Insert-65000 VITAMINA C

Fabricado por: Chromsystems Instruments &
Chemicals GmbH
Importado e distribuído por: BioSys Ltda
Rua Coronel Gomes Machado, 358, Centro, Niterói-RJ
CEP: 24020-112
CNPJ: 02.220.795/0001-79
MS – nº 10350840140
SAC: (21) 3907-2534 – [email protected]
www.biosys.com.br
VITAMINA C EM SORO/PLASMA POR HPLC
VITAMIN C IN PLASMA/SERUM HPLC
Reagente diagnóstico para determinação quantitativa in vitro de Vitamina C em Soro/Plasma por HPLC.
Somente para uso diagnóstico in vitro.
Nº de lote, data de fabricação e validade: vide rótulos dos frascos e da embalagem.
Artigo
65000
Apresentação
Kit Reagente para Análise de Vitamina C em Soro/Plasma (100 análises)
Para informações detalhadas sobre o método e procedimentos, favor consultar o Manual de Instruções para Análise de Vitamina C em
soro/plasma por HPLC no site www.biosys.com.br.
SUMÁRIO
CUIDADOS E PRECAUÇÕES
O Kit Chromsystems para análise de Vitamina C é uma ferramenta poderosa na
área de monitoração do estresse oxidativo, assim como integra a família de
Kits para análise de vitaminas. A análise é realizada em amostras de soro ou
plasma, empregando um sistema isocrático de HPLC com detector UV. O
preparo da amostra é baseado em uma simples e eficiente etapa de
precipitação, que garante a reprodutibilidade e confiabilidade dos resultados. O
método permite a análise de grandes lotes de amostras sem o risco de
degradação da Vitamina C.
Favor consultar a ficha de segurança dos reagentes e adotar as precauções
necessárias para o manuseio de reagentes de laboratório.
GARANTIA
Estas instruções de uso devem ser lidas atentamente antes da utilização do
produto. As instruções nela contidas devem ser rigorosamente cumpridas. A
confiabilidade dos resultados do ensaio não poderá ser garantida em caso de
desvio às instruções.
MÉTODO
Cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) com detecção UV.
DESCARTE
PRINCÍPIO
A fase móvel, o padrão interno, o reagente de precipitação e os resíduos de
preparação das amostras contêm ácidos e devem ser descartados como resíduos
químicos livres de solventes, de acordo com as diretrizes e regulamentos locais
em vigor.
Os interferentes presentes na amostra são eliminados por precipitação, com
adição de reagente específico e uma etapa de centrifugação. A adição deste
reagente também promove o aumento da estabilidade da Vitamina C em
solução. Após a injeção no sistema de HPLC, a detecção UV permite a leitura
de absorbância da Vitamina C em comprimento de onda selecionado (245 nm).
PREPARAÇÃO DOS REAGENTES
Fase Móvel: pronto para uso.
Padrão Interno: pronto para uso.
REAGENTES
Componentes e Composições:
Produto
Composição
Solução de EDTA, carbonato de
Fase móvel
(Mobile Phase)
potássio dihidrogênio e Ácido
fosfórico
Padrão Interno
Solução aquosa contendo
(Internal Standard)
EDTA (75 nmol/L) e Bissulfito
de sódio (50 mmol/L)
Reagente de
Solução de ácido fosfórico
Precipitação (liof.)
contendo fosfato monoácido de
(Precipitation Reagent)
sódio
Frascos de reação
(âmbar)
Reagente de Precipitação (liofilizado):
Reconstituir o Reagente de Precipitação (art. 65005) com 1,5mL do Padrão
Interno (art. 65004), agitar vigorosamente, inclusive por inversão, por cerca de
20 minutos, até a completa dissolução. O reagente reconstituído é estável por
até 1 semana sob refrigeração (2 e 8°C).
