ThromboPath - 0020005500 HemosIL® ThromboPath

HemosIL®
ThromboPath - 0020005500
ITALIANO - Revisione dell’inserto 12/2008
Utilizzo
Metodo
Prestazioni
ThromboPath (ThP) è un test cromogenico automatico per la valutazione funzionale del
sistema anticoagulante della Proteina C nel plasma umano su sistemi di coagulazione
ACL.
Questo test può essere utilizzato, nello studio del paziente trombofilico, come ausilio
nella diagnosi di difetti quali, le carenze di Proteina S (PS) e di Proteina C (PC), la
mutazione del Fattore V Leiden (FVL) e la presenza di Lupus Anticoagulante (LA).
Per le metodiche e le procedure di lavoro fare riferimento al Manuale dell’Operatore e/o
al Manuale Applicativo degli strumenti IL.
Precisione:
La precisione nella serie e totale (tra ciclo e ciclo e tra giorno e giorno) è stata verificata
eseguendo numerosi test.
ACL 8/9/10000
Media (PiCi%) CV % (nella serie) CV % (Totale)
Controllo normale
81,8
0,61
1,55
Plasma di Controllo patologico
67,6
1,97
3,02
(livello basso)
ACL Futura/ACL Advance
Media (PiCi%) CV % (nella serie) CV % (Totale)
Controllo normale
80,7
0,78
1,36
Plasma di Controllo patologico
68,8
1,80
2,59
(livello basso)
Correlazione:
Sono stati eseguiti tre studi su diversi strumenti. Per ogni studio sono stati determinati i
relativi valori di cut-off, di sensibilità e di specificità.6-10
In uno studio effettuato internamente sono stati analizzati 267 campioni di plasma
citratati (126 normali/141 anormali) utilizzando il kit ThromboPath su ACL Advance.
Tutti i campioni patologici analizzati erano di pazienti con difetti conosciuti a carico del
sistema PC/PS (carenze di Proteina S, Proteina C, resistenza alla Proteina C attivata e
Lupus Anticoagulante). I campioni anormali sono stati selezionati utilizzando kit della
Instrumentation Laboratory.
Principio del metodo
L’azione anticoagulante mediata dal sistema della Proteina C è uno dei più importanti
meccanismi di regolazione della coagulazione.
In vivo, la trombina interagisce con la trombomodulina per attivare la Proteina C a
Proteina C Attivata (APC) la cui azione è quella di degradare i fattori procoagulanti FVa
e FVIIIa. Questa azione viene potenziata in presenza dei cofattori, Proteina S e FV, e di
fosfolipidi.
Il kit ThromboPath indaga le possibili disfunzioni del sistema anticoagulante della
Proteina C misurando la generazione di trombina endogena ed esprimendola come %
di Inibizione della Coagulazione indotta da Protac (PiCi%).
Nel dosaggio, il campione di plasma viene diluito con Diluente ThP e suddiviso in due
aliquote: un’aliquota viene incubata con Attivatore ThP A (contenente Protac), l’altra
viene incubata con Attivatore ThP B (senza Protac). La generazione di trombina si
ottiene, in entrambe le aliquote, con l’aggiunta di Tromboplastina ThP.
L’attività della trombina è determinata misurando l’incremento di Densità Ottica (OD) a
405 nm dopo l’aggiunta di Substrato Cromogenico ThP, con relazione di proporzionalità
diretta.
Il risultato del dosaggio è espresso come PiCi% calcolato mediante la seguente
formula: PiCi% = ((OD aliquota con Attivatore B - OD aliquota con Attivatore A)/(OD
aliquota con Attivatore B)) x 100).
Il cut-off deve essere determinato per ogni sistema analitico. Risultati inferiori al cut-off
potrebbero significare o la presenza di possibili patologie a carico del sistema Proteina
C/Proteina S o la possibile presenza di Resistenza alla Proteina C Attivata o la
possibile presenza di Anticoagulante Lupico.
Preparazione dei campioni
Aggiungere a nove parti di sangue fresco venoso una parte di trisodio citrato. Per
informazioni aggiuntive sulla preparazione, il trattamento e la conservazione dei
campioni fare riferimento al documento CLSI (ex NCCLS) H21-A4.3
Reagenti ausiliari e plasmi di controllo
I seguenti prodotti non sono forniti insieme al kit e devono essere ordinati
separatamente.
