Microbiologia para Cosméticos

GUIA DOS MÉTODOS DE
REFERÊNCIA
MICROBIOLOGIA PARA COSMÉTICOS
*Disponíveis no Brasil os meios desidratados.
“BIOKAR Diagnóstico coloca o seu conhecimento à sua disposição para fornecer
soluções simples e rápidas para atender suas necessidades.
Os laboratórios de microbiologia devem obedecer os critérios regulamentares que estão
em constante evolução, e é por isso que nós oferecemos este guia de métodos de
referência para ajudá-lo diariamente na aplicação das normas aos seus produtos
cosméticos.”
SUMÁRIO:
Microrganismos totais:
Leveduras e fungos
Contagem
NF EN ISO 16212 T75-608
Página 4-5
Bactérias aeróbicas Contagem e detecção NF EN ISO 21149 T75-602
Página 6-7
Identificação dos Microrganismos:
Candida albicans
Detecção
NF EN ISO 16212 T75-608
Página 4-5
Escherichia coli
Detecção
NF EN ISO 16212 T75-608
Página 4-5
Pseudomonas aeruginosa Detecção
NF EN ISO 16212 T75-608
Página 4-5
Staphylococcus aureus
NF EN ISO 16212 T75-608
Página 4-5
Detecção
ANEXOS:
Anexo A: Protocolo de preparação dos meios de referência.
Anexo B: Outras normas de microbiologia dos produtos cosméticos.
NF EN ISO 18415: 2011-08. Detecção de microrganismos específicos e não específicos.
NF EN ISO 11930: 2012-06. Avaliação da proteção antimicrobiana de um produto cosmético.
Anexo C: Lista de produtos.
Para maiores informações, entre em contato com a gente.
*Disponíveis no Brasil os meios desidratados.
NF EN ISO 16212
T75-608
(Agosto 2011)
Contagem de leveduras e fungos
Princípios: - Semeadura da amostra na superfície ou profundidade, ou filtração por
membrana e transferência para o meio de cultura (ágar).
- Incubação à 25,0 ± 2,5ºC por 3 à 5 dias. (1)
- Contagem do número de Unidades Formadoras de Colônias (UFC) e do
número de leveduras e fungos por mL ou por g de produto.
Meio de Cultura
Diluente
neutralizante
Meio com peptona de caseína,
lecitina de soja e polissorbato 20
(caldo SCDLP20)
Caldo Eugon LT 100
BK068HA – frasco 500g
BM00608 – 50 tubos 9 mL
Caldo Eugon LT100
BM17508 – 50 tubos 9 mL + contas
de vidro
BM04308 – 10 flaconetes 100 mL
Diluente lecitina polissorbato (LP)
Diluentes
Meio de
Cultura
-
Líquido A
Água Peptonada
BM16408 - 3 embalagens de 3L
Solução peptona tamponada
(pH 7)
Caldo peptona tamponado NaCl
pH 7
BK128HA – frasco 500g
Ágar Sabouraud Dextrose
Cloranfenicol (SDCA) (3)
Ágar Sabouraud Glicose com
Cloranfenicol
BK025HA – frasco 500g
BM17608 – 20 unidades Ø 90 mm
BM17708 – 120 unidades Ø 90 mm
BM17208 – 10 flaconetes 200 mL
Ágar Batata Dextrose com
antibiótico
Ágar Glicose-peptona (GP) com
antibiótico
Diluente para
a suspensão
de levedura Solução triptona cloreto de sódio
Ágar para
cultura de
cepa de
referência
BIOKAR Diagnóstico
Ágar Glicose Extrato de Batata
BK095HA – frasco 500g
Suplemento Seletivo
Cloranfenicol 50 mg
BS02108 – 10 flaconetes
Caldo Triptona Soja
BK046HA – frasco 500g
BM00808 – 50 tubos 9 mL
BM11408 – 10 flaconetes 90 mL
BM13508 – 3 embalagens de 3L
Conformidade
-
Total
Total
Parcial (2)
Total
Total
-
Total
Ágar Sabouraud Glicose
BK025HA – frasco 500g
Ágar Sabouraud Dextrose (SDA)
BM17308 - 20 unidades Ø 90 mm
Total
BM17408 – 120 unidades Ø 90 mm
BM05308 – 10 flaconetes 200 mL
(1) Em caso de utilização de ágar sem antibiótico, incubar à 22,5 ± 2,5ºC por 5 à 7 dias.
(2) Fórmula da Farmacopéia. Contém 1g de triptona ao invés de peptona de carne e pH 7,0 ± 0,2 ao
invés de 7,1 ± 0,2.
(3) Para produtos conhecidos e não contaminados o meio será utilizado sem cloranfenicol.
