Mueller Hinton Agar, Ágar Mueller Hinton, Product

ÁGAR MULLER HINTON – MUELLER HINTON AGAR (7101)
Uso Previsto
Ágar Mueller Hinton é utilizado em testes de susceptibilidade antimicrobiana através do método de difusão
em disco. Esta formula está em conformidade com o Instituto de Padrões Clínicos e Laboratoriais (CLSI –
Clinical and Laboratory Standard Institute), anteriormente a Comissão Nacional de Padrões para
Laboratórios Clínicos (NCCLS - National Committee for Clinical Laboratory Standards).1
Sumário e Explicação do Produto
O Ágar Mueller Hinton é baseado na fórmula recomendada por Mueller e Hinton2 para o isolamento primário
de espécies de Neisseria. Mueller e Hinton selecionaram ágar de extrato de farelo de ervilha como um meio
transparente simples, contendo ingredientes estáveis ao calor.3 Durante a modificação, o amido substituiu as
propriedades promotoras de crescimento do extrato de ervilha, agindo como um “coloide protetor” contra
substâncias tóxicas.
Bauer, Kirby, Sherris e Tuck4 recomendaram o Ágar Mueller Hinton para executar testes te susceptibilidade
de antibióticos utilizando um único disco de alta concentração. Este meio sem suplemento foi selecionado
pelo Instituto de Padrões Clínicos e Laboratoriais (CLSI)1 por diversas razões. Este meio possui baixo teor
de sulfonamida, trimetoprim e inibidores tetracíclicos e proporciona um crescimento satisfatório para a
maioria dos patógenos não exigentes juntamente com a reprodutibilidade de lote para lote.
O Ágar Mueller Hinton é comumente abreviado com Ágar M-H e cumpre com os requerimentos da
Organização Mundial de Saúde.5 O Ágar Mueller Hinton é indicado no Manual Analítico Bacteriológico do
FDA6 para o teste em alimentos e procedimentos comumente realizados em bactérias aeróbias e aeróbias
facultativas.7 Uma variedade de suplementos pode ser adicionada ao Ágar Mueller Hinton, incluindo 5% de
sangue sem fibrina de ovelha ou cavalo, 1% de suplemento para crescimento e 2 % de cloreto de sódio.
Princípios do Procedimento
Extrato de Carne Bovina e Hidrolisado Ácido de Caseína fornecem nitrogênio, vitaminas, carbono e
aminoácidos no Ágar Mueller Hinton. O amido é adicionado para absorver qualquer metabólito tóxico
produzido. O Ágar é o agente solidificante.
Um meio apropriado é essencial para testar a susceptibilidade de micro-organismos para sulfonamidas e
trimetoprim. O antagonismo à atividade das sulfonamidas é demonstrado pelo ácido para-amino benzoico
(PABA) e seus análogos. A atividade reduzida da trimetoprim, resultando em zonas de inibição de
crescimento menores e crescimento da zona central, é demonstrada em meio que possui altos níveis de
timidina. O conteúdo de PABA e tiamina/timidina no Ágar Mueller Hinton Agar são reduzidos ao mínimo,
reduzindo a inativação de sulfonamidas e trimetoprim.
Fórmula / Litro
Extrato de Carne Bovina ........................................................... 2 g
Hidrolisado Ácido de Caseína.............................................. 17,5 g
Amido ..................................................................................... 1,5 g
Ágar ........................................................................................ 17 g
pH Final 7,3 ± 0,1 a 25°C
A fórmula pode ser ajustada e/ou suplementada conforme necessário para atender as especificações de desempenho.
Precaução
1. Somente para o uso em laboratório.
Modo de Preparo
1. Suspenda 38 g do meio em 1 litro de água purificada.
2. Aqueça, agitando frequentemente e ferva por 1 minuto para dissolver completamente o meio.
3. Autoclave a 121°C por 15 minutos. Resfrie até atingir a temperatura ambiente.
PI 7101 Rev 3, Junho 2011
4. OPCIONAL: Suplemente conforme apropriado. Coloque o Ágar Mueller Hinton resfriado em placas de
Petri estéreis de forma a manter a superfície plana, para dar uma profundidade uniforme. Deixe o ágar
atingir a temperatura ambiente.
5. O Ágar Mueller Hinton preparado deve ter pH final de 7,3 ± 0,1 a 25°C.
Especificações de Controle de Qualidade
Aparência Desidratado: Pó é homogêneo, fluxo livre e bege.
Aparência Preparado: O meio preparado é translúcido e amarelo claro a médio.
