Ferritin IRMA

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Ferritin IRMA

Ferritin IRMA
®
Coat-A-Count Ferritin IRMA
English
Intended Use: Coat-A-Count Ferritin
IRMA is an immunoradiometric assay
designed for the quantitative
measurement of ferritin in serum. It is
intended strictly for in vitro diagnostic use
as an aid in the diagnosis of iron
deficiency or overload.
up to 300 (±100) ng/mL for men, and 10
(±5) up to 150 (±50) ng/mL for women.
Concentrations below 10 or 15 ng/mL are
typical of uncomplicated iron deficiency
anemia. For iron overload, values over
300 or 400 ng/mL are the rule, with levels
in the 1,000 – 5,000 ng/mL range common
in full-blown cases of hemochromatosis.
The ferritin molecule consists of a protein
1,2
shell (MW 450,000) and a core of iron.
High concentrations are found in liver cells
and in erythrocyte recycling centers (RE
cells) of the liver, spleen and bone
marrow. In these tissues ferritin serves as
the body's principal storehouse for surplus
iron, protecting against the toxic effects of
excess and maintaining a readily
3,4
mobilized reserve for erythropoiesis.
Ferritin is also present in human plasma,
where its concentration is normally a
satisfactory index of body iron stores as
measured by quantitative phlebotomy, iron
absorption studies, liver biopsy and the
microscopic examination of bone marrow
5,6
aspirates for stainable iron deposits.
Clinical applications of the serum ferritin
8-11
assay have been extensively reviewed.
It has important roles to play in the
diagnosis of iron deficiency and excess,
and in the management of conditions and
treatments posing a threat to iron balance.
It has proved a valuable aid in
discriminating iron deficiency anemia from
12
anemias due to other causes and in
exposing the disappearance of iron
reserves before the onset of anemia.
Serial determinations have been
employed to monitor, noninvasively, the
progressive erosion of iron stores during
13
pregnancy and in patients undergoing
14
regular dialysis treatment. Both in
conjunction with other routine blood
15-17
and on its own, the ferritin assay
tests
has been used to screen for iron
deficiency in a variety of populations,
18,19
to
ranging from blood donors
20,21
It is also
unselected hospital patients.
valuable in screening for precirrhotic
22
hemochromatosis and other forms of
23
iron overload and in monitoring patients
who are receiving regular blood
24
transfusions or iron replacement
25
therapy, and who are thus in danger of
accumulating excessive iron stores.
This relationship with iron stores can be
seen in the pattern of serum ferritin values
under a variety of physiological and
pathological conditions. For individuals in
good health the median level, slightly
elevated at birth, reaches a low of about
30 ng/mL at six months, with the increase
7
to adult levels taking place after puberty.
In males, the median level continues to
climb — from about 70 ng/mL at age
eighteen to almost 200 ng/mL twenty-five
years later — whereas in females there is
a plateau at 35 or 40 ng/mL throughout
the childbearing years and a sharp
increase thereafter. For adults in good
health, the serum ferritin level has been
variously reported to range from 20 (±10)
Although iron depletion appears to be the
only condition associated with reductions
in the serum ferritin level, increases are
observed not only in the presence of
increased iron stores, but also in several
other situations, including liver disorders,
inflammatory conditions, leukemia,
Hodgkin's disease and certain other
malignancies. Here, increased levels may
reflect the escape of ferritin from damaged
liver cells, impaired clearance of ferritin
from the plasma, synthesis of ferritin by
tumor cells, or an expansion of the iron
storage compartment induced by
ineffective erythropoiesis. Inflammation
tends to raise the ferritin level, while
lowering the serum iron concentration, by
Catalog Numbers: IKFE1 (100 tubes)
The 100-tube kit contains less
than 20 microcuries
(740 kilobecquerels) of
125
radioactive I-polyclonal anti-ferritin.
Summary and Explanation of
the Test
2
Coat-A-Count Ferritin IRMA (PIIKFE-11, 2010-11-02)
stimulating increased ferritin production in
RE cells, using iron that would otherwise
be released to plasma transport
26-28
In this condition and others,
proteins.
the correlation between iron stores and
circulating ferritin continues to hold, but
with a shift towards higher values —
necessitating an adjustment in the
reference range if the ferritin assay is still
to be used for distinguishing normal from
29
depleted iron reserves.
Principle of the Procedure
Coat-A-Count Ferritin IRMA is a
solid-phase immunoradiometric assay
based on monoclonal and polyclonal anti125
ferritin antibodies: one I-labeled antiferritin polyclonal antibody in liquid phase,
and monoclonal anti-ferritin antibody
immobilized to the wall of a polystyrene
tube.
In the procedure:
Ferritin is captured between monoclonal
anti-ferritin antibodies immobilized on the
inside surface of the polystyrene tube and
the radiolabeled polyclonal anti-ferritin
tracer.
125
Unbound I-labeled anti-ferritin antibody
is removed by decanting the reaction
mixture and washing the tube; this
reduces nonspecific binding to a very low
level, and ensures excellent low-end
precision.
The ferritin concentration is directly
proportional to the radioactivity present in
the tube after the wash step. The
radioactivity is measured using a gamma
counter, after which the concentration of
ferritin in the patient sample is obtained by
comparing the patient counts-per-minute
with those obtained for the set of
calibrators provided.
Reagents to Pipet: 2
Total Incubation Time: 1 Hour (on a rack
shaker)
Total Counts at Iodination:
approximately 300,000 cpm
Warnings and Precautions
For in vitro diagnostic use.
Reagents: Store at 2–8°C in a refrigerator
designated for incoming radioactive
materials. Dispose of in accordance with
applicable laws.
Do not use reagents beyond their
expiration dates.
Some components supplied in this kit may
contain human source material and/or
other potentially hazardous ingredients
which necessitate certain precautions.
Follow universal precautions, and handle
all components as if capable of
transmitting infectious agents. Source
materials derived from human blood were
tested and found nonreactive for syphilis;
for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis
B surface antigen; and for antibodies to
hepatitis C.
Sodium azide, at concentrations less than
0.1 g/dL, has been added as a
preservative. On disposal, flush with large
volumes of water to prevent the buildup of
potentially explosive metal azides in lead
and copper plumbing.
Water: Use distilled or deionized water.
Radioactivity
A copy of any radioisotope license
certificate (Specific or General) issued to a
US customer must be on file with Siemens
Healthcare Diagnostics before kits or
components containing radioactive
material can be shipped. These
radioactive materials may be acquired by
any customer with the appropriate Specific
license. Under a General license these
radioactive materials may be acquired
only by physicians, veterinarians in the
practice of veterinary medicine, clinical
laboratories and hospitals — and strictly
for in vitro clinical or laboratory tests not
involving external or internal
administration of the radioactive material
or its radiation to human beings or other
animals. Its acquisition, receipt, storage,
use, transfer and disposal are all subject
to the regulations and a (General or
Specific) license of the U.S. Nuclear
Regulatory Commission or a State with
which the NRC has entered into an
agreement for the exercise of regulatory
control.
Handle radioactive materials according to
the requirements of your General or
Specific license. To minimize exposure to
radiation, the user should adhere to
guidelines set forth in the National Bureau
of Standards publication on the Safe
3
Handling of Radioactive Materials
(Handbook No. 92, issued March 9, 1964)
and in subsequent publications issued by
State and Federal authorities.
Wipe up spills promptly and
decontaminate affected surfaces. Avoid
generation of aerosols. Dispose of solid
radioactive waste according to license
requirements. General licensees (holders
of NRC Form 483) may dispose of solid
radioactive waste as nonradioactive
waste, after removing labeling. Specific
licensees (NRC Form 313) should refer to
Title 10, Code of Federal Regulations,
Part 20. Licensees in Agreement States
should refer to the appropriate regulations
of their own state. General licensees may
dispose of liquid radioactive waste of the
type contained in this product through a
laboratory sink drain. Licensees must
remove or deface labels from empty
containers of radioactive materials before
disposal of solid waste. Specific licensees
may dispose of small quantities of liquid
radioactive waste of the type used in this
product through a laboratory sink drain.
Refer to the appropriate regulations
applicable to your laboratory.
Materials Supplied:
Initial Preparation
Ferritin Ab-Coated Tubes (IFE1)
Polystyrene tubes coated with anti-ferritin
murine monoclonal antibody and
packaged in zip-lock bags. Store
refrigerated and protected from moisture,
carefully resealing the bags after opening.
Stable at 2–8°C for one year from the date
of manufacture.
IKFE1: 100 tubes.
125
I Ferritin Ab (IFE2)
5.5 mL iodinated anti-ferritin goat
polyclonal antibody. Stable at 2–8°C for
30 days after opening, or until the
expiration date marked on the label.
IKFE1: 2 vials.
Ferritin Calibrators (FEI3–9, X)
Eight vials, labeled A through H, of
protein-based ferritin calibrators, with
preservative. The calibrators are supplied
in liquid form, ready to use. The zero
calibrator A contains 1.0 mL, while the
remaining calibrators B through H each
contain 0.5 mL. Stable at 2–8°C for
4
30 days after opening. Do not freeze.
IKFE1: 1 set.
The calibrators contain 0, 5, 25, 100, 200,
500, 1,000 and 2,000 nanograms of
ferritin per milliliter (ng/mL), in terms of the
World Health Organization's Second
International Reference Preparation of
Ferritin for Immunoassay, number 80/578
[2nd IS 80/578]. Intermediate calibration
points may be obtained by mixing
calibrators in suitable proportions.
Ferritin Assay Buffer (FEAB)
11 mL buffered diluent, with preservative.
Stable at 2–8°C for 30 days after opening,
or until the expiration date marked on the
vial.
IKFE1: 2 vials.
Buffered Wash Solution Concentrate
(2TSBW)
60 mL of a concentrated buffered saline
solution, with surfactants and sodium
azide as a preservative. Using a transfer
container, dilute each vial of concentrate
with 600 mL distilled or deionized water,
for a total volume of 660 mL. Stable at
2–8°C for 6 months after preparation.
IKFE1: 1 vial × 60 mL.
Materials Required But Not
Provided
Gamma counter — compatible with
standard 12x75 mm tubes
Rack shaker — set at approximately 200
strokes per minute.
Reagent Preparation
Distilled or deionized water
Graduated cylinder — for dispensing
600 mL.
Plastic storage container with lid – for
preparation and storage of Buffered Wash
Solution.
Immunoassay
Micropipets: 10 µL, 100 µL and 200 µL
Dispenser — for delivering 2.0 mL of
Buffered Wash Solution.
Foam decanting rack — available from
Siemens Healthcare Diagnostics (catalog
number: FDR).
4-cycle log-log graph paper
Specimen Collection
The patient need not be fasting, and no
special preparations are necessary.
30
Collect blood by venipuncture into plain
tubes (without anticoagulant), noting the
time of collection, and separate the serum
from the cells.
The use of an ultracentrifuge is
recommended to clear lipemic samples.
Hemolyzed samples may indicate
mistreatment of a specimen before receipt
by the laboratory; hence the results should
be interpreted with caution.
Blood collection tubes from different
manufacturers may yield differing values,
depending on materials and additives,
including gel or physical barriers, clot
activators and/or anticoagulants. Coat-ACount Ferritin IRMA has not been tested
with all possible variations of tube types.
Consult the section on Alternate Sample
Types for details on tubes that have been
tested.
2
31
All components must be at room
temperature (15–28°C) before use.
1
—
A (NSB)
0
B
5
C
25
D
100
E
200
F
500
G
1,000
H ("MB")
2,000
Pipet 10 µL of each calibrator, control
and patient serum sample into the
tubes prepared.
Pipet directly to the bottom. Samples
expected to exceed the concentration
of the highest calibrator (2,000 ng/mL)
should be diluted in the zero
calibrator. The use of disposable-tip
micropipets is recommended, to avoid
carryover from sample to sample.
Positive-displacement pipets and
automatic pipettor-diluters should be
used only if the possibility of carryover
has been evaluated and found to be
insignificant.
Storage: 2–8°C for 7 days, or for
31
2 weeks frozen at –20°C.
Immunometric Assay
Procedure
ng/mL
T*
*Optional total counts
Volume Required: 10 µL of serum per
tube.
Before assay, allow the samples to come
to room temperature (15–28°C) and mix
by gentle swirling or inversion. Aliquot, if
necessary, to avoid repeated thawing and
freezing. Do not attempt to thaw frozen
specimens by heating them in a
waterbath.
Calibrators
3
Add 200 µL of Ferritin Assay Buffer to
all tube (except the T tubes).
Pipet directly to the bottom. A
repeating dispenser is recommended
for this step, and for the addition of
tracer at step 6.
4
Shake for 30 minutes on a rack
shaker.
5
Decant thoroughly. Add 2 mL
Buffered Wash Solution to each tube.
Wait 1 to 2 minutes, than decant
thoroughly.
Label sixteen Ferritin Ab-Coated
Tubes A (nonspecific binding) and B
through H ("maximum binding") in
duplicate. Label additional Ferritin AbCoated Tubes, also in duplicate, for
controls and patient samples.
Removing all visible moisture will
greatly enhance precision. After the
wash, using a foam decanting rack,
decant the contents of all the tubes
and allow them to drain for 2 or
3 minutes. Then strike the tubes
sharply on absorbant paper to shake
off all residual droplets.
6
Add 100 µL of
tube.
125
I Ferritin Ab to every
Pipet directly to the bottom. A
repeating dispenser is recommended.
5
Set the (optional) T tubes aside for
counting (at step 9); they require no
further processing.
7
Shake for 30 minutes on a rack
shaker.
8
Decant thoroughly. Add 2 mL
Buffered Wash Solution to each tube.
Wait 1 to 2 minutes, then decant
thoroughly. Again add 2 mL Buffered
Wash Solution, wait 1 to 2 minutes,
and decant thoroughly.
Removing all visible moisture will
greatly enhance precision. After the
second wash, decant the contents of
all tubes (except the T tubes) using a
foam decanting rack, and allow them
to drain for 2 or 3 minutes. Then strike
the tubes sharply on absorbant paper
to shake off all residual droplets.
9
Count for 1 minute in a gamma
counter.
In multi-head gamma counters, the
(optional) Total Counts tubes should
be separated from the remaining
assay tubes by at least one space, to
minimize the possibility of spillover.
Calculation and Quality Control
To calculate results (in terms of
concentration units) from a log-log
representation of the calibration curve, first
correct the counts per minute (CPM) of
each pair of tubes by subtracting the
average CPM of the nonspecific binding
tubes (calibrator A):
Net Counts = (Average CPM) minus (Average
NSB CPM)
Then determine percent binding (relative
to that of the highest calibrator) — here
called "%B/MB" — of each pair of tubes as
a percent of "maximum binding," with the
NSB-corrected counts of the highest
calibrator taken as 100%:
Percent Bound = (Net Counts / Net MB Counts)
× 100
Using 4-cycle log-log graph paper, plot
Percent Bound versus Concentration for
each of the nonzero calibrators, and draw
a curve approximating the path of these
points. (Connect the calibration points with
arcs or straight line segments. Do not
attempt to fit a single straight line to the
data.) Concentrations for controls and
6
unknowns within range of the nonzero
calibrators may then be estimated from
the calibration curve by interpolation. An
additional plot of Percent Bound versus
Concentration for the three lowest
calibrators on linear-linear graph paper
may be used for interpolation near zero
dose.
Comments: Although other approaches
are acceptable, data reduction by the
method just described has certain
advantages from the standpoint of quality
control. In particular, it yields a calibration
curve that is relatively linear in both log-log
and linear-linear representations, and
relatively stable from assay to assay. It
also yields valuable QC parameters,
namely, Percent Bound (%B/MB) values
for the nonzero calibrators. A still more
informative graph, conveying a sense of
within-assay reproducibility as a function
of concentration, can be obtained by
plotting the Percent Bound values of
individual calibrator tubes directly, i.e.
without first averaging the CPM of
replicates.
Alternatives: Although Percent Bound
can be calculated directly from Average
CPM, correction for nonspecific binding
usually produces a calibration curve that is
more nearly linear throughout its range. A
calibration curve can also be constructed
by plotting CPM or Average CPM directly
against Concentration on either log-log or
linear-linear graph paper. (Semi-log graph
paper should not be used.) This approach
has the virtue of simplicity, but is less
desirable from the standpoint of quality
control.
Computerized Data Reduction: "Pointto-point" methods, including linear and
cubic spline fits, are suitable; but since
they provide little assistance in monitoring
the integrity of an assay, it is important to
prepare the recommended log-log plot of
the calibration curve, either manually or by
computer, as a quality control step. Data
reduction techniques based on the logistic
model may also be applicable. Within this
family, curve-fitting routines based on the
4- or 5-parameter logistic are the most
suitable candidates. However, some
algorithms currently in use may not
converge successfully, even when the
logistic model is true to the data. If a
logistic method is adopted, it is essential
to verify its appropriateness for each day's
assay by monitoring the backcalculation of
the calibrators, and other parameters. In
addition, a plot of the calibration curve in a
log-log representation is highly
recommended, as this is more informative
than the conventional semi-log plot.
And the Percent Bound ("%B/MB") values
of all but the highest of the nonzero
calibrators, for example:
Sample Handling: The instructions for
handling and storing patient samples and
components should be carefully observed.
Dilute patient samples expected to exceed
the concentration of the highest calibrator
(2,000 ng/mL) with the zero calibrator
before assay. All samples, including the
calibrators and controls, should be
assayed at least in duplicate. It is
important to use a disposable-tip
micropipet, changing the tip between
samples, in order to avoid carryover
contamination. Positive displacement
pipets and automatic pipettor-diluters
should be used only if the possibility of
carryover has been evaluated and found
to be insignificant. Pairs of control tubes
may be spaced throughout the assay to
help verify the absence of significant drift.
Inspect the results for agreement within
tube pairs.
Record Keeping: It is good laboratory
practice to record for each assay the lot
numbers of the components used, as well
as the dates when they were first
reconstituted or opened.
Gamma Counter: To minimize the
possibility of spillover in multi-well gamma
counters, the optional total counts tubes
(T) should be separated by one or more
spaces from the other assay tubes.
Alternatively, add only 25 µL of the tracer
to each of the T tubes at step 6, and
multiply the observed counts per minute in
these tubes by 4.
Controls: Controls or serum pools with at
least two ferritin concentration levels (low
and high) should routinely be assayed as
unknowns, and the results charted from
day to day as described in Westgard JO,
et al. A multi-rule chart for quality control.
Clin Chem 1981;27:493-501. Repeat
samples are a valuable additional tool for
monitoring interassay precision.
QC Parameters: We recommend keeping
track of these performance measures:
T = Total Counts (as counts per minute)
%NSB = 100 × (Average NSB Counts / Total
Counts)
%MB = 100 × (Net MB Counts / Total Counts)
%C/MB = 100 × (Net Calibrator "C" Counts / Net
MB Counts)
Further Reading: See Dudley RA, et al.
Guidelines for immunoassay data
reduction. Clin Chem 1985;31:1264-71.
Example Run: For illustration only, not for
calculating results from another run. (See
"Example Run" table.)
Expected Values
Reference ranges were generated using
Coat-A-Count Ferritin IRMA in a study,
involving apparently healthy blood donors
who had not donated blood within a year
of this sampling.
Group
Central 95%
n
Males
21 – 334 ng/mL
226
Females
5 – 143 ng/mL
193
Laboratories should consider these results
as guidelines only. Each laboratory should
establish its own reference ranges.
Limitation
Because of the sequential format of the
Coat-A-Count Ferritin IRMA procedure, it
is very unlikely that even samples with
extremely high ferritin concentrations will
yield spuriously low results — unlike other
immunoradiometric assays, many of which
suffer from a "high-dose hook" effect.
Specimens containing ferritin values up to
125,000 ng/mL were assayed by the
Coat-A-Count Ferritin IRMA procedure,
and were found to yield results well above
2,000 ng/mL, the concentration of the
highest calibrator.
Performance Data
The following sections contain data
representative of the Coat-A-Count Ferritin
IRMA kit's performance. Ferritin results in
the sections below are expressed as
nanograms of ferritin per milliliter (ng/mL).
7
Calibration Range: Up to 2,000 ng/mL
(WHO 2nd IS 80/578).
Analytical Sensitivity: 0.5 ng/mL
High-dose Hook Effect: None up to
150,000 ng/mL
Intraassay (Within-Run): Statistics were
calculated for samples from the results of
20 pairs of tubes in a single assay. (See
"Intraassay Precision" table.)
Interassay (Run-to-Run): Statistics were
calculated for samples from the results of
pairs of tubes in 20 different assays. (See
"Interassay Precision" table.)
End-of-Run Effect: None up to
approximately 200 tubes. (See "End-ofRun Effect" table.)
Specificity: The Coat-A-Count Ferritin
IRMA antibodies were raised against
human liver ferritin and were selected to
react with both liver and spleen ferritin.
Crossreactivity to human heart ferritin is
less than 1%.
Linearity: Samples were assayed under
various dilutions. (See "Linearity" table for
representative data.)
Recovery: Samples spiked 1 to 19 with
four ferritin solutions (350, 700, 1,400 and
2,800 ng/mL) were assayed. (See
"Recovery" table for representative data.)
Bilirubin: Presence of bilirubin in
concentrations up to 200 mg/L has no
effect on results, within the precision of the
assay.
Hemolysis: Presence of packed red blood
cells in concentrations up to 30 µL/mL has
no effect on results, within the precision of
the assay.
Alternate Sample Type: To assess the
effect of alternate sample types, blood
was collected from 26 volunteers into
plain, heparinized, EDTA and Becton
®
Dickinson SST vacutainer tubes. All
samples were assayed by the Coat-ACount Ferritin IRMA procedure, with the
following results.
(Heparin) = 0.90 (Serum) + 2.64 ng/mL
r = 0.993
(EDTA) = 0.93 (Serum) – 0.02 ng/mL
r = 0.999
(SST) = 0.99 (Plain Tubes) + 0.13 ng/mL
r = 1.00
Means:
107.8 ng/mL (Serum)
8
99.1 ng/mL (Heparin)
99.8 ng/mL (EDTA)
107.2 ng/mL (SST)
Method Comparison: The Coat-A-Count
Ferritin IRMA procedure was compared to
IMMULITE Ferritin on 40 patient samples
with ferritin concentrations ranging from
approximately 0.8 to 325 ng/mL. (See
graph) By linear regression:
(CAC IRMA) = 1.08 (IML) + 1.31 ng/mL
r = 0.995
Means:
61 ng/mL (Coat-A-Count IRMA)
56 ng/mL (IMMULITE)
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anemia of rheumatoid arthritis. J Rheumatol
1977;4:389-92. 30) National Committee for
Clinical Laboratory Standards. Procedures for
the collection of diagnostic blood specimens by
venipuncture; approved standard. 4th ed.
NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA: NCCLS,
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in normal individuals and in patients with
malignant lymphoma and chronic renal failure
measured with seven different commercial
immunoassay techniques. J Clin Pathol
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their clinical significance and relevance to
patient care. J Can Med Assoc 1980;122:1240-7
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The Quality System of Siemens Healthcare
Diagnostics Inc. is certified to ISO 13485:2003.
Tables and Graphs
Example Run
Tube1
Duplicate Average
CPM2
CPM3
T7
295,773
292,929
290,085
Net
CPM4
Percent Ferritin
Bound5 ng/mL6
A
(NSB)8
192
212
202
0
—
0
B
998
1,016
1,007
805
0.7%
5
C
4,073
4,222
4,147
3,946
3.2%
25
D
15,341
15,494
15,418
15,216
12%
100
E
28,166
27,244
27,705
27,503
22%
200
F
56,504
55,439
55,972
55,770
45%
500
G
87,649
85,566
86,608
86,406
70%
1,000
H
120,828
124,038 123,836
("MB")9 127,248
100%
2,000
10
Unknowns
X1
8,576
8,697
8,637
8,435
6.8%
55
X2
23,806
24,016
23,911
23,709
19%
169
X3
39,691
40,487
40,091
39,889
32%
331
Quality Control Parameters:
T7 = 292,929 cpm
%NSB8 = 0.07%
%MB9 = 43%
11
Intraassay Precision (ng/mL)
Mean1
SD2
CV3
1
43
3.2
7.4%
2
170
7.2
4.2%
3
359
14.3
4.0%
Technical Assistance
In the United States, contact Siemens
Healthcare Diagnostics Technical
Services department.Tel: 877.229.3711.
To place an order: Tel: 800.255.3232.
9
Interassay Precision (ng/mL)
1
2
Mean
SD
Recovery (ng/mL)
3
1
8.9
0.71
8.0%
2
230
25
10.9%
3
742
52
7.0%
End-of-Run Effect (ng/mL)
1
Solution1 Observed2 Expected3
CV
1
2
Tubes
31-42
Tubes
83-94
Tubes
135-146
Tubes
187-198
Tubes
239-250
1
29
29
28
29
29
2
56
58
59
56
56
3
167
157
179
172
174
4
358
340
364
360
346
5
798
865
808
803
801
3
Linearity (ng/mL)
5
%O/E4
1 16 in 16
168
—
—
8 in 16
96
84
114%
4 in 16
49
42
117%
2 in 16
27
21
129%
1 in 16
14
11
127%
2
3
4
16 in 16
352
—
—
8 in 16
174
176
99%
4 in 16
104
88
118%
2 in 16
54
44
123%
1 in 16
26
22
118%
16 in 16
410
—
—
8 in 16
200
205
98%
4 in 16
101
103
98%
2 in 16
50
51
98%
1 in 16
23
26
88%
16 in 16
933
—
—
8 in 16
424
467
91%
4 in 16
194
233
83%
2 in 16
112
117
96%
1 in 16
55
58
95%
4
5
—
6.8
—
—
A
21
24
88%
B
38
41
93%
C
76
76
100%
91%
D
133
146
—
33
—
—
A
49
48
102%
B
67
66
102%
C
97
101
96%
D
160
171
94%
—
83
—
—
A
96
96
100%
B
112
114
98%
C
146
149
98%
D
203
219
93%
—
165
—
—
A
174
174
100%
B
184
192
96%
C
222
227
98%
108%
D
320
297
—
384
—
—
A
382
382
100%
B
392
400
100%
C
445
435
102%
D
498
505
99%
Method Comparison
400
C o a t-A -C o u n t F e rritin IR M A
Dilution1 Observed2 Expected3
%O/E4
300
200
100
0
0
100
200
300
400
IMMULITE Ferritin, ng/mL
(CAC IRMA) = 1.08 (IML) + 1.31 ng/mL
r = 0.995
10
Deutsch. Example Run: 1Röhrchen, 2Duplikat
CPM, 3Mittelwert CPM, 4Netto CPM, 5Prozent
Bindung, 6Ca. Ferritin, ng/mL, 7Total, 8%NSB,
9
%MB, 10Unbekannte,
11
Qualitätskontrollparameter. Intraassay
Precision: 1Mittelwert, 2S
(Standardabweichung), 3CV
(Variationskoeffizient). Interassay Precision:
1
Mittelwert, 2SD (Standardabweichung), 3CV
(Variationskoeffizient). Linearity: 1Verdünnung,
2
Beobachtet (B), 3Erwartet (E), 4% B/E, 516 in
16. Recovery: 1Lösung, 2Beobachtet (B),
3
Erwartet (E), 4% B/E. End-of-Run Effect:
1
Röhrchen. Method Comparison: Ferritin:
Ferritin.
Español. Example Run: 1Tubo, 2Duplicado
CPM, 3Media CPM, 4 CPM Netas, 5Porcentaje
de unión, 6Ferritina, aprox., ng/mL, 7Total,
8
%NSB, 9%MB, 10Desconocido, 11Parámetros
del control de calidad. Intraassay Precision:
1
Media, 2DS, 3CV. Interassay Precision:
1
Media, 2DS, 3CV. Linearity: 1 Dilución,
2
Observado (O), 3Esperado (E), 4%O/E, 516 en
16. Recovery: 1Solución, 2Observado (O),
3
Esperado (E), 4%O/E. End-of-Run Effect:
1
Tubos. Method Comparison: Ferritin: Ferritina.
Français. Example Run: 1Tube, 2Duplicate
CPM, 3 CPM moyen, CPM corrigé,
5
Pourcentage lié, 6Approx. Ferritine, ng/mL,
7
Total, 8%NSB, 9%MB, 10Patients, 11Paramètres
Contrôle de Qualité. Intraassay Precision:
1
Moyenne, 2SD, 3CV. Interassay Precision:
1
Moyenne, 2SD, 3CV. Linearity: 1Dilution,
2
Observé (O), 3Attendu (A), 4%O/A, 516 dans 16.
Recovery: 1Solution, 2Observé (O), 3Attendu
(A), 4%O/A. End-of-Run Effect: 1Tubes.
Method Comparison: Ferritin: Ferritine.
Italiano. Example Run: 1Provetta, 2CPM in
duplicato, 3CPM Medio, 4CPM Netti,
5
Percentuale di Legato, 6Appross. Ferritina,
ng/mL, 7Totale, 8%NSB, 9%MB, 10non noti,
11
Parametri per il Controllo di Qualità.
Intraassay Precision: 1Media, 2SD (Deviazione
Standard), 3CV (Coefficiente di Variazione).
Interassay Precision: 1Media, 2SD (Deviazione
Standard), 3CV (Coefficiente di Variazione).
Linearity: 1Diluizione, 2Osservato (O), 3Atteso
(A), 4%O/A, 516 in 16. Recovery: 1Soluzione,
2
Osservato (O), 3Atteso (A), 4%O/A. End-of-Run
Effect: 1Provette. Method Comparison: Ferritin:
Ferritina.
Português. Example Run: 1Tubo, 2Duplicado
CPM, 3Média de CPM, 4Net CPM, 5Percentagem
de Ligação, 6Aprox. Ferritina, ng/mL, 7Total,
8
%NSB, 9%MB, 10Amostras Desconhecidas,
11
Parâmetros do controlo de qualidade.
Intraassay Precision: 1Média, 2Desvio padrão,
3
Coeficiente de variação. Interassay Precision:
1
Média, 2Desvio padrão, 3Coeficiente de
variação. Linearity: 1Diluição, 2Observado (O),
3
Esperado (E), 4%O/E, 516 em 16. Recovery:
1
Solução, 2Observado (O), 3Esperado (E),
4
%O/E. End-of-Run Effect: 1Tubos. Method
Comparison: Ferritin: Ferritina.
Deutsch
Anwendung: Der Coat-A-Count Ferritin
IRMA ist ein immunradiometrischer Assay
zur quantitativen Bestimmung von Ferritin
im Serum. Der Assay ist ausschließlich für
die In-vitro- Diagnostik im Zusammenhang
mit der Diagnose von Eisenmangel oder Überschuss gedacht.
Artikelnummern: IKFE1 (100 Tests)
Die Packung mit 100 Röhrchen
enthält weniger als 20 Mikrocurie
(740 Kilobequerel) an
125
I-polyklonalen Anti-Ferritin.
Klinische Relevanz
Das Ferritin, ein Makromolekül mit einem
Molekulargewicht von 450 000 Da,
besteht aus einer Proteinhülle mit einem
1,2
Eisenspeicher im Zentrum des Moleküls.
Hohe Konzentrationen liegen in
Leberzellen, RE-Zellen, der Milz und im
Knochenmark vor. Das Ferritin ist in
diesen Geweben der Eisenspeicher für
den Organismus und übernimmt die
Aufgabe den Körper vor den toxischen
Effekten eines Eisenüberschusses zu
schützen. Gleichzeitig ist es die
3,4
Eisenreserve für die Erythropoese. Das
Ferritin kommt außerdem im Plasma vor
und ist dort ein guter Indikator für den
Eisenspeicher im Körper. Die
Untersuchung des Eisenspeichers ist auch
durch Phlebotomie,
Eisenabsorptionstudien, Leberbiopsie und
die mikroskopische Untersuchung von
Eisenablagerungen in
Knochenmarkpunktaten mit anfärbbaren
5,6
Eisenablagerungen möglich.
Der Zusammenhang zwischen Serum
Ferritin Spiegeln und den Eisenspeichern
wird unter einer Vielzahl von
physiologischen und pathologischen
Bedingungen beobachtet. Bei der Geburt
ist der Median der Ferritin-Konzentration
leicht erhöht und erreicht 6 Monate nach
der Geburt seinen Tiefpunkt mit 30 ng/ml.
Nach der Pubertät wird der Spiegel für
7
Erwachsene erreicht. Bei Männern steigt
der Wert von ca. 70 ng/ml (Median) mit 18
Jahren, in den folgenden 25 Jahren auf
ca. 200 ng/ml. Bei Frauen werden
11
prämenopausale Werte von 35 – 40 ng/ml
gefunden, die postmenopausal schnell
ansteigen. Für gesunde Erwachsene
werden Ferritin-Werte von 20 (±10) bis
300 (±100) ng/ml für Männer und 10 (±5)
bis 150 (±50) ng/ml für Frauen
angegeben. Werte unter 10 oder 15 ng/ml
sind typisch für eine Eisenmangelanämie.
Bei Eisenüberschuß sind Werte über 300
oder 400 ng/ml die Regel, während bei
einer vollentwickelten Hämochromatose,
Werte im Bereich von 1 000 – 5 000 ng/ml
gefunden werden.
Die klinischen Applikationen für FerritinMessungen sind in verschiedenen
8-11
Wie z. B.
Übersichtsartikeln dargestellt.
bei der Diagnose von Eisenmangel bzw. überschuß und in der Kontrolle von
Bedingungen und Therapien, die die
Eisenbilanz beeinflussen können. Es
wurde gezeigt, daß die Ferritin-Messung
bei der Diskriminierung der
Eisenmangelanämie von anderen
12
Anämien hilfreich ist. Ein zusätzliches
Einsatzgebiet ist die Untersuchung der
Eisenspeicher um einen rechtzeitigen
Verlust an Eisen vor Beginn der Anämie
zu erkennen. Für das nicht invasive
Monitoring des progressiven
13
Eisenverlustes in der Schwangerschaft
und bei Dialysepatienten werden serielle
14
Ferritin-Bestimmungen durchgeführt.
15-17
oder
Zusammen mit anderen Bluttests,
auch nur durch die Ferritin-Messung, wird
in verschiedenen Gruppen wie
18,19
und
Blutspendern
20,21
ein Screening
Krankenhauspatienten
auf Eisenmangel durchgeführt. Von
Bedeutung ist die Ferritin-Bestimmung
auch beim Screening auf präzirrhotisch
22
Hämochromatose und anderen Formen
23
des Eisenüberschußes. Bei Patienten
mit der Gefahr einer Eisenüberladung wie
Patienten mit regelmäßigen
24
Bluttransfusionen oder mit einer
25
Eisentherapie ist die FerritinBestimmung sinnvoll.
Die einzige Ursache, die zu einer
Erniedrigung des Ferritin-Spiegels im
Serum führt, ist der Eisenverlust, während
die Erhöhung des Ferritin-Spiegels neben
der Zunahme der Eisenspeicher auch bei
anderen Erkrankungen beobachtet wird.
Zu diesen Erkrankungen gehören:
Lebererkrankungen, Infektionen,
Leukämie, Hodgkin-Krankheit und andere
maligne Erkrankungen. In diesem Fall
12
zeigen die erhöhten Ferritinspiegel den
Verlust des Ferritin aus zerstörten
Leberzellen, eine gestörte Clearence des
Ferritins aus dem Plasma, eine
unkontrollierte Synthese des Ferritins von
Tumorzellen oder die Vergrößerung der
Eisenspeicher durch eine ineffektive
Erythropoese an. Entzündungen führen in
der Regel zu einer Erhöhung des
Ferritinspiegels, da die
Serumeisenkonzentration durch eine
Stimulierung der Ferritinproduktion in den
26-28
Dabei wird
RE-Zellen erniedrigt wird.
Eisen verwendet, welches normalerweise
an Plasmatransportproteine abgegeben
würde. Unter diesen Bedingungen bleibt
die Korrelation zwischen Speichereisen
und zirkulierendem Ferritin erhalten, mit
einer Verschiebung zu höheren Werten im
29
Referenzbereich.
Methodik
Der Coat-A-Count Ferritin IRMA ist ein
Festphasen immunradiometrischer Assay
(beschichtete Röhrchen) mit
monoklonalen und polyklonalen anti125
Ferritin Antikörpern: I-markierte
polyklonale anti-Ferritin Antikörper liegen
in der flüssigen Phase vor und
monoklonale anti-Ferritin Antikörper sind
auf der Röhrchenwand immobilisiert.
Testablauf:
Ferritin wird zwischen den auf der Wand
eines Polystyrolröhrchens immobilisierten
monoklonalen anti-Ferritin Antikörpern und
dem radioaktiv markierten polyklonalen
anti-Ferritin Tracer gebunden.
125
Ungebundene I-markierte anti-Ferritin
Antikörper werden durch Dekantieren des
Reaktionsgemisches und anschließendem
Waschen der Röhrchen entfernt; dies
reduziert die unspezifischen Bindungen
sehr stark und gewährleistet eine
exzellente Präzision bei niedrigen
Konzentrationen.
Die Ferritin Konzentration ist der nach
dem Waschen im Röhrchen verbliebenen
Radioaktivität direkt proportional. Die
Radioaktivität wird in einem GammaCounter gemessen. Die Ferritin
Konzentration in der Patientenprobe wird
durch den Vergleich der gemessenen
Counts pro Minute mit denen der
mitgelieferten Standards unterschiedlicher
Konzentration ermittelt.
Zu pipettierende Reagenzien: 2
Testdauer: 1 Stunde (auf einem
Schüttler)
Totalaktivität zum Zeitpunkt der
Markierung: ca. 300 000 cpm
Hinweise und
Vorsichtsmaßnahmen
Zur In-vitro-Diagnostik.
Reagenzien: Die Packung mit den
Reagenzien sollte bei 2–8°C in einem
Kühlschrank gelagert werden, der für
radioaktives Material ausgewiesen ist. Die
Entsorgung muss nach den jeweils
gültigen Gesetzen erfolgen.
Die Reagenzien dürfen nur bis zum
Verfallsdatum verwendet werden.
Einige Komponenten des Kits können
Material humanen Ursprungs und/oder in
anderer Weise gefährliche Inhaltsstoffe
enthalten, die es unbedingt notwendig
machen die folgenden
Vorsichtsmaßnahmen einzuhalten.
Die generell geltenden
Vorsichtsmaßnahmen sind einzuhalten
und alle Komponenten als potenziell
infektiös zu behandeln. Alle aus
menschlichem Blut gewonnenen
Materialien wurden auf Syphilis,
Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2,
Hepatitis-B-Oberflächenantigen und
Hepatitis-C-Antikörper untersucht und
negativ befundet.
Bestimmten Komponenten wurde
Natriumazid (<0,1 g/dl) hinzugefügt. Um
die Bildung von explosiven Metallaziden in
Blei- und Kupferrohren zu vermeiden,
sollten die Reagenzien nur zusammen mit
großen Wassermengen in die Kanalisation
gespült werden.
Wasser: Destilliertes bzw. deionisiertes
Wasser benutzen.
Radioaktivität
Der Umgang mit radioaktivem Material ist
in Deutschland genehmigungspflichtig.
Deshalb muss der Siemens Healthcare
Diagnostics eine Kopie der aktuellen
gültigen Umgangsgenehmigung des
Kunden vorliegen, bevor radioaktive
Reagenzien versendet werden dürfen. Die
Strahlenschutzverordnung ist zu
beachten.
Das radioaktive Material ist gemäß der
jeweiligen Umgangsgenehmigung zu
handhaben.
Die Strahlenexposition ist zu minimieren.
Spritzer sind sofort aufzuwischen und die
betroffene Oberfläche zu dekontaminieren. Aerosolbildung ist zu vermeiden.
Flüssiger und fester radioaktiver Abfall
sind unter Beachtung der gültigen
Richtlinien zu entsorgen.
Bestandteile der Testpackung:
Vorbereitung
Ferritin Antikörper-beschichtete
Röhrchen (IFE1)
Polystyrolröhrchen beschichtet mit
monoklonalen anti-Ferritin Antikörpern von
der Maus, verpackt in
wiederverschließbaren Plastikbeuteln.
Kühl lagern, vor Feuchtigkeit schützen und
nach dem Öffnen wieder sorgfältig
verschließen. Bei 2–8°C für ein Jahr ab
dem Herstellungsdatum haltbar.
IKFE1: 100 Röhrchen.
125
I Ferritin Antikörper (IFE2)
5,5 ml jodierte, polyklonale Anti-Ferritin
Antikörper von der Ziege. Bei 2–8°C für 30
Tage nach dem Öffnen, oder bis zum
Verfallsdatum auf dem Etikett haltbar.
IKFE1: 2 Flaschen.
Ferritin Standards (FEI3–9,X)
8 Flaschen, A – H, Ferritin Standards auf
Proteinbasis, mit Konservierungsmitteln.
Die Standards werden in flüssiger Form
gebrauchsfertig geliefert. Der 0-Standard
A enthält 1,0 ml, während die restlichen
Standards B – H je 0,5 ml enthalten. Bei
2–8°C bis 30 Tage nach dem Öffnen
haltbar. Nicht einfrieren.
IKFE1: 1 Set.
Die Standards enthalten 0, 5, 25, 100,
200, 500, 1 000 und 2 000 ng/ml Ferritin,
gemessen an der ”World Health
Organization's Second International
Reference Preparation” Ferritin für
Immunoassay, Nummer 80/578 [2nd IS
80/578]. Weitere Standardkurvenpunkte
können durch Mischen der Standards
hergestellt werden.
Ferritin Assay Puffer (FEAB)
11 ml gepuffertes Diluent, mit
Konservierungsmitteln. Bei 2–8°C für 30
Tage nach dem Öffnen, oder bis zum
13
Verfallsdatum auf der Flasche haltbar.
IKFE1: 2 Flaschen.
daher sind die Ergebnisse mit Vorsicht zu
interpretieren.
Gepufferte Waschlösung, Konzentrat
(2TSBW)
60 ml einer konzentrierten, gepufferten
Salzlösung mit Detergenz und
Natriumazid als Konservierungsmittel.
Unter Zuhilfenahme eines Transferbehälters jede Flasche Konzentrat mit
600 ml destilliertem oder deionisiertem
Wasser lösen, das Endvolumen beträgt
660 ml. Bei 2–8°C für 6 Monate nach
Zubereitung stabil.
IKFE1: 1 Flasche × 60 ml.
Blutentnahmeröhrchen von verschiedenen
Herstellern können differierende Werte
verursachen. Dies hängt von den
verwendeten Materialien und Additiven
(Gel oder physische Trennbarrieren,
Gerinnungsaktivatoren und /oder
Antikoagulantien) ab. Coat-A-Count
Ferritin IRMA sind nicht mit allen
möglichen Röhrchenvariationen
ausgetestet worden. Details der
getesteten Röhrchenarten sind dem
Kapitel "Alternative Probenarten" zu
entnehmen.
Erforderliche Laborgeräte und
Hilfsmittel
Gammacounter – kompatibel mit
12x75 mm Röhrchen
Schüttler – ca. 200 Zyklen pro Minute
einstellen.
Reagenzienvorbereitung
Destilliertes oder deionisiertes Wasser
Messzylinder – zum Abmessen von
600 ml.
Plastikbehälter mit Verschluss – zur
Herstellung und Lagerung der gepufferten
Waschlösung
Immunoassay
Mikropipetten: 10 µl, 100 µl und 200 µl
Dispenser – Für die Zugabe von 2,0 ml
der gepufferten Waschlösung.
Dekantierständer – erhältlich bei Siemens
Healthcare Diagnostics (Artikelnummer:
FDR).
Logarithmisches Papier, 4 Dekaden
Probengewinnung
Es ist keine besondere Vorbereitung der
Patienten nötig. Blutentnahme durch
30
Venenpunktion in Röhrchen ohne
Zusätze (ohne Antikoagulantien),
Trennung des Serums von den Blutzellen,
Abnahmezeitpunkt notieren.
Der Einsatz einer Ultrazentrifuge wird zur
Klärung von lipämischen Proben
empfohlen.
Bei hämolysierten Proben besteht die
Möglichkeit einer unsachgemäßen
Handhabung vor Eintreffen im Labor,
14
Erforderliche Menge: 10 µl Serum pro
Röhrchen.
31
Lagerung: Bei 2–8°C für 7 Tage, oder
31
bei –20°C für 2 Wochen.
Die Proben vor Testbeginn auf
Raumtemperatur (15–28°C) bringen und
vorsichtig durchmischen. Um wiederholtes
Einfrieren und Auftauen zu vermeiden bei
Bedarf portionieren. Gefrorene Proben
dürfen nicht durch Erhitzen im Wasserbad
aufgetaut werden.
Immunometrische
Testdurchführung
Alle Testkomponenten vor Testbeginn auf
Raumtemperatur (15–28°C) bringen.
1
Jeweils 2 Ferritin-Antikörperbeschichtete Röhrchen mit A
(unspezifische Bindung, 0-Standard)
und von B bis H (Maximalbindung)
beschriften. Jeweils 2 weitere
Antikörper-beschichtete Röhrchen für
Kontrollen und Patientenproben
beschriften.
Standards
ng/ml
T*
—
A (NSB)
0
B
5
C
25
D
100
E
200
F
500
G
1 000
H ("MB")
2 000
*Optional Totalaktivität
2
Jeweils 10 µl der Standards,
Kontrollen und Patientenserumproben
in die vorbereiteten Röhrchen
pipettieren.
