Instruções de uso - Diagnóstica Catarinense

BILIRRUBINA DIRETA E TOTAL
10.003.00
FINALIDADE
Kit destinado à determinação de Bilirrubina Direta e Total no soro.
PRINCÍPIO DO MÉTODO
Este kit baseia-se na reação de Malloy-Evelyn, que quantifica colorimetricamente
a formação de azobilirrubina, de coloração vermelha, quando a bilirrubina reage
sob determinadas condições com ácido sulfanílico diazotado.
A bilirrubina direta (diglicurônide) é dosada em meio aquoso e a bilirrubina total
(direta + indireta) é dosada por ação de um solubilizador (DMSO).
COMPOSIÇÃO DOS REAGENTES
Bilirrubina Direta: Ácido sulfanílico 35 mmol/L, ácido
clorídrico 180 mmol/L.
Bilirrubina Total: Ácido sulfanílico 40 mmol/L, ácido
clorídrico 60 mmol/L, Dimetilsulfóxido 1 mol/L.
Nitrito: Nitrito de sódio 33 mmol/L, azida sódica 0,095%
p/v.
•
CONDIÇÕES DE ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE
•
Estabilidade: Estável até a data de validade do kit que está impressa no rótulo
da embalagem.
•
Não usar reagentes cuja data de validade tenha expirado.
•
Conservar de 2 a 8 ºC.
•
Não congelar e manter ao abrigo da luz.
MATERIAL NECESSÁRIO NÃO FORNECIDO
•
Espectrofotômetro ou fotômetro para leitura em 550 nm (530-570).
•
Pipetas de vidro e/ou automáticas.
•
Relógio ou Cronômetro.
•
Tubos de ensaio.
CUIDADOS E PRECAUÇÕES
•
O kit destina-se somente para uso diagnóstico in vitro.
As amostras a serem analisadas devem ser tratadas como material
potencialmente infectante.
•
Utilizar os EPI’s de acordo com as Boas Práticas de Laboratório Clínico.
•
Descartar as sobras das reações de acordo com as Boas Práticas de
Laboratório Clínico (BPLC) e Programa de Gerenciamento de Resíduos de
Serviço de Saúde (PGRSS).
•
As informações de Descarte, Segurança e Primeiros Socorros estão
descritas na Ficha Individual de Segurança de Produtos Químicos (FISPQ)
deste produto, disponível em www.biotecnica.ind.br ou pelo telefone (35)3214-4646.
•
Não misturar reagentes de lotes diferentes.
•
Não trocar as tampas dos frascos dos reagentes, a fim de evitar
contaminação cruzada.
•
Não usar o reagente quando este apresentar característica visual em
desacordo com o especificado na FISPQ do produto.
•
Evitar deixar os reagentes fora das condições de armazenamento
especificadas, quando os mesmos não estiverem em uso.
•
Usar pipetas de vidro e ponteiras descartáveis específicas para cada
amostra, controle, padrão/calibrador e reagente.
•
O nível de água do banho-maria deve ser superior ao dos tubos de ensaio
que contém as reações.
•
Atenção! Tampar bem os frascos dos reagentes logo após o uso e
manter armazenado de 2-8°C.
AMOSTRA - PREPARO E ESTABILIDADE
Soro
Imediatamente após a coleta, proteger a amostra da ação da luz.
A bilirrubina é estável por até 8 horas de 10 a 30 °C, 12 horas de 2 a 8 °C ou 24
horas < 0 °C.
PROCEDIMENTO TÉCNICO
A) PREPARAÇÃO DOS REAGENTES
Modo Monoreagente:
Bilirrubina Direta - Misturar na proporção: 30 partes de RBD (Bilirrubina Direta) + 1
parte do RNI (Nitrito).
Homogeneizar suavemente.
Bilirrubina Total - Misturar na proporção: 30 partes de RBT (Bilirrubina Total) + 1
parte do RNI (Nitrito).
Homogeneizar suavemente.
2. Homogeneizar bem e manter os tubos durante 5 minutos em temperatura de 10
a 30 ºC.
3. Medir as absorbâncias do Calibrador, Branco do Calibrador, Amostra e Branco
da Amostra em 550 nm (530-570), zerando o fotômetro com o branco de reagente.
A cor é estável durante 30 minutos.
Bilirrubina Total
1. Pipetar em tubos de ensaio:
RBT
Monoreagente Bili. Total
Amostra/Calibrador
Branco
Reagente
1,0 mL
-----
Branco
Amostra
1,0 mL
--50 µL
Amostra
--1,0 mL
50 µL
2. Homogeneizar bem e manter os tubos durante 5 minutos em temperatura de 10
a 30 ºC.
