Validação Swing_Maria Giselda Aravechia

Micro
Micro Typing
Typing System
System
Swing
Swing TwinSampler
TwinSampler
Experiência com o SwingTwin Sampler em
Rotinas Imunohematológicas
Maria Giselda Aravechia
HIAE- São Paulo
Participantes :
• Marcia R. Dezan
• Vanessa Oliveira
• Eduardo Felix
• Jean Fukimoto
• Dra Mariza Mota
• Dra Lilian Castilho
Micro
Micro Typing
Typing System
System
Swing
Swing TwinSampler
TwinSampler
Swing TwinSampler
• Aplicação :
– Determinação ABO/Rh
– Fenotipagem Rh (C,
Cw,c,E,
e) e Kell
(C,C
,c,E,e)
– Pesquisa de anticorpos irregulares
– Teste da Antiglobulina Direta (TAD)
– Provas de compatibilidade
– Fenotipagem estendida para os antígenos Fya/Fyb; Jka/Jkb; M/N
M/N;;
S/s
S/s;; Lea/Leb; Kpa/Kpb; P1
– Retipagem de bolsas
– Pesquisa de antígenos raros
Descrição
Swing
Swing Twim
Twim Sampler
Sampler
Micro
Micro Typing
Typing System
System
Swing
Swing TwinSampler
TwinSampler
-
Pipetador automático (cartões, microplacas)
-
Conectado a um sistema de interpretação de resultados
(leitoras de aglutinação)
-
Programa → Maestro Master Software (Windows)
-
Hemácias constantemente em suspensão (misturador
magnético)
-
Performance : 55 ID-Cartões ABO/Rh (330 testes) por hora
-
Capacidade : 19 amostras/ 24 Cartões / 1 microplaca / 12
reagentes
Possui :
-
Detecção de nível de amostras, reagentes e diluentes.
-
Identificação de código de barras de amostras, reagentes e
diluentes, cartões e microplacas (Lote/ Validade)
-
Detecção de microcoágulos durante a aspiração
-
Monitoramento do volume dos reagentes, soluções
Micro
Micro Typing
Typing System
System
Swing
Swing TwinSampler
TwinSampler
Saxo
Saxo ID
ID Reader
Reader
Descrição
-
Leitora de aglutinação e centrifugação (24 cartões)
-
Operações são monitoradas pelo Software (ambiente
Windows)
-
Analisa imagem dos microtubos
-
Interpretação incorreta ou insatisfatória, pode-se altera
o resultado que será validado pelo operador (*)
-
Resultados armazenados, impressos ou transferidos
para um computador central.
Micro
Micro Typing
Typing System
System
Swing
Swing TwinSampler
TwinSampler
Lyra
Lyra MP
MP Reader
Reader
Descrição
- 4 funções : Centrifuga, agita, lê e interpreta
- Resultado validado, armazenado, impresso e transferido para
o computador central
- Operações monitoradas pelo Maestro MasterSoftware
MATERIAIS E MÉTODOS
AMOSTRAS
Micro
Micro Typing
Typing System
System
Swing
Swing TwinSampler
TwinSampler
Rotina de Doadores (n=645)
– 373 amostras ⇒ ABO/Rh; Fenotipagem Rh e Kell; PAI
– 272 amostras ⇒ fenotipagem estendida (Fya/Fyb; Jka/Jkb; S/s; Lea/Leb; M/N;
P1) e pesquisa de antígenos raros (Kpa/Kpb; Ge2; Dib)
Rotina de Maternidade (n = 317)
– 157 amostras de RN ⇒ ABO/Rh(D) e TAD
– 158 amostras de mães ⇒ ABO/Rh(D) e PAI