8
Direkt auf den Boden des Röhrchens
pipettieren. Patientenproben mit
erwarteten Konzentrationen oberhalb
des Messbereichs von 2 000 ng/ml
sollten vor der Messung mit 0Standard verdünnt werden. Um
Verschleppung zu vermeiden, wird die
Verwendung von EinmalPipettenspitzen empfohlen.
Verdrängungspipetten, sowie
automatische Pipettor-Dilutoren
sollten nur verwendet werden, wenn
eine mögliche Verschleppung
untersucht und für vernachlässigbar
befunden wurde.
3
200 µl Ferritin Assay Puffer in jedes
Röhrchen (außer T-Röhrchen)
hinzufügen.
pipettieren. Für diesen Schritt und für
die Zugabe des Tracer bei Schritt 6
wird die Verwendung eines
Dispensers wird empfohlen.
Vollständig dekantieren. 2 ml
gepufferte Waschlösung in jedes
Röhrchen geben, 1 – 2 Minuten
stehen lassen, dann erneut vollständig
dekantieren. Nochmals 2 ml
Röhrchen geben, 1 – 2 Minuten
stehen lassen, dann erneut vollständig
dekantieren.
Vollständiges Entfernen der
Flüssigkeit verbessert die Präzision
deutlich. Nach dem 2. Waschgang,
mit Hilfe eines Dekantierständers alle
Röhrchen (außer die T-Röhrchen)
dekantieren und 2 – 3 Minuten umgedreht stehen lassen. Anschließend
werden die Röhrchen kräftig auf
Fließpapier ausgeklopft, um alle
restlichen Tröpfchen zu entfernen.
9
Für 1 Minute im Gamma Counter
messen.
In Mehrkanal-Gamma-Countern
sollten die T-Röhrchen mindestens 1
Position Abstand von den übrigen
Teströhrchen haben, um ein
“Spillover” zu vermeiden.
4
Für 30 Minuten auf einem Schüttler
inkubieren.
Berechnung der Ergebnisse
und Qualitätskontrolle
5
Vollständig dekantieren. 2 ml
Röhrchen hinzufügen. 1 – 2 Minuten
warten und dann erneut vollständig
dekantieren.
Um die Konzentrationen aus der Log-Log
Darstellung der Standardkurve abzulesen,
werden zunächst der Mittelwert jedes
Röhrchenpaars, bereinigt um den
Mittelwert der NSB (Standard A) Counts
pro Minute (cpm), berechnet:
Vollständiges Entfernen der
Flüssigkeit verbessert die Präzision
deutlich. Nach dem Waschen mit Hilfe
eines Dekantierständers alle
Röhrchen dekantieren und 2 – 3
Minuten umgedreht stehen lassen.
Anschließend werden die Röhrchen
kräftig auf Fließpapier ausgeklopft, um
alle restlichen Tröpfchen zu entfernen.
6
125
100 µl I Ferritin Antikörper in jedes
Röhrchen hinzufügen.
pipettieren. Die Verwendung eines
Dispenser wird empfohlen.
Die T-Röhrchen bis zur Messung
(siehe Schritt 9) beiseite stellen; sie
bedürfen keiner weiteren Behandlung.
7
30 Minuten auf einem Schüttler
inkubieren.
Netto Counts = (Mittelwert CPM) minus
(Mittelwert NSB CPM)
Anschließend wird die Bindung jedes
Röhrchenpaars als Prozent der
Maximalbindung (MB, Bmax) bestimmt
(%B/MB). Hierzu werden die mittleren
CPM des G-Standards, korrigiert um die
mittlere NSB, als 100% gesetzt:
Prozentbindung = (Netto Counts / Netto MB
Counts) × 100
Die Prozentbindungen der Standards
werden gegen die Konzentration auf
Logarithmenpapier mit je 4 Dekaden
aufgetragen und durch eine Kurve mit
bestmöglicher Annäherung an diese
Punkte verbunden. (Die einzelnen
Standardkurvenpunkte sollten jeweils mit
einem Bogen oder einer geraden Linie
aber nicht durch eine gerade Linie durch
15
alle Punkte verbunden werden.) Ferritin
Konzentrationen innerhalb des
Konzentrationsbereichs der Standards
können an der Kurve durch Interpolation
abgelesen werden. Die Prozentbindungen
der drei niedrigsten Standards können
zusätzlich auf linearem Papier gegen die
Konzentration aufgetragen werden, um
durch Interpolation Ergebnisse in der
Nähe von 0 genauer zu ermitteln.
Hinweis: Obwohl auch andere Verfahren
akzeptabel sind, hat die beschriebene
Berechnung der Daten Vorteile im Sinne
der Qualitätskontrolle. Man erhält eine
Standardkurve, die sowohl in der Log-Log,
als auch in der Lin-Lin Darstellung
weitgehend linear verläuft und sich von
Ansatz zu Ansatz nur wenig verändert.
Man erhält so auch wichtige Parameter für
die Qualitätskontrolle wie die
Prozentbindungen der Standards mit
Konzentrationen ungleich 0 (%B/Bmax oder
"%B/MB"). Mehr Informationen über die
Intra-Assay-Präzision als Funktion der
Konzentration vermittelt die direkte
Darstellung der Prozentbindung jedes
einzelnen Standard-Röhrchens und nicht
des Mittelwertes.
Alternative Berechnung: Obwohl die
Berechnung der Prozentbindung auch
direkt aus dem Mittelwert der CPM
erfolgen kann, führt die Korrektur um die
NSB normalerweise eher zu einer über
den gesamten Messbereich linear
verlaufenden Kurve. Eine Standardkurve
kann auch durch das direkte Auftragen
der CPM, bzw. mittleren CPM gegen die
Konzentration auf Log-Log oder Lin-Lin
Papier erstellt werden.
(Halblogarithmisches Papier sollte nicht
verwendet werden.) Dieses Verfahren ist
zwar einfacher, aber weniger hilfreich aus
Sicht der Qualitätskontrolle.
Computergestützte Berechnung:
"Punkt-zu-Punkt" Methoden, insbesondere
lineare und kubische-spline
Berechnungen können für den Coat-ACount Ferritin IRMA angewendet werden.
Auch wenn die Berechnung durch ein
Computer-Programm erfolgt, ist die
grafische Log-Log Darstellung der
Standardkurve (manuell oder automatisch)
als ein weiterer Schritt der
Qualitätskontrolle empfehlenswert. Für die
Berechnung der Daten sind auch sog.
logistische Verfahren anwendbar. Aus
dieser Gruppe sind die 4- oder 516
Parameter Logistik am besten geeignet.
Es ist zu berücksichtigen, dass manche
der üblichen Algorithmen sich nicht
erfolgreich annähern, selbst wenn
logistische Modelle die Daten richtig
erfassen. Wird ein logistisches Verfahren
angenommen, ist es in jedem Fall
erforderlich, die Korrektheit des täglichen
Ansatzes mit Hilfe der Rückberechnung
der Standards und anderer Parameter zu
beurteilen. Zusätzlich wird die grafische
Darstellung in Log-Log-Form empfohlen,
da diese mehr Informationen bietet als die
konventionelle halblogarithmische
Darstellung.
Proben-Handhabung: Die Anweisungen
zur Handhabung und Lagerung von
Proben und Komponenten müssen
beachtet werden. Patientenproben mit
erwarteten Konzentrationen über dem
höchsten Standard (2 000 ng/ml) sollten
vor dem Einsatz in den Test mit 0Standard verdünnt werden. Alle Proben,
inklusive Standards und Kontrollen, sollten
in Doppelbestimmung gemessen werden.
Um Verschleppung zu vermeiden ist es
wichtig, Pipetten mit Einwegspitzen zu
verwenden und diese zwischen den
Proben zu wechseln. Verdrängungspipetten, sowie automatische PipettorDilutoren sollten nur verwendet werden,
wenn eine mögliche Verschleppung
untersucht und für vernachlässigbar befunden wurde. Kontrollpaare sollten an
verschiedenen Stellen des Testansatzes
platziert werden, um eine eventuelle Drift
zu erkennen. Die Einzelergebnisse der
Duplikate sollten auf Übereinstimmung
überprüft werden.
Gamma Counter: In Mehrkanal-GammaCountern sollten die T-Röhrchen
mindestens 1 Position Abstand von den
übrigen Teströhrchen haben, um ein
“Spillover” zu vermeiden. Alternativ
können auch nur 25 µl in die Röhrchen mit
der Totalaktivität im Schritt 6 pipettiert und
anschließend die CPM mit dem Faktor 4
multipliziert werden.
Kontrollen: Kontrollen mit mindestens 2
Ferritin Konzentrationen (niedrig und
hoch) sollten routinemäßig als unbekannte
Proben eingesetzt und von Tag zu Tag
protokolliert werden.
Wiederholungsmessungen von Proben
sind ein wertvolles Hilfsmittel in der
Beurteilung der Interassay Präzision.
Qualitätskontroll-Parameter: Es wird
empfohlen die folgenden Parameter zu
protokollieren:
T = Totalaktivität (als Counts pro Minute)
%NSB = 100 × (Mittelwert NSB Counts / Total
Counts)
%MB = 100 × (Netto Counts / Total Counts)
Und die Prozentbindungen (%B/Bmax oder
"%B/MB") aller Standards mit Ausnahme
des höchsten Standards, zum Beispiel:
%C/MB = 100 × (Netto Counts Standard "C" /
Netto Counts MB)
Aufzeichnung: Es ist gute Laborpraxis
die Chargennummern, sowie das Datum
der ersten Öffnung bzw. Rekonstitution
der verwendeten Komponenten zu
protokollieren.
Literatur: Siehe auch: Dudley RA, et al.
Auswertebeispiel: Dieses Beispiel dient
nur zur Veranschaulichung und ist nicht
dazu geeignet Werte aus einem anderen
Testansatz damit zu ermitteln. (siehe
Tabelle "Example Run").
Referenzwerte
In einer Studie mit offensichtlich gesunden
Blutspendern, die mindestens 1 Jahr vor
der Blutentnahme kein Blut gespendet
hatten, wurden mit dem Coat-A-Count
Ferritin IRMA folgende Referenzbereiche
ermittelt:
Gruppe
Zentraler 95%Bereich
n
Männer
21 – 334 ng/ml
226
Frauen
5 – 143 ng/ml
193
Im Labor sollten diese Ergebnisse
lediglich als Richtwerte betrachtet werden.
Jedes Labor sollte seine eigenen
Referenzbereiche etablieren.
Grenzen der Methode
Aufgrund des sequentiellen Formats des
Coat-A-Count Ferritin IRMA Verfahrens ist
es sehr unwahrscheinlich, dass gerade
Proben mit extrem hohen Ferritin
Konzentrationen falsch erniedrigte
Ergebnisse erzielen – im Gegensatz zu
anderen immunoradiometrischen Assays,
die häufig unter einem „high-dose Hook“Effekt leiden. Proben, die Ferritin bis zu
125 000 ng/ml enthalten wurden mit dem
Coat-A-Count Ferritin IRMA Verfahren
untersucht und erzielten Werte oberhalb
von 2 000 ng/ml, der Konzentration des
höchsten Standards.
Leistungsdaten
Siehe Tabellen und Grafiken mit
repräsentativen Daten für den Assay. Die
Ergebnisse sind in ng/ml angegeben.
Messbereich: bis 2 000 ng/ml
(WHO 2nd IS 80/578).
Analytische Sensitivität: 0,5 ng/ml.
High-Dose-Hook-Effekt: keiner bis
150 000 ng/ml.
Intraassay Präzision: Statistische
Berechnung der Ergebnisse von Proben,
die in 20 Röhrchenpaaren in einem
Ansatz gemessen wurden. (Siehe Tabelle
„Intraassay-Precision“.)
Interassay Präzision: Statistische
Berechnung der Ergebnisse von 3
Proben, die in 20 Röhrchenpaaren in
verschiedenen Ansätzen gemessen
wurden. (Siehe Tabelle „InterassayPrecision“.)
"End of Run" Effekt: Tritt bis ca.
200 Röhrchen nicht auf. (siehe Tabelle
"End-of-Run Effect").
Spezifität: Die Antikörper des
Coat-A-Count Ferritin IRMA sind gegen
das humane Leber-Ferritin gerichtet und
wurden ausgewählt, um das Ferritin aus
Leber und Milz zu binden. Die
Kreuzreaktivität gegenüber humanem
Herz-Ferritin liegt unter 1%.
Linearität: Proben wurden in
verschiedenen Verdünnungen getestet.
(Repräsentative Daten entnehmen Sie
bitte der Tabelle „Linearity“.)
Wiederfindung: Proben wurden 1:19 mit
Ferritin Lösungen (350, 700, 1 400 und
2 800 ng/ml) versetzt und gemessen.
(Repräsentative Daten entnehmen Sie
bitte der Tabelle „Recovery“.)
Bilirubin: Bilirubin hat in Konzentrationen
bis zu 200 mg/l keinen Einfluss auf die
Ergebnisse, der größer als die Impräzision
des Assays selbst ist.
Hämolyse: Erythrozytenkonzentrate
haben in Konzentrationen bis zu 30 µl/ml
17
keinen Einfluss auf die Messung, der
größer als die Impräzision des Assays
selbst ist.
diagnóstico in vitro, como una ayuda en el
diagnóstico de la deficiencia o el exceso
de hierro.
Alternativer Probentyp: Um die
Auswirkungen von verschiedenen
Probenarten zu untersuchen, wurde Blut
von 26 Freiwilligen in Röhrchen ohne
Additiva, in Heparin-, EDTA- und Becton
®
Dickinson SST Vacutainer-Rörchen
gesammelt. Alle Proben wurden mit dem
Coat-A-Count Ferritin IRMA Assay mit den
nachfolgend aufgeführten Ergebnissen
bestimmt.
Referencia: IKFE1 (100 tubos)
(Heparin) = 0,90 (Serum) + 2,64 ng/ml
r = 0,993
(EDTA) = 0,93 (Serum) – 0,02 ng/ml
r = 0,999
(SST) = 0,99 (einfachen Röhrchen) + 0,13 ng/ml
r = 1,00
Mittelwerte:
107,8 ng/ml (Serum)
99,1 ng/ml (Heparin)
99,8 ng/ml (EDTA)
107,2 ng/ml (SST)
Methodenvergleich: Der Coat-A-Count
Ferritin IRMA wurde mit IMMULITE
Ferritin anhand von 40 Patientenproben
mit Ferritin Konzentrationen von ca. 0,8 –
325 ng/ml verglichen. (Siehe Grafik)
Berechnung der linearen Regression:
(CAC IRMA) = 1,08 (IML) + 1,31 ng/ml
r = 0,995
Mittelwerte:
61 ng/ml (Coat-A-Count IRMA)
56 ng/ml (IMMULITE)
Anwendungsberatung
Bei Rückfragen wenden Sie sich bitte an
Ihre Niederlassung.
Das Qualitätsmanagement-System der Siemens
Healthcare Diagnostics Inc. ist zertifiziert nach
DIN EN ISO 13485:2003.
Español
Coat-A-Count Ferritina IRMA
Utilidad del análisis: Coat-A-Count
Ferritina IRMA es un ensayo
radioinmunométrico diseñado para la
determinación cuantitativa de ferritina en
suero. Su uso es estrictamente para
18
El kit de 100 tubos contiene
menos de 20 microcurios (740
kilobequerelios) de anticuerpo
policlonal anti-ferritina marcado
125
radiactivamente con I.
Resumen y Explicación del
Test
La molécula de ferritina consiste de una
envoltura proteica (PM 450 000) y un
1,2
núcleo de hierro. Se encuentran altas
concentraciones en los hepatocitos y en
los centros de reciclaje de los eritrocitos
(células RE) del hígado, bazo y médula
ósea. En estos tejidos, la ferritina actúa
como el almacén principal del hierro
exógeno, protegiéndole frente a los
efectos tóxicos de las reservas
3,4
movilizadas para la eritropoyesis. La
ferritina también está presente en el
plasma humano, donde su concentración
es normalmente un índice tan satisfactorio
de las reservas férricas como la
flebotomía cuantitativa, los estudios de
absorción de hierro, la biopsia hepática y
el estudio microscópico de tinción de
depósitos de hierro de aspirados de
5,6
médula ósea.
Su relación con la reserva sérica se puede
observar gracias al patrón de valores de la
ferritina bajo diferentes condiciones
fisiológicas y patológicas. Para los
individuos sanos el nivel medio, elevado
en el nacimiento, alcanza un mínimo de
30 ng/ml a los seis meses de edad, y va
incrementando su nivel hasta los valores
7
de adulto a partir de la pubertad. En los
hombres, el nivel medio continúa
aumentando — desde 70 ng/ml
aproximadamente a los dieciocho años de
edad hasta 200 ng/ml transcurridos
veinticinco años — mientras que en las
mujeres existe un plató entre 35 y
40 ng/ml hasta el final de la edad fértil con
un rápido incremento posterior. Para los
adultos sanos, el nivel sérico de ferritina
ha sido establecido por diferentes autores
dentro del rango, de 20 (±10) hasta 300
(±100) ng/ml para los hombres, y de 10
(±5) hasta 150 (±50) ng/ml para las
mujeres. Concentraciones por debajo de
10 o 15 ng/ml son típicas de una anemia
ferropénica. Para una sobrecarga de
hierro, los valores entre 300 y 400 ng/ml
son normales, con niveles entre 1 000 –
5 000 ng/ml en casos de hemocromatosis.
Las aplicaciones clínicas de la
determinación de ferritina sérica han sido
8-11
Tiene un
revisadas en profundidad.
importante papel en el diagnóstico de la
deficiencia y exceso de hierro, y en el
seguimiento de condiciones y tratamientos
que amenacen el balance férrico. Es una
ayuda demostrada en la discriminación
entre anemias ferropénicas y anemias
12
debidas a otras etiologías y en la
predicción de la desaparición de las
reservas férricas antes de que curse con
anemia. Las deteminaciones seriadas de
ferritina se han utilizado para la
monitorización, no invasiva, de la
variación en las reservas férricas durante
13
14
el embarazo y en pacientes dializados.
En conjunto con otros métodos rutinarios
15-17
y por sí sola, la determinación de
ferritina ha sido usada para el screening
de deficiencias férricas en muchas
poblaciones, estableciendo los rangos de
normalidad a partir de donantes de
18,19
y de pacientes
sangre
20,21
También tiene utilidad
hospitalarios.
en el screening de hemocromatosis
22
precirrótica y otras formas de
23
sobrecarga férrica y en la monitorización
de pacientes que reciben transfusiones
24
sanguíneas regularmente o terapia
25
sustitutiva de hierro, y cuando exista
peligro de acumular reservas férricas en
cantidad excesiva.
Aunque la disminución de hierro parece
ser la única condición asociada con la
caída de los niveles séricos de ferritina, se
detectan aumentos de la misma en otras
condiciones además del aumento en la
reserva férrica, incluyendo enfermedades
hepáticas, condiciones inflamatorias,
leucemia, enfermedad de Hodgkin y en
otras enfermedades. Aquí, los niveles
aumentados pueden reflejar la liberación
de ferritina por los hepatocitos dañados, el
aclaramiento anómalo de ferritina
plasmática, síntesis de ferritina por células
tumorales, o un incremento de las
reservas férricas inducidas por una
eritropoyesis inefectiva. La inflamación
tiende a aumentar el nivel de ferritina
mientras que disminuye el nivel férrico
sérico debido a la producción
sobreestimulada de ferritina en las células
RE que usan el hierro, que de otra
manera sería liberado a las proteínas
26-28
En estas
plasmáticas transportadoras.
condiciones, se mantiene la correlación
entre reservas férricas y ferritina sérica,
pero con una desviación en los niveles
elevados — lo que hace necesario un
ajuste en los rangos de normalidad si la
determinación de ferritina sólo se utiliza
para distinguir entre reservas férricas
29
normales o disminuidas.
Principio del análisis
Coat-A-Count Ferritina IRMA es un
ensayo radioinmunométrico en fase sólida
que se basa en anticuerpos monoclonales
y policlonales anti-ferritina: anticuerpo
125
policlonal anti-ferritina marcado con I en
fase líquida y anticuerpo monoclonal antiferritina inmovilizado en la pared de un
tubo de poliestireno.
En el procedimiento:
La ferritina es capturada entre los
anticuerpos monoclonales anti-ferritina
que están inmovilizados en la superficie
interna del tubo de poliestireno y el
trazador policlonal anti-ferritina marcado
radiactivamente.
El anticuerpo anti-ferritina marcado con
125
I no unido se remueve decantando la
mezcla de reacción y lavando el tubo; esto
reduce la unión inespecífica a un nivel
muy bajo, y asegura una precisión
excelente a concentraciones bajas.
La concentración de ferritina es
directamente proporcional a la
radioactividad presente en el tubo
después del paso de lavado. La
radiactividad se mide con un contador
gama, después de lo cual se determina la
concentración de ferritina en la muestra
del paciente comparando las cuentas por
minuto de la muestra con las obtenidas
para el juego de calibradores
suministrados.
Reactivos a pipetear: 2
Tiempo total de incubación: 1 hora (en
un agitador de racks)
Cuentas totales en la iodización:
aproximadamente 300 000 cpm
Advertencias y precauciones
Para uso diagnóstico in vitro.
19
Reactivos: Almacenar de 2–8°C en una
cámara preparada para almacenar
material radioactivo. Desechar de acuerdo
a la legislación en vigor.
No usar los reactivos después de su fecha
de caducidad.
Algunos componentes suministrados en el
kit pueden contener material de origen
humano y/o otros componentes
potencialmente peligrosos que necesiten
ciertas precauciones.
Siga las precauciones universales y
manipule todos los componentes como si
fueran capaces de transmitir agentes
infecciosos. Los materiales derivados de
sangre humana han sido analizados y son
negativos para sífilis; para anticuerpos
frente al VIH 1 y 2; para el antígeno de
superficie de hepatitis B y para los
anticuerpos de hepatitis C.
Se ha usado Azida sódica, en
concentraciones menores de 0,1 g/dl,
como conservante. Para su eliminación,
lavar con grandes cantidades de agua
para evitar la constitución de residuos de
azidas metálicas, potencialmente
explosivas, en las cañerías de cobre y
plomo.
Agua: Usar agua destilada o desionizada.
