55 (31) 3048-0008
E-mail: [email protected]
Data de fabricação, data de validade, nº. do lote, vide rótulo do produto.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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Results of a Prospective study. New England Journal of Medicine 301, 303-306 (1979).
PRODUZIDO PARA
Bioeasy Diagnóstica Ltda. Avenida Barão Homem de Melo, 567, 1° andar, bairro Nova
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Nº. 10374660062.
TERMO DE GARANTIA
A Bioeasy Diagnóstica Ltda se responsabiliza por este kit de diagnóstico, desde que o
mesmo esteja com sua integridade física inabalada e dentro do prazo de validade, seguido
de comprovação pela assessoria técnica de que não houve falhas na execução, manuseio
ou conservação deste produto. A Bioeasy Diagnóstica Ltda e seus distribuidores não se
responsabilizam por falhas no desempenho do kit sob essas condições.
Revisado em 20/01/2010