Protocolo
1g ou 1mL de amostra
diluída 1/10 (a) (b)
Caldo Eugon LT 100 (c)
0,1 mL em superfície
1 mL em profundidade
Por filtração em membrana
Ágar SABOURAUD
Cloranfenicol (e)
Incubar de 3 à 5 dias
à 25,0 ± 2,5ºC
Contagem de leveduras e
fungos (f)
(a) Quantidade mínima de amostra para análise.
(b) Outras diluições podem ser feitas a partir da suspensão-mãe (utilizando o mesmo
solvente), dependendo do nível de contaminação da amostra.
(c) Outros solventes podem ser utilizados de acordo com o Parágrafo 5.4.
(d) Transferir para a membrana uma quantidade adequada de amostra (correspondente à
1g ou 1mL de produto) e colocá-la sobre o ágar.
(e) Outros meios de cultura podem ser utilizados de acordo com o Parágrafo 5.4.
(f) A contagem é geralmente realizada utilizando ao menos 2 unidades por diluição.
*Disponíveis no Brasil os meios desidratados.
NF EN ISO 21149
T75-602
(Setembro 2009)
Contagem e detecção de bactérias aeróbicas mesófilas
Princípios:
Para a contagem
- Semeadura da amostra na superfície ou profundidade, ou filtração por
membrana e transferência para o meio de cultura (ágar).
- Incubação à 32,5 ± 2,5ºC por 72 ± 6h.
- Contagem do número de Unidades Formadoras de Colônias (UFC) e do
número de bactérias aeróbicas mesófilas por mL ou por g de produto.
Para a detecção
- Enriquecimento em meio líquido não seletivo à 32,5 ± 2,5ºC por 20 horas.
- Semeadura em ágar não seletivo.
- Incubação à 32,5 ± 2,5ºC por 48 a 72h.
Meio de Cultura
Diluente
neutralizante
Meio com peptona de caseína,
lecitina de soja e polissorbato 20
(caldo SCDLP20)
Caldo Eugon LT 100
BK068HA – frasco 500g
BM00608 – 50 tubos 9 mL
Caldo Eugon LT100
BM17508 – 50 tubos 9 mL + contas
de vidro
BM04308 – 10 flaconetes 100 mL
Diluente lecitina polissorbato (LP)
Caldo Letheen modificado
-
Líquido A
Água Peptonada
BM16408 - 3 embalagens de 3L
Solução peptona tamponada
(pH 7)
Caldo peptona tamponado NaCl
pH 7
BK128HA – frasco 500g
Diluentes
Meio de
Cultura para
Contagem
BIOKAR Diagnóstico
Ágar de peptona e caseína de soja Ágar Tripto-caseína de Soja
(SCDA) ou ágar tripto-caseína de
BK026HA – frasco 500g
soja (TSA)
BM05008 – 20 unidades Ø 90 mm
BM17808 – 120 unidades Ø 90 mm
BM01708 – 10 flaconetes 100 mL
BM04908 – 10 flaconetes 200 mL
Ágar Eugon LT 100
Ágar Eugon LT 100
BK096HA – frasco 500g
BM17008 – 20 unidades Ø 90 mm
BM04508 – 10 flaconetes 200 mL
Conformidade
-
Total
-
Total
Parcial (1)
Total
Total
Ágar LT 100
-
-
-
-
Meio de peptona e caseína de soja
adicionado de ágar
Caldos de
enriquecimento
Caldo Eugon LT100
Caldo Eugon LT 100
BK068HA – frasco 500g
BM00608 – 50 tubos 9 mL
BM17508 – 50 tubos 9 mL + contas
de vidro
Total
BM04308 – 10 flaconetes 100 mL
Caldo Letheen modificado
Meio líquido de peptona de
caseína de soja-lecitinapolissorbato 80 (Caldo SCDLP 80)
Caldo neutralizante D/E
neutralizante Dey/Engley)
-
-
-
-
-
-
(caldo
Ágar Eugon LT 100
Meios para a
detecção por
enriqueciMeio líquido de peptona de
mento
caseína de soja-lecitina-
Ágar Eugon LT 100
BK096HA – frasco 500g
BM17008 – 20 unidades Ø 90 mm
BM04508 – 10 flaconetes 200 mL
Total
-
-
polissorbato 80 (Caldo SCDLP 80)
Diluente para
a suspensão Solução triptona cloreto de sódio
bacteriana
Caldo Triptona Soja
BK046HA – frasco 500g
BM00808 – 50 tubos 9 mL
BM11408 – 10 flaconetes 90 mL
BM13508 – 3 embalagens de 3L
Total
Ágar para
cultura de
cepa de
referência
Ágar de peptona e caseína de soja Ágar Tripto-caseína de Soja
(SCDA) ou ágar tripto-caseína de
BK026HA – frasco 500g
soja (TSA)
BM05008 – 20 unidades Ø 90 mm
Total
BM17808 – 120 unidades Ø 90 mm
BM01708 – 10 flaconetes 100 mL
BM04908 – 10 flaconetes 200 mL
(1) Fórmula da Farmacopéia. Contém 1g de triptona ao invés de peptona de carne e pH 7,0 ± 0,2 ao invés
de 7,1 ± 0,2.