Radioactividad
Una copia de cualquier certificado de
licencia de radioisótopos (específico o
general) emitido a la aduana de los
EE.UU. se registrará en los ficheros de
Siemens Healthcare Diagnostics antes de
que se puedan enviar kits o componentes
conteniendo material radioactivo. Estos
materiales radioactivos pueden adquirirse
por cualquier cliente con la licencia
específica apropiada. Con una licencia
general, estos materiales radioactivos
pueden adquirirse solo por médicos,
veterinarios en la práctica de la medicina
veterinaria, laboratorios clínicos y
hospitales — y estrictamente para la
clínica in vitro o tests de laboratorio que
no conlleven la administración interna o
externa de material radioactivo o su
radiación a humanos u otros animales. Su
adquisición, recepción, almacenaje, uso,
trasferencia y desecho están regulados y
se expenderá una licencia (general o
específica) de la Comisión Nuclear de
EE.UU. o de un Estado con el NRC para
su consiguiente control.
20
Manejar los materiales radioactivos de
acuerdo a los requerimientos de su
licencia general o específica. Para
minimizar la exposición a la radiación, el
usuario debe adherirse al cuarto conjunto
de guías publicadas por el National
Bureau of Standards con el nombre Safe
Handling of Radioactive Materials
(Handbook No. 92, issued March 9, 1964)
y en las consiguientes publicaciones de
las autoridades Federales o Estatales.
Limpiar y decontaminar rápidamente las
superficies afectadas. Evitar la generación
de aerosoles. Eliminar los residuos sólidos
radioactivos de acuerdo con los
requerimientos de su licencia. Licencias
generales (NRC Form 483) pueden
eliminar sus residuos sólidos radioactivos
como residuos no radioactivos, después
de retirar las etiquetas. Licencias
específicas (NRC Form 313) se deben
referir al Título 10, Código de
Regulaciones Federales, Parte 20. Las
licencias en Estados Asociados deben
referirse a las normativas de su
correspondiente Estado. Licencias
generales pueden eliminar sus residuos
líquidos radioactivos contenidos en este
tipo de productos como cualquier otro
material líquido, quitando las etiquetas de
los contenedores y procesándolos como
residuos sólidos. Licencias específicas
pueden eliminar pequeñas cantidades de
residuos líquidos radioactivos contenidos
en este tipo de productos como cualquier
otro material líquido. Refiérase a la
normativa aplicable a su laboratorio.
Materiales Suministrados:
Preparación Inicial
Tubos recubiertos de anticuerpo frente
a la Ferritina (IFE1)
Tubos de poliestireno recubiertos con un
anticuerpo monoclonal murino antiferritina y embalados en bolsas de cierre
hermético. Almacenar refrigerados y
protegidos de la condensación, cerrando
cuidadosamente las bolsas después de su
uso. Estable a 2–8°C por un año a partir
de la fecha de fabricación.
IKFE1: 100 tubos.
125
I anticuerpo de Ferritina (IFE2)
5,5 ml de anticuerpo policlonal antiferritina de cabra iodizado. Estable a
2–8°C durante 30 días después de su
apertura, o hasta la fecha de caducidad
impresa en el vial.
IKFE1: 2 viales.
Preparación de los reactivos
Agua destilada o desionizada
Calibradores de ferritina (FEI3–9,X)
Ocho viales de calibradores de ferritina de
base proteica, marcados A a H, con
conservante. Los calibradores se
suministran en forma líquida, listos para
usar. El calibrador cero A contiene 1,0 ml,
y los calibradores restantes, B a H,
contienen cada uno 0,5 ml. Estable a
2–8°C durante 30 días después de su
apertura. No congelar.
IKFE1: 1 juego.
Recipiente plástico con tapa – para la
preparación y el almacenamiento de la
Solución Amortiguadora de Lavado.
Los calibradores contienen
respectivamente: 0, 5, 25, 100, 200, 500,
1 000 y 2 000 nanogramos de ferritina por
mililitro (ng/ml), en términos de la
Segunda Referencia Internacional de
Preparación de Ferritina para
Inmunoanálisis, número 80/578 [2nd IS
80/578]. Los puntos de calibración
intermedios se pueden obtener
mezclando los calibradores en las
proporciones adecuadas.
Solución amortiguadora de ensayo
para ferritina (FEAB)
11 ml de solución diluyente amortiguada,
con conservante. Estable a 2–8°C durante
30 días después de su apertura, o hasta
la fecha de caducidad marcada en la
etiqueta
IKFE1: 2 viales.
Probeta graduada – para dispensar
600 ml.
Radioinmunoanálisis
Micropipetas: 10 µl, 100 µl y 200 µl
Dispensador – para dispensar 2,0 ml de la
Solución Amortiguadora de Lavado.
Rack de decantación – disponible en
Siemens Healthcare Diagnostics
(Referencia: FDR).
Papel gráfico log-log de 4 ciclos
Recogida de la muestra
El paciente no necesita estar en ayunas
así como tampoco cualquier otro tipo de
preparación. Recoger la sangre por
30
venipunción en tubos sin anticoagulante,
registrando el tiempo en que se toma la
muestra, y separar el suero de las células
por centrifugación.
Se recomienda el uso de una
ultracentrífuga para aclarar las muestras
lipémicas.
Las muestras hemolizadas podrían indicar
una mala manipulación de la muestra
antes de ser recibida por el laboratorio; en
este caso, los resultados deben
interpretarse con precaución.
Concentrado de Solución
Amortiguadora de Lavado (2TSBW)
60 ml de solución salina amortiguada, con
surfactantes y Azida sódica como
conservante. Utilizando un depósito de
transferencia, diluir el contenido de cada
frasco con 600 ml de agua destilada, para
un volumen total de 660 ml. Estable a
2–8°C durante 6 meses después de la
preparación.
IKFE1: 1 vial × 60 ml.
Los tubos para recoger sangre de
distintos fabricantes pueden producir
valores diferentes, dependiendo del
material del tubo y de los aditivos,
incluyendo barreras de gel o barreras
físicas, activadores de la coagulación y/o
anticoagulantes. El Ferritina Coat-A-Count
IRMA no ha sido analizado con todos los
distintos tipos de tubos. Para obtener
detalles sobre los tipos tubos que se han
analizado, consulte la sección de Tipos de
Muestras Alternativos.
Materiales Requeridos pero no
suministrados
Volumen requerido: 10 µl de suero por
tubo.
31
Contador Gamma compatible con los
tubos de 12 x 75 mm
Conservación: 7 días a 2–8°C , o
31
2 semanas a –20°C.
Agitador de rack – a aproximadamente
200 movimientos por minuto.
Antes del ensayo, llevar todas las
muestras a temperatura ambiente (15–
28°C) y mezclar por inversión. Alicuotar, si
es necesario, para evitar la repetición de
congelación y descongelación. No intentar
21
la descongelación de muestras
congeladas calentándolas en un baño de
agua.
Ensayo Inmunométrico
Todos los componentes deben llevarse a
temperatura ambiente (15–28°C) antes de
su uso.
1
trazador en el paso 6, se recomienda
usar un dispensador de repetición.
4
Agitar durante 30 minutos en un
agitador de racks.
5
Decantar completamente. Añadir 2 ml
de la Solución Amortiguadora de
Lavado a cada tubo. Esperar 1 a 2
minutos, luego dejar que decante
completamente.
Marcar dieciséis tubos recubiertos de
anticuerpo anti-ferritina: A (unión no
específica) y B hasta H (máxima
unión), por duplicado. Marcar tubos
adicionales recubiertos de anticuerpo,
también por duplicado, para controles
y muestras de pacientes.
Calibradores
ng/ml
T*
—
A (NSB)
0
B
5
C
25
D
100
E
200
F
500
G
1 000
H ("MB")
2 000
Eliminar toda la humedad visible para
mejorar la precisión. Después de
lavar, decantar los contenidos de
todos lo tubos usando un rack de
decantación de espuma, y permitir
que drenen durante 2 o 3 minutos.
Golpear los tubos contra papel
absorbente para eliminar las gotas
residuales.
6
Pipetear directamente en el fondo del
tubo. Se recomienda usar un
dispensador de repetición.
Dejar los tubos T a un lado para su
contaje (paso 9); no requieren más
procesamiento posterior.
7
Agitar durante 30 minutos en un
agitador de racks.
8
Decantar completamente. Añadir 2 ml
de la Solución Amortiguadora de
Lavado a cada tubo. Esperar 1 a 2
minutos, luego dejar que decante
completamente. Nuevamente, añadir
2 ml de la Solución Amortiguadora de
Lavado, esperar 1 a 2 minutos y dejar
que decante completamente.
*Cuentas totales opcionales
2
Pipetear 10 µl de los calibradores,
controles y muestras de los pacientes
en sus correspondientes tubos.
tubo. Las muestras que se espera que
contengan concentraciones de
ferritina mayores que la del calibrador
más alto (2 000 ng/ml) deberán
diluirse con el calibrador cero. Se
recomienda usar micropipetas con
puntas desechables para evitar el
arrastre de una muestra a otra. Sólo
se deberán usar pipetas de
desplazamiento positivo y equipos de
dilución automática si se ha evaluado
la posibilidad de arrastre y se ha
determinado que este sería
insignificante.
3
Añadir 200 µl de la Solución
Amortiguadora de Ensayo de Ferritina
a todos los tubos (excepto los tubos
T).
tubo. Para este paso y para añadir el
22
Añadir 100 µl del anticuerpo anti125
ferritina marcado con I a cada tubo.
Eliminar toda la humedad visible para
mejorar la precisión. Después del
segundo lavado, decantar los
contenidos de todos lo tubos (excepto
los tubos T) usando un rack de
decantación de espuma, y permitir
que drenen durante 2 o 3 minutos.
Golpear los tubos contra papel
absorbente para eliminar las gotas
residuales.
9
Contar durante 1 minuto en un
contador gamma.
En los contadores gama de varias
cabezas, los tubos de Cuentas
Totales (opcional) deberán separarse
de los otros tubos del ensayo por lo
menos un espacio para minimizar la
posibilidad de derrames.
Cálculo y Control de Calidad
Para calcular los resultados (en términos
de unidades de concentración) a partir de
la representación log-log de la curva de
calibración, corregir primero las cuentas
por minuto (CPM) de cada par de tubos,
restando la Media CPM de los tubos de
unión no específica (calibrador A).
Cuentas netas = (Media CPM) menos
(Media NSB CPM)
Luego, determinar el porcentaje de unión
(relativo al del calibrador más alto) – aquí
llamado “%B/MB” – de cada par de tubos,
como un porcentaje de “unión máxima”,
tomando como 100% a las cuentas
corregidas de NSB del calibrador más
alto.
Porcentaje de Unión = (Cuentas netas / Cuentas
MB netas) × 100
Usando un papel gráfico log-log de 4
ciclos, representar el Porcentaje de Unión
en función de la Concentración para cada
uno de los calibradores no cero, y trazar
una curva aproximando la trayectoria de
estos puntos. (Conectar los puntos de
calibración con arcos o segmentos rectos.
No intentar acomodar una sola recta a los
datos). Las concentraciones de los
controles y las concentraciones
desconocidas que estén dentro del rango
de los calibradores no cero pueden
estimarse a partir de la curva de
calibración por interpolación. Además, se
puede graficar el Porcentaje de Unión en
función de la Concentración para los tres
calibradores más bajos en un papel
gráfico lineal-lineal, para interpolar cerca
de la dosis cero.
Comentarios: Si bien se pueden utilizar
otras aproximaciones, la reducción de
datos por el método recién descrito tiene
ciertas ventajas desde el punto de vista
de control de calidad. En particular, este
produce una curva de calibración que es
relativamente lineal en las
representaciones log-log y en las
representaciones lineal-lineal, y es
relativamente estable de un ensayo a
otro. También produce parámetros de
Control de Calidad valiosos,
concretamente, valores de Porcentaje de
Unión (%B/MB) para los calibradores no
cero. Incluso se puede obtener un gráfico
más informativo que expresa la
reproducibilidad intraensayo, graficando
directamente los valores de Porcentaje de
Unión de los tubos de los calibradores
individuales, es decir, sin primero
promediar las CPM de los duplicados.
Alternativas: Si bien el Porcentaje de
Unión puede calcularse directamente de
la Media CPM, la corrección de la unión
no específica generalmente produce una
curva de calibración que es más lineal en
todo su rango. También se puede obtener
una curva de calibración graficando
directamente las CPM o la Media CPM en
función de la Concentración, ya sea en
papel gráfico log-log o en papel gráfico
lineal-lineal. (No se deberá usar papel
semilogarítmico). Esta aproximación tiene
la ventaja de la simplicidad pero es menos
deseable desde el punto de vista del
control de calidad.
Reducción de datos por ordenador: Los
métodos de “punto a punto”, incluyendo
los ajustes lineales y de spline cúbico, son
adecuados, pero, como no son muy útiles
para controlar la integridad de un ensayo,
es importante preparar el gráfico log-log
de la curva de calibración recomendado,
ya sea manualmente o por ordenador,
como un paso de control de calidad. Las
técnicas de reducción de datos que se
basan en el modelo logístico también
pueden ser aplicables. Dentro de esta
familia, las rutinas de ajuste de curvas que
se basan en la logística de 4 o 5
parámetros son las más adecuadas. Sin
embargo, algunos algoritmos que se usan
actualmente pueden no converger
exitosamente, aun cuando el modelo
logístico se cumple para los datos. Si se
adopta un método logístico, es esencial
verificar si este es apropiado para el
ensayo diario, controlando el cálculo
inverso de los calibradores y otros
parámetros. Además, una gráfica de la
curva de calibración en una
representación log-log es muy
recomendable, ya que esta es más
informativa que la gráfica semilogarítmica
convencional.
Manipulación de la muestra: Observar
cuidadosamente las instrucciones para
manipular y guardar las muestras de los
pacientes y los componentes. Antes de
analizar, diluir las muestras de los
pacientes que se espera que contengan
23
concentraciones de ferritina mayores que
la del calibrador más alto (2 000 ng/ml)
con el calibrador cero. Todas las
muestras, incluyendo los calibradores y
los controles, deberán analizarse por lo
menos por duplicado. Es importante usar
una micropipeta con punta desechable,
cambiando la punta entre muestras para
evitar la contaminación por arrastre. Sólo
se deberán usar pipetas de
desplazamiento positivo y equipos de
dilución automática si se ha evaluado la
posibilidad de arrastre y se ha
determinado que este sería insignificante.
Se pueden espaciar pares de tubos
controles a lo largo del ensayo para
ayudar a verificar que no haya una
desviación significativa. Inspeccionar la
concordancia de los resultados entre los
pares de tubos.
Contador Gama: Para minimizar la
posibilidad de derrames en los contadores
gamas multi-well, los tubos opcionales de
cuentas totales (T) deberán separarse de
los otros tubos del análisis uno o más
espacios. Alternativamente, añadir sólo
25 µl del trazador a cada uno de los tubos
T en el paso 6, y multiplicar por 4 las
cuentas por minuto observadas en estos
tubos.
Controles: Se deben analizar
rutinariamente controles o pools de suero
de al menos dos niveles distintos de
concentración (bajo y alto), como si
fuesen concentraciones desconocidas, y
los resultados diarios deben graficarse
como se describe en Westgard JO, et al.
A multi-rule chart for quality control. Clin
Chem 1981;27:493-501. Las muestras
repetidas pueden servir como una
herramienta de valor adicional para
monitorizar la precisión interensayo.
Parámetros de Control de Calidad:
Recomendamos mantener un registro de
los siguientes parámetros de rendimiento:
T = Cuentas totales (como cuentas por minuto)
%NSB = 100 × (Media cuentas NSB / cuentas
totales)
%MB = 100 × (Cuentas netas / Cuentas totales)
Y de los valores de Porcentaje de Unión
(“%B/MB”) de todos los calibradores no
cero, excepto por el más alto, por ejemplo:
%C/MB = 100 × (Cuentas netas del calibrador
"C" / Cuentas netas MB)
24
Registro de los ensayos: Es una buena
práctica de laboratorio registrar para cada
ensayo los números de lote de los
componentes usados, así como las fechas
en las que fueron abiertos por primera vez
y reconstituidos.
Más información: Ver Dudley RA, et al.
“Guidelines for immunoassay data
reduction”. Clin Chem 1985;31:1264-71.
Ejemplo: Sólo como ilustración, no se
puede utilizar para calcular resultados.
(Ver tabla "Example Run").
Valores esperados
Los intervalos de referencia se generaron
usando el procedimiento Coat-A-Count
Ferritina IRMA en un estudio en el que
participaron donantes de sangre
aparentemente sanos, quienes no habían
donado sangre dentro de un año de este
muestreo.
95% central
n
Hombres
Grupo
21 – 334 ng/ml
226
Mujeres
5 – 143 ng/ml
193
Los laboratorios deben considerar estos
resultados sólo como una guía. Cada
laboratorio deberá establecer sus propios
intervalos de referencia.
Limitación
Debido al formato secuencial del
procedimiento Coat-A-Count Ferritina
IRMA, es muy improbable que incluso las
muestras con concentraciones de ferritina
extremadamente altas produzcan
resultados falsamente bajos, a diferencia
de otros ensayos radioinmunométricos,
muchos de los cuales sufren de un efecto
de “gancho a altas dosis”. Se analizaron
muestras conteniendo valores de ferritina
de hasta 125 000 ng/ml con el
procedimiento Coat-A-Count Ferritina
IRMA, encontrándose resultados muy
superiores a 2 000 ng/ml, la concentración
del calibrador más alto.
Características analíticas
Las secciones siguientes contienen datos
representativos del rendimiento del kit
Coat-A-Count Ferritina IRMA. Los
resultados de ferritina en las secciones de
abajo están expresados en nanogramos
de ferritina por mililitro (ng/ml).
Intervalo de calibración: Hasta
2 000 ng/ml (WHO 2nd IS 80/578).
Dickinson. Todas las muestras fueron
analizadas con el procedimiento Coat-ACount Ferritina IRMA, con los siguientes
resultados.
Sensibilidad analítica: 0,5 ng/ml.
(Heparina) = 0,90 (Suero) + 2,64 ng/ml
r = 0,993
Efecto de gancho a altas dosis:
Ninguno hasta 150 000 ng/ml.
(EDTA) = 0,93 (Suero) – 0,02 ng/ml
r = 0,999
Precisión intraensayo (dentro de una
tanda): Las estadísticas se calcularon
para las muestras a partir de los
resultados de 20 pares de tubos en una
tanda. (Ver la tabla "Intraassay
Precision").
(SST) = 0,99 (tubos simples) + 0,13 ng/ml
r = 1,00
Precisión entre ensayos (de una tanda
a otra): Las estadísticas se calcularon
para las muestras a partir de los
resultados obtenidos por duplicado en 20
ensayos diferentes. (Ver la tabla
"Interassay Precision").
Efecto deriva: Ninguno hasta
aproximadamente 200 tubos. (Ver tabla
"End-of-Run Effect").
Especificidad: Los anticuerpos Coat-ACount Ferritina IRMA fueron producidos
contra ferritina humana de hígado y se
seleccionaron para reaccionar contra
ferritina de hígado y de bazo. La
reactividad cruzada con la ferritina de
corazón humano es menor de 1%.
Linealidad: Las muestras fueron
analizadas con varias diluciones. (Véase
la tabla "Linearity" para resultados
representativos.)
Recuperación: Se han analizado
muestras cargadas 1 a 19 con cuatro
soluciones (350, 700, 1 400 y
2 800 ng/ml) de ferritina. (Ver la tabla
"Recovery" para resultados
representativos).
Bilirrubina: La presencia de bilirrubina,
en concentraciones de hasta 200 mg/l, no
tiene ningún efecto sobre los resultados
en términos de precisión.
Hemólisis: La presencia de eritrocitos en
concentraciones de hasta 30 µl/ml no
tiene efecto en los resultados, en lo
concerniente a la precisión del ensayo.
Tipo de Muestra Alternativa: para
evaluar el efecto de los diferentes tipos de
muestras alternativos, se recogió sangre
de 26 voluntarios en tubos normales,
tubos con Heparina, tubos con EDTA y
®
tubos vacutainer SST de Becton
Medias:
107,8 ng/ml (Suero)
99,1 ng/ml (Heparina)
99,8 ng/ml (EDTA)
107,2 ng/ml (SST)
Comparación de los métodos: Se
comparó el procedimiento Coat-A-Count
Ferritina IRMA con el procedimiento
IMMULITE Ferritina en 40 muestras de
pacientes con concentraciones de ferritina
de 0,8 a 325 ng/ml aproximadamente.
(Ver el gráfico) Por regresión lineal:
(CAC IRMA) = 1,08 (IML) + 1,31 ng/ml
r = 0,995
Medias:
56 ng/ml (IMMULITE)
Asistencia técnica
Póngase en contacto con el distribuidor
nacional.
El Sistema de Calidad de Siemens Healthcare
Diagnostics Inc. está certificado por la ISO
13485:2003.
Français
Coat-A-Count Ferritine IRMA
Domaine d'utilisation : Coat-A-Count
Ferritine IRMA est un dosage
radioimmunométrique destiné à la mesure
quantitative de la ferritine dans le sérum. Il
est réservé à un usage diagnostic in vitro
et constitue une aide au diagnostic de
carence ou surcharge en fer.
Référence catalogue : IKFE1 (100 tubes)
Le coffret de 100 tubes contient
moins de 20 microcuries
(740 kilobecquerels) d'anticorps
25
polyclonal anti-ferritine marqué à l'iode
125 .
Introduction
La molécule de ferritine est constituée
d'une enveloppe protéique d'un poids
moléculaire de 450 000 Daltons et d'un
1,2
noyau de fer. Des concentrations
élevées sont trouvées dans les cellules du
foie, plus particulièrement dans les
cellules réticulo-endothéliales du foie, de
la rate et de la moelle osseuse. Dans ces
tissus, la ferritine assure le stockage du
fer en excès, évitant ainsi les effets
toxiques de cet excès, et représente une
réserve rapidement utilisable pour
3,4
l'érythropoïèse. La ferritine est
également retrouvée dans le plasma
humain où sa concentration est
généralement un excellent indicateur des
réserves en fer de l'organisme,
comparable aux autres méthodes
traditionnelles (dosage de la capacité
totale de fixation du fer, examen au
microscope de la moelle osseuse, biopsie
5,6
du foie ou phlébotomie).
Cette relation entre les réserves de fer et
le taux de ferritine sérique peut être
observée dans de nombreuses conditions
physiologiques et pathologiques. Pour des
individus en bonne santé, le taux moyen
de ferritine, légèrement élevé à la
naissance, baisse pour atteindre un
minimum d'une valeur d'environ 30 ng/ml
à 6 mois et augmente jusqu'au taux de
7
l'adulte qui est atteint après la puberté.
Chez les hommes, le taux moyen continue
de croître d'environ 70 ng/ml à l'âge de
18 ans jusqu'à 200 ng/ml 25 ans plus tard
alors que chez les femmes on observe un
plateau à 35 ou 40 ng/ml entre la puberté
et la ménopause et une forte
augmentation par la suite. Chez les
adultes en bonne santé, les valeurs
normales attendues en ferritine sérique
vont de 20 (±10) à 300 (±100) ng/ml pour
les hommes et de 10 (±5) à 150 (±50)
ng/ml pour les femmes. Des
concentrations inférieures à 10 ou
15 ng/ml sont le signe d'une anémie
ferriprive. Lors de surcharge en fer, des
valeurs supérieures à 300 ou 400 ng/ml
sont observées, des valeurs de 1 000 à
5 000 ng/ml sont fréquentes dans des cas
d'hémochromatose.