Resposta Esperada de Cultivo: Prepare, inocule e coloque os discos de antibiótico de acordo com o
procedimento descrito pela CLSI.1,8,9 As culturas listadas devem ter o diâmetro da zona média do tamanho da
concentração testada.8
Micro-organismo
Enterococcus faecalis ATCC 29212
Escherichia coli ATCC 25922
Escherichia coli ATCC 35218
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Staphylococcus aureus ATCC 43300
Resposta & Reações
Crescimento; diâmetros da zona dentro das especificações publicadas.
Crescimento; diâmetros da zona dentro das especificações publicadas.
Crescimento; diâmetros da zona dentro das especificações publicadas.
Crescimento; diâmetros da zona dentro das especificações publicadas.
Crescimento; diâmetros da zona dentro das especificações publicadas.
Crescimento; diâmetros da zona dentro das especificações publicadas.
Os organismos listados são os mínimos que devem ser avaliados para o teste de controle de qualidade.
Procedimento do Teste
Para uma completa explicação sobre o teste de susceptibilidade aos antimicrobianos, refira-se às
referências apropriadas sobre os procedimentos.
Resultados
Refira-se aos documentos apropriados para os tamanhos corretos das zonas.
Armazenamento
Armazene o frasco contendo o meio desidratado devidamente fechado entre 2 - 30°C. Uma vez aberto e
fechado novamente, coloque o frasco em um ambiente de baixa umidade e na mesma temperatura de
armazenamento. Proteja contra a umidade e luz mantendo o frasco firmemente fechado.
Validade
Refira-se à data de validade no frasco. O meio desidratado deve ser descartado se não fluir livremente ou se
houver mudança na coloração original. A validade se aplica ao meio em sua embalagem intacta quando
armazenado como indicado.
Limitações do Procedimento
1. Vários fatores podem afetar os resultados: tamanho do inóculo, taxa de crescimento, formulação do
meio e pH. É necessário o cumprimento estrito do protocolo para assegurar resultados confiáveis.9
2. A inativação da droga pode ser um resultado do período prolongado de incubação requerido por
micro-organismos de crescimento lento.10
3. A variação na concentração de cátions bivalentes, principalmente cálcio e magnésio afetam os
resultados de testes de aminoglicosídeos, tetraciclinas e colistina com isolados de P. aeruginosa.7
Embalagem
Ágar Mueller Hinton
N° Código
7101A
7101B
7101C
500 g
2 kg
10 kg
PI 7101 Rev 3, Junho 2011
Referências
1.
Clinical and Laboratory Standards Institute. 2006. Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests. Approved
standard M2-A9. CLSI, Wayne, PA.
2. Mueller, J. H., and J. Hinton. 1941. A protein-free medium for primary isolation of gonococcus and meningococcus. Proc. Soc.
Exp. Biol. Med. 48:3330-333.
3. Gordon and Hine. 1916. Br. Med. J. 678.
4. Bauer, A. L., W. M. M. Kirby, J. C. Sherris, and M. Turck. 1966. Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk
method. Am. J. Clin. Pathol. 45:493-496.
5. World Health Organization. 1961. Standardization of methods for conducting microbic sensitivity tests. Technical Report Series
No. 210, Geneva.
6. www.fda.gov/Food/ScienceResearch/LaboratoryMethods/BacteriologicalAnalyticalmanualBAM/default.htm.
7. Wood, G. L., and J. A. Washington. 1995. Antibacterial susceptibility tests: dilution and disk diffusion methods, p. 1327-1341. In
Murray, P.R., E. J. Baron, M. A. Pfaller, F. C. Tenover, and R. H. Yolken (eds.). Manual of clinical microbiology, 6th ed. American
Society for Microbiology, Washington, D.C.
8. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2006. Protocols for evaluating dehydrated Mueller Hinton Agar, 2nd ed.; Approved
standard M6-A2, CLIS, Wayne PA.
9. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2008. Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Eighteenth informational
supplement, M100-S18 (MS). Wayne, PA.
10. Isenberg, H. D. (ed.). 1992. Clinical microbiology procedures handbook, vol. 1, American Society for Microbiology, Washington, D.C.
Informação Técnica
Contate a Neogen do Brasil para Serviços Técnicos ou questões envolvendo a preparação ou desempenho do meio de cultura
desidratado no telefone 19.3935-3727.
Contate a Acumedia Manufacturers, Inc. para Serviços Técnicos ou questões envolvendo a preparação ou desempenho do meio de
cultura desidratado no telefone +1 (517)372-9200 ou fax +1 (517)372-2006.
PI 7101 Rev 3, Junho 2011