Rotina de Pacientes
– 17 soros ⇒ Pesquisa de anticorpos irregulares
– 9 soros ⇒ Provas de compatibilidade
Redeterminação de tipagem ABO/Rh(D)
– 11 segmentos de bolsas RhD- ⇒ ABO/Rh
Micro
Micro Typing
Typing System
System
Swing
Swing TwinSampler
TwinSampler
PROTOCOLOS
KITS utilizados para Amostras de Doadores
DiaMed MP (A-B-AB-D(VI-)-D(VI+)-ctl/A1-B)
Tipagem ABO e RhD
Prova Direta
50µL Suspensão de hemácias 0,8% em
Diluente 1 (Bromelina)
Prova reversa
50µL do plama + 50 µL das hemácias A1 e B
Fenotipagem Rh(C,Cw,c,E,e) e Kell
ID-Rh-Subgrupos+Cw+K
ID-LISS/Coombs
25 µL de suspensão a 5% de hemácias em
Diluente 1
Pesquisa de Anticorpos irregulares
50µL de hemácia teste I e II
25 µL de plasma
Micro
Micro Typing
Typing System
System
Swing
Swing TwinSampler
TwinSampler
- KITS utilizados para Amostras de Recém-Nascidos
A-B-AB-D(VI+)-ctl-TAD
PROTOCOLOS
Tipagem ABO e RhD e TAD
50µL Suspensão de hemácias
0,8% em Diluente 2 (LISS)
- KITS utilizados para Amostras de Mães
DiaMed MP (A-B-AB-D-ctl/A1-A2-B)
ID-Liss/Coombs
Micro
Micro Typing
Typing System
System
Swing
Swing TwinSampler
TwinSampler
FENOTIPAGEM ESTENDIDA
- Cartões Individuais DiaClon Anti-Lea, -Leb, -P1, -Kpa, -Kpb
- 10µL de suspensão a 5% em Diluente 1 (Bromelina)
- Cartões Individuais DiaClon Anti-M, Anti-N
- 10µL de suspensão a 5% em Diluente 2 (LISS)
Pares de antígenos
- 50µL de suspensão a 0,8% em Diluente 2 (LISS) – Fya/Fyb e S/s
- 50µL dos anti-soros nos microtubos
- 10µL de suspensão a 0,8% em Diluente 1 (Bromelina) – Jka/Jkb
Micro
Micro Typing
Typing System
System
Swing
Swing TwinSampler
TwinSampler
Pesquisa de Antígenos raros Anti-Ge2, Anti-Dib e
Provas de compatibilidade
50µL de suspensão hemácia 0,8% em Diluente 2
25 µL de cada anti-soro
Incubação 15 min a 37oC
Centrifugação
Leitura
Micro
Micro Typing
Typing System
System
Swing
Swing TwinSampler
TwinSampler
Doadores (Semi-Automação – Diana) e Técnica manual de
microplacas:
Tipagem ABO direta e reversa
- 30 µL da Suspensão hemácias a 3,0% (Bromelina) + 30 µL de cada respectivo
anti-soros diluídos
- 30µL da Suspensão hemácias A1 e B a 3,0% + 60 µL do soro dos doadores
Fenotipagem Rh (D,C,E,c,e) e Kell :
– 30µL da Suspensão hemácias a 1,5% (Bromelina) + 50 µL de cada
respectivo anti-soros diluídos
PESQUISA DE ANTICORPOS
– 30 µL da Suspensão de hemácias I e II a 3% + 100 µL amostra
– 37oC - 45 min + Lavagens + 50 µL de Anti-IgG
Micro
Micro Typing
Typing System
System
Swing
Swing TwinSampler
TwinSampler
Doadores
• FENOTIPAGEM (Duffy, Kidd, Ss)
50 µL de suspensão a 1% em Liss + 25 µL do anti-soro no
cartão Liss/Coombs (Grifols). Incubação (37oC - 45 min)
Pacientes
• Tipagem ABO/RhD ; TAD ⇒ Técnica Clássica em tubo
• Pesquisa de anticorpos ⇒ Tubo / Microplaca