Nr. Cat.
Controllo normale
0020003110
Controllo di qualità
Per un completo programma di controllo di qualità si raccomanda l’uso di plasmi
normali e patologici.4 Il Controllo normale e il Plasma di Controllo patologico (livello
basso) sono indicati per questo programma. Ogni laboratorio dovrà stabilire i propri
valori medi e le deviazioni standard per ogni controllo ed individuare le corrette
procedure di analisi. I controlli dovranno essere analizzati almeno una volta ogni 8 ore
in accordo con le esigenze del laboratorio. Consultare il Manuale dell’Operatore dello
strumento per ulteriori informazioni. Per l’identificazione e la risoluzione di situazioni
particolari, fare riferimento all’articolo di Westgard et al.5
Il Plasma di Controllo patologico (livello basso) deve dare dei risultati inferiori a 75
PiCi% e deve essere come minimo 8 PiCi% più basso del Controllo normale.
Risultati
Per calcolare i valori di PiCi% utilizzare la seguente procedura.
PiCi% =
Composizione
Il kit ThromboPath è composto da:
D
ThP Diluent (Nr. Cat. 0020005521): 2 flaconi da 10 mL di una soluzione di
tampone HEPES con aggiunta di polibrene, stabilizzanti e conservanti.
S
ThP Substrate (Nr. Cat. 0020005522): 1 flacone da 8 mL di substrato
cromogenico liofilizzato S-2796 Z-D-Arg-Sar-Arg-pNA.2HCL (1.46 g/L) con
stabilizzanti.
T
ThP Thromboplastin (Nr. Cat. N 0020005523): 2 flaconi da 4 mL di una
preparazione di reagente PT liofilizzato contenente fattore tissutale, fosfolipidi
sintetici, ioni calcio, magnesio, manganese, tampone HEPES, stabilizzanti e
conservanti.
A
ThP Activator A (Nr. Cat. 0020005524): 1 flacone da 5 mL di una preparazione
liofilizzata di attivatore della Proteina C estratto dal veleno di Agkistrodon
contortrix contortrix (Protac®), con aggiunta di stabilizzanti e conservanti.
B
ThP Activator B (Nr. Cat. 0020005525): 1 flacone da 5 mL di una preparazione
liofilizzata di attivatore B (senza Protac) con aggiunta di stabilizzanti e
conservanti.
L
Low Control Plasma (P/N 0020005526): 2 flaconi da 1 mL di plasma umano
liofilizzato con livelli ridotti di Proteina S.
ATTENZIONE:
Questo prodotto contiene materiale di cui è stata verificata all’origine, con metodi
raccomandati dalla FDA, l’assenza dell’antigene di superficie dell’epatite B (HBsAg) e
degli anticorpi anti-HCV e anti-HIV 1/2. Trattare come potenzialmente infetto.1
Evitare il contatto con gli occhi e con la pelle (S 24/25). Non gettare i residui nelle
fognature (S 29). Usare indumenti protettivi adatti (S 36).
Per uso diagnostico in vitro.
Preparazione
ThP Diluent: Capovolgere prima dell’uso.
ThP Substrate: Sciogliere il contenuto del flacone con 8 mL di acqua distillata.2
Chiudere con il tappo e miscelare delicatamente fino alla completa ricostituzione del
materiale. Mantenere il reagente a 15-25°C per 30 minuti e miscelarlo nuovamente
prima dell’uso. Non agitare.
ThP Thromboplastin: Sciogliere il contenuto del flacone con 4 mL di acqua distillata.2
Chiudere con il tappo e miscelare delicatamente fino alla completa ricostituzione del
materiale. Mantenere il reagente a 15-25°C per 30 minuti e miscelarlo nuovamente
prima dell’uso. Non agitare.
ThP Activator A: Sciogliere il contenuto del flacone con 5 mL di acqua distillata.2
Chiudere con il tappo e miscelare delicatamente fino alla completa ricostituzione del
materiale. Mantenere il reagente a 15-25°C per 30 minuti e miscelarlo nuovamente
prima dell’uso. Non agitare.
ThP Activator B: Sciogliere il contenuto del flacone con 5 mL di acqua distillata.2
Chiudere con il tappo e miscelare delicatamente fino alla completa ricostituzione del
materiale. Mantenere il reagente a 15-25°C per 30 minuti e miscelarlo nuovamente
prima dell’uso. Non agitare.