Apresentação
1 x 1000 mL
1 x 12 mL
Padrão de Calibração em Plasma (liofilizado):
O calibrador de Vitamina C em plasma (art. 65003) é rastreável a substância de
referência adquirida de fornecedor certificado. Após reconstituição, é
submetido ao mesmo processo de preparo das amostras de pacientes. Para
reconstituir o calibrador, pipetar exatamente 0,5 mL de água tipo I no
frasco. Deixar repousar em temperatura ambiente por cerca de 5-10 minutos,
para permitir a completa reconstituição. Agitar ocasional e gentilmente até que
o conteúdo esteja homogêneo e evitar a exposição direta à luz. O calibrador
reconstituído é estável por 4 dias se protegido da luz e mantido refrigerado, em
temperatura entre 2 e 8°C. Para períodos maiores de armazenamento (máximo
de 4 semanas), conservar fracionado a -20°C . A concentração atual depende
do lote e será encontrada no folheto de informações que acompanha o produto.
8 x 1,5 mL
100 unidades
(Reaction vials)
INSTRUÇÕES
REAGENTES
DE
ARMAZENAGEM
E
ESTABILIDADE
DOS
Os reagentes não abertos são estáveis até a data de validade indicada no rótulo,
desde que as condições de armazenamento estabelecidas sejam obedecidas. A
tabela abaixo mostra a temperatura de armazenagem para os reagentes do kit e
para outros reagentes Chromsystems disponíveis separadamente:
Artigo
Produto
Temperatura
65001
Fase móvel
2 – 30°C
65003
Padrão de Calibração de Vitamina C em
< - 18°C
Plasma (liofiliz.)
65004
Padrão Interno
2 – 8 °C
65005
Reagente de Precipitação (liofilizado)
2 – 30 °C
0074
Controle de Vitamina C em Plasma, Bi< - 18°C
Nível (I+II)
Controles em Plasma (liofilizado):
Os controles de Vitamina C em plasma (artigos 0074) são submetidos a todo o
processo de preparo das amostras. Os controles são incluídos em cada série
analítica, para monitorar a exatidão e a precisão do sistema. Para reconstituir
o controle liofilizado, pipetar exatamente 0,5 mL de água tipo I no frasco.
Deixar repousar em temperatura ambiente por cerca de 5-10 minutos, para
permitir a completa reconstituição. Agitar ocasional e gentilmente até que o
conteúdo esteja homogêneo e evitar a exposição direta à luz. O controle
reconstituído é estável por 4 dias se protegido da luz e mantido refrigerado, em
temperatura entre 2 e 8°C. Para períodos maiores de armazenamento (máximo
de 4 semanas), conservar a – 20°C. A faixa de concentração depende do lote e
será encontrada no folheto de informações que acompanha os controles.
IM 65000 VITC E Dec 2003 R1.2 / BS Rev 01 jul2012
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MATERIAIS REQUERIDOS, MAS NÃO FORNECIDOS
CALIBRADORES E CONTROLES
Coluna cromatográfica equilibrada (Chromsystems art. 65100).
Padrão de Calibração de Vitamina C em Plasma liofilizado (Chromsystems art.
65003).
Controle de Vitamina C em Plasma Bi-Nível (I+II) (Chromsystems art. 0074).
Água tipo I ou grau HPLC.
Centrífuga para microtubos.
Material geral de laboratório.
A Chromsystems disponibiliza os seguintes produtos:
Artigo Produto
65003
Padrão de Calibração de Vitamina C em
Plasma (liofiliz.)
0074
Controle de Vitamina C em Plasma, BiNível (I+II)
Apresentação
5 x 0,5mL
2 x 5 x 0,5mL
DESEMPENHO / CARACTERÍSTICAS
AMOSTRA
Deverão ser analisadas amostras de soro ou plasma. A coleta das amostras dos
pacientes deve ser feita com heparina. Outros sistemas de coleta, como EDTA,
causam perda de estabilidade da Vitamina C.
Estabilidade da amostra: as amostras de plasma coletadas são estáveis por 5
dias se mantidas congeladas a –20°C. Em temperatura ambiente, a estabilidade
é de apenas 2 horas. Para minimizar a oxidação da Vitamina C, a amostra de
sangue deve ser centrifugada imediatamente após a coleta e o plasma
transportado congelado a –20°C. Caso o sangue total seja transportado,
conservar a +4°C (não congelar).
Estabilidade das amostras preparadas: as amostras preparadas são estáveis
por até 12 horas em temperatura ambiente, protegidas da luz. Quando
conservadas a – 20°C, são estáveis por até 3 semanas.
PROCEDIMENTOS DO TESTE
Ajustes do instrumento:
Amostrador:
Detector UV:
Fluxo:
Temperatura da coluna:
Volume de injeção de 20µL, tempo de
corrida cromatográfica de 5 min.