3. Medir as absorbâncias do Calibrador, Branco do Calibrador e Amostra e Branco
da Amostra em 550 nm (530-570), zerando o fotômetro com o branco de reagente.
A cor é estável durante 30 minutos.
Procedimento Modo Bireagente:
Bilirrubina Direta
1. Pipetar em tubos de ensaio:
Branco
Reagente
RBD - Bili. Direta
1,0 mL
RNI - Nitrito
--Amostra/Calibrador
---
Branco
Amostra
1,0 mL
--50 µL
Amostra
1,0 mL
30 µL
50 µL
2. Homogeneizar bem e manter os tubos durante 5 minutos em temperatura de 10
a 30 ºC.
3. Medir as absorbâncias do Calibrador, Branco do Calibrador, Amostra e Branco
da Amostra em 550 nm (530-570), zerando o fotômetro com o branco de reagente.
A cor é estável durante 30 minutos.
Bilirrubina Total
1. Pipetar em tubos de ensaio:
Branco
Reagente
RBT – Bili. Total
1,0 mL
RNI - Nitrito
--Amostra/Calibrador
---
Branco
Amostra
1,0 mL
--50 µL
Amostra
1,0 mL
30 µL
50 µL
2. Homogeneizar bem e manter os tubos durante 5 minutos em temperatura de 10
a 30 ºC.
3. Medir as absorbâncias do Calibrador e Branco do Calibrador e Amostra e
Branco da Amostra em 550 nm (530-570), zerando o fotômetro com o branco de
reagente. A cor é estável durante 30 minutos.
Nota: Para teste em amostra pediátrica, o volume pode ser diminuído até 20 µL.
Caso essa opção for selecionada, reduzir igualmente o volume do calibrador e
controle.
Os volumes dos reagentes não devem ser alterados.
PROCEDIMENTO DE CALIBRAÇÃO/CÁLCULOS
Com Calibrador
Bilirrubina (mg/dL) = (Abs. Amostra - Abs. Branco Amostra) x Conc. Cal (mg/dL)
(Abs. Cal - Abs. Branco Cal)
Exemplo:
Concentração do Calibrador = 4,0 mg/dL
Absorbância da Amostra = 0,092
Absorbância Branco da Amostra = 0,04
Absorbância do Calibrador = 0,110
Absorbância Branco Calibrador = 0,051
Bilirrubina (mg/dL) = 0,092 - 0,040 x 4,0 = 3,52 mg/dL
0,110 - 0,051
Com Fator de Calibração Calculado
Fator de Calibração = Concentração Calibrador (mg/dL)
(Abs. Cal - Abs. Branco Cal)
Bilirrubina (mg/dL) = (Abs. amostra - Abs. Branco Amostra) x Fator de Calibração
Estável por 48 horas, quando mantido em frasco fechado e de 2 a 8 ºC.
Os reagentes de trabalho desenvolvem uma coloração alaranjada, porém, isto não
interfere no resultado final.
Exemplo:
Fator de Calibração =
B) Procedimento Modo Monoreagente:
Bilirrubina (mg/dL) = (0,092 - 0,040) x 67,8 = 3,52 mg/dL
Bilirrubina Direta
1. Pipetar em tubos de ensaio:
RBD
Monoreagente Bili. Direta
Amostra/Calibrador
Branco
Reagente
1,0 mL
-----
Branco
Amostra
1,0 mL
--50 µL
Amostra
--1,0 mL
50 µL
BIOTÉCNICA IND.COM. LTDA. Rua Ignácio Alvarenga nº 96, Vila Verônica,
Varginha MG BRASIL CEP: 37026-470 Tel/fax: +55 35 3214 4646
www.biotecnica.ind.br
4,0
= 67,8
0,110 - 0,051
SENSIBILIDADE E LINEARIDADE
- Sensibilidade Metodológica:
Calculado (BDI): 0,015 mg/dL
Calculado (BTO): 0,025 mg/dL
- Linearidade: 15 mg/dL.
Para valores superiores, diluir a amostra com NaCl 150 mM (0,9%), realizar nova
dosagem e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluição.
Revisão: 02 - SETEMBRO/2011
LIMITAÇÕES DA TÉCNICA
•
Hemólise e Lipemia
Evitar o uso de amostra hemolisada, pois a hemoglobina produz resultados
falsamente diminuídos.
Triglicérides > 150 mg/dL
•
Anticoagulantes
Todos anticoagulantes interferem na dosagem.