Protocolo
1g ou 1mL de amostra
diluída 1/10 (a) (b)
Caldo Eugon LT 100 (c)
0,1 mL em superfície
1 mL em profundidade
Por filtração em membrana
Ágar Tripto-caseína de soja (c)
Incubar de 72 ± 6h
à 32,5 ± 2,5ºC
Contagem (e)
Caldo Eugon LT100 (c)
Incubar de 48 à 72h
à 32,5 ± 2,5ºC
Presença/Ausência (e)
(a) Quantidade mínima de amostra para análise.
(b) Outras diluições podem ser feitas a partir da suspensão-mãe (utilizando o mesmo
solvente), dependendo do nível de contaminação da amostra.
(c) Outros solventes podem ser utilizados de acordo com o Parágrafo 5.4.
(d) Transferir para a membrana uma quantidade adequada de amostra (correspondente à
1g ou 1mL de produto) e colocá-la sobre o ágar.
(e) A contagem é geralmente realizada utilizando ao menos 2 unidades por diluição.
*Disponíveis no Brasil os meios desidratados.
NF EN ISO 18416
T75-607
(Setembro 2009)
Princípios:
Detecção de Candida albicans
- Enriquecimento em meio líquido à 32,5 ± 2,5ºC de 20 à 72 horas.
- Isolamento em ágar à 32,5 ± 2,5ºC por 24 a 48h.
- Identificação por ensaios apropriados.
Meio de Cultura
BIOKAR Diagnóstico
Caldo Eugon LT100
Meios
líquidos de
enriquecimento
Caldo Eugon LT 100
BK068HA – frasco 500g
BM00608 – 50 tubos 9 mL
BM17508 – 50 tubos 9 mL + contas
de vidro
BM04308 – 10 flaconetes 100 mL
Meio líquido digerido de caseína- Caldo Triptona Soja (TSB)
soja
BK046HA – frasco 500g
BM03008 – 50 tubos 10 mL
BM00908 – 10 flaconetes 100 mL
BM17908 – 10 flaconetes 90 mL
Caldo Letheen modificado
Meio lecitina polissorbato
adicionado de dextrose e
peptona (Caldo GPLP80)
Ágar seletivo
para o
isolamento
C. albicans
Ágar
Sabouraud
Cloranfenicol
Diluente para
a suspensão Solução triptona cloreto de sódio
de levedura
Ágar Sabouraud Dextrose (SDA)
Ágar Batata Dextrose
-
Ágar Sabouraud Glicose com
Dextrose Cloranfenicol
BK025HA – frasco 500g
BM17608 – 20 unidades Ø 90 mm
BM17708 – 120 unidades Ø 90 mm
BM17208 – 10 flaconetes 200 mL
Ágar Batata Dextrose com
antibiótico
Ágar para
validação
80
de
Ágar Glicose Extrato de Batata
BK095HA – frasco 500g
Suplemento Seletivo
Cloranfenicol 50 mg
BS02108 – 10 flaconetes
Caldo Triptona Soja
BK046HA – frasco 500g
BM00808 – 50 tubos 9 mL
BM11408 – 10 flaconetes 90 mL
BM13508 – 3 embalagens de 3L
Ágar Sabouraud Glicose
BK025HA – frasco 500g
BM17308 - 20 unidades Ø 90 mm
BM17408 – 120 unidades Ø 90 mm
BM05308 – 10 flaconetes 200 mL
Ágar Glicose Extrato de Batata
BK095HA – frasco 500g
Ágar de peptona e caseína de soja Ágar Tripto-caseína de Soja
(SCDA) ou ágar tripto-caseína de
BK026HA – frasco 500g
soja (TSA)
BM05008 – 20 unidades Ø 90 mm
BM17808 – 120 unidades Ø 90 mm
BM01708 – 10 flaconetes 100 mL
BM04908 – 10 flaconetes 200 mL
Conformidade
Total
Total
-
Total
Total
Total
Total
Total
Total
Protocolo
1g ou 1mL de amostra
diluída 1/10 (a) (b)
Caldo Eugon LT 100 (c)
0,1 mL em superfície
Incubar de 20 à 72 h
à 32,5 ± 2,5ºC
Ágar SABOURAUD
Cloranfenicol (d)
Incubar de 24 à 48 h
à 32,5 ± 2,5ºC
- Coloração de Gram
- Teste de produção de filamentos e
clamidosporos
- Cultura em ágar de farinha de
mandioca com 1% de polissorbato
80
(a) Quantidade mínima de amostra para análise.