Les applications cliniques des dosages de
ferritine sérique ont été énormément
26
8-11
La ferritine sérique a un rôle
étudiées.
important dans le diagnostic des carences
et des surcharges en fer et dans le suivi
des pathologies et des traitements qui
peuvent entraîner des déséquilibres au
niveau du fer dans l'organisme. Ce
dosage permet de différencier les anémies
dues à une carence en fer des autres
12
types d'anémies. Il permet également de
détecter la baisse des réserves de fer
avant l'installation de l'anémie. Des séries
de dosages sont utilisées pour suivre, de
manière non invasive, la diminution
progressive des réserves de fer pendant
13
la grossesse ou chez des patients
14
régulièrement sous hémodialyse. En
complément d'autres dosages sériques de
15-17
mais aussi seul, le dosage de
routine
la ferritine a été utilisé comme test de
dépistage des carences en fer dans de
nombreux types de population, allant des
18,19
jusqu'aux patients
donneurs de sang
20,21
Le
hospitalisés non sélectionnés.
dosage de la ferritine permet également le
dépistage de l'hémochromatose
22
précirrhotique ou d'autres formes de
23
surcharge en fer. Il est également
intéressant dans le suivi de patients
24
régulièrement transfusés ou recevant un
25
traitement de substitution ferrique chez
qui le risque de surcharge en fer est très
important.
Alors que la carence en fer semble être le
seul facteur responsable de la baisse du
taux sérique de ferritine, des
augmentations du taux sont observées
non seulement en présence de réserves
en fer augmentées mais aussi dans
d'autres pathologies dont les maladies
hépatiques, les états inflammatoires, les
leucémies, la maladie de Hodgkin et
certains types de cancers. Dans ces cas,
des taux augmentés peuvent refléter soit
la libération de ferritine à partir des
cellules hépatiques endommagées, soit
une altération de la clairance de la ferritine
plasmatique, soit une synthèse de ferritine
par des cellules tumorales ou une
augmentation des réserves en fer induite
par une érythropoïèse défectueuse.
L'inflammation tend à augmenter le taux
de ferritine alors qu'elle diminue la
concentration de fer sérique en stimulant
la production de ferritine par les cellules
réticulo-endothéliales du foie, mobilisant
ainsi le fer qui aurait normalement dû être
libéré et se fixer aux protéines de
26-28
Dans ces
transport plasmatiques.
conditions et dans d'autres cas, le rapport
entre les réserves de fer et la ferritine
circulante existe toujours, mais avec une
déviation vers des valeurs plus hautes,
nécessitant un ajustement des valeurs de
référence si le dosage de la ferritine est
utilisé pour différencier des réserves
29
normales des carences en fer.
Principe du test
Coat-A-Count Ferritine IRMA est un
dosage radioimmunométrique en phase
solide utilisant des anticorps monoclonaux
et polyclonaux anti-ferritine: un anticorps
polyclonal anti-ferritine, marqué à l'iode
125, en phase liquide et un anticorps
monoclonal anti-ferritine fixé à la paroi du
tube en polystyrène.
Dans le protocole:
La ferritine est capturée entre l'anticorps
monoclonal anti-ferritine fixé à la surface
interne du tube en polystyrène et
l'anticorps polyclonal anti-ferritine du
traceur radiomarqué.
L'anticorps libre anti-ferritine marqué à
l'iode 125 est éliminé du mélange
réactionnel par décantation et lavage du
tube; il en résulte une très faible liaison
non spécifique, assurant ainsi une
excellente précision pour les valeurs
basses.
La concentration de ferritine est
directement proportionnelle à la
radioactivité présente dans le tube après
l'étape de lavage. La radioactivité est
mesurée grâce à un compteur gamma et
les concentrations de ferritine dans les
échantillons de patients sont obtenues en
comparant les cpm du patients à ceux
obtenus par la gamme d'étalonnage.
Réactifs à distribuer : 2
Temps d'incubation totale : 1 heure (sur
un portoir mélangeur)
Activité totale en début de marquage :
environ 300 000 cpm
Précautions d'emploi
Réservé à un usage diagnostique in vitro.
Réactifs : Conserver à +2/+8°C dans un
réfrigérateur autorisé à recevoir du
matériel radioactif. Éliminer les déchets
conformément aux lois en vigueur.
Ne pas utiliser les réactifs au delà de leur
date d'expiration.
Certains composants fournis avec ce
coffret peuvent contenir des agents
humains et/ou d'autres éléments
potentiellement infectieux qui nécessitent
certaines précautions.
Respecter les précautions d'emploi et
manipuler tous les composants du coffret
comme des produits potentiellement
infectieux. Les réactifs dérivés de produits
humains et utilisés dans ce coffret ont subi
un test sérologique pour la Syphilis et des
tests de dépistage pour les anticorps antiVIH1 et 2, anti-HCV et pour l'antigène de
surface de l'hépatite B, qui se sont tous
avérés négatifs.
De l'azide de sodium à des concentrations
inférieures à 0,1 g/dl a été ajouté comme
conservateur ; lors de l'élimination,
l'évacuer avec de grandes quantités d'eau
pour éviter une accumulation d'azides
métalliques explosifs dans les
canalisations.
Eau : utiliser de l'eau distillée ou
désionisée.
Radioactivité
Ce coffret de réactif est reservé à l'usage
in vitro (Autorisation DGSNR).
Règles de base de protection contre les
rayonnements ionisants et précautions
d'emploi.
Ce produit radioactif ne peut être reçu,
acheté, détenu ou utilisé que par des
personnes autorisées à cette fin et dans
des laboratoires dotés de cette
autorisation. Cette solution ne peut en
aucun cas être administrée à l'homme ou
aux animaux. Respecter impérativement
les dates de péremption indiquées sur
l'emballage extérieur et sur les étiquettes
des différents réactifs du coffret. Tous les
réactifs, dont les tubes revêtus
d'anticorps, doivent être conservés à
+ 4/+ 8° C dans leur conditionnement
d'origine avant d'être utilisés. L'achat, la
possession, l'utilisation et l'échange de
matières radioactives sont soumis aux
réglementations en vigueur dans le pays
de l'utilisateur. Les règles de base de
protection contre les rayonnements
ionisants doivent être respectées selon
des procédures en vigueur. Ne pas
pipeter des solutions radioactives avec la
bouche. Eviter le contact direct avec la
27
peau ou les muqueuses de tout produit
radioactif en utilisant des blouses et gants
de protection. Toute manipulation de
matières radioactives se fera dans un
local ad hoc éloigné de tout passage. Les
produits radioactifs seront stockés dans
leur conditionnement d'origine dans un
local approprié. Un cahier de réception et
de stockage de produits radioactifs sera
tenu à jour. Le matériel de laboratoire et la
verrerie qui ont été contaminés doivent
être éliminés au fur et à mesure afin
d'éviter une contamination croisée de
plusieurs isotopes. Chaque contamination
ou perte de substance radioactive devra
être réglée selon les procédures établies.
Toute mise aux déchets de matière
radioactive se fera en accord avec les
réglementations en vigueur. Ne pas
manger, ni boire, ni fumer, ni appliquer
des cosmétiques dans les laboratoires où
des produits radioactifs sont utilisés. Les
réactifs radioactifs ne peuvent être vendus
qu'à des personnes habilitées à manipuler
des substances radioactives.
Matériel Fourni :
Préparation Initiale
Tubes revêtus d'anticorps anti-ferritine
(IFE1)
Tubes en polystyrène revêtus d'anticorps
monoclonal murin anti-ferritine,
conditionnés dans des sachets
hermétiques à glissière. Les conserver
réfrigérés et protégés de l'humidité, bien
refermer les sachets après utilisation.
Stable à +2/+8°C jusqu'à la date
d'expiration notée sur le sachet.
IKFE1 : 100 tubes.
Anticorps anti-ferritine marqué à l'iode
125 (IFE2)
5,5 ml anticorps polyclonal de chêvre antiferritine marqué à l'iode 125. Le réactif est
fourni sous forme liquide, prêt à l'emploi.
Stable à +2/+8°C pendant 30 jours après
ouverture, ou jusqu'à la date d'expiration
marquée sur l'étiquette.
IKFE1 : 2 flacons.
Standards Ferritine (FEI3–9,X)
Huit flacons, étiquetés de A à H, de
standard ferritine dans une matrice
protéine en tampon, avec conservateur.
Les standards sont fournis sous forme
liquides, prêts à l'emploi, le flacon de
standard zéro A contient 1 ml, les autres
28
flacons de standard, B à H, chacun 0,5 ml
Stable à +2/+8°C pendant 30 jours après
ouverture. Ne pas congeler.
IKFE1 : 1 jeu.
Les standards contiennent respectivement
0, 5, 25, 100, 200, 500, 1 000 et 2 000
nanogrammes de ferritine par millilitre
(ng/ml) obtenus à partir de la seconde
préparation internationale de référence de
ferritine pour immunodosage de l'OMS
80/578 (2nd IS 80/578). Des points
intermédiaires peuvent être obtenus en
mélangeant des standards dans des
proportions compatibles.
Tampon de dosage Ferritine (FEAB)
11 ml de diluant tampon avec
conservateur. Stable à +2/+8°C pendant
30 jours après ouverture, ou jusqu'à la
date d'expiration marquée sur l'étiquette.
IKFE1 : 2 flacons.
Solution de tampon de lavage
concentrée (2TSBW)
60 ml d'une solution tampon saline
concentrée, avec surfactants et azide de
sodium comme conservateur. Utiliser un
récipient de transfert, diluer le contenu de
chaque flacon avec 600 ml d'eau distillée,
pour obtenir un volume total de 660 ml.
Stable à +2/+8°C 6 mois après
préparation.
IKFE1 : 1 Flacon x 60 ml.
Matériel requis mais non fourni
Compteur Gamma – permettant
l'utilisation de tubes standards 12x75 mm
Agitateur — environ 200 tpm.
Préparation des réactifs
Eau distillée ou désionisée
Eprouvette graduée — pour distribuer
600 ml.
Flacon de conservation en plastique avec
couvercle— pour la préparation et le
stockage de la solution de tampon de
lavage.
Immunodosage
Micropipettes: 10 µl, 100 µl et 200 µl
Distributeur — pour distribuer 2,0 ml de
solution de tampon de lavage.
Un portoir de décantation – disponible
chez Siemens Healthcare Diagnostics
(Référence catalogue : FDR).
Papier graphe Log-log 4-cycles
Recueil des échantillons
Le patient n'a pas besoin d'être à jeun et
aucune préparation spéciale n'est requise.
30
Prélever le sang par ponction veineuse
sur tubes secs (sans coagulants) en
évitant l'hémolyse, et séparer le sérum
des cellules. Noter l'heure de
prélèvement.
Il est recommandé de clarifier les
échantillons hyperlipémiques par
ultracentrifugation.
Des échantillons hémolysés peuvent être
révélateurs d'une préparation inadéquate
du prélèvement avant son envoi au
laboratoire ; il faudra donc interpréter les
résultats avec prudence.
2
Conservation : 7 jours à +2/+8°C ou
31
2 semaines à –20°C.
Chaque composant doit être à
température ambiante avant utilisation
(15°C–28°C).
1
Etiqueter 16 tubes coatés d'anticorps
anti-ferritine en duplicate, A (liaison
non spécifique) et de B à H (liaison
maximale LM). Etiqueter les tubes
coatés d'anticorps supplémentaires,
également en duplicate, pour les
échantillons de patients et les
contrôles.
—
A (LNS)
0
B
5
C
25
D
100
E
200
F
500
G
1 000
H ("LM")
2 000
Pipeter 10 µl de chaque standard,
contrôle et échantillon sérique de
patient dans les tubes préparés.
Distribuer directement au fond du
tube. Les échantillons de patients
suspectés de contenir des
concentrations de ferritine supérieures
au standard le plus élevé
(2 000 ng/ml) doivent être dilués avec
le standard zéro avant le dosage. Il
est bon d'utiliser des embouts de
micropipettes jetables, de changer
d'embout entre les échantillons de
manière à éviter toute contamination.
Les pipettes à « capillaire » et les
pipetteurs-diluteurs automatiques ne
doivent être utilisés que si le risque de
contamination a été évalué et jugé
insignifiant.
Volume nécessaire : 10 µl of sérum par
tube.
Protocole de dosage
Immunométrique
ng/ml
T*
*Tubes T activité totale optionnels
Des tubes pour prélèvements sanguins
provenant de fabricants différents peuvent
donner des résultats différents, selon les
matériaux et additifs utilisés, y compris
gels ou barrières physiques, activateurs
de la coagulation et/ou anticoagulants. Le
coffret Ferritine Coat-A-Count IRMA n'a
pas été testé sur tous les types de tubes
possibles. Veuillez consulter le chapitre
intitulé Autres Types d'Échantillons pour
plus de renseignements sur les tubes qui
ont été évalués.
Avant le dosage, laisser les échantillons
revenir à température ambiante (15–
28°C), mélanger doucement par rotations
ou retournement. Aliquoter, si nécessaire,
afin d'éviter de répéter les cycles
congélation / décongélation. Ne pas tenter
de décongeler les spécimens congelés à
l'aide d'un bain marie.
Standards
3
Ajouter 200 µl du tampon du dosage
(FEAB) dans chaque tube (sauf
tubes T).
tube. Une multipette est
recommandée.
4
Incuber 30 minutes sous agitation.
5
Décanter complètement. Ajouter à
chaque tube 2 ml de solution tampon
de lavage. Attendre 1 à 2 minutes et
décanter parfaitement. Ajouter de
nouveau 2 ml de solution tampon de
lavage, attendre 1 à 2 minutes et
décanter totalement.
Eliminer toute trace d'humidité pour
améliorer la précision. Après le
lavage, utiliser un portoir de
décantation, décanter le contenu de
chacun des tubes (excepté les tubes
T) et laisser égoutter pendant 2 ou 3
minutes. Retourner alors
29
6
vigoureusement les tubes sur du
papier absorbant afin d'éliminer les
gouttelettes résiduelles.
liaison maximale (LM), corrigée des cpm
dus au LNS des tubes H tubes considérés
à 100%:
Ajouter 100 µl d'anticorps anti-ferritine
marqué à l'iode 125 dans chaque
tube.
% liaison = (cpm corrigés / cpm corrigés LM) ×
100
tube. Une multipette est
recommandée.
Les tubes T peuvent être mis de côté
jusqu'au comptage (étape 9); ils n'ont
besoin d'aucun autre traitement.
7
Incuber 30 minutes sous agitation.
8
Décanter complètement. Ajouter à
chaque tube 2 ml de solution tampon
de lavage. Attendre 1 à 2 minutes et
décanter parfaitement. Ajouter de
nouveau 2 ml de solution tampon de
lavage, attendre 1 à 2 minutes et
décanter totalement.
Eliminer toute trace d'humidité pour
améliorer la précision. Après le
second lavage, utiliser un portoir de
décantation, décanter le contenu de
chacun des tubes (excepté les tubes
T) et laisser égoutter pendant 2 ou 3
minutes. Retourner alors
vigoureusement les tubes sur du
papier absorbant afin d'éliminer les
gouttelettes résiduelles.
9
Compter 1 minute dans un compteur
gamma.
Pour les compteurs gamma multipuits, les tubes T (optionnels) doivent
être séparés des autres tubes par au
moins un espace, afin de minimiser
les risques de contamination.
Calcul des Résultats et
Contrôle de Qualité
Pour calculer les concentrations de
ferritine à partir d'une courbe standard
représentée en log-log, il faut, dans un
premier temps, corriger les coups par
minute (cpm) de chaque paire de tubes en
soustrayant la moyenne des cpm des
tubes à liaison non spécifique (standard
A):
CPM corrigés = (Moyenne cpm) moins
(Moyenne cpm LNS)
Puis déterminer pour chaque doublet la
capacité de liaison en pourcentage
(%B/B2000, ici nommée "%B/LM") de
30
Utiliser le papier log-log 4 cycles pour la
construction de la courbe, en portant sur
l'axe des ordonnées les pourcentages de
liaison, et sur l'axe des abscisses les
valeurs des standards différents de zéro.
Tracer la courbe qui passe
approximativement par ces points. Relier
les points par des arcs ou des segments
de droite. Ne pas chercher à réaliser une
seule droite à partir des résultats. Les
concentrations des contrôles et des
inconnus dans le domaine de mesure du
standard zéro peuvent être lues à partir de
la droite par interpolation. Il est possible
de tracer un autre graphe à partir des 3
premiers standards pour apprécier les
valeurs proches de zéro.
Commentaires : Bien que d'autres
approches de calcul soit aussi
acceptables, la réduction des données
avec la méthode indiquée ci-dessus a
certains avantages du point de vue du
contrôle de qualité. En particulier, elle
donne une courbe d'étalonnage qui est
relativement linéaire avec les
représentations log-log et linéaire-linéaire,
et est relativement stable d'une dosage à
l'autre. Elle donne également des
paramètres déterminants pour le contrôle
de qualité, plus précisément, les valeurs
de % de liaison (%B/B2000 ou "%B/LM)
pour les standards différents de zéro. Un
graphique encore plus utile, donnant une
idée de la reproductibilité intra-essai, peut
être obtenu en représentant directement
le pourcentage de liaison de chaque
standard, par exemple sans faire un calcul
de valeur moyenne à partir des cpm des
doublets.
Alternatives : Le pourcentage de liaison
peut être aussi calculé directement à partir
de la moyenne des cpm, la correction par
la liaison non spécifique produit
habituellement une courbe de calibration
qui est pratiquement linéaire sur tout le
domaine. Une courbe de calibration peut
être aussi créée en portant directement
sur l'ordonnée les cpm ou la moyenne des
cpm et en abscisse la concentration sur
du papier log-log ou linéaire-linéaire (le
papier semi-log ne doit pas être utilisé).
Cette méthode à l'avantage de sa
simplicité mais elle est moins
recommandée pour ce qui concerne le
Contrôle de Qualité.
Traitement informatique des données :
Les méthodes "Point-par-point", incluant
les fonctions de lissage linéaire, peuvent
être utilisées; bien qu'elles ne permettent
qu'une faible assistance pour le suivi de la
qualité des tests, il est important de tracer
en log-log, selon les recommandations, la
courbe d'étalonnage, soit manuellement
soit informatiquement, en considérant que
c'est une étape du Contrôle de Qualité. Le
traitement des données utilisant des
fonctions polynomiales de 4ème ou 5ème
degré est aussi possible et est adapté.
Garder à l'esprit, cependant, que certains
algorithmes actuellement utilisés peuvent
ne pas être adaptés. Si une de ces
méthodes semble adaptée, il est essentiel
de vérifier qu'elle reste appropriée dans le
temps, par recalcul des concentration de
standards et d'autres paramètres. De plus,
un tracé log-log de la courbe de
calibration est fortement recommandé car
il est plus informatif que le tracé habituel
en semi-log.
Traitement des échantillons : Les
recommandations données concernant
l'utilisation et la conservation des sérums
doivent être respectées. Les échantillons
de patients suspectés de contenir des
concentrations de ferritine supérieures au
standard le plus élevé (2 000 ng/ml)
doivent être dilués avec le standard zéro
avant le dosage. Tous les échantillons,
standards et contrôles inclus, doivent être
dosés en duplicate. Il est important
d'utiliser des micropipettes à embouts
jetables, de changer d'embout entre les
échantillons de manière à éviter toute
contamination. Les pipettes de transfert et
les pipeteurs diluteurs automatiques ne
doivent être utilisés que si le risque de
transmission de contamination a été
évalué et considéré comme insignifiante.
Les doublets de tubes de contrôles
doivent être espacés au long de la série
de dosage afin de vérifier l'absence de
dérive significative. Vérifier la
concordance des résultats entre les
doublets de tubes.
autres tubes par au moins un espace. En
alternative, il est possible d'ajouter
uniquement 25 µl (au lieu de 100 µl)et de
multiplier par 4 le nombre de cpm obtenus
comme activité totale.
Contrôles : Les contrôles ou des pools de
sérum avec au moins deux niveaux de
concentration de ferritine (bas et élevé)
doivent être dosés en routine comme
inconnus, et les résultats notés jour après
jour comme décrit par exemple dans
Westgard JO, et al. A multi-rule chart for
quality control. Clin Chem 1981;27:493501. Un redosage d'échantillon peut être
précieux pour suivre la précision inter
essai.
Paramètres du Contrôle de Qualité :
Nous recommandons de garder une trace
de ces résultats de performances:
T = Activité totale (cpm)
%LNS = 100 × (Moyenne des cpm du LNS /
cpm Totaux)
%LM = 100 × (cpm corrigés LM / cpm totaux)
Et toutes les valeurs de pourcentage de
liaison (%B/B2000 ou "%B/LM") sauf la plus
élevée des standards différents de zéro,
par exemple:
%C/LM = 100 × (cpm standard C corrigé / cpm
LM corrigé)
Conservation des données : Il est bon
d'enregistrer pour chaque dosage les
numéros de lots et la date de
reconstitution et/ou ouverture des
composants utilisés.
Bibliographie : Se reporter à Dudley RA,
et al. Guidelines for immunoassay data
Exemple de série : A titre d'exemple
uniquement, et non pour calculer des
résultats provenant d'une autre série. (Voir
le tableau “Example Run”.)
Valeurs de référence
Ces valeurs de référence ont été
obtenues avec le dosage Coat-A-Count
Ferritine IRMA dans une étude de
donneurs de sang apparemment en
bonne santé et n'ayant pas donné de sang
dans l'année précédent ce prélèvement.
Compteur Gamma : Pour minimiser
l'éventualité d'une contamination dans le
compteur gamma multipuits, il convient de
séparer les tubes d'activité totale T des
31
Domaine Central
95%ile
n
Hommes
21 – 334 ng/ml
226
Femmes
5 – 143 ng/ml
193
Groupe
Ces valeurs sont données à titre indicatif
uniquement.Chaque laboratoire devra
établir ses propres valeurs de référence.
Limites
Du fait de son format séquentiel (2 étapes)
le dosage Coat-A-Count Ferritine IRMA
n'est pratiquement pas (contrairement à
d'autres dosages immunométriques) sujet
à l'effet “crochet” rencontré pour des
échantillons à très fortes concentrations
donnant de fausses valeurs basses : des
échantillons contenant des taux de
ferritine supérieurs à 125 000 ng/ml dosés
avec le coffret Coat-A-Count Ferritine
IRMA ont donnés des résultats supérieurs
à 2 000 ng/ml, soit le standard le plus
élevé du dosage.
sélectionnés pour leur réactivité vis à vis
de la ferritine de le rate en plus de celle du
foie. La réaction croisée avec la ferritine
du cœur est inférieure à 1%.