CONTROLE DA QUALIDADE
Todo laboratório clínico deve manter um programa de controle interno da
qualidade que defina claramente os objetivos, procedimentos, normas e critérios
para limites de tolerância, ações corretivas e registro das atividades. Ao mesmo
tempo, deve ser mantido um sistema definido para monitorar a variabilidade
analítica que ocorre em todo sistema de medição.
O uso de controles para avaliar a imprecisão das determinações deve ser prática
rotineira no laboratório. Sugere-se usar um controle na faixa de referência ou no
nível de decisão e outro controle com valor em outra faixa de significância clínica.
A aplicação do sistema de regras múltiplas de Westgard para avaliação do estado
de controle também é recomendável.
O laboratório deve participar de programas de controle externo de qualidade a fim
de verificar a exatidão de seus resultados. Têm-se como exemplo os programas
oferecidos pela SBAC (Sociedade Brasileira de Análises Clínicas) e SBPC
(Sociedade Brasileira de Patologia Clínica).
Para Controle Interno de Qualidade Laboratorial recomenda-se o uso do soro
calibrador e dos soros controle abaixo:
Soro Calibrador - Autocal H
13.002.00
Soro Controle Normal - Quantinorm
13.003.00
Soro Controle Patológico - Quantialt
13.004.00
VALORES DE REFERÊNCIA
SORO
Bilirrubina Total
Bilirrubina Direta
mg/dL
< 1,1
< 0,25
µmol/L
< 18,8
< 4,3
TABELA DE SÍMBOLOS INTERNACIONAIS
Estes valores são unicamente para orientação, sendo recomendável que cada
laboratório estabeleça seu próprio intervalo de referência.
Conversão para Unidade do Sistema Internacional (SI): µmol/L
Bilirrubina (mg/dL) x 17,1 = Bilirrubina (µmol/L)
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO
Repetibilidade
A realização de 20 determinações de uma mesma amostra em um mesmo dia,
com valores dentro da faixa de referência mostrou um Coeficiente de Variação de
3,95% para Bilirrubina Total e 4,73% para Bilirrubina Direta.
Reprodutibilidade
A realização de 10 determinações de uma mesma amostra, analisada em dias
diferentes mostrou um Coeficiente de Variação de 3,14% para Bilirrubina Total e
de 3,98% par Bilirrubina direta.
Especificidade Analítica
A comparação com um método similar, já validado, mostrou um coeficiente de
correlação, r, igual a 0,999 para Bilirrubina Total e 0,992 para Bilirrubina Direta, a
partir de amostras obtidas de pacientes de ambulatório. A equação de regressão
obtida foi Y = 0,9848X + 0,0419 para Bilirrubina Total e Y = 0,9875X + 0,0245 para
Bilirrubina Direta.
SIGNIFICADO CLÍNICO
A bilirrubina é formada principalmente pela degradação da molécula heme e é
transportada até o fígado, veiculada pela albumina. Nesta fase a bilirrubina é
insolúvel em água e é conhecida como bilirrubina não conjugada ou bilirrubina
indireta. No fígado a bilirrubina se liga ao ácido glicurônico, mediante a atuação
da enzima uridil difosfato glicuroniltransferase, transformando-se assim em
bilirrubina direta ou bilirrubina conjugada. A bilirrubina direta é excretada pelas
vias biliares até o intestino, onde é metabolizada pela flora bacteriana residente
a um grupo de produtos complexos conhecidos como estercobilinogênio. Esta
eliminação se dá de maneira praticamente completa. A bilirrubina total
corresponde a soma das frações direta e indireta. A determinação da bilirrubina
total e de suas frações é útil na avaliação de hepatopatias, quadros hemolíticos
e obstrução de vias biliares. Em particular é utilizada no acompanhamento da
icterícia do recém-nascido. Além da eritroblastose fetal, outras causas como
icterícia fisiológica, reabsorção de hematoma, hipotiroidismo, galactosemia,
sífilis, toxoplasmose, citomegalia, rubéola, deficiência de G6PD e esferocitose
podem provocar icterícia no neonato. A bilirrubina está elevada nas síndromes
de Crigler-Najjar e Gilbert.
OBSERVAÇÕES
1. A limpeza e secagem adequadas do material usado são fatores fundamentais
para a estabilidade dos reagentes e obtenção de resultados corretos.
A água utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes
contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O
enxágüe deve ser exaustivo sendo os últimos com água destilada ou deionizada.