(b) Outras diluições podem ser feitas a partir da suspensão-mãe (utilizando o mesmo
solvente), dependendo do nível de contaminação da amostra.
(c) Outros solventes podem ser utilizados de acordo com o Parágrafo 5.3.3.
(d) Outros meios de cultura podem ser utilizados de acordo com o Parágrafo 5.3.4.
*Disponíveis no Brasil os meios desidratados.
NF EN ISO 21150
T75-604
(Setembro 2009)
Princípios:
Detecção de Escherichia coli
- Enriquecimento em meio não seletivo à 32,5 ± 2,5ºC de 20 à 72 horas.
- Isolamento em ágar à 32,5 ± 2,5ºC por 24 a 48h.
- Identificação por meio de ensaios apropriados.
Meio de Cultura
BIOKAR Diagnóstico
Caldo Eugon LT 100
BK068HA – frasco 500g
BM00608 – 50 tubos 9 mL
BM17508 – 50 tubos 9 mL + contas
de vidro
BM04308 – 10 flaconetes 100 mL
Caldo Eugon LT100
Meios
líquidos de
enriquecimento
Meio líquido de lactose, contendo
neutralizantes
e
agentes
dispersantes
Meio líquido lactose
Caldo Nutritivo Lactose
BK082HA – frasco 500g
Meio líquido de triptona-sojalecitina-polissorbato 80 (Caldo
SCDLP 80)
Caldo neutralizante D/E
neutralizante Dey/Engley)
-
Total
Total
-
-
-
-
-
-
(caldo
Caldo Letheen modificado
Ágar seletivo
para o
Ágar MacConkey
isolamento
E.coli
Ágar MacCONKEY
BK050HA – frasco 500g
BM18008 – 10 flaconetes 100 mL
Ágar seletivo
Ágar de Levine eosina e azul de
para
metileno (EMB)
confirmação
Ágar EMB (Levine)
BK046HA – frasco de 500g
Diluente para
a suspensão Solução triptona cloreto de sódio
Bacteriana
Ágar para
validação
Conformidade
Caldo Triptona Soja
BK046HA – frasco 500g
BM00808 – 50 tubos 9 mL
BM11408 – 10 flaconetes 90 mL
BM13508 – 3 embalagens de 3L
Ágar de peptona e caseína de soja Ágar Tripto-caseína de Soja
(SCDA) ou ágar tripto-caseína de
BK026HA – frasco 500g
soja (TSA)
BM05008 – 20 unidades Ø 90 mm
BM17808 – 120 unidades Ø 90 mm
BM01708 – 10 flaconetes 100 mL
BM04908 – 10 flaconetes 200 mL
Total
Total
Total
Total
Protocolo
1g ou 1mL de amostra
diluída 1/10 (a) (b)
Caldo Eugon LT 100 (c)
0,1 mL em superfície
Incubar de 20 à 72 h
à 32,5 ± 2,5ºC
Ágar MacCONKEY
Incubar de 24 à 48 h
à 32,5 ± 2,5ºC
- Coloração de Gram
- Cultura em Ágar de Levine eosina e
azul de metileno (EMB)
(a) Quantidade mínima de amostra para análise.
(b) Outras diluições podem ser feitas a partir da suspensão-mãe (utilizando o mesmo
solvente), dependendo do nível de contaminação da amostra.
(c) Outros solventes podem ser utilizados de acordo com o Parágrafo 5.3.3.
*Disponíveis no Brasil os meios desidratados.
NF EN ISO 22717
T75-603
(Setembro 2009)
Princípios:
Detecção de Pseudomonas aeruginosa
- Enriquecimento em meio não seletivo à 32,5 ± 2,5ºC de 20 à 72 horas.
- Isolamento em ágar à 32,5 ± 2,5ºC por 24 a 48h.
- Identificação por meio de ensaios apropriados.