ThP Low Control Plasma: Sciogliere il contenuto del flacone con 1 mL di acqua
distillata. 2 Chiudere con il tappo e miscelare delicatamente fino alla completa
ricostituzione del materiale. Mantenere il reagente a 15-25°C per 30 minuti e miscelarlo
nuovamente prima dell’uso. Non agitare.
(OD con Attivatore B – OD con Attivatore A)
———————————————————— x 100
(OD con Attivatore B)
Vedere le informazioni fornite nella sezione “Determinazione del valore di Cut-off in
PiCi%” per l’interpretazione dei risultati.
Limitazioni/sostanze interferenti
I risultati del test ThromboPath sui sistemi di coagulazione ACL non sono influenzati in
presenza di livelli di emoglobina fino a 100 mg/dL, bilirubina fino a 20 mg/dL, trigliceridi
fino a 700 mg/dL, eparina fino a 0,75 U/mL (eparina non frazionata e a basso peso
molecolare), FVII fino a 2 U/mL o FVIIa e FVIII fino a 0,5U/mL e dalla presenza dei
fattori della fase di contatto della via intrinseca della coagulazione. Concentrazioni alte
di FII, FVII, FVIIa, FX, LA e un avanzato stato di gravidanza potrebbero diminuire i
valori di PiCi%. Nello stesso modo basse concentrazioni di FII, FVIII e FX possono
aumentare i valori di PiCi%.
Determinazione del valore di Cut-Off in PiCi%
Le anomalie nel sistema anticoagulante della Proteina C, associate ad un aumentato
rischio trombotico, possono essere evidenziate quando il valore ottenuto in PiCi% è
uguale o inferiore al cut-off.
Si raccomanda che ciascun laboratorio stabilisca il proprio valore di cut-off per ogni
lotto specifico di ThromboPath e per ogni tipo di analizzatore in uso.
NOTA: Per il calcolo del valore di cut-off devono essere utilizzati campioni con la stessa
concentrazione di citrato (3.2 o 3.8%) dei plasmi in esame.
Procedura per stabilire il valore di cut-off in PiCi%
1. Determinare l’intervallo di normalità per ogni nuovo lotto di ThromboPath.
2. Eseguire il test ThromboPath utilizzando almeno 30 campioni di plasma di individui
sani, sia maschi che femmine, compresi in un intervallo di età dai 20 ai 65 anni. Si
consiglia di includere i plasmi di controllo (normale e patologico basso) per la
validazione dei risultati.
3. Calcolare la media e la deviazione standard in PiCi%.
4. Calcolare il cut-off sottraendo al valore medio una deviazione standard.
5. Il valore in PiCi% del Plasma di Controllo patologico (livello basso) dovrebbe essere
inferiore al valore del cut-off.
6. Il valore in PiCi% del Controllo normale deve essere superiore a quello del Plasma
di Controllo patologico (livello basso) e vicino al valore del cut-off.
Interpretazione dei risultati
Il valore del cut-off in PiCi% deve essere determinato in ciascun laboratorio, come già
indicato in precedenza, per ogni nuovo lotto di ThromboPath e per ogni tipo di
analizzatore in uso.
I campioni patologici per difetti di PS, o di PC, o per resistenza alla Proteina C attivata
(APCR) o per la presenza di Lupus Anticoagulante possono dare nel test ThP un
risultato inferiore al valore di cut-off.
Campioni con carenze di Proteina C, Proteina S, FV Leiden o Lupus Anticoagulante
possono presentare una diminuzione dell’attività del sistema PC/PS espressa in PiCi%.
In alcuni studi preliminari, sono stati rilevati valori di PiCi% inferiori al cut-off in donne in
gravidanza. Le femmine presentano una media del 4.2% inferiore in PiCi% rispetto agli
uomini. Si consiglia di determinare valori di cut-off distinti per maschi e femmine.
Utilizzare per il calcolo del cut-off, almeno 30 campioni di plasma di individui sani, sia
maschi che femmine.
Conservazione e stabilità dei reagenti
Valori attesi
I reagenti sigillati sono stabili a 2-8°C fino alla data di scadenza stampata sull’etichetta
del flacone.
ThP Diluent, ThP Substrate, ThP Activator A and B: Stabilità dopo ricostituzione: 2
giorni a 2-8°C, 3 settimane a -20°C nel flacone originale o 32 ore a 15°C su ACL
Futura/ACL Advance e ACL 8000/9000/10000. Non è richiesto l’agitatore per la
miscelazione.