INTERPRETAÇÃO DOS
RESULTADOS
Micro
Micro Typing
Typing System
System
Swing
Swing TwinSampler
TwinSampler
RESULTADOS ENCONTRADOS
Fenótipos
n
Fenótipos
n
Ror
38
R1r
112
A1
133
R2r
35
A2
26
R1R1
62
R2R2
23
R1R2
33
Amostras de
Doadores
Total = 373
A1B
13
A2B
5
R1Rz
1
B
46
R2Rz
1
RzRz
1
100%
R1wr
3
concordância
R1wR1
2
O
150
Fenótipos
n
R1wR2
2
K+
47
rr
47
K-
326
r´r
10
r”r
3
amostras
Micro
Micro Typing
Typing System
System
Swing
Swing TwinSampler
TwinSampler
Amostras de Doadores –PAI (n=367)
Reações
encontradas
Swing
Técnica
Manual
Anticorpos detectados
PAI-
360
360
-
PAI+
3
3
(2) Anti-Lea ; (1) Anti-P1
PAI+ (Swing)
1
0
(1) Anti-I
PAI+ (Téc Manual)
0
3
(1) Anti-Lea ; (1) Autoanti-I; (1) Anti-Leb
n
Jka
Jkb
S
s
Fya
Fyb
n
Jka
Jkb
S
s
Fya
Fyb
2
+
+
+
+
+
+
2
+
o
+
+
o
+
Doadores
3
+
o
+
+
+
+
2
+
o
o
+
+
+
Fenotipagem
Fenotipagem estendida
estendida
2
+
+
+
+
o
+
3
+
+
NR
NR
+
+
2
+
+
+
+
+
o
6
o
+
NR
NR
+
+
3
+
+
o
+
+
+
1
+
o
NR
NR
+
+
1
+
+
+
o
+
+
6
+
+
NR
NR
o
+
1
o
+
+
+
+
+
1
+
+
NR
NR
+
o
1
o
+
+
+
o
+
1
o
+
NR
NR
+
o
1
+
+
+
o
+
o
5
o
+
NR
NR
o
+
1
+
o
o
o
o
o
2
+
+
+
+
NR
NR
2
+
+
o
+
o
o
2
+
o
o
+
NR
NR
2
o
+
o
+
o
+
1
+
o
+
+
NR
NR
1
+
+
o
+
+
o
4
+
+
o
+
NR
NR
7
+
+
o
+
o
+
1
+
o
+
o
NR
NR
Amostras de
Total = 66
amostras
100%
concordância
concordância
Antígenos
Resultados
Amostras de
M+
34
Doadores
N-
5
M+N+
29
Fenotipagem
Fenotipagem estendida
estendida ee
Pesquisa
Pesquisa de
de antígenos
antígenos raros
raros
M+N-
23
M-N+
19
Le(a+b-)
9
Le(a-b-)
10
Le(a-b+)
40
P1+
91
P1-
17
Kp(a-b+)
117
Kp(a+b+)
1
Kp(b+)
24
Ge2
80
Di(b+)
80
Micro
Micro Typing
Typing System
System
Swing
Swing TwinSampler
TwinSampler
Resultados
A RhD+
A RhDB RhD+
N
56
7
21
B RhDAB RhD+
AB RhDO RhD+
3
8
1
55
O RhDTOTAL
6
157 (100%)
Amostras de Recém-nascidos
Resultados
n
Eluato
TAD-
147
-
TAD+ Swing
TAD+ Tubo
3
(2) Anti-A;
(1) Anti-B
TAD+ Swing
TAD- Tubo
7
(5) Anti-A; (1) Anti-B;
(1) Anti-AB
Total
157
10
S=100% (Cartão)
S=77% (Tubo)
Micro
Micro Typing
Typing System
System
Swing
Swing TwinSampler
TwinSampler
Resultados
A RhD+
A RhDB RhD+
N
58
7
22
B RhDAB RhD+
AB RhDO RhD+
2
3
1
57
O RhDTOTAL
8
158 (100%)
Amostras de Mães
Resultados
n
Identificação Acs
PAI-
151
-
PAI+Swing
PAI+ Tubo
2
(2) Anti-D
PAI+ Swing
PAI- Tubo
2
(1) Anti-Dia
(1) Anti-D
Total
155
(100%)
4
S=100% (Cartão)
S=67% (Tubo)
Swing (Gel)
Microplaca
n = 17
I
II
I
II
1
+
+
o
o
AntiJka
2
+
+
o
o
Anti-Cw,-Fyb
3
+
+
+
+
Anti-C,-D
4
+
o
o
o
Anti-K
5
+
o
o
o
Anti-K
6
+
o
+
o
Anti-K
7
+
+
o
o
Anti-D
8
+
+
+
+
Anti-C,-D
9
+
+
+
+
Anti-D
10
+
+
+
+
Anti-C,-D
11
+
+
+
+
Anti-C,-D,-Fya
12
o
+
o
+
Anti-E
13
+
o
+
+
Anti-Jkb
14
+
o
o
+
Anti-Fya
15
+
o
+
o
Anti-C
16
o
+
o
+
Anti-c
17
+
+
+
+
Anti-D
Ac
Micro
Micro Typing