Meio de Cultura
BIOKAR Diagnóstico
Caldo Eugon LT 100
BK068HA – frasco 500g
BM00608 – 50 tubos 9 mL
BM17508 – 50 tubos 9 mL + contas
de vidro
BM04308 – 10 flaconetes 100 mL
Caldo Eugon LT100
Meios
líquidos de
enriquecimento
Meio líquido de triptona-sojalecitina-polissorbato 80 (Caldo
SCDLP 80)
Caldo neutralizante D/E
neutralizante Dey/Engley)
Conformidad
e
Total
-
-
-
-
-
-
(caldo
Caldo Letheen modificado
Ágar seletivo
para o
Ágar Cetrimida
isolamento
Ágar seletivo
Ágar de Pseudomonas para a
para
pesquisa de piocianina (Ágar
confirmação Pseudomonas P)
Diluente para
a suspensão Solução triptona cloreto de sódio
Bacteriana
Ágar para
validação
Ágar Cetrimida
BK049HA – frasco 500g
-
Caldo Triptona Soja
BK046HA – frasco 500g
BM00808 – 50 tubos 9 mL
BM11408 – 10 flaconetes 90 mL
BM13508 – 3 embalagens de 3L
Ágar de peptona e caseína de soja Ágar Tripto-caseína de Soja
(SCDA) ou ágar tripto-caseína de
BK026HA – frasco 500g
soja (TSA)
BM05008 – 20 unidades Ø 90 mm
BM17808 – 120 unidades Ø 90 mm
BM01708 – 10 flaconetes 100 mL
BM04908 – 10 flaconetes 200 mL
Total
-
Total
Total
Protocolo
1g ou 1mL de amostra
diluída 1/10 (a) (b)
Caldo Eugon LT 100 (c)
0,1 mL em superfície
Incubar de 20 à 72 h
à 32,5 ± 2,5ºC
Ágar Cetrimida
Incubar de 24 à 48 h
à 32,5 ± 2,5ºC
- Coloração de Gram
- Pesquisa de oxidase
- Cultura em Ágar de Pseudomonas
para pesquisa de piocianina
(a) Quantidade mínima de amostra para análise.
(b) Outras diluições podem ser feitas a partir da suspensão-mãe (utilizando o mesmo
solvente), dependendo do nível de contaminação da amostra.
(c) Outros solventes podem ser utilizados de acordo com o Parágrafo 5.3.3.
*Disponíveis no Brasil os meios desidratados.
NF EN ISO 22718
T75-605
(Setembro 2009)
Princípios:
Detecção de Staphylococcus aureus
- Enriquecimento em meio não seletivo à 32,5 ± 2,5ºC de 20 à 72 horas.
- Isolamento em ágar à 32,5 ± 2,5ºC por 24 a 48h.
- Identificação por meio de ensaios apropriados.
Meio de Cultura
BIOKAR Diagnóstico
Caldo Eugon LT 100
BK068HA – frasco 500g
BM00608 – 50 tubos 9 mL
BM17508 – 50 tubos 9 mL + contas
de vidro
BM04308 – 10 flaconetes 100 mL
Caldo Eugon LT100
Meios
líquidos de
enriquecimento
Meio líquido hidrolisado de
caseína-soja
Caldo neutralizante D/E
neutralizante Dey/Engley)
Conformidade
Total
-
-
-
-
-
-
(caldo
Caldo Letheen modificado
Ágar Baird Parker
Solução de telurito de potássio
Ágar seletivo Emulsão de gema de ovo
para o
isolamento
Ágar Manitol (Ágar Chapman)
Ágar Vogel-Johnson
Diluente para
a suspensão Solução triptona cloreto de sódio
bacteriana
Ágar para
validação
Ágar Baird Parker
BK055HA – frasco 500g
BM01808 - 20 unidades Ø 90 mm
BM09108 - 120 unidades Ø 90 mm
Ágar de CHAPMAN Manitol
BK030HA – frasco 500g
Caldo Triptona Soja
BK046HA – frasco 500g
BM00808 – 50 tubos 9 mL
BM11408 – 10 flaconetes 90 mL
BM13508 – 3 embalagens de 3L
Ágar de peptona e caseína de soja Ágar Tripto-caseína de Soja
(SCDA) ou ágar tripto-caseína de
BK026HA – frasco 500g
soja (TSA)
BM05008 – 20 unidades Ø 90 mm
BM17808 – 120 unidades Ø 90 mm
BM01708 – 10 flaconetes 100 mL
BM04908 – 10 flaconetes 200 mL
Total
Total
-
Total
Total
Protocolo
1g ou 1mL de amostra
diluída 1/10 (a) (b)
Caldo Eugon LT 100 (c)
Incubar de 20 à 72 h
à 32,5 ± 2,5ºC
Ágar BAIRD-PARKER (d)
Incubar de 24 à 48 h
à 32,5 ± 2,5ºC
- Coloração de Gram
- Pesquisa de catalase
- Pesquisa de oxidase
(a) Quantidade mínima de amostra para análise.
(b) Outras diluições podem ser feitas a partir da suspensão-mãe (utilizando o mesmo
solvente), dependendo do nível de contaminação da amostra.
(c) Outros solventes podem ser utilizados de acordo com o Parágrafo 5.3.3.
(d) Outros meios de cultura podem ser utilizados de acordo com o Parágrafo 5.3.4.
*Disponíveis no Brasil os meios desidratados.