ThP Thromboplastin: Stabilità dopo ricostituzione: 2 giorni a 2-8°C, 32 ore a 15°C su
ACL Futura/ACL Advance e ACL 8000/9000/10000. Non è richiesto l’agitatore per la
miscelazione.
ThP Low Control Plasma: Stabilità dopo ricostituzione: 4 ore a 15-25°C nella
coppetta, o 7 giorni a -20°C nel flacone originale.
Al termine dei cicli lavorativi si consiglia di conservare i reagenti a 2-8°C nel flacone
originale per una migliore stabilità.
Utilizzando il kit ThromboPath è stato determinato il seguente valore di cut-off sui
sistemi di coagulazione ACL.
Sistema
N
Media meno 1 Deviazione Standard
ACL 8000/9000/10000
126
81,0 PiCi%
ACL Futura/Advance
126
80,6 PiCi%
I risultati ottenuti in un altro studio, effettuato analizzando 30 soggetti normali e qui di
seguito riportati, confermano che è accettabile determinare il valore di cut-off
utilizzando una popolazione di 30 campioni.
Sistema
N
Media meno 1 Deviazione Standard
ACL 8000/9000/10000
30
81,1 PiCi%
ACL Futura/ Advance
30
80,9 PiCi%
I risultati sono stati determinati usando un lotto specifico di reagente. A causa delle
diverse variabili, che possono condizionare il tempo di coagulazione, ogni laboratorio
deve stabilire il proprio intervallo di normalità e il valore di cut-off.
ThromboPath - 0020005500
Cut-off = 80,9%
Sensibilità = 98%
Specificità = 86%
Studio 1
Normali
PS Def.
PC Def.
PS & PC Def.
FV Leiden
L.A.
Numero
Campioni
Falsi
Positivi
Falsi
Negativi
126
11
14
35
44
34
14%
0
0
0
0
0
0
0
0
0
2,5%
0
In uno secondo studio effettuato presso un laboratorio esterno sono stati analizzati 125
campioni di plasma citratati (40 normali/85 anormali) utilizzando il kit ThromboPath su
ACL 9000. Tutti i campioni patologici analizzati erano di pazienti con difetti conosciuti a
carico del sistema PC/PS (carenze di Proteina S, Proteina C, resistenza alla Proteina C
attivata e Lupus Anticoagulante). I campioni anormali sono stati selezionati utilizzando
kit della Instrumentation Laboratory.
Cut-off = 85,4%
Sensibilità = 91,7%
Specificità = 85%
Studio 2
Normali
PS Def.
PC Def.
PS & PC Def.
FV Leiden
L.A.
Numero
Campioni
Falsi
Positivi
Falsi
Negativi
40
26
19
8
22
10
15%
0
0
0
0
0
0
23%
5,3%
0
2,5%
0
In un terzo studio effettuato presso un laboratorio esterno sono stati analizzati 133
campioni di plasma citratati (102 normali/31 anormali) utilizzando il kit ThromboPath su
ACL 9000. Tutti i campioni patologici analizzati erano di pazienti con difetti conosciuti a
carico del sistema PC/PS (carenze di Proteina S, Proteina C e resistenza alla Proteina
C attivata). I campioni anormali sono stati selezionati utilizzando kit della
Instrumentation Laboratory.
Cut-off = 86,25%
Sensibilità = 90,3%
Specificità = 94,1%
Studio 3
Normali
PS Def.
PC Def.
PS & PC Def.
FV Leiden
L.A.
Numero
Campioni
Falsi
Positivi
Falsi
Negativi
102
18
7
1
5
0
5,9%
0
0
0
0
-
0
11,1%
14,2%
0
0
-
I risultati dei test di precisione e di correlazione sono stati ottenuti usando uno specifico
lotto di reagenti e controlli.
PORTUGUÊS - Revisão do folheto 12/2008
Utilização Prevista
Reagentes Adicionais e Plasmas de Controlo
Características de Desempenho
O HemosIL ThromboPath (ThP) é um ensaio cromogénico para a avaliação funcional
da via anticoagulante da Proteína C do plasma humano citratado nos Sistemas de
Coagulação IL. O ensaio destina-se a auxiliar o diagnóstico de defeitos trombofílicos
como deficiências em Proteína S (PS), Proteína C (PC), Factor V de Leiden (FVL) e
Anticoagulantes lúpicos(LA).