Typing System
System
Swing
Swing TwinSampler
TwinSample
Amostras de
Pacientes
S = 100% (Cartão)
S= 90% (microplaca)
Micro
Micro Typing
Typing System
System
Swing
Swing TwinSampler
TwinSample
Amostras de Pacientes
Provas de compatibilidade – 9 soros de pacientes com
múltiplos anticorpos incluindo anticorpo de alta freqüência :
• 25 bolsas compatíveis
• 50 bolsas incompatíveis
Retipagem de 11 segmentos de bolsas
A Rh(D)- 3
B Rh(D)- 2
AB Rh(D)- 2
O Rh(D)- 4
Tempo gasto para realização
dos testes
Testes
Total de
amostras
Swing
Micro
Micro Typing
Typing System
System
Swing
Swing TwinSampler
TwinSample
Semiautomação/Tubos
ABO / Rh / Kell / PAI
12
39 min
30 min (ABO)
30 min (Rh/K)
20 min (PAI)
Fenotipagem
Estendida (FY/JK/S/s)
12
15 min
30 min
ABO/Rh/TAD
12
13 min
45 minutos
ABO /Rh / PAI
12
17 min
1 hora
Vantagens
Micro
Micro Typing
Typing System
System
Swing
Swing TwinSampler
TwinSample
Equipamento
• O Software Maestro permite impressão, armazenamento de
resultados e interfaceamento dos dados com o computador.
• É rápido e fácil de manusear.
• Rastreabilidade completa de testes, amostras, resultados e
operadores.
• Integração com software dos equipamentos (interface
comum).
• Identificação por sistema de código de barras.
• Permite uma 2a validação da checagem dos resultados.
• Aceita vários tipos de tubos.
• Permite a costumização de vários tipos de rotinas.
Vantagens
Micro
Micro Typing
Typing System
System
Swing
Swing TwinSampler
TwinSample
• Reagentes (Kits) utilizados nas rotinas
• Microplacas com soros pré-dispensados.
• Utilização da pesquisa de anticorpos em cartão, dispensa
lavagem e adição de antiglobulina humana.
• Re-utilização de cavidades não utilizadas (24horas).
• Cartões e microplacas que permitem detectar fenótipos D
parcial.
• Fenotipagens em cartão induz a menor chance de erros.
Micro
Micro Typing
Typing System
System
Swing
Swing TwinSampler
TwinSample
Pontos de melhoria :
• Baixo volume dos anti-soros anti-Fya, anti-Fyb, anti-S, anti-s
• Pouco tempo para a re-utilização das microplacas e dos
cartões no equipamento uma vez abertos.
• Permitir a costumização para outras rotinas, por exemplo a
pesquisa de antígenos raros.
• Permitir a continuidade do teste quando o equipamento
detecta baixo nível de um reagente.
CONCLUSÃO
Micro
Micro Typing
Typing System
System
Swing
Swing TwinSampler
TwinSample
• Otimiza rotinas e propicia rastreabilidade.
• Equipamento viável e seguro para ser utilizado em rotinas
imunohematológicas.
• 100% de concordância nos resultados das fenotipagens
quando comparado com semi-automação e técnicas
manuais.
• Mais sensível na detecção de TAD+ em RN.
• Mais sensível para detecção de anticorpos clinicamente
significantes em pacientes.