Anexo A: Protocolo de preparação para cepa de referência.
Suspensão bacteriana
Suspensão bacteriana
Suspensão bacteriana
TSA
(Repique da cultura em
tubos inclinados ou placas)
SDA
(Repique da cultura em
tubos inclinados ou placas)
PDA
(Repique da cultura em
placas)
Incubar de 18 à 24h
à 32,5 ± 2,5ºC
Segunda subcultura (3º possível)
7 à 11 dias à
32,5 ± 2,5ºC
Triptona Cloreto de Sódio Triptona Cloreto de Sódio Triptona Cloreto de Sódio
Suspensão titulada
107 à 108 ufc/mL (a)
Suspensão titulada
107 à 108 ufc/mL (a)
Suspensão titulada
107 à 108 ufc/mL (a)
Controle de titulação da suspensão
TSA
SDA
Incubar de 18 à 24h
à 32,5 ± 2,5ºC
Contagem de
bactérias totais (b)
Contagem de
Candida albicans (b)
(a) Utilizar a suspensão até duas horas após seu preparo.
(b) Para cada suspensão, dobrar a contagem por mL repicado.
*Disponíveis no Brasil os meios desidratados.
PDA
(Repique da cultura em
placas)
7 à 11 dias à
32,5 ± 2,5ºC
Contagem de
Aspergillus brasiliensis (b)
Anexo B: outras normas para a Microbiologia de Produtos Cosméticos.
Diretrizes para a avaliação de riscos e identificação microbiológica de baixo risco – NF EN
ISO 29621 – T75-609
Avaliação da proteção antimicrobiana de um produto cosmético – NF EN ISO 11930 –
T75-600
Instruções gerais para as análises microbiológicas – NF EN ISO 21148 – T75-601
Detecção dos microorganismos específicos e não específicos – NF EN ISO 18415 – T75606
NF EN ISO 18415
T75-606
(Agosto 2011)
Detecção de microrganismos específicos e não específicos
Princípios:
- 1ª etapa: enriquecimento em meio líquido não específico.
- 2ª etapa: isolamento e identificação em função das necessidades e
seguindo as instruções das normas correspondentes.
Meio de Cultura
Diluente
BIOKAR Diagnóstico
Solução triptona cloreto de sódio
Caldo Triptona Soja
BK046HA – frasco 500g
BM00808 – 50 tubos 9 mL
BM11408 – 10 flaconetes 90 mL
BM13508 – 3 embalagens de 3L
Caldo Eugon LT 100
BK068HA – frasco 500g
BM00608 – 50 tubos 9 mL
BM17508 – 50 tubos 9 mL + contas
de vidro
BM04308 – 10 flaconetes 100 mL
Caldo Eugon LT100
Meio líquido
de enriqueciMeio líquido de caseína-sojamento
Conformidade
Total
Total
lecitina-polissorbato 20 (FCDLP 20)
-
-
Meio líquido de caseína-sojalecitina-polissorbato 80 (FCDLP 80)
-
-
Caldo neutralizante D/E
neutralizante Dey/Engley)
-
-
-
-
(caldo
Caldo Letheen modificado
Ágar não
específico
Ágar Triptona Soja (TSA)
BK026HA – frasco 500g
Ágar de peptona e caseína de soja BM05008 – 20 unidades Ø 90 mm
(SCDA) ou ágar tripto-caseína de
BM17808 – 120 unidades Ø 90 mm
soja (TSA)
BM01708 – 10 flaconetes 100 mL
BM04908 – 10 flaconetes 200 mL
Caldo Triptona Soja (TSB)
BK046HA – frasco 500g
Meio de peptona e caseína de soja BM03008 – 50 tubos 10 mL
adicionado de ágar (Caldo SCD
BM00908 – 10 flaconetes 100 mL
adicionado de ágar)
BM17908 – 10 flaconetes 90 mL
Ágar Bacteriológico tipo A
A1010HA – Flaconete 500g
A1010GC – Balde 5kg
Ágar Bacteriológico tipo E
A1012HA – Flaconete 500g
A1010GC – Balde 5kg
Total
Total
Protocolo
1g ou 1mL de amostra
diluída 1/10 (a) (b)
Caldo Eugon LT 100 (c)
Incubar de 20 à 72 h
à 32,5 ± 2,5ºC
Ágar TSA (d)
Incubar de 24 à 48 h
à 32,5 ± 2,5ºC
Identificação dos microorganismos (e):
- Escherichia coli
- Pseudomonas aeruginosa
- Staphylococcus aureus
- Candida albicans
- Microrganismos não específicos
(a) Quantidade mínima de amostra para análise.
(b) Outras diluições podem ser feitas a partir da suspensão-mãe (utilizando o mesmo
solvente), dependendo do nível de contaminação da amostra.