Os seguintes não são fornecidos com o kit e devem ser adquiridos separadamente.
Américas e Pacífico
Europa
Cat. No.
Cat. No.
Normal Control
0020003120
0020003110
Resumo e Princípio
Controlo de Qualidade
Precisão:
A precisão intra-análise e total (de análise para análise e dia a dia) foi aferida ao longo
de múltiplas análises utilizando as amostras de controlo normais e anormais.
ACL 8/9/10000
Média (PiCi%) CV % (intra-análise) CV % (Total)
Plasma Normal Control
81.8
0.61
1.55
Plasma Low Control
67.6
1.97
3.02
ACL Futura/ACL Advance
Média (PiCi%) CV % (intra-análise) CV % (Total)
Plasma Normal Control
80.7
0.78
1.36
Plasma Low Control
68.8
1.80
2.59
Correlação:
Realizaram-se 3 estudos em vários instrumentos. O cut-off foi realizado para cada
estudo e determinou-se a sensibilidade e a especificidade respectiva. 6-10
Executou-se um estudo interno com 267 amostras (126 normais/141 anormais),
utilizando ThromboPath para rastrear as amostras de plasma citratado com
deficiências conhecidas em Proteína S, C, APC R V e anticoagulante lúpico num ACL
Advance. As amostras anormais foram identificadas utilizando ensaios do
Instrumentation Laboratory.
A via de anticoagulação da proteína C é um dos mais importantes mecanismos
regulatórios da coagulação. In vivo, a trombina que se liga ao receptor trombomodulina
activa a proteína C a Proteína C activada (APC). Por sua vez a APC, degrada os
factores pró-coagulantes FVa e FVIIIa, e esta acção é potenciada na presença dos
co-factores da APC, Proteína S e Factor V e fosfolípidos. O HemosIL ThromboPath
determina a disfunção da via da anticoagulação da Proteína C, através da medição da
geração endógena de Trombina como Percentagem da Inibição da Coagulação
induzida pelo Protac (Protac-induced Coagulation Inhibition Percent-PiCi%). Durante o
ensaio, a amostra de plasma é diluida com ThP Diluent e analisada em duas alíquotas
separadas. Uma alíquota é incubada com o ThP Activator A (com Protac) e a outra
alíquota é incubada com o ThP Activator B (sem Protac). A geração de Trombina em
ambas as alíquotas é iniciada pela adição de ThP Thromboplastin. A actividade da
Trombina é quantificada, após a adição de ThP Chromogenic Substrate, como o
aumento da densidade óptica a 405nm. O resultado final do ensaio é calculado como
PiCi% = ((DO com Activator B - DO com Activator A) / (DO com Activator B)) x 100.
O cut-off pode ser determinado para cada plataforma de instrumento. Abaixo do cutoff, as amostras podem ser patológicas quer para o PC, PS ou Resistência APC e
Anticoagulantes lúpicos.
Os controlos normal e baixo são recomendados para um programa de controlo de
qualidade completo.4 O Normal Control vendido em separado e o ThP Low Control
Plasma incluído neste kit foram concebidos ara fazerem parte deste programa. Cada
laboratório deve estabelecer a sua própria média e desvio padrão e ainda, estabelecer
um programa de controlo de qualidade para monitorizar as análises laboratoriais. Os
controlos devem ser analisados pelo menos uma vez, em cada turno de 8 horas, de
acordo com as boas práticas de laboratório. Consulte o Manual do Operador do
instrumento, para obter informação adicional. Consulte Westgard et al para
identificação e resolução de situações fora do controlo.5
O plasma Low Control dará resultados inferiores a 75 PiCi% e estará no mínimo, 8
PiCi% abaixo do plasma Normal Control.
Resultados
O seguinte procedimento deverá ser utilizado para calcular o PiCi%
PiCi% =
Composição
O kit ThromboPath consiste em:
D
ThP Diluent (P/N 0020005521): 2 x 10 mL frascos de uma preparação líquida
contendo tampão HEPES, polibreno, agente espessante e conservantes.
S
ThP Substrate (P/N 0020005522): 1 x 8 mL frascos de uma preparação
liofilizada com substrato cromogénico S-2796 Z-D-Arg-Sar-Arg-pNA.2HCL 1.46g/L
com agente espessante.