Test de dilution : Des échantillons ont
été dosés à différentes concentrations.
(Voir le tableau « Linearity » pour des
données représentatives.)
Test de récupération : 3 échantillons ont
été chargés dans la proportion 1 à 19
avec 4 solutions de ferritine (350, 700,
1 400 et 2 800 ng/ml) puis dosés pour ce
test de récupération. (Voir le tableau
« Recovery » pour des données
représentatives.)
Bilirubine : La présence de bilirubine ne
présente aucun effet sur les résultats ni
sur la précision du dosage si la
concentration ne dépasse pas 200 mg/l.
Hémolyse : La présence d'agrégat
d'hématies jusqu'à une concentration de
30 µl/ml, n'a aucun effet sur les résultats
quant à la précision du dosage.
Les paragraphes suivants donnent des
données représentatives du dosage
Coat-A-Count Ferritine IRMA. Les
concentrations de ferritine sont exprimées
en nanogrammes de ferritine par millilitre
(ng/ml).
Autres types d'échantillons : pour
estimer l'effet de l'utilisation de différents
type d'échantillons, 26 volontaires ont été
prélevés sur tubes secs, héparinés, EDTA
®
et sur tubes vacutainer SST Becton
Dickinson. Tous les échantillons ont été
dosés avec le protocole Coat-A-Count
Ferritine IRMA et ont donné les résultats
suivants.
Intervalle de linéarité : jusqu'à
2 000 ng/ml (WHO 2nd IS 80/578).
(Hépariné) = 0,90 (Sérum) + 2,64 ng/ml
r = 0,993
Sensibilité analytique : 0,5 ng/ml.
(EDTA) = 0,93 (Sérum) – 0,02 ng/ml
r = 0,999
Performances du test
Effet crochet : aucun jusqu'à
150 000 ng/ml.
Précision intra-dosage (au sein d'une
même série) : Les calculs ont été
effectués à partir des résultats de 20
dosages en double pour chacun des 3
échantillons dans une seule série. single
(Voir le tableau « Intraassay Precision ».)
Précision inter-dosage (entre plusieurs
séries) : Calculée sur 3 échantillons
analysés en double dans 20 séries. (Voir
le tableau « Interassay Precision ».)
Effet de la position des tubes : Aucun
jusqu'à 200 tubes. (Voir le tableau « Endof-Run Effect ».)
Spécificité : Les anticorps du coffret
Coat-A-Count Ferritine IRMA ont été
produits à partir de la ferritine du foie puis
32
(SST) = 0,99 (tubes ordinaires) + 0,13 ng/ml
r = 1,00
Moyennes :
107,8 ng/ml (Sérum)
99,1 ng/ml (Hépariné)
99,8 ng/ml (EDTA)
107,2 ng/ml (SST)
Comparaison de méthodes : Le dosage
Coat-A-Count Ferritine IRMA a été
comparé au dosage IMMULITE Ferritine
sur 40 échantillons de patients présentant
des concentrations de 0,8 to 325 ng/ml.
(Voir le graphique) Par régression
linéaire :
(CAC IRMA) = 1,08 (IML) + 1,31 ng/ml
r = 0,995
Moyennes :
56 ng/ml (IMMULITE)
Assistance technique
Contacter votre distributeur national.
Le Système Qualité de Siemens Healthcare
Diagnostics Inc. est certifié ISO 13485:2003.
Italiano
Coat-A-Count Ferritina IRMA
Uso: Il dosaggio Coat-A-Count Ferritina
IRMA è un dosaggio immunoradiometrico
per la determinazione quantitativa della
ferritina nel siero. E' a solo uso
diagnostico in vitro quale ausilio nella
diagnosi della carenza o dell'eccesso di
ferro.
Codice: IKFE1 (100 provette)
Il kit da 100 determinazioni
contiene meno di 20 microcurie
(740 kilobecquerel) di un
anticorpo radioattivo policlonale anti125
ferritina marcato con I .
Riassunto e Spiegazione del
Test
La molecola di ferritina è formata da una
proteina a conchiglia (PM 450 000) e da
1,2
un core di ferro. Concentrazioni elevate
sono riscontrabili nelle cellule del fegato e
nei centri di riciclo degli eritrociti (cellule
RE) del fegato, della milza e del midollo
osseo. In questi tessuti, la ferritina serve
quale principale riserva del ferro in
eccedenza, proteggendo il corpo dagli
effetti tossici e mantenendo una riserva
3,4
pronta all'uso per l'eritropoiesi. La
ferritina è anche presente nel plasma
umano, dove la sua concentrazione
costituisce un indice soddisfacente delle
riserve di ferro cosiccome misurate dalla
flebotomia quantitativa, dagli studi di
assorbimento del ferro, dalla biopsia del
fegato e dall'esame al microscopio di
frammenti del midollo osseo per
5,6
l'individuazione di depositi di ferro.
Questo rapporto con le riserve di ferro si
vede nell'andamento dei valori di ferritina
nel siero in svariate condizioni fisiologiche
e patologiche. Per individui in buona
salute il livello medio, leggermente elevato
alla nascita, raggiunge un valore di circa
30 ng/mL a sei mesi, con un innalzamento
7
a livelli adulti che avviene con la pubertà
Negli uomini, il livello medio continua a
salire – da circa 70 ng/mL all'età di diciotto
anni fino a circa 200 ng/mL venticinque
anni dopo – mentre nelle donne si
raggiunge un plateau a 35 o 40 ng/mL
durante l'età fertile ed un repentino
innalzamento dopo. Negli adulti in buona
salute, il livello di ferritina nel siero è stato
riscontrato variare da 20 (±10) fino a
300 (±100) ng/mL per gli uomini e 10 (±5)
fino a 150 (±50) ng/mL nelle donne.
Concentrazioni al di sotto di 10 o
15 ng/mL sono tipiche dell'anemia
semplice dovuta a carenza di ferro. Per
concentrazioni elevate di ferro, valori al di
sopra di 300 o 400 ng/mL sono la regola,
livelli dell'ordine di 1 000 – 5 000 ng/mL
sono comuni in casi di emocromatosi
conclamata.
Le applicazioni cliniche del dosaggio della
ferritina sierica hanno subito ampie
8-11
Essa ha un ruolo importante
modifiche.
nella diagnosi della carenza o eccesso di
ferro, e nella gestione delle condizioni e
delle terapie che costituiscono una
minaccia per l'equilibrio del ferro. Si è
rivelata di grande aiuto nel discriminare tra
anemia dovuta a carenza di ferro da altri
12
tipi di anemia dovuti ad altre cause e nel
rivelare la sparizione di riserve di ferro
prima dell'inizio dell'anemia. Sono state
utilizzate determinazioni seriali per
monitorare, in maniera non invasiva, la
progressiva erosione delle riserve di ferro
13
durante la gravidanza ed in pazienti
14
sottoposti a dialisi. Sia con altri test
15-17
di routine che da solo, il
ematochimici
dosaggio della ferritina è stato utilizzato
per effettuare lo screening sulla carenza di
ferro in una popolazione varia
18,19
e
comprendente donatori di sangue
20,21
Si
pazienti ospedalieri non selezionati.
è rivelato utile anche nello screening di
22
pazienti affetti da emocromatosi
precirrotica ed in altre forme di eccesso di
23
ferro e nel monitoraggio di pazienti che
24
ricevono regolari trasfusioni di sangue o
25
terapia per il ripristino del ferro e sono
quindi a rischio per l'accumulo eccessivo
di riserve di ferro.
Benchè la deplezione del ferro sembri
essere l'unica condizione associata alle
riduzioni dei livelli di ferritina nel sangue,
sono stati osservati innalzamenti non solo
in presenza di un aumento delle riserve di
33
ferro, ma anche in diverse altre situazioni,
inclusi i disturbi di fegato, le infiammazioni,
la leucemia, la malattia di Hodgkin e altre
patologie maligne. Qui, livelli accresciuti
possono riflettere la fuoriuscita di ferritina
dalle cellule del fegato danneggiate, una
clearance anomala della ferritina dal
plasma, la sintesi della ferritina da cellule
tumorali o un'espansione delle riserve di
ferro indotta da un'eritropoiesi inefficace.
L'infiammazione tende a stimolare una
produzione maggiore di ferritina nelle
cellule RE, utilizzando il ferro che
altrimenti verrebbe rilasciato nelle proteine
26-28
In questa ed
plasmatiche di trasporto.
in altre condizioni, la correlazione tra
riserve di ferro e ferritina in circolo
continua a mantenersi, ma con una
tendenza verso i valori alti – che
necessitano di un aggiustamento nel
range di riferimento se il dosaggio della
ferritina viene sempre usato per
distinguere tra riserve di ferro normali o
29
carenti.
Principio del Dosaggio
Il Dosaggio Coat-A-Count Ferritina IRMA
è un dosaggio immunoradiometrico in fase
solida basato su anticorpi monoclinali e
policlonali anti-ferritina: un anticorpo
125
policlonale anti-ferritina marcato con I in
fase liquida, un anticorpo monoclonale
anti-ferritina adeso alle pareti di una
provetta di polistirene.
Nella Procedura:
La Ferritina è catturata tra gli anticorpi
monoclonali anti-ferritina adesi alla
superficie interna della provetta di
polistirene ed al tracciante policlonale antiferritina radiomercato.
L'anticorpo non legato anti-ferritina
125
marcato con I è rimosso decantando la
miscela di reazione e lavando la provetta;
ciò riduce il legame non specifico ad un
livello molto basso, ed assicura
un'eccellente precisione low-end.
La concentrazione di ferritina è
direttamente proporzionale alla
radioattività presente nella provetta dopo il
lavaggio. La radioattività è misurata
utilizzando un gamma counter, dopodiché
la concentrazione di ferritina nel campione
viene ottenuta comparando le conte al
minuto del paziente con quelle ottenute
per il set di calibratori forniti.
34
Reagenti da Dispensare: 2
Tempo Totale di Incubazione: 1 ora (su
shaker)
Conte Totali alla iodinazione:
circa 300 000 cpm
Avvertenze e Precauzioni
Ad uso diagnostico in vitro.
Reagenti: Conservare a 2–8°C in un
frigorifero appositamente destinato al
materiale radioattivo. Eliminare secondo le
normative di legge vigenti.
Non utilizzare reagenti oltre la data di
scadenza.
Alcuni componenti forniti in questo kit
possono contenere materiale di origine
umana e/o altri ingredienti potenzialmente
pericolosi che necessitano di precauzioni
di utilizzo.
Seguire le precauzioni universali, e
manipolare tutti i componenti come se
potessero trasmettere agenti infettivi.
Sono stati dosati materiali di origine
umana e sono stati trovati non reattivi per
la Sifilide; per gli Anticorpi Anti-HIV 1 e 2;
per l'Antigene di Superficie dell'Epatite B;
e per gli Anticorpi Anti-Epatite C.
E' stata aggiunta Sodio Azide a
concentrazioni inferiori a 0,1 g/dL come
conservante. Al momento
dell'eliminazione, irrorare con molta acqua
per evitare la formazione di azidi
metalliche potenzialmente esplosive nelle
tubature di piombo e di rame.
Acqua: Utilizzare solo acqua distillata o
deionizzata.
Radioattività
Una copia di tutti i certificati di
Autorizzazione per radioisotopi (Specifica
o Generica) rilasciata ad un cliente
americano deve essere conservata in file
presso la Siemens Healthcare Diagnostics
prima che i kit o i componenti contenenti
materiale radioattivo possano essere
spediti. Questi materiali radioattivi
possono essere acquisiti da qualsivoglia
cliente in possesso dell'Autorizzazione
Specifica. Con l'Autorizzazione Generica
questi materiali radioattivi possono essere
acquistati solo da medici, veterinari che
esercitino la professione, laboratori clinici
ed ospedalieri – e solo per l'esecuzione di
test clinici o di laboratorio in vitro che non
implichino somministrazione interna o
esterna del materiale radioattivo o delle
sue radiazioni alle persone o animali. La
sua acquisizione, ricevimento,
conservazione, utilizzo, trasferimento ed
eliminazione sono soggette a
regolamentazioni e ad Autorizzazione
(Generica o Specifica) della Commissione
Statunitense per il Nucleare o dello Stato
con il quale l'NRC abbia stipulato un
accordo per l'esercizio del controllo
regolatorio.
Manipolare i materiali radioattivi secondo
quanto previsto dall'Autorizzazione
Generica o Specifica. Per minimizzare
l'esposizione alle radiazioni, l'utilizzatore
deve attenersi alle linee guida stabilite dal
National Bureau of Standards publication
su “Safe Handling of Radioactive
Materials” “Norme per una corretta
manipolazione dei Materiali
Radioattivi”.(Guida N° 92, pubblicata il 9
Marzo 1964) e successive edizioni
pubblicate dallo Stato e dalle Autorità
Federali.
Assorbire immediatamente le fuoriuscite e
decontaminare le superfici contaminate.
Evitare la formazione di aerosol. Eliminare
i rifiuti solidi radioattivi secondo quanto
previsto dall'Autorizzazione. Le licenze
generiche (possessori di NRC Form 483)
possono eliminare i rifiuti radioattivi solidi
come non radioattivi, dopo aver rimosso
l'etichetta. I detentori di autorizzazioni
specifiche (NRC Form 313) devono fare
riferimento al Titolo 10, Codice delle
Regolamentazioni Federali Parte 20. I
detentori di Autorizzazioni negli Stati che
hanno stipulato un accordo con l'NRC
dovrebbero far riferimento alle
regolamentazioni idonee dei loro stati. I
detentori di Autorizzazioni Generali
possono eliminare i rifiuti radioattivi liquidi
del tipo contenuto in questo prodotto
attraverso il lavello del laboratorio. I
detentori di autorizzazione devono
eliminare o rendere illeggibili le etichette
dei contenitori vuoti di materiali radioattivi
prima di eliminare i rifiuti solidi. I detentori
di autorizzazioni specifiche possono
eliminare piccoli quantitativi di rifiuti
radioattivi liquidi del tipo utilizzato in
questo prodotto attraverso il lavello del
laboratorio. Fare riferimento alle
regolamentazioni appropriate applicabili al
Vostro laboratorio.
Materiali Forniti:
Preparazione Iniziale
Provette Coattate con Anticorpi
Ferritina (IFE1)
Provette di polistirene coattate con un
anticorpo monoclonale murino antiferritina e confezionate in buste a cerniera.
Conservare refrigerate al riparo
dall'umidità, richiudendole dopo l'utilizzo.
Stabile a 2–8°C per un anno dalla data di
produzione.
IKFE1: 100 provette.
125
Anticorpo Ferritina marcato con I
(IFE2)
5,5 mL di un anticorpo policlonale di capra
iodinato anti-ferritina. Stabile a 2–8°C per
30 giorno dopo l'apertura, o fino alla data
di scadenza indicata sull'etichetta.
IKFE1: 2 flaconi.
Calibratori Ferritina (FEI3–9,X)
Otto flaconi, etichettati dalla A alla H, di
calibratori ferritina su base proteica, con
conservanti. I calibratori sono forniti in
forma liquida, pronti all'uso. Il calibratore
zero A contiene 1,0 mL, mentre i rimanenti
calibratori dalla B alla H contengono
ciascuno 0,5 mL. Stabili a 2-8°C per 30
giorni dopo l'apertura. Non congelare.
IKFE1: 1 set.
I calibratori contengono 0, 5, 25, 100, 200,
500, 1 000 e 2 000 nanogrammi di ferritina
per millilitro (ng/mL), in termini di WHO
Seconda Preparazione Internazionale di
Riferimento della Ferritina per gli
Immunodosaggi, numero 80/578 [2°IS
80/578]. Punti intermedi della calibrazione
possono essere ottenuti mescolando i
calibratori in proporzioni idonee.
Tampone Ferritina (FEAB)
11 mL di un diluente/tampone con
conservanti. Stabile a 2–8°C per 30 giorni
dopo l'apertura, o fino alla data di
scadenza indicata sul flacone.
IKFE1: 2 flaconi.
Soluzione di Lavaggio Concentrata
(2TSBW)
60 mL di una soluzione/tampone salina
concentrata con surfactanti e sodio azide
come conservante. Utilizzando un
contenitore per il trasferimento, diluire
ciascun flacone di concentrato con
600 mL di acqua distillata o deionizzata
35
per un volume totale di 660 mL. Stabile a
2–8°C per 6 mesi dopo la preparazione.
IKFE1: 1 flacone × 60 mL.
Materiali Richiesti Ma Non
Forniti
Volume Richiesto: 10 µL di siero per
provetta.
31
Conservazione: 2–8°C per 7 giorni, o
31
per 2 settimane congelato a –20°C.
Preparazione dei Reagenti
Acqua distillata o deionizzata
Prima del dosaggio, consentire ai
campioni di raggiungere temperatura
ambiente (15–28°C) e mescolare
scuotendo leggermente o capovolgendo la
provetta. Aliquotare, se necessario per
evitare cicli ripetuti di congelamento e
scongelamento. Non tentare di scongelare
i campioni congelati riscaldandoli in un
bagnetto termostatato.
Cilindro Graduato — per la dispensazione
di 600 mL.
Procedura del Dosaggio
Contenitore di plastica con coperchio –
per la preparazione e la conservazione
della Soluzione di Lavaggio.
Tutti i componenti devono essere a
temperatura ambiente (15–28°C) prima
dell'utilizzo.
Gamma counter — compatibile con
provette standard da 12x75 mm
Shaker — settato a circa 200 colpi al
minuto.
1
Immunodosaggio
Micropipette: 10 µL, 100 µL e 200 µL
Dispensatore — per la dispensazione di
2,0 mL of di Soluzione di Lavaggio.
Foam per la decantazione — disponibile
presso Siemens Healthcare Diagnostics
(Codice: FDR).
Carta per grafici a 4-cicli log-log
Prelievo dei Campioni
Non è necessario che il paziente sia a
digiuno, non sono necessarie preparazioni
30
particolari. Prelevare il sangue in
provette semplici (senza anticoagulanti),
annotando l'ora del prelievo e separare il
siero dalle cellule.
Si consiglia l'utilizzo di un'ultracentrifuga
per schiarire i campioni lipemici.
I campioni emolizzati posson indicare il
trattamento non idoneo del campione
prima dell'arrivo al laboratorio; per questo
motivo, i risultati devono essere
interpretati con prudenza.
Provette per il prelievo di sangue di
produttori diversi possono dare valori
differenti, a seconda dei materiali e degli
additivi usati, incluso gel o barriere fisiche,
attivatori di coaguli e/o anticoagulanti.
L'Coat-A-Count IRMA Ferritina non é stato
verificato con tutte le possibili variazioni di
tipi di provette. Consultare la sezione
riguardante Campioni Alternativi per
dettagli sulle provette testate.
36
Etichettare con A sedici Provette
Coattate con Anticorpo Ferritina A
(legame non specifico) e dalla B alla H
("legame massimo") in duplicato.
Etichettare altre Provette Coattate,
anch'esse in duplicato, per controlli e
campioni.
Calibratori
ng/mL
T*
—
A (NSB)
0
B
5
C
25
D
100
E
200
F
500
G
1 000
H ("MB")
2 000
*Conte totali opzionali
2
Dispensare 10 µL di ciascun
calibratore, controllo e campione di
siero nelle provette preparate.
Pipettare direttamente al fondo.
Campioni con concentrazioni attese
del calibratore più elevato
(2 000 ng/mL) dovrebbero essere
diluiti nel calibratore zero. Si consiglia
l'utilizzo di micropipette con puntali
monouso per evitare il carryover da un
campione all'altro. Pipette a
dislocazione positiva e pipettatoridiluitori automatici dovrebbero essere
utilizzati solo se la possibilità che si
verifichi il carryover è stata valutata e
trovata insignificante.
3
Aggiungere 200 µL di Tampone
Ferritina a tutte le provette (eccetto le
provette T).
Pipettare direttamente al fondo. Si
consiglia per questo passaggio e per
l'aggiunta del tracciante al punto 6,
l'utilizzo di un dispensatore a
ripetizione.
4
Scuotere per 30 minuti su shaker.
5
Decantare completamente.
Aggiungere 2 mL di Soluzione di
Lavaggio ad ogni provetta. Attendere
1 o 2 minuti, quindi decantare
completamente.
Rimuovere tutta l'umidità visibile
aumentando così la precisione. Dopo
il lavaggio, utilizzando un foam per la
decantazione, decantare il contenuto
di tutte le provette e fare in modo che
asciughino per 2 o 3 minuti.
Tamponarle su carta assorbente per
eliminare completamente i liquidi.
6
Aggiungere 100 µL di un anticorpo
125
Ferritina marcato con I ad ogni
provetta.
Pipettare direttamente al fondo. Si
consiglia l'utilizzo di un dispensatore.
Mettere da parte le provette T per la
conta (al punto 9); non sono necessari
ulteriori passaggi.
7
Scuotere per 30 minuti su shaker.
8
Decantare completamente.
Aggiungere 2 mL di Soluzione di
Lavaggio ad ogni provetta. Attendere
1 o 2 minuti, quindi decantare
completamente. Aggiungere ancora
2 mL di Soluzione di Lavaggio,
attendere 1 o 2 minuti, e decantare
completamente.
Rimuovere tutta l'umidità visibile
aumentando così la precisione. Dopo
il secondo lavaggio, decantare il
contenuto di tutte le provette (eccetto
quelle T) utilizzando un foam per la
decantazione e fare in modo che si
asciughino per 2 o 3 minuti.
Tamponarle su carta assorbente per
eliminare completamente i liquidi.
9
Contarle per 1 minuto in un gamma
counter.
Nei gamma counter multi-testina le
Conte Totali (opzionali) devono
essere separate di almeno uno
spazio, per minimizzare la possibilità
di fuoriuscite.
Calcolo e Controllo di Qualità
Per calcolare i risultati (in termini di unità
di concentrazione) da una
rappresentazione log-log della curva di
calibrazione, correggere inizialmente le
conte per minuto (CPM) di ciascuna
coppia di provette sottraendo i CPM medi
delle provette del legame non specifico
(calibratore A):
Conte Nette = (Media dei CPM) Meno (Media
CPM NSB)
Quindi determinare il legame percentuale
(relativo a quello del calibratore più
elevato) – qui chiamato "%B/MB" – di
ciascuna coppia di provette come
percentuale del “legame massimo” con le
conte corrette per NSB del calibratore più
elevato preso al 100%:
Percentuale di Legato = (Conte Nette / Conte
Nette MB) × 100
Utilizzando una carta per grafici log-log a
4 cicli, tracciare la Percentuale di Legato
vs. la Concentrazione per ciascuno dei
calibratori nonzero, e tracciare una curva
approssimativamente lungo questi punti.
