Tecnologia de ELISA

IDEXX Livestock, Poultry and Dairy
Tecnologia de ELISA
© 2013 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved.
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ELISA
• O método de ELISA é um teste rápido usado para
detecção e quantificação de anticorpos ou antígenos
contra vírus, bactérias e outros materiais.
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Formatos ELISA
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Indireto (placa impregnada por Ag – busca Ac)
• Direto ou Captura de antígeno – placa impregnada por Ac
• Bloqueio (competitivo) – utilizado mais para busca de Ag podendo ser utilizado para Ac
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ELISA Indireto
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ELISA de Bloqueio
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ELISA para bovinos
ELISA Indireto
Paratuberculosis Toxoplasma gondii
IBR
Fiebre Q
Chlamydia abortus Fasciola
BVD Ab
Fiebre Aftosa
Neospora
Brucella abortus
Mycoplasma
Lengua Azul
Pleuropneumonia contagiosa
Hipodermosis
Adenovirus
PI3
Virus sincicial
ELISA Competitivo o de bloqueio
IBR gE, IBR gB
Leucosis
ELISA Captura de Antígeno
BDV Ag
Rota, Corona, K99
Criptosporidium
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Laboratório de ELISA
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Componentes Kit ELISA
• Microplacas revestidas
• Controles
• Diluente da amostra
• Conjugado
• Substrato
• Solução de lavagem
• Solução STOP
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Equipamentos para realização teste ELISA
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Controle do Ambiente para Execução Técnica de ELISA
• Temperatura
• Umidade
• Luminosidade
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Qualidade das amostras
A qualidade da amostra pode ter um impacto significativo nos
resultados finais do ensaio. A maioria dos laboratórios não tem
escolha com relação à qualidade das amostras recebidas.
Grande contaminação fúngica ou bacteriana pode causar efeitos
adversos nos anticorpos ou em outros componentes proteicos de
uma amostra e podem ter um efeito indesejável nos resultados de
testes. Se a qualidade da amostra for altamente questionável,
recomenda-se com veemência obter uma amostra fresca quando
possível.
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Qualidade das amostras
Amostras de leite: Amostras de leite integral podem ser
utilizadas após a centrifugação durante 15 minutos a 2000 x
g, ou deixadas durante a noite se refrigeradas (2 a 8 °c). A
amostra destinada ao ensaio deve ser coletada da parte
abaixo da camada do creme.
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Qualidade das amostras
Amostras séricas/plasmáticas: As amostras séricas com sinais
de hemólise (vermelho-claro) e lipemia moderada (aparência
leitosa) podem ter pouco ou nenhum efeito nos resultados do
ELISA.
Evite usar amostras que estejam fortemente hemolisadas
(vermelho-escuro) ou excessivamente lipêmicas. Verifique o
encarte da embalagem para informações. Quando houver soro no
coágulo, cuidado para não aspirar nenhum material coagulado ou
células sanguíneas.
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Armazenamento de amostras
Certifique-se de que as amostras estejam armazenadas
apropriadamente. Em geral, as amostras séricas devem ser
refrigeradas de 2 a 8 °c durante não mais de 3 a 5 dias. Se as
amostras precisarem ser armazenadas por mais tempo, elas devem
ser removidas do coágulo e congeladas a um mínimo de -20 °c.
Certifique-se de que todas as amostras estejam corretamente
rotuladas e vedadas para evitar a evaporação. Evidência de
liofilização (concentração da amostra) pode ser observada como
cristalização e é comum nos congeladores de autodegelo. Isso deve
ser evitado porque a integridade da amostra muito provavelmente
ficará comprometida.
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Cuidados com as amostras
• Evite vários ciclos de degelo do congelador, pois isso
pode danificar os anticorpos ou antígenos na amostra.
Recomendamos não mais de 3–5 ciclos.
• Todas as amostras degeladas precisam ser misturadas
completamente antes de diluir para assegurar que as
proteínas sejam dispersas por toda a amostra. Misture
gentilmente por vórtex ou invertendo pelo menos cinco
vezes. Espumar ou misturar demais as amostras causará
desnaturação das proteínas séricas.
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Tempo de Execução das provas de ELISA
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Lavagem das Microplacas de ELISA
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Leitura placa de ELISA e interpretação dos resultados
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Obrigada!
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