T
ThP Thromboplastin (P/N 0020005523): 2 x 4 mL frascos de reagente PT
liofilizado com tampão HEPES, factor tecidular, fosfolípidos sintéticos, cálcio,
magnésio, manganésio, agentes espessantes e conservantes..
A
ThP Activator A (P/N 0020005524): 1 x 5 mL frasco de fracção liofilizada de
activador da proteína C proveniente do veneno da Agkistrodon contortrix
contortrix (Protac®) com agente espessante e conservante.
B
ThP Activator B (P/N 0020005525): 1 x 5 mL frascos de activador B liofilizado
sem Protac com agente espessante e conservante.
L
Low Control Plasma (P/N 0020005526): 2 x 1 mL frascos de plasma humano
liofilizado com um nível baixo de Proteína S.
PRECAUÇÕES E AVISOS:
Os materiais deste produto foram analisados com métodos aprovados pela FDA e
foram não reactivos para o Antigénio de Superfície da Hepatite B (AgHBs), e para os
anticorpos anti-HCV e anti-HIV. Manipule como potencialmente infeccioso1
Evitar o contacto com a pele e os olhos (S 24/25). Não deitar os resíduos no esgoto (S 29).
Usar vestuário de protecção adequado (S 36).
Este produto destina-se a Uso em Diagnóstico in vitro.
Preparação
ThP Diluent: Pronto a utilizar. Antes de utilizar, inverter para misturar.
ThP Substrate: Dissolver o conteúdo com 8 mL de água tipo II CLSI (anteriormente
NCCLS) ou equivalente.2 Substituir a tampa e agite suavemente. Assegure-se que o
produto foi completamente reconstituído. Manter os reagentes entre 15-25°C durante
30 minutos e inverter para misturar antes de utilizar. Não agitar.
ThP Thromboplastin: Dissolver o conteúdo com 4 mL de água tipo II CLSI ou
equivalente.2 Substituir a tampa e agite suavemente. Assegure-se que o produto foi
completamente reconstituído. Manter os reagentes entre 15-25°C durante 30 minutos e
inverter para misturar antes de utilizar. Não agitar.
ThP Activator A: Dissolver o conteúdo com 5 mL de água tipo II CLSI ou equivalente.2
Substituir a tampa e agite suavemente. Assegure-se que o produto foi completamente
reconstituído. Manter os reagentes entre 15-25°C durante 30 minutos e inverter para
misturar antes de utilizar. Não agitar.
ThP Activator B: Dissolver o conteúdo com 5 mL de água tipo II CLSI ou equivalente.2
Substituir a tampa e agite suavemente. Assegure-se que o produto foi completamente
reconstituído. Manter os reagentes entre 15-25°C durante 30 minutos e inverter para
misturar antes de utilizar. Não agitar.
ThP Low Control Plasma: Dissolver o conteúdo com 1 mL of CLSI de água tipo II
CLSI ou equivalente.2 Substituir a tampa e agite suavemente. Assegure-se que o
produto foi completamente reconstituído. Manter os reagentes entre 15-25°C durante
30 minutos e inverter para misturar antes de utilizar. Não agitar.
Conservação e Estabilidade dos Reagentes
Os reagentes selados são estáveis até ao fim do prazo de validade impresso no frasco,
desde que conservado entre 2-8°C.
ThP Diluent, ThP Substrate, ThP Activator A and B: Estabilidade pós-reconstituição:
2 dias a 2-8°C, 3 semanas a -20°C no frasco original ou 32 horas a 15°C nos Sistemas
ACL Futura/ACL Advance e ACL 8000/9000/10000. Não é necessário agitar.
ThP Thromboplastin: Estabilidade pós-reconstituição: 2 dias a 2-8°C, ou 32 horas a
15°C nos Sistemas ACL Futura/ACL Advance e ACL 8000/9000/10000. Não é
necessário agitar.
ThP Low Control Plasma: Estabilidade pós-reconstituição:4 horas a 15-25°C no copo
de amostra, ou 7 dias a - 20°C no frasco original.
Para estabilidade óptima remover os reagentes do sistema e conservá-los entre 2-8°C
no frasco original.
Cut-off 80.9%
(DO com Activator B – DO com Activator A)
———————————————————— x 100
(DO com Activator B)
Ver a secção de Cut-off PiCi% para instruções acerca da interpretação de resultados.