(Collegare i punti della calibrazione con
archi o linee rette. Non tentare di
congiungere i punti con un'unica retta). Le
concentrazioni per i controlli ed i campioni
non noti entro il range dei calibratori non
zero possono essere stimate dalla curva
di calibrazione per interpolazione. Può
essere utilizzato un ulteriore tracciato della
Percentuale di Legato vs. la
Concentrazione per i tre calibratori più
bassi su carta per grafici linear-linear per
interpolazione verso la dose zero.
Commenti: benchè altri approcci siano
accettabili, il calcolo dei dati con il metodo
appena descritto ha alcuni vantaggi dal
punto di vista del controllo di qualità. In
particolare, produce una curva di
calibrazione che è relativamente lineare
sia nella rappresentazione log-log che
linear-linear e relativamente stabile da un
dosaggio all'altro. Produce anche validi
parametri per il CQ e cioè: i valori di
Legato Percentuale (%B/MB) per i
calibratori non zero. Un grafico che
37
fornisca ancora più informazioni, in termini
di riproducibilità intra-dosaggio in funzione
della concentrazione può essere ottenuto
tracciando i valori della Percentuale di
Legato delle singole provette dei
calibratori direttamente i.e. senza prima
effettuare la media dei CPM dei replicati.
Alternative: Benché la Percentuale di
Legato possa essere calcolata
direttamente dai CPM Medi, la correzione
per il legame non specifico produce
normalmente una curva di calibrazione
che è più vicina alla linearità lungo il suo
range. Una curva di calibrazione può
anche essere costruita tracciando i CPM o
i CPM Medi direttamente verso la
concentrazione sia con grafico log-log che
con grafico linear-linear. (Non deve essere
utilizzato un grafico semi-log). Questo
approccio ha la virtù della semplicità, ma è
meno desiderabile dal punto di vista del
controllo di qualità.
Calcolo Computerizzato dei Dati: Sono
accettabili metodi "Punto-a-punto", incluse
linee spline cubiche e lineari; ma poiché
sono poco d'aiuto nel monitoraggio
dell'integrità del dosaggio, è importante
preparare la rappresentazione log-log
della curva di calibrazione, sia
manualmente che con il computer come
step del controllo di qualità. Possono
essere utilizzate anche le tecniche di
calcolo dei dati basati sul modello
logistico. All'interno di questa famiglia, le
routine di curve-fitting basate sulla
logistica a 4 o 5 parametri sono i candidati
più idonei. Tuttavia, alcuni algoritmi ad
oggi in uso possono non convergere in
modo uniforme, anche quando il modello
logistico è in accordo con i dati. Se viene
adottato un metodo logistico, è essenziale
verificarne l'appropriatezza per la routine
giornaliera monitorando il calcolo dei
calibratori e di altri parametri. Inoltre, si
consiglia una rappresentazione log-log
della curva di calibrazione, poiché fornisce
più informazioni della rappresentazione
convenzionale semi-plot.
Manipolazione dei Campioni: Le
istruzioni per la manipolazione e la
conservazione dei campioni e dei
componenti del kit devono essere
scrupolosamente osservate. Diluire i
campioni con concentrazioni attese più
elevate del calibratore più alto,
(2 000 ng/mL), con il calibratore zero,
prima di dosarli. Tutti i campioni, inclusi i
38
calibratori ed i controlli debbono essere
dosati almeno in duplicato. E' importante
utilizzare una micropipetta con puntali
monouso, cambiando il puntale tra i
campioni per evitare la contaminazione da
carry-over. E' possibile utilizzare pipette a
dislocazione positiva e pipettatori-diluitori
automatici solo se è già stata esclusa la
possibilità che si verifichi il carry-over.
Coppie di provette dei controlli possono
essere intervallate all'interno del dosaggio
per verificare l'assenza di deviazioni
significative. Controllare i risultati per
verificare la concordanza all'interno delle
coppie di provette.
Gamma Counter: Per minimizzare la
possibilità che si verifichino fuoriuscite in
gamma counter multi-pozzetto, le provette
delle conte totali opzionali (T) devono
essere separate da uno o più spazi dalle
altre provette. In alternativa, aggiungere
solo 25 µL del tracciante ad ognuna delle
provette T al punto 6, e moltiplicare le
conte per minuto osservate in queste
provette per 4.
Controlli: sia quelli forniti, o altri controlli
Ferritina o pool di sieri – con almeno due
livelli di concentrazione (basso ed alto)
devono essere dosati routinariamente
come campioni non noti, ed i risultati
annotati giorno dopo giorno come indicato
in Westgard JO, et al. A multi-rule chart for
quality control. Clin Chem 1981;27:493501. Ripetere i campioni quale ulteriore
strumento di monitoraggio della precisione
inter-dosaggio.
Parametri di QC: Consigliamo di
annotare tali prestazioni:
T = Conte Totali (conte al minuto)
%NSB = 100 × (Conte NSB Medie / Conte
Totali)
%MB = 100 × (Conte Nette / Conte Totali)
Ed i valori della Percentuale di Legato
("%B/MB") di tutti i calibratori ad
eccezione del calibratore più elevato tra i
calibratori non zero, ad esempio:
%C/MB = 100 × (Conte Nette del Calibratore "C"
/ Conte Nette MB)
Archivio Dati: Si consiglia per ogni
dosaggio di annotare i numeri di lotto dei
componenti utilizzati, le date di
ricostituzione o di apertura.
Ulteriori Letture: Vedi Dudley Ra et al.
Seduta Esemplificativa: a solo scopo
illustrativo e non per calcolare i risultati di
un'altra seduta. (vedi tabella "Example
Run").
Valori Attesi
I range di Riferimento sono stati generati
utilizzando il dosaggio Coat-A-Count
Ferritina IRMA in uno studio, che ha
coinvolto donatori in apparente buono
stato di salute che non avevano effettutato
donazioni da un anno.
Gruppo
Range Centrale al 95%
n
Maschi
21 – 334 ng/mL
226
Femmine
5 – 143 ng/mL
193
I laboratori devono considerare questi
risultati soltanto come linee guida. Ogni
laboratorio dovrebbe stabilire i propri
range di riferimento.
Limiti
A causa del formato sequenziale del
dosaggio Coat-A-Count Ferritina IRMA, è
molto improbabile che anche campioni
con concentrazioni di ferritina
estremamente elevate producano risultati
falsamente bassi – a differenza di altri
dosaggi immunoradiometrici, molti dei
quali soffrono di un effetto “gancio a dosi
elevate”. Sono stati dosati campioni
contenenti valori di ferritina fino a
125 000 ng/mL ben al di sopra di
2 000 ng/mL, la concentrazione del
calibratore più elevato.
Precisione Intradosaggio (All'interno
della stessa seduta): Sono state
calcolate statistiche per campioni dai
risultati di 20 coppie di provette in un
unico dosaggio. (Vedi tabella “Intraassay
Precision”.)
Precisione Interdosaggio (Da una
seduta all'altra): Sono state calcolate
statistiche per campioni dai risultati di
coppie di provette in 20 dosaggi diversi.
(Vedi tabella “Interassay Precision”.)
Effetto Fine-Seduta: Nessuno fino a circa
200 provette. (vedi tabella "End-of-Run
Effect").
Specificità: Gli anticorpi Coat-A-Count
Ferritina IRMA sono stati prodotti vs. la
ferritina contenuta nel fegato umano e
sono stati selezionati per reagire sia alla
ferritina presente nel fegato che nella
milza. La crossreattività verso la ferritina
presente nel cuore umano è inferiore all'
1%.
Linearità: I campioni sono stati dosati a
varie diluizioni. (Vedi tabella “Linearity” per
dati rappresentativi.)
Recupero: Sono stati dosati campioni
diluiti 1:19 con quattro soluzioni di
Ferritina (350, 700, 1 400 e 2 800 ng/mL)
(Vedi tabella “Recovery” per dati
rappresentativi).
Bilirubina: La presenza di bilirubina in
concentrazioni fino a 200 mg/L non ha
nessun effetto sui risultati entro il range di
precisione del dosaggio.
Emolisi: La presenza di globuli rossi
impaccati in concentrazioni fino a
30 µL/mL non ha effetto sui risultati entro il
range di precisione del dosaggio.
Le sezioni seguenti contengono i dati
rappresentativi delle prestazioni del
dosaggio Coat-A-Count Ferritina IRMA. I
risultati nelle sezioni di seguito sono
espresse in nanogrammi di ferritina per
millilitro (ng/mL).
Tipo di Campione Alternativo: Per
determinare l'effetto di campioni
alternativi, è stato prelevato del sangue da
26 volontari in provette semplici,
eparinizzate, EDTA e Becton Dickinson
®
vacutainer SST . Tutti i campioni si sono
analizzati mediante il procedimento di
Ferritina dell'Coat-A-Count IRMA, con i
risultati seguenti.
Range di Calibrazione: Fino a
2 000 ng/mL (WHO 2°IS 80/578).
(Eparina) = 0,90 (Siero) + 2,64 ng/mL
r = 0,993
Sensibilità Analitica: 0,5 ng/mL.
(EDTA) = 0,93 (Siero) – 0,02 ng/mL
r = 0,999
Effetto Gancio a Dosi Elevate: Nessun
effetto fino a 150 000 ng/mL.
(SST) = 0,99 (tubi semplici) + 0,13 ng/mL
r = 1,00
Prestazioni del Dosaggio
39
Valore medio:
107,8 ng/mL (Siero)
99,1 ng/mL (Eparina)
99,8 ng/mL (EDTA)
107,2 ng/mL (SST)
Comparazione di Metodi: Il dosaggio
Coat-A-Count Ferritina IRMA è stato
comparato al dosaggio IMMULITE
Ferritina su 40 campioni con
concentrazioni di ferritina da circa 0,8 a
325 ng/mL. (Vedi grafico). Mediante
regressione lineare:
(CAC IRMA) = 1,08 (IML) + 1,31 ng/mL
r = 0,995
Valore medio:
56 ng/mL (IMMULITE)
Assistenza Tecnica
All'estero: Si prega di contattare il proprio
Distributore Nazionale.
Il Sistema Qualità della Siemens Healthcare
Diagnostics Inc. è certificato ISO 13485:2003.
Português
Utilização: O Coat-A-Count Ferritin IRMA
é um ensaio imunoradiométrico concebido
para a medição quantitativa da ferritina no
soro. Destina-se estritamente a uso de
diagnóstico in vitro como auxiliar no
diagnóstico da deficiência ou excesso de
ferro.
Números de catálogo: IKFE1 (100 tubos)
O kit de 100 tubos contém menos
de 20 microcuries
(740 quilobecquerels) de anti125
ferritina policlonal I.
Sumário e explicação do teste
A molécula de ferritina consiste num
envólucro proteico (PM 450 000 D) e num
1,2
núcleo de ferro. Encontram-se altas
concentrações nas células do fígado e
nos centros de reciclagem dos eritrócitos
(células RE) no fígado, bílis e medula
óssea. A ferritina existe nestes orgãos
como fonte de reserva principal para
fornecer ferro, com função protectora
40
contra o efeito tóxico do excesso e
mantém uma reserva disponível para a
3,4
eritropoiese. A ferritina também está
presente no plasma, onde a sua
concentração é normalmente um
indicador satisfatório do armazenamento
de ferritina no organismo, medida por
flebotomia quantitativa, estudos de
absorção de ferritina, biópsia ao fígado e
absorção microscópica de aspirados da
medula óssea por coloração de depósitos
5,6
de ferritina.
Esta relação com o armazenamento de
ferritina pode ser vista nos valores padrão
da ferritina no soro sob uma variedade de
condições fisiológicas e patológicas. Em
indivíduos saudáveis o valor mediano
levemente aumentado no nascimento,
atinge um valor abaixo do normal de
aproximadamente 30 ng/mL aos 6 meses,
com aumento para valores de adulto após
7
a puberdade. Nos homens,o valor
mediano continua a subir – de
aproximadamente 70 ng/mL aos 18 anos
até quase 200 ng/mL, 25 anos depois –
enquanto que nas mulheres há um valor
mediano constante de 35 ou 40 ng/mL
durante a infância e um aumento
acentuado posteriormente. Em
publicações diversas, os níveis
apresentados para a ferritina, no soro, em
adultos saudáveis, vão de 20 (+/-10) a
300 (+/-100) ng/mL para o homem, e de
10 (+/-5) a 150 (+/-50) ng/mL para a
mulher. Concentrações abaixo de 10 ou
15 ng/mL são típicas em anemias por
deficiência de ferro, sem complicações.
Valores de ferro excessivos, em regra
acima dos 300 ou 400 ng/mL, com níveis
dentro de uma escala de 1 000 –
5 000 ng/mL são comuns em casos de
hemocromatose.
Têm sido consideravelmente revistas as
aplicações clínicas do doseamento da
8-11
Esta desempenha um
ferritina sérica.
papel importante no diagnóstico clínico da
deficiência e do excesso de ferro, e na
avaliação das condições e tratamento
ameaçadores do equilibrio do ferro. Tem
provado ser uma ajuda valiosa na
descriminação entre anemia devido a
deficiência de ferro e outros tipos de
12
anemias e na revelação do
desaparecimento das reservas de ferro
antes do início da anemia. Têm sido
aplicadas determinações em série para
monitorizar, de forma não invasiva, a
erosão progressiva das reservas de ferro
13
ao longo da gravidez e em pacientes
14
regularmente submetidos a diálise. Quer
conjuntamente com outros testes
15-17
de rotina quer por si só, o
sanguíneos
doseamento de ferritina tem sido usado
para triagem da deficiência de ferro em
várias populações, desde populações de
18,19
a pacientes
dadores de sangue
hospitalares não seleccionados.20,21 É
também importante na triagem de
22
hemocromatose pré-cirrótica e de outras
23
formas de excesso de ferro, no
acompanhamento de pacientes que
recebem regularmente transfusões
24
sanguíneas ou sob terapia de reposição
25
de ferro, e ainda sob perigo de
acumulação excessiva de
armazenamento de ferro.
Embora o esgotamento de ferro pareça
ser a única condição associada a
reduções dos níveis séricos da ferritina,
observam-se aumentos destes, não só na
presença de acréscimo de ferro
armazenado mas também em várias
outras situações, incluíndo alterações
hepáticas, condições inflamatórias,
leucemia, doença de Hodgkin e outras
malignidades. Nestas condições, níveis
séricos elevados podem reflectir a
libertação de ferritina de células hepáticas
danificadas, remoção debilitada de
ferritina do plasma, síntese de ferritina por
células tumorais, ou uma expansão do
local de armazenamento do ferro induzida
por uma eritropoiese deficiente.
Condições inflamatórias tendem a
aumentar o nível sérico da ferritina ao
mesmo tempo que diminuem a
concentração sérica do ferro, por
estimulação do aumento da produção de
ferritina nas células RE, utilizando o ferro
que, de outra forma, seria libertado para
26as proteínas transportadoras do plasma.
28
Nestas e noutras condições, a
correlação entre o ferro armazenado e a
ferritina circulante continuam paralelas
mas com um desvio na presença de
valores altos – necessitando um ajuste
nas taxas de referência se o doseamento
de ferritina for usado para destinguir
reservas de ferro normais de reservas
29
esgotadas.
Princípio do Procedimento
O Coat-A-Count Ferritin IRMA é um
ensaio imunoradiométrico de fase sólida
baseado em anticorpos anti-ferritina
monoclonais e policlonais: um anticorpo
125
anti-ferritina policlonal marcado com I
na fase líquida, e um anticorpo antiferritina monoclonal imobilizado na parede
de um tubo de poliestireno.
No procedimento:
A ferritina é capturada entre os anticorpos
anti-ferritina monoclonais imobilizados na
superfície interior do tubo de poliestireno
e o marcador anti-ferritina policlonal
marcado radioactivamente.
O anticorpo anti-ferritina não ligado
125
marcado com I é removido através da
decantação da mistura de reacção e da
lavagem do tubo; isto reduz a ligação não
específica para um nível muito baixo, e
garante uma excelente precisão de gama
baixa.
A concentração de ferritina é directamente
proporcional à radioactividade presente
no tubo depois da fase de lavagem. A
radioactividade é medida usando um
contador gama; seguidamente, a
concentração de ferritina na amostra de
paciente é obtida através da comparação
das contagens por minuto do paciente
com as obtidas para o conjunto de
calibradores fornecido.
Reagentes para Pipetar: 2
Tempo de Incubação: 1 hora (num
agitador mecânico)
Contagens Totais na Marcação com o
Iodo: aproximadamente 300 000 cpm,
Precauções
Para uso de diagnóstico in vitro.
Reagentes: Conservar a 2–8°C num
frigorífico destinado para materiais
radioactivos. Eliminar de acordo com as
leis aplicáveis.
Não utilize reagentes com prazo de
validade expirado.
Alguns componentes fornecidos com este
dispositivo podem conter matéria de
origem humana e/ou outros ingredientes
potencialmente perigosos que necessitem
de algumas precauções.
Manipule com as devidas precauções
todos os materiais capazes de transmitir
doenças infecciosas. As matérias primas,
obtidas de soro humano, foram testadas,
revelando resultados negativos para a
41
sífilis, para os anticorpos do vírus da
imunodeficiência humana (HIV) 1 e 2;
para o antigénio de superfície da hepatite
B (HBsAg) e para os anticorpos do vírus
da hepatite C.
Azida de sódio foi adicionada como
conservante; para evitar acumulações de
azidas metálicas explosivas em
canalizações de cobre e alumínio, os
reagentes devem ser rejeitados no esgoto
apenas se estiverem diluídos e forem
lavados com grandes volumes de água.
Água: Utilize água destilada ou
desionizada.
Radioactividade
Uma cópia da licença de uso de produtos
radioactivos (especifico ou geral) enviada
pelo cliente, deve estar em poder da
Siemens Healthcare Diagnostics antes do
envio dos kits ou componentes contendo
material radioactivo. Estes materiais
radioactivos podem ser adquiridos por
qualquer cliente que possua a necessária
licença especifica. Com uma licença
generalista estes produtos radioactivos só
podem ser adquiridos por médicos,
veterinários na prática de medicina
veterinária, laboratórios clinicos e
hospitais. E somente para uso clinico in
vitro ou testes laboratoriais não
envolvendo administração externa ou
interna do material radioactivo ou da sua
radiação para o ser humano ou outros
animais. A sua aquisição, receita,
armazenamento uso, transporte e
eliminação estão sujeitas aos
regulamentos e à licenciada Comissão de
Regulação Nuclear ou do Estado
respectivo de acordo com a lei em vigor.
Tratar os materiais radioactivos de acordo
com a regulamentação da sua licença,
específica ou generalista. De modo a
minimizar a exposição à radiação deve o
utilizador seguir as instruções da
publicação do Departamento Nacional de
Padrões (Utilização segura de materiais
radioactivos-Livro No. 92, publicado em
Março de 1964) e publicações seguintes
do Estado e Autoridades Federais.
Limpar os derrames prontamente e
descontamine as superficies afectadas.
Evitar os aerossois. Elimine os lixos
radioactivos de acordo com a
regulamentação da licença. As licenças
generalistas (portadores da licença NRC
42
483) podem eliminar os lixos sólidos
radioactivos como lixo não radioactivo
depois de remover os rótulos. Licenças
Especificas (Licença NRC 313) devem ter
em conta o Capitulo 10 do artigo 20, do
Código de Regulamentações Federais.
Cada Estado deve referir a legislação em
vigor aprovada para o seu território. As
licenças generalistas podem eliminar os
lixos radioactivos liquidos do tipo deste
produto para um esgoto de laboratório. Os
licenciados devem remover os rótulos dos
frascos vazios de materiais radioactivos
antes de os colocar no esgoto sólido. As
licenças especificas podem eliminar
pequenas quantidades de lixo radioactivo
deste tipo de produto para o esgoto
normal do laboratório. Ter em atenção as
regulamentações em vigor para o seu
laboratório.
Materiais fornecidos:
Preparação inicial
Tubos Revestidos com Anticorpos
Ferritina (IFE1)
Tubos de poliestireno revestidos com
anticorpos murinos anti-ferritina
monoclonais e embalados em saquetas
de fecho hermético. Conservar refrigerado
e protegido da humidade, selar os sacos
cuidadosamente após cada abertura.
Estável a de 2–8°C durante um ano
depois da data de fabrico.
IKFE1: 100 tubos.
125
Anticorpos Ferritina I (IFE2)
5,5 mL de anticorpo policlonal de cabra
anti-ferritina iodado. Estável a uma
temperatura de 2–8°C durante 30 dias
depois de aberto, ou até ao prazo de
validade indicado no rótulo.
IKFE1: 2 frascos.
Calibradores Ferritina (FEI3–9,X)
Oito frascos, rotulados de A a H, de
calibradores de ferritina de base proteica,
com conservante. Os calibradores são
fornecidos na forma líquida, prontos a
usar. O calibrador zero A contém 1,0 mL,
enquanto os restantes calibradores de B a
H contêm 0,5 mL cada. Estável a 2–8°C
durante 30 dias depois de aberto. Não
congelar.
IKFE1: 1 conjunto.
Os calibradores contêm 0, 5, 25, 100, 200,
500, 1 000 e 2 000 nanogramas de
ferritina por mililitro (ng/mL), de acordo
com a Segunda Referência Internacional
de Preparação de Ferritina para
Imunoensaio número 80/578 da
Organização Mundial de Saúde [2ª NI
80/578]. Os pontos de calibração
intermédios podem ser obtidos misturando
os calibradores nas proporções
adequadas.
Tampão de Ensaio de Ferritina (FEAB)
11 mL de diluente tamponizado, com
conservante. Estável a 2–8°C durante 30
dias depois de aberto, ou até ao prazo de
validade indicado no frasco.
IKFE1: 2 frascos.
Colheita
O paciente não necessita dieta. Não são
necessárias preparações especiais.
Colher sangue através de punção
30
venosa para tubos lisos (sem
anticoagulante), anotando a data e hora
da colheita, e separar o soro das células.
Recomenda-se o uso de uma ultra
centrífuga para clarear amostras
lipémicas.
Amostras hemolisadas podem indicar
tratamento incorrecto de uma amostra
antes do envio para o laboratório; portanto
os resultados devem ser interpretados
com cuidado.
Concentrado de Solução de Lavagem
Tamponizado (2TSBW)
60 mL de uma solução salina concentrada
tamponizada, com surfactantes e azida de
sódio como conservante. Usando um
recipiente de transferência, diluir cada
frasco de concentrado com 600 mL de
água destilada ou desionizada, para um
volume total de 660 mL. Estável a 2–8°C
durante 6 meses depois de preparado.
IKFE1: 1 frasco × 60 mL.
