validação de metodologia espectrofotométrica para a determinação

VALIDAÇÃO
DE
METODOLOGIA
DETERMINAÇÃO DE FRUTOSE
ESPECTROFOTOMÉTRICA
PARA
A
Romana Migliavaca Grando (PIBIC/CNPq-EM), Melissa Demoliner, Alana Peres de
Oliveira, Sabrina Carra, Mauricio Moura da Silveira, Eloane Malvessi (Orientador(a))
A validação tem como objetivo demonstrar que o método é apropriado para a finalidade pretendida.
Dessa forma, os parâmetros considerados no processo de validação são especificidade, linearidade,
precisão, exatidão, limite de detecção e quantificação. No estudo em questão, foi investigado o método
de Seliwanoff, usado na identificação de cetoses. As cetoses (frutose) em contato com ácidos
concentrados são transformadas em derivados de furfural que, por sua vez, se condensa com o
resorcinol, contido no reagente de Seliwanoff, formando um composto de cor. Nesse contexto, o objetivo
do trabalho foi desenvolver e validar uma metodologia de determinação de frutose. Para o preparo do
reagente de Seliwanoff, 0,05% (m/v) de resorcinol foi diluído em HCl 4,0 mol/L. Para a realização da
análise, a 0,2 mL de amostra foi adicionado 1,8 mL de reagente de Seliwanoff e a mistura foi mantida em
banho a 100°C por 15 minutos, sendo, posteriormente, mantida em banho de gelo por 2 minutos. Ao final
desta etapa, foi adicionada à reação 3mL de água destilada. A absorbância das amostras foi lida em
espectrofotômetro, a 486nm. A validação foi realizada conforme descrito pela ANVISA (RE n°899/2003).
Para esse fim, foram realizados os testes de linearidade, com 10 concentrações diferentes (0,1 a 1g/L),
calculado o limite de quantificação (LQ), limite de detecção (LD), exatidão e precisão (intra e inter dia). A
precisão intra dia foi determinada através de nove análises da amostra em concentração de 0,5g/L,
enquanto que a inter dia, foi realizada em 0,5, 0,8 e 1g/L do analito, em três dias diferentes. A exatidão
do método foi determinada a partir das medidas de nove repetições da mesma concentração de analito, a
especificidade por determinação de uma amostra 0,5 g/L de glicose e 0,5 g/L de frutose. Com relação à
linearidade, coeficiente de correlação de 0,99 foi obtido. Na precisão intra dia e inter dia, os desvios
padrões relativos (DPR) obtidos foram 3,64 e inferior a 5%, respectivamente. Exatidão de 97% foi obtida
em relação ao valor verdadeiro (0,5g/L). O LD e LQ foi de 0,04 e 0,14g/L, respectivamente. Para
especificidade, 96% foi determinado pela comparação com os resultados da amostra padrão. Nestas
condições, a método espectrofotométrico de determinação de frutose com o reagente de Seliwanoff
demonstrou ser uma metodologia precisa, seletiva, exata, linear e adequada para análises, assegurando
a confiabilidade dos resultados conforme descrito pela ANVISA.
Palavras-chave: cetoses, reagente de Seliwanoff, validação de método
Apoio: UCS, CNPq