Limitações/Substâncias Interferentes
Os resultados ThromboPath não são afectados pela hemoglobina até 100 mg/dL,
bilirrubina até 20 mg/dL, triglicéridos até 700 mg/dL, Heparina até 0.75 U/mL (HNF e
HBPM), FVII ou FVIIa até 2.0 U/mL, FVIII até 0.5U/mL e activação por contacto.
Concentrações elevadas de FII, FVII, FVIIa, FX, LA e gravidez tardia podem diminuir
os valores de PiCi%. Do mesmo modo, as baixas concentrações de FII, FVIII e FX
podem diminuir os valores de PiCi%.
Cut-Off PiCi%
Os defeitos trombofílicos na via da Proteína C pode ser evidente quando o PiCi% é
igual a ou inferior ao cut-off.
Quando utilizar o kit HemosIL ThromboPath, o cut-off tem de ser estabelecido para
cada instrumento individual e para lote específico de HemosIL ThromboPath utilizado.
NOTA: A concentração de citrato das amostras devem igualar aquela com que o cut-off
foi estabelecido. (citrato a 3.2 ou 3.8%)
Procedimento para estabelecer o valor de cut-off PiCi%
1. Para cada novo lote de ThromboPath, deve estabelecer-se um novo intervalo normal.
2. Realize a análise com 30 indivíduos normais saudáveis, com igual número de
homens e mulheres, de idades entre 20 – 65 anos.
3. Calcule a média e o desvio padrão em PiCi%.
4. O cut-off é igual à média menos um desvio padrão.
5. O plasma ThP Low Control deve ser inferior ao cut-off estabelecido.
6. O plasma Normal Control será mais elevado do que o controlo baixo e perto do cutoff estabelecido.
Interpretação
O valor de cut-off PiCi% deve ser estabelecido para cada plataforma de instrumento,
pelos clientes localmente, com cada novo lote de ThromboPath, tal como foi
anteriormente definido. Abaixo do cut-off, as amostras podem ser patológicas para PC,
PS ou Resistência APC e anticoagulantes lúpicos.
O cut-off estabelecido deve ser um ponto abaixo, do que as amostras APCR-Vheterozigóticas, e amostras com PC < 70% e PS<60% se enquadram. Amostras com
deficiência em Proteína C, em Proteína S, no FV de Leiden ou com anticoagulantes
lúpicos podem apresentar uma actividade PiCi% diminuída.
Em estudos limitados, os resultados de mulheres grávidas estavam abaixo do intervalo
de cut-off PiCi%. As mulheres tinham uma média de PiCi% mais baixa cerca de 4.2%,
do que os homens. Podem ser utilizados valores separados de cut-off para homens e
mulheres. O número de amostras (n) deve igualar 30 quando se estabelecerem os cutoffs baseados no sexo.
Valores Esperados
O cut-off foi realizado utilizando o kit ThP nos Sistemas de Coagulação IL.
Sistema
N
Média menos 1 Desvio Padrão
ACL 8000/9000/10000
126
81.0 PiCi%
ACL Futura/Advance
126
80.6 PiCi%
Num estudo adicional utilizando 30 amostras de doentes normais, os resultados
seguintes foram obtidos para concluir que o estabelecimento de um cut-off baseado
num conjunto de 30 amostras de uma população normal é aceitável.
Sistema
N
Média menos 1 Desvio Padrão
ACL 8000/9000/10000
30
81.1 PiCi%
ACL Futura/ Advance
30
80.9 PiCi%
Estes resultados foram obtidos utilizando um lote especifíco de reagente. Devido a
muitas variáveis, que podem afectar os tempos de coagulação, cada laboratório deverá
estabelecer o seu intervalo normal e o cut-off.
Sensibilidade = 98%
Especificidade = 86%
Studio 1
Normal
Def PS
Def PC
Def PS & PC
FV Leiden
A.L.
N°
Amostras
Falso
Positivo
Falso
Negativo
126
11
14
35
44
34
14%
0
0
0
0
0
0
0
0
0
2,5%
0
Realizou-se um segundo estudo com 125 amostras (40 normais/85 anormais) num
laboratório externo utilizando ThromboPath para rastrear amostras de plasma citratado
com deficiências conhecidas de Proteína S, C, APC R V e anticoagulante lúpico num
ACL 9000. As amostras anormais foram identificadas utilizando ensaios do
Instrumentation Laboratory.