Os tubos para colheita sanguínea de
diferentes fabricantes, podem originar
diferentes valores, dependendo dos
materiais e aditivos, incluíndo gel ou
barreiras fisicas, activadores do coágulo
e/ou anti coagulantes. Coat-A-Count
IRMA Ferritina não foram ainda testados
com todas as possiveis variações
originadas pelos tipos de tubos. Consultar
a secção Tipos de Amostras Alternativas
para obter detalhes sobre os tubos que
foram testados.
Materiais necessários mas não
fornecidos
Volume de Amostra: 10 µL de soro por
tubo.
Contador gama — compatível com tubos
standard 12x75 mm
Agitador mecânico — definido
aproximadamente para 200 movimentos
por minuto.
Preparação dos Reagentes
Água destilada ou desionizada
Proveta graduada — para uma dose de
600 mL.
Contentor plástico de armazenamento
com tampa – para preparação e
armazenamento de Solução de Lavagem
Tamponizada.
Imunoensaio
Micropipetas: 10 µL, 100 µL e 200 µL
Dispensador — para uma dose de 2,0 mL
de Solução de Lavagem Tamponizada.
Dispositivo de decantação de espuma —
disponível na Siemens Healthcare
Diagnostics (Números de catálogo: FDR).
Papel milimétrico log-log de 4 ciclos
31
Storage: 2–8°C durante 7 dias, ou
durante 2 semanas congelado a uma
31
temperatura de –20°C.
Deixar as amostras atingir a temperatura
ambiente (15–28°C) e agitar suavemente
ou por inversão. Aliquotar se necessário
para evitar repetidos
congelamentos/descongelamentos. Não
descongelar as amostras por aquecimento
em banho-maria.
Procedimento Imunométrico de
doseamento
Todos os componentes devem estar à
temperatura ambiente(15–28°C) antes de
usar.
1
Rotular dezasseis tubos Revestidos a
Anticorpos Ferritina A (ligação não
específica) e de B a H ("ligação
máxima") em duplicado. Rotular
Tubos adicionais Revestidos a
Anticorpos Ferritina, também em
duplicado, para controlos e amostras
de paciente.
43
Calibradores
ng/mL
T*
—
A (NSB)
0
B
5
C
25
D
100
E
200
F
500
G
1 000
H ("MB")
2 000
6
Pipetar directamente para a base dos
tubos. Recomenda-se um distribuidor
de repetição.
Deixar os tubos T para as contagens
(nº 9); não necessitam mais
processamento.
7
Misturar durante 30 minutos num
agitador mecânico.
8
Decantar completamente. Adicionar
2 mL de Solução de Lavagem
Tamponizada a cada tubo. Esperar 1
a 2 minutos, e, de seguida, decantar
completamente. Adicionar novamente
Tamponizada, esperar 1 a 2 minutos,
e, de seguida, decantar
completamente.
*Tubos opcionais de contagem total
2
Pipetar 10 µL de cada calibrador,
controlo e amostra de soro de
paciente para os tubos preparados.
tubos. As amostras que se preveja
que excedam a concentração do
calibrador mais elevado (2 000 ng/mL)
deverão ser diluídas no calibrador
zero. Recomenda-se a utilização de
micropipetas de pontas descartáveis,
de modo a evitar contaminação entre
amostras. Devem ser utilizadas
pipetas de transporte e pipetadoresdiluidores automáticos, apenas se a
possibilidade de contaminação tiver
sido avaliada e considerada como não
significativa.
3
Adicionar 200 µL de Tampão de
Ensaio de Ferritina a todos os tubos
(à excepção dos tubos T).
tubos. Recomenda-se um
dispensador de repetição para esta
etapa, bem como para a adição do
marcador na etapa 6.
4
Misturar durante 30 minutos num
agitador mecânico.
5
Decantar completamente. Adicionar
Tamponizada a cada tubo. Esperar 1
a 2 minutos, e de seguida decantar
completamente.
Removendo todo o líquido
remanescente melhora-se bastante a
precisão. Após a lavagem, usando um
dispositivo de decantação de espuma,
decantar o conteúdo de todos os
tubos e deixá-los drenar durante 2 a 3
minutos. Eliminar todas as gotas
residuais com papel absorvente.
44
Adicionar 100 µL de Anticorpos
125
Ferritina I a cada tubo.
Removendo todo o líquido
remanescente melhora-se bastante a
precisão. Depois da segunda
lavagem, decantar o conteúdo de
todos os tubos (à excepção dos tubos
T) usando um dispositivo de
decantação de espuma, e deixá-los
drenar durante 2 a 3 minutos. Eliminar
todas as gotas residuais com papel
absorvente.
9
Contar durante 1 minuto num
contador gama.
Em contadores gama de cabeça
múltipla, os tubos (opcionais) de
Contagem Total devem ser separados
dos restantes tubos de ensaio pelo
menos um espaço, a fim de minimizar
a possibilidade de derrame.
Cálculos e Controlo de
Qualidade
A fim de calcular os resultados (em
termos das unidades de concentração) a
partir da representação log-log da curva
de calibração, corrigir primeiro as
contagens por minuto (CPM) de cada par
de tubos, subtraindo a CPM média dos
tubos de ligação não específica
(calibrador A):
Contagens reais = (Média CPM) minutos (Média
NSB CPM)
Determinar de seguida a percentagem de
ligação (relativamente à do calibrador
mais elevado) — aqui designado "%B/MB"
— de cada par de tubos como
percentagem da "ligação máxima,"
considerando as contagens corrigidas
com NSB do calibrador mais elevado
como 100%:
Percentagem de Ligação = (Contagens reais /
Contagens MB reais) × 100
Usando papel milimétrico log-log de 4
ciclos, representar a Percentagem de
Ligação relativamente à Concentração
para cada um dos calibradores diferentes
de zero, e desenhar uma curva
aproximando a trajectória destes pontos.
(Ligar os pontos de calibração com arcos
ou segmentos de linha recta. Não tentar
aplicar uma única linha recta aos dados.)
É então possível calcular as
concentrações de controlos e amostras
desconhecidas dentro da gama dos
calibradores diferentes de zero com base
na curva de calibração por interpolação.
Pode ser usada uma representação
adicional da Percentagem de Ligação
relativamente à Concentração para os três
c alibradores mais baixos em papel
milimétrico linear-linear para interpolação
próximo da dose zero.
Observações: Embora sejam aceitáveis
outras abordagens, a redução de dados
pelo método que acabamos de descrever
apresenta certas vantagens do ponto de
vista do controlo da qualidade. Em
particular, produz uma curva de calibração
relativamente linear tanto nas
representações log-log como linear, e
relativamente estável de ensaio para
ensaio. Produz igualmente parâmetros de
CQ úteis, tais como valores de
Percentagem de Ligação (%B/MB) para
os calibradores diferentes de zero. Pode
obter-se um gráfico ainda mais informativo
que veicula uma ideia de reprodutibilidade
intra-ensaio em função da concentração,
representando directamente os valores da
Percentagem de Ligação de tubos de
calibrador individuais, ou seja, sem ter de
calcular primeiro a média da CPM das
réplicas.
Alternativas: Embora a Percentagem da
Ligação possa ser calculada directamente
a partir da CPM Média, a correcção da
ligação não específica produz
normalmente uma curva de calibração
mais próxima da linearidade em toda a
sua amplitude. Também é possível gerar
uma curva de calibração representando
directamente a CPM ou a CPM Média
relativamente à Concentração em papel
milimétrico log-log ou linear-linear. (Não
deve ser usado papel milimétrico semilogarítmico). Esta abordagem tem a
vantagem de ser mais simples, mas é
menos recomendável do ponto de vista do
controlo da qualidade.
Redução de Dados Computadorizada:
Os métodos “ponto-a-ponto”, incluindo as
aproximações lineares e por spline cúbico,
são adequadas; todavia, uma vez que
fornecem pouca ajuda na monitorização
da fiabilidade de um ensaio, é importante
preparar a representação log-log
recomendada da curva de calibração,
manualmente ou por computador, como
etapa do controlo da qualidade. As
técnicas de redução de dados baseadas
no modelo logístico poderão também ser
aplicadas. Nesta família, as rotinas de
aproximação de curvas baseadas em
logística de 4 ou 5 parâmetros são as
possibilidades mais adequadas. Deve
contudo, ter-se em atenção que alguns
algoritmos actualmente utilizados podem
não convergir com êxito, mesmo quando o
modelo de logística é fiel aos dados. Se
for adoptado um método logístico, é
essencial verificar a sua adequabilidade
ao ensaio de cada dia, monitorizando o
cálculo de confirmação dos calibradores e
outros parâmetros. Além disso, é
altamente recomendada uma
representação da curva de calibração em
log-log, já que é mais informativa do que a
representação semi-logarítmica
convencional.
Manuseamento de Amostras: Devem
ser criteriosamente respeitadas as
instruções de manuseamento e
armazenamento das amostras do
paciente e componentes. Diluir as
amostras de paciente que se preveja que
excedam a concentração do calibrador
mais elevado (2 000 ng/mL) com o
calibrador zero antes do ensaio. Todas as
amostras, incluindo os calibradores e
controlos, devem ser submetidas a ensaio
pelo menos duplo. É importante usar uma
micropipeta de ponta descartável,
substituindo a ponta entre cada
amostragem, a fim de evitar contaminação
entre amostras. Deverão ser usadas
pipetas de transporte e pipetadoresdiluidores automáticos apenas se a
possibilidade de contaminação tiver sido
45
avaliada e considerada como não
significativa. Os pares de tubos de
controlo podem ser espaçados ao longo
do ensaio a fim de ajudar a confirmar a
ausência de desvio significativo. Analisar
os resultados para verificar a
concordância entre pares de tubos.
Contador Gama: Para minimizar a
possibilidade de derrame em contadores
gama de reservatório múltiplo, os tubos
opcionais de contagem total (T) deverão
ser separados por um ou mais espaços
dos restantes tubos do ensaio.
Alternativamente, adicionar apenas 25 µL
do marcador a cada um dos tubos T na
etapa 6, e multiplicar por 4 as contagens
por minuto observadas nestes tubos.
Controlos: Controlos, ou os pools de soro
com pelo menos dois níveis de
concentração de ferritina (elevado e
baixo) devem por rotina ser submetidos a
ensaio como amostras desconhecidas, e
os resultados devem ser representados
em gráfico de dia para dia de acordo com
o procedimento descrito em Westgard JO,
et al. Um gráfico de regras múltiplas para
controlo da qualidade. Clin Chem 1981;
27:493-501. As amostras de repetição
constituem uma ferramenta adicional útil
para monitorizar a precisão inter-ensaios.
Parâmetros de CQ: Recomendamos o
acompanhamento destas medições de
desempenho:
T = Contagens Totais (como contagens por
minuto)
%NSB = 100 × (Média Contagens NSB /
Contagens Totais)
%MB = 100 × (Contagens reais / Contagens
Totais)
E os valores de Percentagem de Ligação
("%B/MB") de todos os calibradores
excepto do calibrador diferente de zero
mais elevado, por exemplo:
%C/MB = 100 × (Contagens Líquidas Calibrador
"C" / Contagens Líquidas MB)
Manutenção de Registos: È boa prática
laboratorial registar para cada ensaio o
número do lote dos componentes usados,
bem como as datas de quando foram
primeiro reconstituidas ou abertas.
Literatura Adicional: Ver Dudley RA, et
al. Guidelines for immunoassay data
46
Exemplo de Ensaio: Apenas para
ilustração, não para calcular resultados de
outro ensaio. (Ver tabela "Example Run".)
Valores de Referência
Foram geradas gamas de referência
usando o Coat-A-Count Ferritin IRMAnum
estudo, envolvendo dadores de sangue
aparentemente saudáveis que não
tivessem dado sangue até um ano antes
desta amostragem.
Grupo
Central 95%
n
Ind. Sexo Masc.
21 – 334 ng/mL
226
Ind. Sexo Fem.
5 – 143 ng/mL
193
Laboratórios devem considerar estes
resultados como directrizes apenas. Cada
laboratório deve estabelecer os seus
próprios valores de referência.
Limitação
Devido ao formato sequencial do
procedimento Coat-A-Count Ferritin IRMA,
é bastante improvável que mesmo as
amostras com concentrações de ferritina
extremamente elevadas venham a
produzir resultados baixos falsos — ao
contrário de outros ensaios
imunoradiométricos, muitos dos quais
sofrem o efeito "hook de alta dose".
Espécimens contendo valores de ferritina
de até 125 000 ng/mL foram submetidos a
ensaio segundo o procedimento
Coat-A-Count Ferritin IRMA, e concluiu-se
que produziam resultados
substancialmente acima de 2 000 ng/mL,
a concentração do calibrador mais
elevado.
Características do Ensaio
As secções seguintes contêm dados
representativos do desempenho do kit
Coat-A-Count Ferritin IRMA. Os
resultados da Ferritina nas secções
abaixo estão expressos em nanogramas
de ferritina por mililitro (ng/mL).
Calibração: Até 2 000 ng/mL
(WHO 2nd IS 80/578).
Sensibilidade Analítica: 0,5 ng/mL
Efeito Hook de Alta Dose: nenhum até
150 000 ng/mL.
Intra-ensaio (Dentro-da-Série): Foram
calculadas estatísticas para amostras a
partir dos resultados de 20 pares de tubos
num único ensaio. (Consulte a tabela
“Intraassay Precision".)
Inter-ensaios (De Série para Série):
Foram calculadas estatísticas para
amostras a partir dos resultados de pares
de tubos em 20 ensaios diferentes.
(Consulte a tabela “Interassay Precision".)
Efeito fim-de-série: Nenhum até
aproximadamente 200 tubos. (Ver tabela
"End-of-Run Effect".)
Especificidade: Os anticorpos
Coat-A-Count Ferritin IRMA foram criados
contra a ferritina do fígado humano e
foram seleccionados para reagir tanto
com ferritina do fígado como do baço. A
reactividade cruzada com a ferritina do
coração humano é inferior a 1%.
Linearidade: As amostras foram
doseadas sob várias diluições. (Consulte
a tabela "Linearity" para dados
representativos.)
Recuperação: Foram submetidas a
ensaio amostras a que foram adicionadas
quatro soluções de Ferritina 1 para 19
(350, 700, 1 400 e 2 800 ng/mL). (Ver
tabela de "Recovery" para dados
representativos.)
Bilirrubina: A presença de bilirrubina em
concentrações até 200 mg/L não tem
efeito em resultados, dentro da precisão
do ensaio.
Hemólise: A Presença de eritrocitos em
concentrações até 30 µL/mL não tem
efeito no resultado, dentro da precisão do
ensaio.
Tipo de amostra alternativa: Para
determinar o efeito de amostras
alternatives, foi colhido sangue de 26
voluntários em tubos secos, com EDTA,
®
heparinizados e tubos de vacum SST da
Becton Dickinson. Todas as amostras
foram ensaiadas pelo método
Coat-A-Count Ferritin IRMA, com os
seguintes resultados.
(Heparina) = 0,90 (Soro) + 2,64 ng/mL
r = 0,993
(EDTA) = 0,93 (Soro) – 0,02 ng/mL
r = 0,999
(SST) = 0,99 (tubos simples) + 0,13 ng/mL
r = 1,00
99,8 ng/mL (EDTA)
107,2 ng/mL (SST)
Comparação de Métodos: O
procedimento Coat-A-Count Ferritin IRMA
foi comparado com o IMMULITE Ferritin
em 40 amostras de paciente com
concentrações de ferritina oscilando
aproximadamente entre 0,8 e 325 ng/mL.
(Ver gráfico) Regressão linear:
(CAC IRMA) = 1,08 (IML) + 1,31 ng/mL
r = 0,995
Média:
56 ng/mL (IMMULITE)
Assistência Técnica
Por favor contacte o seu Distribuidor
Nacional.
O Sistema da Qualidade da Siemens Healthcare
Diagnostics Inc. está registado sob a norma ISO
13485:2003.
IMMULITE® and Coat-A-Count® are trademarks
of Siemens Healthcare Diagnostics.
©2010 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. All
rights reserved.
Origin: US
Siemens Healthcare Diagnostics Inc.
Los Angeles, CA 90045 USA
Siemens Healthcare Diagnostics Ltd.
Sir William Siemens Sq.
Frimley, Camberley, UK GU16 8QD
2010-11-02
PIIKFE – 11
Changes in this Edition:
cc#19759: Removed IKFE2 and IKFE5 kit sizes
and all associated component sizes and
radioactivity information. In Materials Required
But Not Provided section, added FDR catalog
number for foam decanting rack; removed
“available from Siemens” claim for graph paper
ZP43L, rack shaker DPSR1/DPSR2 and 2 mL
dispenser DB2ML. Removed Technical Bulletin
ZJ019 from Further Reading section.
Médias:
107,8 ng/mL (Soro)
99,1 ng/mL (Heparina)
47
Understanding the Symbols
Understanding the Symbols
En English
Erklärung der Symbole
De Deutsch
Descripción de los símbolos
Es Español
Explication des symboles
Fr Français
Comprensione dei simboli
It
Descrição dos símbolos
Pt Português
Italiano
The following symbols may appear on the
product labeling: / Die folgenden Symbole
können auf dem Produktetikett verwendet
werden: / Los siguientes símbolos pueden
aparecer en la etiqueta del producto: / Les
symboles suivants peuvent apparaître sur les
étiquettes des produits : / Sull'etichetta del
prodotto possono essere presenti i seguenti
simboli: / Os seguintes símbolos podem
aparecer no rótulo dos produtos:
Symbol Definition
En: In vitro diagnostic medical
device
De: Medizinisches Gerät zur
In-vitro Diagnose
Es: Dispositivo médico para
diagnóstico in vitro
Fr: Dispositif médical de
diagnostic in vitro
It: Dispositivo medico per
diagnostica in vitro
Pt: Dispositivo médico para
diagnóstico in vitro
En: Catalog Number
De: Katalog-Nummer
Es: Número de referencia
Fr: Numéro de référence
catalogue
It: Numero catalogo
Pt: Número de catálogo
En: Manufacturer
De: Hersteller
Es: Fabricante
Fr: Fabricant
It: Produttore
Pt: Fabricante
En: Authorized Representative in
the European Community
De: Autorisierte Vertretung in der
Europäischen Union
Es: Representante autorizado en
la Unión Europea
Fr: Représentant agréé pour
l’Union européenne
It: Rappresentante autorizzato
nella Comunità europea
Pt: Representante Autorizado na
Comunidade Europeia
48
Symbol Definition
En: CE Mark
De: CE-Kennzeichen
Es: Símbolo de la CE
Fr: Marque CE
It: Marchio CE
Pt: Marca CE
En: CE Mark with identification
number of notified body
De: CE-Kennzeichen
Identifikationsnummer der
benannten Stelle
Es: Marca de la CE con número
de identificación del organismo
notificado
Fr: Marque CE avec numéro
d’identification du corps notifié
It: Marchio CE con numero
identificativo dell'ente notificato
Pt: Marca CE, com número de
identificação do órgão notificado
En: Consult instructions for use
De: Bedienungshinweise
beachten
Es: Consulte las instrucciones de
uso
Fr: Consulter le mode d’emploi
It: Consultare le istruzioni per
l'uso
Pt: Consulte as instruções de
utilização
En: Caution! Potential Biohazard
De: Vorsicht! Biologisches
Risikomaterial
Es: ¡Precaución! Peligro Biológico
Potencial
Fr: Avertissement ! Risque
biologique potentiel
It: Attenzione! Potenziale Pericolo
Biologico
Pt: Precaução! Potenciais Riscos
Biológicos
En: Radioactive Materials
De: Radioaktives Material
Es: Materiales radiactivos
Fr: Matériaux radioactifs
It: Materiali radioattivi
Pt: Materiais Radioactivos
En: Caution
De: Vorsicht
Es: Precaución
Fr: Avertissement
It: Attenzione
Pt: Precaução
Symbol Definition
En: Temperature limitation
(2–8°C)
De: Temperaturgrenze (2–8°C)
Es: Limitación de la temperatura
(2–8°C)
Fr: Limites de température
(2–8°C)
It: Limiti di temperatura (2–8°C)
Pt: Limites de temperatura
(2–8°C)
En: Upper limit of temperature
(≤ -20°C)
De: Obere Temperaturgrenze
(≤ -20°C)
Es: Limitación superior de la
temperatura (≤ -20°C)
Fr: Limite supérieure de
température (≤ -20°C)
It: Limite superiore di temperatura
(≤ -20°C)
Pt: Limite máximo de temperatura
(≤ -20°C)
En: Lower limit of temperature
(≥2°C)
De: Mindesttemperatur (≥2°C)
Es: Temperatura maxima (≥2°C)
Fr: Limite inférieure de
température (≥2°C)
It: Limite inferiore di temperature
(≥2°C)
Pt: Limite inferior de temperatura
(≥2°C)
En: Do not freeze (> 0°C)
De: Nicht einfrieren (> 0°C)
Es: No congelar (> 0°C)
Fr: Ne pas congeler (> 0°C)
It: Non congelare (> 0°C)
Pt: Não congele (> 0°C)
En: Keep away from sunlight
De: Vor Sonneneinstrahlung
schützen
Es: Mantener protegido de la luz
solar
Fr: Maintenir hors de portée de la
lumière du soleil
It: Non esporre alla luce del sole
Pt: Manter protegido da luz solar
LOT
En: Batch code
De: Chargenbezeichnung
Es: Código de lote
Fr: Numéro de code du lot
It: Codice lotto
Pt: Código de lote
Symbol Definition
En: Contains sufficient for (n)
tests
De: Es reicht für (n) tests
Es: Contiene material para (n)
pruebas
Fr: Suffisant pour (n) tests
It: Contiene materiale sufficiente
per (n) test
Pt: Contém o suficiente para (n)
testes
2008-01
En: Date format (year-month)
De: Datumsformat (Jahr-Monat)
Es: Formato de fecha (año-mes)
Fr: Format de la date
(année-mois)
It: Formato data (anno-mese)
Pt: Formato de data (ano-mês)
En: Use by
De: Verwendbar bis
Es: Fecha de caducidad
Fr: A utiliser avant
It: Usare entro
Pt: Use até
En: Harmful
De: Gesundheitsschädlich
Es: Nocivo
Fr: Nocif
It: Nocivo
Pt: Nocivo
En: Corrosive
De: Ätzend
Es: Corrosivo
Fr: Corrosif
It: Corrosivo
Pt: Corrosivo
En: Toxic
De: Giftig
Es: Tóxico
Fr: Toxique
It: Tossico
Pt: Tóxico
En: Dangerous for the
environment
De: Umweltgefährlich
Es: Peligroso para el medio
ambiente
Fr: Dangereux pour
l'environnement
It: Pericoloso per l'ambiente
Pt: Perigoso para o ambiente
49

Ferritin IRMA

Transcrição

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