(c) Outros solventes podem ser utilizados de acordo com o Parágrafo 5.3.2.
(d) Outros meios de cultura podem ser utilizados de acordo com o Parágrafo 5.3.3.
(e) Estabelecer os testes de identificação necessários para cada microrganismo.
*Disponíveis no Brasil os meios desidratados.
NF EN ISO 11930
T75-600
(Junho 2012)
Avaliação da proteção antimicrobiana de um produto cosmético
Princípios: - Inoculação da formulação com inócuo calibrado.
- Determinação do número de microorganismos sobreviventes aos intervalos
de tempo pré definidos durante 28 dias.
Meio de Cultura
Diluente
Neutralizante
Solução triptona cloreto de sódio
Caldo Eugon LT100
Ágar Sabouraud Dextrose (SDA)
Meios de
cultura
Ágar Batata Dextrose
BIOKAR Diagnóstico
Conformidade
Caldo Triptona Soja
BK046HA – frasco 500g
BM00808 – 50 tubos 9 mL
BM11408 – 10 flaconetes 90 mL
BM13508 – 3 embalagens de 3L
Total
Caldo Eugon LT 100
BK068HA – frasco 500g
BM00608 – 50 tubos 9 mL
BM17508 – 50 tubos 9 mL + contas
de vidro
BM04308 – 10 flaconetes 100 mL
Total
Ágar Sabouraud Glicose
BK025HA – frasco 500g
BM17308 - 20 unidades Ø 90 mm
BM17408 – 120 unidades Ø 90 mm
BM05308 – 10 flaconetes 200 mL
Ágar Glicose Extrato de Batata
BK095HA – flaconete 500g
Total
Equivalente (1)
Ágar de peptona e caseína de soja Ágar Tripto-caseína de soja
(SCDA) ou ágar tripto-caseína de
BK026HA – frasco 500g
soja (TSA)
BM05008 – 20 unidades Ø 90 mm
BM17808 – 120 unidades Ø 90 mm
BM01708 – 10 flaconetes 100 mL
BM04908 – 10 flaconetes 200 mL
(1) o meio contém 4g de extrato de batata ao invés de 200g de infusão de batata preconizada.
*Disponíveis no Brasil os meios desidratados.
Total
Protocolo
1) Demonstração da eficácia do neutralizante:
1g ou 1 mL da formulação em 9 mL de Caldo Eugon LT 100
30 ± 15 min à temperatura ambiente
Adicionar 1 mL de solução calibrada de micro-organismos (b) (c)
TSA
SDA
PDA
Incubar de 48 à 72h
à 32,5 ± 2,5ºC
Contagem de
bactérias totais (a)
3 à 5 dias à
32,5 ± 2,5ºC
Contagem de
Candida albicans (a)
Contagem de
Aspergillus brasiliensis (a)
*Disponíveis no Brasil os meios desidratados.
2) Demonstração da eficácia da proteção antimicrobiana da formulação:
20g ou 20 mL da formulação + 0,2 mL de inócuo calibrado (b)
Em um intervalo de tempo regular, retirar 1 mL ou 1g da formulação inoculada
7 dias: T7
14 dias: T14
28 dias: T28
Para cada amostragem, fazer a contagem dos microrganimos (seguindo o protocolo
descritivo da etapa “Demonstração da eficácia da etapa de neutralização”).
(a) Contar em dobro, 1 mL de cada mistura inoculada.
(b) O inócuo calibrado contém entre 10 5 e 106 UFC/mL para Candida albicans e
Aspergillus brasiliensis.
(c) Fazer um tubo controle, com 1 mL de inócuo em 10 mL de diluente.
*Disponíveis no Brasil os meios desidratados.
