Aula 5 reagentes não marcados Reações de precipitação e

1- REAGENTES NÃO
MARCADOS
2- REAÇÕES DE
PRECIPITAÇÃO E
AGLUTINAÇÃO
Prof. Dr. Fernando Ananias
Interação reversível
Complementariedade
Especificidade
Ligações:
•Pontes de Hidrogênio
• Ligações iônicas
• Interações hidrofóbicas
• Interações de Van der Waals
1
Afinidade
Força de interação entre um único sítio de ligação Ag-Ac
(em um único epítopo).
Avidez
Força de interações total entre Ac e Ag.
Soma das afinidades de todos epítopos envolvidos
Reação cruzada
Dois Ag diferentes apresentam um epítopo idêntico
Ac específicos para um epítopo se ligam a um epítopo não
relacionado, mas com propriedades químicas similares.
Aplicações
Pesquisa
Diagnóstico
Soroepidemiológia
Métodos:
Precipitação
Aglutinação
Imunoensaios
2
Metodologias que utilizam:
1) Reagentes não marcados
• Reação de precipitação
• Reação de aglutinação
2)
Reagentes marcados
• RIA
• ELISA
• Imunofluorescência
• Western Blot
Reagentes não
marcados
Detectam / quantificam as conseqüências da ligação Ag – Ac
3
Reação de Precipitação
Interação: ac - ag solúvel forma uma
rede que pode desenvolver um
precipitado visível.
Anticorpos bivalentes
+
Antígenos multivalentes
PRECIPITADO
1- Reação de precipitação em soluções
Reação quantitativa:
•Qtidade cte Ac
•Qtidade cresc. Ag
Qtidade precipitina
4
2 - Reação de Precipitação em gel
Utiliza uma matriz de ágar
Ag + Ac = linha de precipitação visível
a) Imunodifusão radial
(Método de Mancini)
• Ag ou Ac fixos
• Dosagem de proteínas séricas
b) Imunodifusão dupla
• Identidade de Ags = Ac de
reatividade conhecida
Reações de Aglutinação
Ac + Ag particulado
aglutininas
Agregação visível de partículas
Eritrócitos
Bactérias
Fungos
látex
• Efeito pró-zona
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Aglutinação Direta
Células ou partículas insolúveis + Ac = Aglutinação
• Detecção Acs específicos
• Quantificação
Tipagem ABO
Testes confirmatórios para sífilis
Aglutinação bacteriana
Presença de infecção
Diferenciação de espécies
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Aglutinação passiva
Ag solúveis associados a outras superfícies
(Partículas de látex ou superfície de hemácias)
+
Inibição da Aglutinação
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