2. A água utilizada no laboratório deve ter a qualidade adequada a cada aplicação.
Assim, para preparar reagentes e usar nas medições, a água deve ser do Tipo II,
com resistividade > 1 megaohms ou condutividade < 1 microsiemens e
concentração de silicatos < 0,1 mg/L. Para o enxágüe inicial da vidraria, a água
pode ser do Tipo III, com resistividade > 0,1 megahoms ou condutividade < 10
microsiemens. No enxágüe final, utilizar água do Tipo II. Coluna deionizadora com
sua capacidade saturada libera água alcalina, vários íons e também substâncias
com grande poder de oxidação ou redução que deterioram os reagentes em
poucos dias ou mesmo horas, alterando de maneira imprevisível os resultados.
Assim, é fundamental estabelecer um programa de controle da qualidade da água.
APRESENTAÇÕES
Apresentação 1
Apresentação 2
RBD
RBT
RNI
RBD
RBT
RNI
1 x 50 mL
1 x 50 mL
1 x 5 mL
1 x 250 mL
1 x 250 mL
2 x 13 mL
GARANTIA DE QUALIDADE
Antes de serem liberados para o consumo, todos os reagentes Biotécnica são
testados pelo Departamento de Controle de Qualidade. A qualidade dos reagentes
é assegurada até a data de validade mencionada na embalagem de
apresentação, desde que armazenados e transportados nas condições
especificadas. Os dados relativos ao Controle de Qualidade deste produto (lote
impresso nas etiquetas dos frascos de reagentes) podem ser solicitados em:
[email protected]
AUTOMAÇÃO
Este procedimento é automatizável na maioria dos analisadores.
Os protocolos estão disponíveis em www.biotecnica.ind.br
SAC - SERVIÇO DE ATENDIMENTO AO CONSUMIDOR
Qualquer dúvida na utilização deste kit, entrar em contato com a Assessoria
Científica da Biotécnica Ltda, através do telefone +55 35 3214 4646 ou pelo
email [email protected]
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
•
HIJMANS VAN DEN BERGH, A. A.; MULLER, P. Uber eine directe und eine
indirecte diazoreaction auf bilirubin. Biochem. Z. v.77, p.90-103, 1916.
•
MALLOY H. T.; EVELYN K. A. Determination of bilirubin with photoeletric
colorimeter. J. Biol. Chem. v.119, p.481-90, 1937.
•
MATIMEK, R. G. Colorimetric determination of bilirubin, total and direct. Clin.
Chim. Acta. v.13 p.161, 1966.
•
YOUNG, D.S. Effects of drugs on clinical laboratory tests - vol. 2, 5 ed.
Washington DC: AACC Press, 2000.
•
WESTGARD, J. O. et al. A multi-rule shewhart chart quality control in clinical
chemistry. Clin. Chem. v.27 p.493-501, 1981.
RESPONSABILIDADE TÉCNICA
Dr. Gilson Sério Pizzo - CRF MG - 5310
MS
80027310205
50 testes
de 1 mL
250 testes
de 1 mL
SÍMBOLO
IDIOMA
Português
English
Español
Português
English
Español
Português
English
Español
Português
English
Español
Português
English
Español
Português
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Español
Português
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Español
Português
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Español
Português
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Español
Português
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Español
Português
English
Español
Português
English
Español
Português
English
Español
DEFINIÇÃO
Consultar Instruções de Uso
Consult instructions for use
Consultar la metódica
Código
Code
Código
Número de lote
Batch code
Denominación de lote
Para uso diagnóstico in vitro
For in vitro diagnostic medical device
Para uso em diagnostico in vitro
Conteúdo do kit
Contents of kit
Contenido del estuche
Conteúdo suficiente para <n> testes
Contains sufficient for <n> tests
Contenido suficiente para <n> ensayos
Calibrador
Calibrator
Calibrador
Controle
Control
Control
Padrão
Standard
Patrón
Reagente e seu número/abreviação
Reagent and its number/abbreviation
Reactivo e su número/abreviación
Limite de temperatura
Temperature limitation
Temperatura límite
Data limite de utilização (último dia do mês)
Use by (last day of the month)
Estable hasta (ultimo día del mes)
Fabricado por
Manufactured by
Elaborado por
Risco biológico
Biological risk
Riesgo biológico
Corrosivo
Corrosive
Corrosivo
Tóxico
Toxic
Tóxico
Inflamável
Flammable
Inflamable
Nocivo / Irritante
Harmful / Irritant
Nocivo / Irritante
Material reciclável
Recyclable material
Material reciclable
Não descartar diretamente no ambiente
Dispose properly
Desechar adecuadamente