Anexo C: Lista dos principais produtos da Microbiologia Cosmética
PRODUTO
APRESENTAÇÃO
Ágar BAIRD-PARKER
BK055HA – frasco 500g
BM01808 – 20 placas de Ø 90 mm
BM09108 – 120 placas de Ø 90 mm
Ágar Cetrimida
BK049HA – frasco 500g
Ágar Sal Manitol
BK030HA – frasco 500g
Caldo peptona tamponado com NaCl pH BK128HA – frasco 500g
7,0
BM16408 – 3 embalagens de 3L
Ágar EMB (LEVINE)
BK046HA – frasco 500g
BK068HA – frasco 500g
BM00608 – 50 tubos 9 mL
BM17508 – 50 tubos 9 mL + contas de vidro
BM04308 – 10 frascos 100 mL
Caldo Eugon LT 100
Ágar Eugon LT 100
BK096HA – frasco 500g
BM17008 - 20 placas de Ø 90 mm
BM04508 – 10 frascos 200 mL
Ágar Batata Dextrose (com antibiótico)
BK095HA – frasco 500g
Suplemento Seletivo Cloranfenicol 50 mg
BS02108 – 10 frascos
Ágar MacCONKEY
BK050HA – frasco 500g
BM18008 – 10 frascos 100 mL
Caldo Lactose
BK082HA – frasco 500g
BK025HA – frasco 500g
BM17308 - 20 unidades Ø 90 mm
BM17408 – 120 unidades Ø 90 mm
BM05308 – 10 flaconetes 200 mL
Ágar SABOURAUD Glicose
Ágar
SABOURAUD
Cloranfenicol
Glicose
Caldo Triptona Soja (TSB)
Ágar Triptona Soja (TSA)
Ágar Glicose Oxitetraciclina (OGA)
com BK025HA – frasco 500g
BM17608 – 20 unidades Ø 90 mm
BM17708 – 120 unidades Ø 90 mm
BM17208 – 10 flaconetes 200 mL
BK046HA – frasco 500g
BM03008 – 50 tubos 10 mL
BM00908 – 10 embalagens 100 mL
BM17908 – 10 embalagens 90 mL
BK046HA – frasco 500g
BM05008 – 20 placas de Ø 90 mm
BM17808 – 120 placas de Ø 90 mm
BM01708 – 10 embalagens 100 mL
BM04908 – 10 embalagens 200 mL
BM02208 – 10 flaconetes 110 mL
BK053HA – frasco 500g
BK053GC – embalagem 5 Kg
Suplemento Seletivo Oxitetraciclina 50 mg
BS00808 – embalagem com 10 frascos
Suplemento Seletivo Gentamicina 25 mg
BS00908 – embalagem com 10 frascos
Suplemento Seletivo Cloranfenicol 50 mg
BS02108 – embalagem com 10 frascos
Ágar Schaedler
BK063HA – frasco 500g
Caldo Tetrationato
BK083HA – frasco 500g
Ágar Verde Brilhante
BK091HA – frasco 500g
Caldo Müller-Kauffmann
Ágar Contagem de Placas (PCA)
BM10608 – 50 flaconetes 10 mL
BK135HA – frasco 500g
Suplemeto Seletivo Novobiocina 10 mg
BS03308 – embalagem com 10 frascos
Suplemeto Seletivo Novobiocina 40 mg
BS05608 – embalagem com 8 frascos
BM01508 – 10 flaconetes 100 mL
BM03308 – 10 flaconetes 200 mL
BK144HA – frasco 500g
BK144GC – embalagem 5 Kg
Caldo Lecitina Polissorbato Triton X
BM00608 – 50 tubos 9 mL
BM04308 – 10 frascos 100 mL
BK137HA – frasco 500g
Ágar Lecitina Polissorbato Triton X
BM04508 – 10 flaconetes 200 mL
BK138HA – frasco 500g
*Disponíveis no Brasil os meios desidratados.
Apresentações
A) Ágar:
PRONTO:
Placas de Petri (ainda não
disponíveis no Brasil):
- Pacote com 120 unidades de
Ø 90 mm;
- Pacote com 20 unidades de
Ø 90 mm.
PRONTO PARA SOLUBILIZAR:
Flaconetes (ainda não
disponíveis no Brasil):
- 10 flaconetes de 100 mL;
- 10 flaconetes de 200 mL.
DESIDRATADO:
Frascos:
- Embalagem de 500g;
- Embalagem de 5 Kg.
*Disponíveis no Brasil os meios desidratados.
Apresentações
B) Caldos:
PRONTO PARA USO:
Frascos (ainda não
disponíveis no Brasil):
- 10 frascos de 90 mL;
- 10 frascos de 100 mL;
- 10 frascos de 200 mL.
Tubos (ainda não
Embalagens flexíveis
disponíveis no Brasil):
- 50 tubos de 9 mL;
- 50 tubos de 10 mL.
(ainda não disponíveis no
Brasil):
- 3 embalagens de 3L;
- 2 embalagens de 5L.
DESIDRATADO:
Frascos:
- Embalagem de 500g;
- Embalagem de 5 Kg.
*Disponíveis no Brasil os meios desidratados.
BIOKAR Diagnostics Qualidade
O Controle de Qualidade da Biokar Diagnostics certifica o desempenho de seus
produtos em conformidade com os padrões ISO:
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Testes de desempenho;
Condições de transporte;
Testes de esterilidade;
Testes de neutralização;
Análises das características físico-químicas (pH, aspecto...).
BIOKAR Diagnostics é certificada
de acordo com as normas padrão
de gerenciamento ISO 9001:2008.
A Biokar Diagnostics propõe um acesso direto à documentação técnica de seus
produtos nos sites:
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*Disponíveis no Brasil os meios desidratados.
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