Cut-off = 85.4
Sensibilidade = 91.7%
Especificidade = 85%
Studio 2
Normal
Def PS
Def PC
Def PS & PC
FV Leiden
A.L.
N°
Amostras
Falso
Positivo
Falso
Negativo
40
26
19
8
22
10
15%
0
0
0
0
0
0
23%
5.3%
0
0
0
Efectuou-se um terceiro estudo com 133 amostras ( 102 normais / 31 anormais ) num
laboratório externo com ThromboPath para rastrear amostras de plasma citratado com
deficiências conhecidas de Proteína S, C, e APC R V num ACL 9000. As amostras
anormais foram identificadas utilizando ensaios do Instrumentation Laboratory.
Cut-off = 86.25
Sensibilidade = 90.3%
Def PC
Especificidade = 94.1%
Studio 3
Normal
Def PS
Def PS & PC
FV Leiden
A.L.
N°
Amostras
Falso
Positivo
Falso
Negativo
102
18
7
5.9%
0
0
1
5
0
0
0
-
0
11%
14.2%
0
0
-
A precisão e os resultados de correlação foram obtidos utilizando lotes específicos de
reagentes e controlos.
Procedimentos do Instrumento/Teste
Consulte o Manual do Operador do instrumento IL que utiliza e/ou o Manual de
Aplicação.
Colheita e Preparação de Amostras
Nove partes de sangue venoso recentemente colhido, são adicionadas a uma parte de
citrato trissódico. Consulte o CLSI Document H21-A4 para obter mais instruções sobre
colheita, manipulação e conservação de amostras.
Symbols used / Verwendete Symbole / Símbolos utilizados / Symboles utilisés / Simboli impiegati / Símbolos utilizados / Anvendte symboler / Använda Symboler /
In vitro diagnostic
medical device
In-vitro Diagnostikum
De uso diagnóstico in
vitro
Dispositif mèdical de
diagnostic in vitro
Per uso diagnostico in
vitro
Dispositivo médico para
utilização em diagnóstico
in vitro
“in vitro” diagnostisk udstyr
In vitro diagnostisk
medicinsk produkt
Batch code
Chargen-Bezeichnung
Identificación número
de lote
Désignation du lot
Numero del lotto
Número de lote
Batch nr.
Tillverkningskod
Use by
Verwendbar bis
Caducidad
Utilisable jusqu’à
Da utilizzare prima del
Data límite de
utilização
Anvendelse
Användning
Temperature limitation
Festgelegte
Temperatur
Temperatura de
Almacenamiento
Températures limites
de conservation
Limiti di temperatura
Límite de temperatura
Temperatur
begrænsninger
Temperatur gräns
Consult instructions for use
Beilage beachten
Consultar la metódica
Lire le mode d’emploi
Vedere istruzioni per l’uso
Consultar as instruções de
utilização
Se vejledning for
anvendelse
Ta del av instruktionen före
användning
Control
Kontrollen
Control
Contrôle
Controllo
Controlo
Kontrol
Kontroll
Biological risks
Biologisches Risiko
Riesgo biológico
Risque biologique
Rischio biologico
Risco biológico
Miljø oplysninger
Biologiska risker
Manufacturer
Hergestellt von
Fabricado por
Fabricant
Prodotto da
Fabricado por
Producent
Tillverkare
Authorised representative
Bevollmächtigter
Representante autorizado
Mandataire
Rappresentanza autorizzata
Representante autorizado
Leverandør
Auktoriserad representant
In vitro
Instrumentation Laboratory Company - Bedford, MA 01730-2443 (USA)
Instrumentation Laboratory SpA - V.le Monza 338 - 20128 Milano (Italy)
303485B R1 12/2008
ThromboPath
Printed Insert Sheet:
Revision:
Issued:
C.O.:
0020005500
303485B
R1
December
406263
LANGUAGES
ITALIAN
PORTUGUESE
TECHNICAL SPEC'S
PAPER:
SIZE:
PRINT:
PRINT COLOR:
White paper, 50-60 g/m2 weight.
11 x 24" (280 x 609 mm.).
Front.
Top band Green Pantone 382, all remaining type in black.
Instrumentation Laboratory Company - Bedford, MA 01730-2443 (USA)
Instrumentation Laboratory SpA - V.le Monza 338 - 20128 Milano (Italy)
303485B R1 12/2008