Comprimento de onda de 245 nm
1,0 a 1,5 mL/min
Ambiente (aprox. 25 ºC)
Procedimento de preparo de amostras:
Utilizar os frascos de reação que acompanham o kit, para que as amostras
sejam protegidas da exposição da luz ambiente.
1. Misturar 100 μl de soro/plasma (padrões, controles e amostras) e 100μl de
reagente de precipitação reconstituído.
2. Agitar por 10 segundos (vortex).
3. Incubar por 10 minutos a +4°C.
4. Centrifugar por 5 min a 13000 rpm.
5. Injetar 20μl do sobrenadante no sistema de HPLC.
Tempo de retenção esperado:
Analito
Vitamina C
Padrão Interno
Ácido Úrico
Faixa de Medição:
O método é linear do limite de quantificação, que equivale a 0,5 mg/L, até a
concentração limite de 100 mg/L de Vitamina C.
Recuperação:
A taxa de recuperação para a Vitamina C é de 95%, enquanto do padrão
interno é de 98%.
Precisão:
A determinação da precisão intra-ensaio foi realizada a partir da média de
múltiplas amostras, analisadas em três diferentes concentrações. A precisão
inter-ensaio foi analisada em duas concentrações diferentes.
Precisão intra-ensaio
n = 10
Vitamina C
Precisão inter-ensaio
n = 20
Vitamina C
VALORES DE REFERÊNCIA
Analito
Concentração (mg/L)
Concentração (µmol/L)
Vitamina C
4,6 – 14,9
26,1 – 84,6
Fonte: W. LEE (1997), Clin Chemistry 43, 154-157.
Cada laboratório deve estabelecer seus próprios valores de referência para
adaptar o método às características de sua população analisada.
LITERATURA
1.
2.
Tempo de retenção aprox. em minutos
2,0
2,6
4,0
CÁLCULOS
Coeficiente de variação (%) /
Concentração (mg/L)
2,3 / 5,0
1,7 / 10,0
2,1 / 16,0
Coeficiente de variação (%) /
Concentração (mg/L)
4,2 / 6,5
3,1 / 21,5
3.
4.
W. Lee, S. M. Roberts, R. F. Labbe, Clinical Chemistry 43, 154-157,
1997.
H. Greiling, A. M. Gressner, Lehrbuch der klinischen Chemie und
Pathobiochemie, 3. Auflage, 1995, Schattauer Verlagsgesellschaft mbH,
Stuttgart, ISBN 3-7945-1548-X.
P. Nuhn, Naturstoffchemie, 2. Auflage, 1990, Hirzel Wissenschaftliche
Verlagsgesellschaft, Stuttgart, ISBN 3-7776-0473-9.
H. K. Biesalski, J. Schrezenmeir, P. Weber, H. Weiß, Vitamine:
Physiologie, Pathophysiologie Therapie, 1997, Georg Thieme Verlag,
Stuttgart, ISBN 3-13-118401-9.
CAnalito [mg/L] = ____AAmostra x ISCalibrador x *CCalibrador
ACalibrador x ISAmostra
Área/altura do pico do analito A no cromatograma da amostra
= Aamostra
Área/altura do pico do analito A no cromatograma do calibrador
= ACalibrador
Área/altura do pico do padrão interno no cromatograma da amostra
= ISAmostra
Área/altura do pico do padrão interno no cromatograma do calibrador
= ISCalibrador
Concentração C do analito A no calibrador
= *CCalibrador
* A concentração do analito no calibrador depende do lote e será encontrada no
folheto de informações que acompanha o produto. Uma vez que a mesma
quantidade de padrão interno é adicionada ao padrão de calibração e às
amostras de pacientes, a concentração do padrão interno pode ser considerada
como “1” para fins de cálculo.
Fatores de conversão:
Analito
Vitamina C
mg/L para µmol/L
x 5,679
IM 65000 VITC E Dec 2003 R1.2 / BS Rev 01 jul2012
µmol/L para mg/L
x 0,176
Chromsystems Instruments & Chemicals GmbH
Am Haag 12
D-82166 Gräfelfing
Munique, Alemanha
Fone: +49 89 18930-0
Fax: +49 89 18930-199
www.chromsystems.de
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